Summary
Her beskriver vi en lys-mørke præference test for Drosophila larve. Denne analyse giver oplysninger om medfødte og døgnrytmen regulering af lys sensing og behandling photobehavior.
Abstract
Lette fungerer som miljømæssig signal til at styre dyrs adfærd på forskellige niveauer. Drosophila larver nervesystem bliver brugt som et unikt model til at besvare grundlæggende spørgsmål om, hvordan lys oplysningerne behandles og deles mellem hurtige og døgnrytmen adfærd. Drosophila larver vise en stereotyp undgåelse adfærd, når de udsættes for lys. At undersøge lys afhængige adfærd sammenligneligt enkle lys og mørke præference tests kan anvendes. I hvirveldyr og leddyr nervebanerne involveret i sensing og behandling visuelle inputs delvist overlapper de behandling fotisk døgnrytmen information. Den fascinerende spørgsmål om, hvordan lyset sensing systemet og døgnrytmen systemet interagerer for at holde adfærdsmæssige udgange koordineret stort set uudforsket. Drosophila er en påvirker biologisk model til at håndtere disse spørgsmål, på grund af et lille antal af neuroner i hjernen og tilgængeligheden af genetiske værktøjer for neuronal manipulation. Den præsenterede lys-mørke præference assay tillader undersøgelse af en række visuelle adfærd, herunder døgnrytmen kontrol phototaxis.
Introduction
Her beskriver vi en adfærdsmæssig assay baseret på larvestadiet præference for mørke (eller lys). Larver reagerer med en stærk og stereotyp photonegative respons under fouragering faser (L1 til tidlig L3) 1. Assayet har til formål at vurdere den photophobic adfærd larve og sammenligner lys eller mørk præference for en gruppe af larver bevæge sig frit i en petriskål coatet med agar. Denne adfærdsmæssige analyse ikke kun indeholder oplysninger om følsomheden, integration og tidsmæssige plasticitet det visuelle system, er det endvidere tips om, hvordan lysfølsomhed og dens proces styres af døgnrytmen system.
Drosophila larver øje (også betegnet Bowlig Orgel, BO), er det vigtigste organ for lyssans. Hvert øje består af 12 fotoreceptorer (PR), otte PRs udtrykker den grønne-følsomme rhodopsin6 (RH6) og fire PRs udtrykker den blå-følsomme rhodopsin5 (RH5) 2,3. Ud over PRS, also klasse IV multidendritic neuroner, som dækker larve kropsvæggen, er blevet identificeret til at reagere på skadelige lysintensiteter 4,5. Det er også kendt, at pacemaker neuroner beliggende i den centrale Larvetilstand hjerne udtrykker det lysfølsomme protein Cryptochrome (Cry), der fungerer som ur iboende blå lyssensor i hjernen 6,7. Intriguingly photophobicity af vildtypedyr viser en døgnrytmen komponent på forskellige tidspunkter i løbet af dagen og natten, når der testes med denne analyse. Reaktionerne på baggrund af fouragering L3 larver viste stærkere photophobicity ved daggry og lavere photophobicity i skumringen, når testet for lys-mørke præference 7.. Interessant kun RH5-prs er nødvendige for let undgåelse, mens RH6-prs kan undværes. Både RH5-prs og RH6-prs er involveret i at nulstille den molekylære ur med lys 8. Den Cry vej skal koordineres med de øvrige lysfølsomme veje at orkestrere en passende adfærdsmæssig produktion iløbet af dagen. Acetylcholin i PRS spiller en afgørende rolle i lyset undgåelsesadfærd samt medrivning af den molekylære ur. Blokering acetylcholin neurotransmission fra PRS til døgnrytmen pacemaker neuroner reducerer photophobic respons i lys-mørke præference assay 8.. Anvender det samme assay, har to symmetriske par af neuroner for nylig blevet identificeret til at skifte lyset præference tredje larver instar Drosophila 9.. Disse to par neuroner kan fungere under sene larvestadier, når dyrene forlader mad til formentlig finde en passende pupariation site. Men spørgsmålet om, hvordan de visuelle veje interagere og kontrollere larve visuel adfærd på en døgnrytmen måde stort set ubesvaret. Lyset præference analysen tillader sammenligninger mellem døgnrytmen tidspunkter, flyve linjer og døgnrytmen stat under forskellige lys kvaliteter. Analysen er let forberedt og billig og har været gavnlig tidligere jegn flere laboratorier for at beskrive og studere lys afledt adfærd i larve.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1.. Larveopdræt
- Hold flyve stammer eller genetiske krydsninger i massekultur ved 25 ° C på majsgryn medium under en 12-timers lys-12-timers mørkecyklus i en flue inkubator udstyret med lys og timeren.
