Summary
Photothrombosis 매우 재현성 방식으로 관심 분야의 작은 잘 구분 경색을 유도하기위한 빠르고, 최소 침습 기술입니다. 그것은 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.
Abstract
photothrombotic 치기 모델은 이전에 주입 빛에 민감한 염료의 사진 활성화의 수단으로 주어진 대뇌 피질의 영역 내에서 허혈성 손상을 유발하는 것을 목표로하고있다. 조명에 따라 염료 활성화 중항 산소를 생성합니다 후속 혈소판 응집 결국 국부적으로 혈액 흐름의 중단을 결정 혈전 형성과 혈관 내피 세포막의 손상 구성 요소. 처음 1977 년 로젠 엘 - Sabban에 의해 제안 된이 방법은 나중에 쥐의 뇌에서 1985 년에 왓슨 향상과 현재 모델의 기초를 설정했습니다. 또한, 유전자 변형 마우스 라인의 증가 여부는 더 photothrombosis 모델에 대한 관심을 높이기 위해 기여했다. 간단히, 감광성 염료 (로즈 벵골) 복강 내 주입하고 혈류를 입력합니다. 차가운 광원에 의해 조명 될 때, 염료 활성화되고 지역의 결과, 혈소판 활성화 및 혈전증과 혈관 손상을 유발혈액의 흐름이 중단. 광원 재현하고 비 침습적 방법으로 관심의 대뇌 피질의 지역을 대상으로 할 수 있습니다 개두술의 필요없이 그대로 두개골에 적용 할 수 있습니다. 마우스는 다음 봉합하고 일어나 허용됩니다. 허혈성 손상의 평가는 신속 페닐-tetrazolium 염화물 또는 크레 실 바이올렛 염색을 수행 할 수 있습니다. 이 기술은 정확한 세포의 특성이나 기능 연구에 매우 유리하다 작은 크기와 잘 구분 된 경계의 경색을 생산하고 있습니다. 또한, 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.
Introduction
21 세기의 시작 부분에서, 허혈성 뇌졸중은 장기 장애 1 스트로크 2004 약 5.7 백만 명의 사망자를 차지하고있는 사망률 전세계의 두 번째 원인의 두 번째 원인을 나타내는 치명적인 질환이다. 에 배치 된 수많은 노력에도 불구하고, 뇌졸중 후 기능 회복을 개선 할 수있는 효과적인 치료는 아직 없습니다. 그들은 허혈성 손상의 병태 생리의 모델링을 허용하고 생체 내에서 서로 다른 신경 전략의 효능을 테스트 할 뇌졸중의 동물 모델은 널리 뇌졸중 연구 분야에 사용됩니다. 이러한 모델의 대부분은 다른 모델은 일반적으로 특정 영역, 모터 및 체성 감각 피질에 작은 크기의 병변을 연구하기 위해 개발 된 반면, 중간 대뇌 동맥 내 (일시적 또는 영구적) 혈액의 흐름을 방해하여 광범위한 경색을 유도하는 것을 목표로하고 있습니다. 그러나 여러 가지 요인 교류를 생성하기 위해 기여할 수사용하는 마우스 변형 등의 실험 뇌졸중 연구의 변화의 ertain 정도, 위의 모든 연령과 성별 연구에 포함 된 동물과, 기술은 허혈성 손상을 유도하기 위해 채택했다. 후자 점, 수술 기간 및 침입 (즉, 개두술에 대한 필요성)뿐만 아니라 안정적으로 허혈성 병변을 유발하는 운영자에게 필요한 수술 기술과 관련하여 매우 중요 결정 요소 성공과 생체 뇌졸중 연구에서 공정한 .
photothrombosis의 개념은 처음 1977 3 로젠 엘 - Sabban에 의해 제안 왓슨 등으로 쥐의 뇌에서의 응용 프로그램에 의해 유명하게되었습니다 1985 4 기술은 크게 향상 현재 모델 3의 기준을 설정되었던되었다. - 6. photothrombotic 방법은 이전에 혈액 계, 어에 전달 빛에 민감한 염료의 사진 활성화를 통해 대뇌 피질의 경색을 유도하는 것을 목표로무형 문화 유산은 빛에 노출 된 지역에있는 지방 혈관 혈전증의 결과. 순환 염료는 형광 근원하여 적절한 파장 조명되면 결과적으로 반응성이 매우 높은 중항 산소 제품의 많은 양의를 생성하는 산소 분자에 에너지를 해제합니다. 이러한 산소 중간체, 내피 세포막의 과산화를 유도 혈소판 부착 및 응집을 선도하고, 결국 지역의 대뇌 흐름은 중단 7을 결정하는 혈전의 형성.