- Fortynd Backer gær i vand til dannelse af en flydende pasta (10 g Backer gær fortyndet med 3-4 ml destilleret H2O). Tilføj en lille dråbe til majsmel mad og dække glassene. Lad tørre i mindst en time for at undgå voksne fluer klistrer til gær pasta. Sætte en lille dråbe af gær fortyndes i vand på overfladen af fødevaren kan forbedre æglægning. Alternativt bager gær pasta, 20% eddikesyre (AcOH) (Sigma Aldrich, Schweiz A6283-100 ml) kan anvendes. Til dette, dyppe spidsen af en vatpind på løsningen og spredes på majsmel fødevarer overflade.
- Put voksne fluer (mindst fire dage gammel, men ikke er ældre end ti dage) i majsmel mad hætteglas. Put nok voksne i hvert hætteglas for at opnå tilstrækkelig larver at gentage præferenceafprøve adskillige gange og lad statistisk sammenligning. For genetiske krydsninger, vi typisk bruger et minimum af 20 hunner og hanner 5-10 per hætteglas, men nogle linjer kræver flere hunner at opnå en tilstrækkelig larve afkom.
- Tillad voksne at lægge æg for 12 timer, og overføre dem til nye flasker. Voksne kan overføres i morgen og om aftenen. Vi plejer overfører voksne i syv til ti dage, og hvis det er nødvendigt at tage nye voksne.
- Holde æg samlinger tages hver 12 timer i inkubatoren og lad vokse larverne ved 25 ° C, 12-timers lys-12-timers mørkecyklus og 60% fugtighed. For at teste for døgnrytmen komponenter af visuel adfærd flytte larver til konstant mørke (DD) 48 timer efter ægudtagningen (svarende til to-light-mørke cykler). Til dette skal du bruge en separat inkubator uden lys, men beholde alle andre forhold såsom temperatur og fugtighed identiske. Vær sikker på at overføre hætteglas til DD inkubator lige før overgangen til den mørke fase. Inden du flytter de hætteglas, anothis inkubator sat hætteglas i en papkasse eller pak glassene med aluminiumsfolie for at undgå udsættelse for lys under overførslen (pakning i papkasse eller indpakningen, der skal gøres i løbet af "lys-on fasen" før skiftet mellem væksthuse). Forhindre dyrene fra enhver lys eksponering efter dette punkt, og indtil eksperimenter start.
- Efter 4 dage (84-108 hr fra æglægning) indsamle tidlige L3 (fodring larver) på tidspunkter, der skal testes (se 4.. Light præference test, punkt. 4.4.).
2. Test Setup
- Udføre eksperimenter i et mørkt rum med konstant temperatur og fugtighedsforhold.
- At holde to kvadranter af petriskålen i mørke, dække låget med sort tape og aluminiumsfolie. For at gøre dette, markere midten af låget omkreds. Også markere fire punkter i grænseområdet af låget med 90 ° adskillelse mellem dem. For at gøre det lettere, tegne en 20 cm firkantet opdelt i fire kvadranter af 10 cm længde på enark papir eller med hjælp af en computer. Skær 10 cm kvadrater af aluminiumsfolie og sort tape (figur 1A). Cover to modsatte kvadranter ved at lime et kvadrat af aluminiumsfolie, som første lag og sort tape dækker det, være omhyggelig til også at dække grænsen af låget.
I de sidste to lidt forskellige former af denne assays blev anvendt. Vi her bruge "kvart-tallerken" assay, hvor petriskålen er inddelt i fire lige kvartaler 10. Subsidiært "halv-plate" assay petriskålen er delt halvdelen (halvt udsat for lys, halvt i mørke) 1,7,8. Indtil i dag ingen signifikante forskelle mellem de to analyser er blevet offentliggjort. - Lim en kvadrant ark som den, der anvendes til mærkning lågene lige under lyskilden på bordet. Markere omkredsen af en petriskål centreret om kvadranter skæringspunkt. Brug mærkerne som reference for at placere testpladen altid i den samme stilling under lyskilden.
- Installer enlampe, enten en simpel hvid pære (Phillips, Softtone 5W) eller en LED-lampe (LED lampe, 80012 Hvid, Osram) over petriskålen med hjælp af en jern stativet (Fisher Scientific, S47808). Justere højden på en måde, at hele testpladen homogent lyser. Vi anbefaler brugen af LED lamper, da de udleder mere specifikke bølgelængder end traditionelle glødepærer. Desuden lysdioder udsender mindre varme.
- Juster lysintensiteten ved hjælp af et fotometer (miljø Meter PCE EM882). At opnå den ønskede lysintensitet på 350-760 lux, flytte lampen op eller ned efter behov. Tilslutning lampen en justerbar strømforsyning giver mere fleksibilitet til at ændre intensiteter uden at flytte lampen (figur 1B).
3. Plader Forberedelse
- Lav 200 ml 2,5% agar (Sigma-Aldrich, Schweiz A5093-500G) med dobbelt destilleret vand (Millipore).
- Placer petriskåle på et bord (90 mm i diameter;Greiner Bio-One GmbH til 4550 Kremsmeinster, Østrig) i rækker tillade hælde varmt agarose.
- Kog agarose i en mikrobølgeovn, indtil opløsningen er helt gennemsigtig og væske. Sørg for, at flydende løsning ikke indeholder bobler. ADVARSEL: Transport omhyggeligt til bordet siden løsning kan være meget varmt!
- Hælde agarose i petriskåle, indtil hele overfladen homogent er dækket med et tyndt lag af opløsningen, omkring to eller tre millimeter er nok. Være hurtig til at forhindre agarose størkne før overfladebehandlingen alle plader. Lad pladerne køle ned. Opbevar pladerne ved stuetemperatur og bruger dem kun på den samme dag af præparatet.
4.. Lys præference Test
- Arbejdet under rødt lys i eksperimentet plads til at forhindre lys indflydelse inden testen, da Drosophila ikke er i stand til at fornemme røde bølgelængder af lys. Brug en rød pære (Phillips, PFE712E * 8), monteret i en lampe at lyse tHan sted at arbejde.
- Oprethold temperaturen gennem alle eksperimenter ved 25 ° C. Kontrol stuetemperatur ved hjælp af et varmeapparat eller køleindretning, hvis det kræves.
- Tage nogle fødevarer fra hætteglassene opdrættes til to-dages perioder under konstant mørke (fra afsnit 1). Da larver sædvanligvis graver på overfladen af fødevaren, tage det øverste lag (ca. 5 mm dyb) med hjælp af en spatel (Fisher Scientific, 14-373-25A). Spred maden på den udvendige side af en petriskål låg, tilsættes lidt vand og bland forsigtigt med spatel.
- Saml fodring L3 larver fra fødevarer. Som lys præference vil blive testet, vælge kun tidligt / fodring L3 larver er afgørende, da den negative phototaxis er sikret. Late / vandrer L3 larver eller store larve kravle på maden formentlig allerede skiftet deres photobehavior. Fodring L3 larver (negativ phototactic) kan genkendes, fordi deres forreste Spirakler er åbne og stak til ydersiden i en finger-lignende form. Den bageste spiracles har tre åbninger hver, og fire grupper af store forgrenede hår. Spytkirtlerne udvides til den anden abdominal segment 11. Staging larve under et mikroskop er praktisk hvorimod intet hvidt lys bør anvendes. En rød lampe er nødvendig for at belyse larverne hvis iscenesættelse under stereoskopisk mikroskop før eksperimenter er påkrævet.
- Vask larver kortvarigt i vand fra hanen og indsamle tidlige fodring tredje stadie larver (stadig i rødt lys). Før du overfører larverne på prøve plade, tage larverne med en våd pensel og forsigtigt absorbere overskydende vand med en papirserviet eller papirfilter. Tør ikke larver også overdrevent, da det kan skade dyret og påvirke dens adfærd.
- At den våde pensel omhyggeligt overføre larverne til pladerne. Placer en gruppe på omkring 30 larver i midten af pladen. Dæk pladen med låg allerede forberedt med kvadranter og indstille pladen under lyskilden klar til eksperiment (se sektion 2).