Photothrombosis는 일반적으로 인간의 뇌졸중 발생하지만 빛에 노출 영역에 혈액 흐름을 선택적으로 차단 결과적으로 더 많은 표면 혈관에 병변을 유도로 하나 동맥 폐색이나 휴식하지 않는 비정규 허혈성 모델입니다. 이러한 이유로,이 방법은 대뇌 피질의 가소성의 세포 및 분자 연구에 적합 할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실행의 단순성에 있습니다.를 제거하기 위하여 2 분, 두피를 면도하는 1 분; 정위 장치에 동물을 배치하는 3 ~ 5 분 또한, photothrombosis 쉽게 이십 분 대기 (마취 3 분을 포함한 동물 당 약 사십분에서 수행 할 수 소독액과 두피는 절개하고 두개골을 청소; 2 ~ 4 분 형광 섬유 배치, 장미 벵골 솔루션을 주입하는 1 분, 복강 내 확산 5 분 - 대기, 조명의 15 분, 5 분에 상처를 청소하고) 동물을 봉합. 또한, 어떤 수술 전문 지식 병변이 그대로 두개골의 간단한 조명을 통해 유도되는이 기술을 수행 할 필요가 없습니다. 고전적인 동맥 폐색과는 달리,이 메소드는 조사 영역 내 pial과 intraparenchymal 미세 혈관을 선택적으로 폐색을 결정하고 어떤 담보 용기가 대상 영역에 산소를 공급하는 남아 있지되는 병변 중 변동성을 줄일 수 있습니다.
그 특정 자연에도 불구하고photothrombotic 손상의 주가는 필수 메커니즘은 뇌의 뇌졸중 발생. 마찬가지로 인간의 뇌졸중 동맥 폐색, 혈소판 응집 및 혈전 형성 조사 면적 7 혈액 흐름의 중단을 결정합니다. 마찬가지로,이 모델은 중간 대뇌 동맥 폐색 8에서와 같이 중요한 염증 반응을 공유합니다. 그러나, 잘 delimitated 경계 부분적으로 보존 신진 대사의 영역에 해당하는 penumbral 영역, photothrombotic 병변 후 매우 감소 또는 inexistent입니다. 이 명확한 경계선은 허혈성 또는 그대로 대뇌 피질의 영역 내에서 세포 반응의 연구를 촉진 할 수있다. Photothrombosis 마우스 모델은 형질 전환 동물의 다양한 행정 연구에 특히 적합합니다. 실제로 고전적인 모델은 마우스 변형 바이어스 9 일으킬 수있는 높은 사망률 비율을보고 C57BL / 6의 모든 긴장과 오랜 기간 연구에 맞지 않을 수 있습니다.
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Protocol
1. 미리 수술
- 1.5 ML 튜브에 로즈 벵골 무게 15 MG / ML의 최종 농도에 도달 할 때까지 멸균 생리 식염수에 용해. 0.2 μm의 필터를 통해 소독을 필터링하고 최대 2 개월 상온에서 어둠에 저장합니다.
- 고압 증기 멸균하여 모든 수술기구를 소독. 외과 영역 수술을 시작하기 전에 한 시간 미만을 소독해야한다.
- 주입되는 로즈 벵골의 복용량을 조정하려면 마우스 체중을 기록합니다. 우리는 현재 프로토콜 12 주 오래 된 여성 CD1 생쥐의 10 μL / g의 동물 무게를 주입했다. 로즈 벵골의 양을 원하는 대뇌 피질의 병변의 크기는 쉽게 다른 복용량 (일반적으로 2 μL / g, 5 μL / g 또는 10 G / μL 체중) 테스트하여 예비 실험을 별도의 세트에서 확인할 수 생산하는 데 필요한. 주입되는 로즈 벵골의 양, 광원의 특히 유형 실험 조건에 따라 크게 달라집니다사용 및 빛의 노출의 기간. 본 연구에서는 10 g / μL (150 ㎍ / g) 용량이 다른 그룹이보고 된 반면, 15 분 동안 빛에 노출에 photothrombosis을 유도 할 필요가 발견되었다 50 ㎍ / g 6,8 및 100 ㎍ / g 이하도 10 복강 내 주입 photothrombotic 병변을 유도하기에 충분했다.