- Tænd hvide lampe og starte timeren. Lad larven bevæge sig frit på pladen i 5 min, og derefter hurtigt fjerne låget og tælle antallet af larver i mørke og i lyset kvadranter. Markering af placeringen af hver larve med en markør kan lette optællingen. Alternativt kan du tage et billede af pladen og tælle efterfølgende. Larverne viser uklart lys præference, ligesom larver kravle på væggene eller gravende i agar bør betragtes som neutral præference og bare indgå i det samlede antal af larver, når lyset præference Indekset er beregnet.
- Efter optælling, kasseres pladen med larver og erstatte med en ny test plade til næste eksperiment. Saml brugte plader i en autoklave plasticpose til senere håndtering og bortskaffelse.
- Når du har udført et tilstrækkeligt antal eksperimenter en ny genotype kan testes. 10-15 forsøg pr genotype er tilstrækkelige til analyse.
5.. Data analysis
- For nemheds skyld overføre data til datablad som Excel (Microsoft) eller Origin (Origin Lab) på en computer for yderligere statistiske analyser. Arrangere i en kolonne antallet af dyr i mørke, i en anden kolonne antallet af dyr i lys kvadranter og i det tredje den samlede dyr i pladen (herunder "neutral" larver).
- Beregn præference indeks (PREF) for mørke hvert eksperiment ved hjælp af følgende formel:
PREF (mørke) = (antal larver i mørke - antal larver i lys) / samlet antal larver - Sammenlign statistisk et datasæt med en passende analyse for grupper. Her bruger vi en Wilcoxon test til at sammenligne statistisk to grupper. En ANOVA test med en Tukey s multiple-sammenligning post-hoc test kan gøres, hvis normal fordeling antagelse er opfyldt i en manifold gruppe sammenligning.
- Lav grafer, der viser klart sammenligninger blandt linjer og tidspunkter punkter langs dages cyklus. We brug Origin Software (Origin Lab) for at teste statistisk signifikans og generere passende grafer, men alle andre statistiske software kan være nyttig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Efter ovenfor beskrevne protokol, vi testede lys-mørke præference i begyndelsen tredje larval stadion af vildtype Canton-S flyver på to forskellige døgnrytmen gange CT0 og CT12. Voksne var opdrættet 12-timers lys-12-timers mørke og venstre for at lægge æg for 12 timer. Larver vokse de første to dage under samme lys-mørke-regime. Da vi ønskede at teste døgnrytmen graduering under konstant forhold (fri drift af døgnrytmen ur), blev larverne derefter overført til konstant mørke for de næste tre dage, indtil testen blev udført (figur 3A).
Her brugte vi 350 lux da det har vist sig, at dette er den optimale lysintensitet at påvise forskelle af lys respons Drosophila larve langs døgnrytmen cyklus i forhold til andre intensiteter (70 og 600 lux) 7. Forskelle i lysfølsomhed og dermed i lys respons er observeret, når man sammenligner CT0 med CT12. I Drosophila, sammenfaldende CT0s med daggry, er den halve cyklus mellem CT0-CT12 betragtes den subjektive dag og fra CT12 til CT24 den subjektive natten 12.. Lys lysfølsomhed er højere kortvarigt efter overgangen fra mørke til lys, når næsten 77% af larverne foretrækker mørket sammenlignet med næsten 69% af mørke præference på det tidlige subjektive nat (figur 3B). Dette afspejles også af den mørke præference indeks (PREF (mørke)) beregnet med formlen præsenteret ovenfor for hvert forsøg. Gennemsnitsberegnings alle gentagelser opnåede vi en præference-indeks på 0,52 for CT0 og 0,36 for CT12. Ved hjælp af Wilcoxon test (Origin) en statistisk signifikant forskel mellem to tidspunkter vises (p = 0,0229).
Figur 1.. (A) Markering kvadranter i petriskål låg. Kvadranter kan mærkes i petriskålen låg med hjælp af et trykt kvadrant bruges som lærred. Posteriort det første lag af aluminiumsfolie kan limes på den ydre overflade af pladen og være dækket med sort tape på de to modsatte kvadranter for mørket. (B) Skematisk oprettet for lys-mørke præference test. (C) A Petri fad dækket med mørke kvadranter og fyldt med 2,5% agar, klar til at blive brugt til forsøg. Klik her for at se større figur .
Figur 2.. Light-dark præference test, eksempel på et fad lige efter indstilling larve på prøve pladen (Start), og efter 5 min (End). Typisk bruger vi en gruppe på 30 dyr for hvert eksperiment.
tp_upload/50237/50237fig3.jpg "alt =" Figur 3 "fo: content-width =" 5.5in "fo-src =" / files/ftp_upload/50237/50237fig3highres.jpg "/>
Figur 3.. (A) Light regime følges for at teste lys præference i fodring L3 larver. (B) Procentdel af mørk præference for både tid peger testet (CT0 og CT12). Procentdel af larver, som foretrukne mørke og lys tælles for hver gentagelse, og alle gentagelser gennemsnit. Larver i grænser plade eller grave på agaren betragtes som neutrale. (C) Mørk præference indeks beregnet for de samme tidspunkter. Signifikant statistisk forskel mellem grupperne er vist ved Wilcoxon sum-rank-test (p <0,05). (N = 18 (540 larver) pr tidspunkt). Klik her for at se større figur .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Lyset præference beskrevne test drager fordel af larver medfødte photobehavior. Analysen er let at bevise, tillader mange gentagelser med lave omkostninger og leverer værdifulde oplysninger om lys sensing og forarbejdning. Den eksperimentelle paradigme tillader relativ hurtig kvantificering af, hvor mange personer foretrækker lys eller mørk. Sådan præference kan vises som rå procenter eller alternativt Preference Index (PREF). Præfekturet udtrykkes som forskellen af dyr, foretrukket lys og dyr, foretrukket mørke divideret med den samlede dyr.
Et afgørende punkt for lyset præference testen er varigheden af eksperimenterne. Her har vi afprøvet fem minutter, men det er muligt, at andre genotyper eller under andre lette egenskaber forskelle ikke er så klar med dette eksperiment varighed. For visse stimuli (smagssansen) har vi indset, at længere eksperimenter med 20 min varighed, leverer renere preferences med mindre variation. Test forskellige eksperimentelle varigheder kunne være fair især når du bruger genotyper, hvor bevægelse eller følsomhed påvirkes og larver kræver længere tid til at udforske test plade. I så fald bør den tid være lige korrigeret for kontrol og eksperimentelle genotyper.
Analysen også mulighed afsløre forskelle blandt tidspunkter af dagen gennem døgnrytmen cyklus som vist her og i tidligere rapporter 7,13. Lette reaktioner på fotisk stimuli er stærkt reguleret af døgnrytmen ur, formentlig ved at modulere følsomhed fotoreceptorer. Larver svar til lys fald i de første to timer af dagen og bliver stabil under de resterende ti timers den lette fase. At sammenligne forskellige grupper i løbet af dagen, er det afgørende at gøre forsøg på tilsvarende eller identiske tidspunkter for døgnrytmen cyklus for hver gruppe. Derudover er det også vigtigt at undgå ændringer, derkan påvirke Larvetilstand adfærd, som termiske fluktuationer eller lys input forud for eksperimenter, hvis arbejder i mørke. For dette, er det vigtigt at opdrætte larverne ved samme temperatur og luftfugtighed end dem, der bruges til eksperimenter og være omhyggelig med at holde dyr i mørke, når det er nødvendigt.
Mindst tre nyligt beskrevne veje bidrager til lys sensing i Drosophila larve 5,14: 1) rhodopsin afhængige system, medieret af larvestadiet øje 2) de multidendritic neuroner klasse IV, spredes langs larve krop og 3) ur iboende blå lyssensorer udtrykker Cry. Bidrag fra forskellige lysfølsomme veje for visuel adfærd kan løses ved præference testen beskrevet her. Forskellige kilder til belysning med bestemte intensiteter og bølgelængder kan bruges til at teste forskellige lys kvaliteter. Denne mulighed kan stole på oplysninger om følsomheden af de enkelte elementer i det lys sensing systemet end hvorledes sådanne lys indgange behandles. For en mere detaljeret eksperimentering om lys stimulation, kan analysen let modificeres til at teste forskellige lys kvaliteter. Stigende og faldende lysintensiteter, samt teste forskellige bølgelængder er muligt ved hjælp self-made LED lamper med specifikke bølgelængder (mange muligheder er tilgængelige på markedet). Kontrol af sådanne lamper med strømforsyninger tilbyder et godt udvalg af intensiteter. Disse muligheder for at manipulere lys kvaliteter giver en bred vifte af variabler, der skal testes med lyset præference test.