2. 마취 절차
- 50 % 투명 유도 챔버 (유도 3.5-4 %, 유지 1.5 %) (v / v)의 oxygen/50 % (v / v)의 일산화이 질소 가스 혼합물에서 isoflurane을 가진 생쥐를 마취. 가스 마취 동물의 빠른 웨이크을 허용하고 마취 가스의 레벨을 쉽게 조절할 수 있습니다. 또는, 마우스는 케타민을 - xylazine 혼합하여 마취를 할 수 있습니다.
- 깊은 마취에 도달하면, 얼굴에 마스크를 사용하여 마취를 유도 챔버에서 마취 동물을 제거 정위 프레임에 배치하고 유지합니다. isoflura를 조정네브래스카 선량 적절한 마취 수준을 달성 할 수 있습니다. 절차 전반에 걸쳐 호흡 속도를 모니터링하고 (40 - 분당 60 호흡) 상수 있는지 확인합니다.
- 동물이 깊은 마취인지 확인하기 위해 발가락 핀치를 사용합니다.
- 건조에서 눈을 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다.
- 조심스럽게 수술을 통해 온도를 모니터링하기 위해 직장 프로브를 삽입합니다. ± 0.5 ° C. 37에서 마우스의 체온을 유지하기 위해 관련 피드백 제어 가열 패드를 설정
3. 대상 영역의 조명 수술
- 전기 면도기와 마우스 두피를 면도.
- 단단히 머리를 보호하고 외부 도관에 귀 막대를 삽입합니다. 손상 고막을하지 않도록주의해야합니다.
- 면봉을 사용하여 70 % 에탄올과 베타 딘의 와이프를 번갈아 표면에 피부를 소독.
- 아이 르에서 정중선을 따라 절개를 만들기 위해 메스를 사용하여목 아래 VEL. 두개골 노출 유지하기 위해 피부 견인기를 적용합니다.
- 부드럽게 메스와 두개골의 가장자리에 periostium을 철회하고 두개골 표면이 멸균 면봉을 사용하여 건조 할 수 있습니다. 브레 그마 및 람다를 식별합니다. 기준점으로 브레 그마에 유리 마이크로 피펫을 꽂은 후, 관심 영역의 좌표로 이동합니다. 이 문서에 대해 선택한 관심 영역은 대략 둥글게 모양입니다 브레 그마에 가로 약 2mm를 중심으로, 그리고 프랭클린 마우스 뇌 아틀라스에 따라 감각 피질의 많은 부분을 포함하고 약 30 mm 2의 지역을 커버 팍시 노스 11.
- 참조 점으로 그 위치를 표시하고 빛의 산란을 방지하지만 압력을 발휘하지 관심을 지불 두개골 표면과 밀착 광섬유를 넣어. 조명 영역은 광섬유 GUI의 끝에 작은 구멍이나 모자와 두개골에 마스크를 적용하여 제한 할 수 있습니다드.
4. 로즈 벵골 주입 및 활성화
- 1 ML의 주사기에 로즈 벵골 솔루션을로드하고 체중의 10 μL / g의 용량에 따라 주입되는 양을 계산합니다.
- 느린 복강 주사로 이동합니다.
- 염료 확산시켜 혈류를 입력합니다. 5 분 후 형광 조명을 켭니다. 빛의 다른 소스에 의해 동물의 조명을 피하십시오. 우리는 150 W 강도 광섬유 조명을 사용했다.
- 조명의 15 분 후, 빛의 노출을 중지하고 상처를 봉합. 조명의 5 분은 이미 경색을 생산하고 10 분 최대 효과 12를 얻을 가능성이 충분하다. 가변성을 최소화하기 위해, 우리는 15 분 동안 조명을 선택합니다.
5. 봉합
- 피부 견인기를 제거하고 탈수를 방지하기 위해 멸균 생리 식염수를 적용합니다.
- 반대로 절단 needl를 사용하여 상처를 닫습니다전자 및 실크 또는 나일론 봉합 실.
- 완전히 깨어 때까지 마취 전달을 방해,주의 깊게 정위 장치에서 마우스를 제거하고 미리 예열 가열 패드에 넣어, 다음의 케이지로 돌아갑니다. 체온 경색 확장에 다양성을 제한하는 절차를 통해주의 깊게 모니터링해야합니다. 농도와 투여 경로에 따라, 벵골은 여전히 주사 13 후 몇 시간 동안 혈류에서 발견 할 수있는 로즈. 잠재적 인 이차 손상 (로즈 벵골 흡수 파장 녹색 스펙트럼에있는)을 방지하기 위해 온난화 램프로 가열 담요를 선호합니다.
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Representative Results
이 프로토콜은 이미 육안 (그림 1A-1C)의 피질의 절개시 볼 수있는 대뇌 피질의 병변을 생성합니다. photothrombotic 병변 조직 로즈 벵골의 사진 정품 인증을 허용하도록 충분히 반투명하는 표면과 깊은 대뇌 피질의 레이어를 개발하고 있습니다. 뇌경색의 정도의 측정은 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA)에 고정 후 새로운 조직 또는 크레 실 바이올렛으로 페닐-tetrazolium 염화물 (TTC)와 조직 학적 염색 신속하게 수행 할 수 있습니다. TTC 부화하기 전에, 갓 해부 뇌 뇌 슬라이서에 위치 1 mm 두께의 조각 (그림 1C)에 절편. 경색 지역 경색 영역 (그림 1D-1E)의 정확한 측정을 허용하는, 창백한 나타나는 반면, TTC는 빨간색 그대로 조직을 레이블. 주변부로 정의되지 않은 국소 빈혈의 영역은 병변의 크기에 따라 매우 감소 또는 inexistent입니다.
마찬가지로, 크레 실 바이올렛 염색 보라색 스테인드 주변 조직에 비해 흠 경색 영역의 식별을 할 수 있습니다. 반응성 증식과 세포 침윤 (병변에 따라 첫 주에 발생하는) 또한뿐만 아니라 아교 흉터 (그림 2B1-2B2)의 모양으로, (그림 2A1-2A2) 평가 될 수있다. 음성 대조군은 동일한 수술과 염료 주입을 수행하여 수행하지만, 차가운 광원에 노출하지 않고있다. 병변은 병변 (그림 3A-3B)의 서로 다른 시간 지점에서 크기와 위치에 재현. 경색 영역은 일반적으로 로즈 벵골 주사 14 후 4 ~ 6 시간에 최대 크기에 도달하고 이후 이일 ~ 4 일 게시물 photothrombosis에 신속하게 줄일 수 있습니다. 조사는 더 많은 표면 층에서 발생하지만 깊은 피질 층에있는 대형 선박도 있기 때문에의 폐색 될 수 있습니다압축 병변 7에 의해 자극. 뇌 pial의 미세 혈관의 분포가 서로 다른 연령이나 변형의 동물마다 다를 수 있기 때문에 치료 전에 병변의 재현성을 조사하는 것이 중요합니다.
그림 1. 사일 photothrombosis. AB. 측면 및 정면보기 후에 CD1 쥐 뇌의 photothrombotical 병변의 거시적 인 외관. 표면 경색 (화살촉)는 남의 눈에 보이는 흰색 영역으로 표시됩니다. C.는 뇌를 1 mm 두께의 섹션으로 빠르게 단면 뇌 슬라이서에 위치하고 있습니다. DF는. 뇌경색의 정도의 측정은 TTC 염색하여 수행 할 수 있습니다 . 혈전 병변 내 괴사 조직 문자염색의 부재로 화 된. AC에 나와있는 뇌의 관상 절편 D에서 F로 꼬리 확장에 주동이에 표시됩니다.
그림 2. photothrombotic 손상의 대표 시간적 진화. 성인 C57BL / 6 마우스 뇌 코로나 섹션은 크레 실 바이올렛으로 염색 하였다. A1이 A2가. 칠일 부상 후 세포의 높은 숫자가 경색 경계에서 수집합니다. B1은, B2합니다. 30에서 병변 볼륨이 매우 감소 아교 흉터가 형성된다. A2 및 B2는 각각 A1과 B1의 높은 배율입니다. 스케일 바 : A1, B1 : 1mm, A2 B2 : 0.5 mm.