Desuden Drosophila larver er i stand til at associere straf eller belønninger med enten lys eller mørke, ændre deres oprindelige photobehavior 15.. Til dette blev en tilpasning af den beskrevne protokol anvendt viser alsidigheden af assayet. Sammenfattende er det lys-mørke præference test et værdifuldt instrument, der bidrager med en bedre forståelse af hurtigeog døgnrytmen adfærd stammer fra lysstimuli og hvilke elementer i den lysfølsomme systemet og døgnrytmen ur Drosophila larve er involveret i denne proces.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at afsløre.
Acknowledgments
Vi takker vores kolleger på Biologisk Institut, University of Fribourg for frugtbare diskussioner. Vi takker Bloomington Stock Center for at give flyve bestande. Dette arbejde blev støttet af den schweiziske National Science Foundation (PP00P3_123339) og Velux Fonden til SGS
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Agar | Sigma-Aldrich | A5093-500G | 2.5%; Sigma-Aldrich, 9471 Buchs, Switzerland |
| Petri dishes | Greiner Bio-One GmbH | 633180 | 90-mm diameter; Greiner Bio-One GmbH, 4550 Kremsmeinster, Austria |
| LEDs Lamp | OSARAM | 80012 White | LED lamp, 80012 White |
| Environment Meter | PCE | PCE EM882 | Lux, Temp, RH% |
| Thermostatic cabinet | Aqua Lytic (Liebherr) | ET636-6 | |
| Light timer | Timer T | 6185.104 | 230V/50HZ (check specifications for your country) |
| Universal thermostat | Conrad | UT200 | |
| Humidifier | Boneco | ||
| Balck tape | Tesa | 5 cm | |
| Glue | Uhu | ||
| lncubator lamp | Phillips | Softtone | 5W |
| Timer clock | Ziliss | Ziliss, Switzerland | |
| Excel Software | Microsoft | Excel | |
| Origin Software 8.5 | OriginLab | ||
| Backer Yeast | Migros Switzerland | ||
| Iron support stand 17X28CM | Fisher Scientific | S47808 | |
| Acetic acid | Sigma Aldrich | A6283-100ML | 20% acetic acid dilluted in H2O |
| Red light lamp | Phillips | PFE712E*8C | |
| Spatula | Fisher Scientific | 14-373-25A | |
| Power supply | EA | EA PS 2042-06B | Optional |
| Aluminium foil | Prix Coop | ||
| Heater | GOON | NSB200C | |
| Microwave Oven | Intertronic | ||
| Standard corn meal fly food | |||
| Destilled water |
References
- Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development. J. Neurogenet. 10, 119-135 (1995).
- Sprecher, S. G., Pichaud, F., Desplan, C. Adult and larval photoreceptors use different mechanisms to specify the same Rhodopsin fates. Genes Dev. 21, 2182-2195 (2007).
- Sprecher, S. G., Desplan, C. Switch of rhodopsin expression in terminally differentiated Drosophila sensory neurons. Nature. 454, 533-537 (2008).
- Xiang, Y., et al. Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall. Nature. 468, 921-926 (2010).
- Diaz, N. N., Sprecher, S. G.
- Emery, P., et al. Drosophila CRY is a deep brain circadian photoreceptor. Neuron. 26, 493-504 (2000).
- Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response. Neuron. 45, 293-300 (2005).
- Keene, A. C., et al. Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment. J. Neurosci. 31, 6527-6534 (2011).
- Gong, Z. F., et al. Two Pairs of Neurons in the Central Brain Control Drosophila Innate Light Preference. Science. 330, 499-502 (2010).
- Lilly, M., Carlson, J. smellblind: a gene required for Drosophila olfaction. Genetics. 124, 293-302 (1990).
- Bodenstein, D. The postembryonic development of Drosophila. Biology of Drosophila. Demerec, M. , John Wiley & Sons. 275-367 (1950).
- Pittendrigh, C. S. Circadian systems: Entrainment. Biological Rhythms. 4 Handbook of Behavioral Neurobiology, Plenum. 95-124 (1981).
- Collins, B., Kane, E. A., Reeves, D. C., Akabas, M. H., Blau, J. Balance of Activity between LN(v)s and Glutamatergic Dorsal Clock Neurons Promotes Robust Circadian Rhythms in Drosophila. Neuron. 74, 706-718 (2012).
- Keene, A. C., Sprecher, S. G. Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae. Trends Neurosci. 35, 104-110 (2012).
- von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae. Behav. Neurosci. 125, 921-929 (2011).