그림 3. 2시에 뇌의 거시적 외관은 photothrombosis 후 4 16 일. PFA-관류 뇌의 대답 Microphotographs은 더 immunohistological 분석을 위해 준비했습니다. 경색 영역 (점선) 강조 표시됩니다. B.는 병변 후 2, 4, 16 일째 면적의 비교. N 각 그룹 = 4. * p <0.05 (학생의 T - 테스트).
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Discussion
수정 및 대체
때문에 562 nm에서의 흡수 피크, 필터링 된 크세논 아크 램프에서 녹색 빛 레이저는 원래 감광성 로즈 벵골 조사하기 위해 선택되었다. 레이저 매개 여기가 여전히 recently5를 사용했지만, 그것은 또한 염료 여기 10,15을 보장하는 형광 램프로 교체 할 수 있습니다. 형광 광섬유 레이저 소스보다 조작하기 쉽고 저렴합니다. 그러나 레이저는 일반적으로 선박 별 응고 10 생체에 대한 개두술 후 개별 표면 소동맥을 대상으로하는 데 사용되는 것으로 나타났습니다해야한다.
민감한 염료의 배송은 일반적으로 균일하고 재현성 결과를 얻기위한 몇 가지 훈련을 필요로 꼬리 정맥 주입에 의해 수행됩니다. 대조적으로, 복강 내 주입을 수행하는 것이 더 쉽습니다와 로즈 벵갈은 몇 분 13 후 혈액 스트림에서 감지됩니다. 효과적인 photothrombosis는 염료의 혈장 농도가 투여 13 일 후도 60 분을 계속 증가 하였다 복강 주사 8 일 쥐 로즈 벵갈 그러나 높은 복강 내 투여 후 흥미로운 염료 5 분에 의해 달성 될 수있다. 로즈 벵골 주입 정맥 주사 그러나 행정이 방법은 주입이 너무 빠르게 (<1.5 분) 또는 높은 염료 농도 5시에 수행되는 경우에는 저혈압과 연관 될 수 병변 (13)의 재현성을 높일 수 있습니다. 혈압의 변동을 방지를 들어, Erythrosin B 등의 감광 물질이 혈관 폐색을 생성하기 위하여 이용 될 수있다, 그러나이 분자가 농도 5의 동일한 범위 로즈 벵갈보다 효율적으로 간주됩니다.
중요한 단계
다른 요인은 민감한 염료의 농도로 병변의 크기와 깊이, 염료 injecti 사이의 대기 시간에 영향을에와 조명 광원의 강도, 수술 중 및 후 깨달은 표면, 노출 기간과 체온의 직경. 두개골 광원의 각도는 경색의 모양에 영향을 미칠 수 있습니다. 예비 실험의 일련의 재현성을 테스트하고 선택적으로 대상 영역 및 / 또는 취득 의미심장 한 행동 적자에 영향을 미치는 병변을 생산 염료 및 조사 시간의 최소 금액을 결정하기 위해 실시한다.
기술의 한계
이 기술은 대뇌 허혈 4 동안 관찰로 혈소판 응집을 유도하여 인간의 스트로크를 모방하기 위해 개발되었다. 그러나 photothrombotic 손상이 약간 인간의 뇌졸중 다릅니다. 뇌졸중은 일반적으로 단일 터미널 동맥 내 혈액 흐름의 방해로 인해 발생되는 반면, 우선, 혈전증, 조명 영역에있는 혈관의 다수의 트리거됩니다. 으로그들은 담보 동맥에 의해 혈액 공급을받을 수 있으며, 괴사 세포 죽음을 받아야하지 않는 결과는, 신진 대사를 부분적으로 만 혈액의 흐름 중단을받은 동맥에 의해 지원되는 뇌의 일부 지역은 초기에 적은 영향을받습니다. 반면에 매우 제한된 주변부에 photothrombosis 결과에 의해 생성 된 잘 정의 된 경계, 그 후 허혈 신경 요원의 주요 대상입니다. 또한, 뇌졸중 환자의 하위 집합에 재관류가 자발적으로 발생하고 차 피해를 (재관류 손상 등) 유도 할 수 있습니다. 허혈의 특정 측면을 연구하기 위해, 일시적으로 폐쇄 모델이 더 적합합니다.
경색 자체의 패턴은 인간의 치기와 다른 몇 가지 특성을 표시합니다. MRI는 허혈성 경색의 발달 반면 대형 photothrombotic 병변 허혈성 경색 vasogenic 부종의 동시 개발 구호 물자에있는 vasogenic 부종에 우선 표시N 스트로크 16. 반대로, photothrombosis는 photothrombotic 경색 혈소판 또는 고유 응고 경로 17의 억제 차단 한 후 발생합니다 있다는 사실로 인해 항 혈전 제 연구의 연구에 적합하지 않을 수 있습니다. 사실 그것은 독특한 조건에서 혈소판 응고 내피 무결성 중단 부종과 주변 혈관의 관련 압축을 유도 할 수있는 photothrombotic 폐색 필요가 없습니다 것을 제안하고있다. 또한 같은 연구 MRI 분석 혈소판 17의 혈소판 기능이나 고갈 봉쇄 한 후 경색 크기의 변경을 보여주지 않았다.
기존의 방법에 대하여 의미
영구 과도 초점과 허혈의 수많은 잘 표준화 된 모델은, 기계적 또는 화학적으로 유도 밀접하게 인간의 스트로크 병태 생리를 모방 develo을에하기 위해 설치류에서 개발 된P 새로운 신경 전략. 여기에 제시된대로 photothrombosis는 지속적으로 재현성 및 최소 침습적 방법으로 모든 피질이나 피질 사이트에서 원하는 크기의 뇌졸중 손상을 유도 영구적 국소 허혈 모델입니다. 이 모델은 더 광범위한 연구가 98.4 % 18를 취득하는 동안 (25 동물) 우리의 실험에서 100 %에 도달하는 높은 생존율을 보여줍니다. photothrombotic 병변은 여러 테스트 6,19에 의해 평가 될 수있는 대상 지역과 행동 회복에 따라 정확한 기능에 영향을하기 위해 사용자 정의 할 수 있습니다. 또한이 방법은 시간이 많이 걸리는, 약간의 비용이며 기술적으로 필라멘트 모델 등 다른 모델과는 달리 요구되지 않는 한 신속하게 배울 수 있습니다. 또한 혈관 폐색은 인간의 뇌졸중에서 관찰 된 것과 구조적으로 유사하다 혈전의 로컬 형성을 유도하여 얻을 수 있습니다. 그러나 photothrombotic 방법은 홍보를 위해 적응시켰다중대 뇌동맥 20 oducing 폐색. 링 병변 모델은 나중에 큰 주변부를 얻기 위해 개발되었다. 그것은 가능한 조직의 대뇌 피질의 영역은 원형 손상된 조직으로 둘러싸여 있으며, 허혈 주변부 21,22의 생화학 및 분자 특성을 공유하는의 중앙에 원형의 모양에 따라 조명으로 구성되어 있습니다. 기술의 변형은 또한 두뇌 개발 23 또는 피질 조직 24 뇌졸중을 수행 할 수 있습니다.
결론적으로, photothrombosis 높은 재현성 허혈 모델을 수행하기 쉽습니다. 또한, 그것은 세포 및 분자 두 수준에서, 특히 뇌 손상의 질문에 답변 대뇌 피질의 소성의 평가를 위해 실험 뇌졸중 연구의 숫자에 적합합니다.
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Disclosures
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
Acknowledgments
우리는 통찰력있는 제안과 의견, 그리고 마우리 Grassano, 마리나 Boido 및 촬영 Ermira Pajaj에 대한 Annalisa 익살 감사합니다. 이 작품은 FP7-MC-214003-2 (마리 퀴리 초기 교육 네트워크 AXREGEN)와 COMPAGNIA 디 산 파올로, gliarep 프로젝트에 의해 투자되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Solutions and chemicals | |||
| Rose Bengal | Sigma, Italy | 330000 | |
| Isoflurane Vet | Merial | 103120022 | |
| Betadine | Asta Medica | ||
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Surgical material and equipment | |||
| Fluosorber Filter | Havard apparatus | 340415 | |
| 150W fiber optic illuminator | Photonic | PL3000 | |
| Temperature Controller for Plate TCAT-2DF | Havard apparatus | 727561 | |
| Stereotaxic Instrument | Stoelting | 51950 | |
| Operating microscope | Takagi | OM8 | |
| Heating pad | |||
| Oxygen and nitrogen gas | |||
| Surgery Tools | World precision instrument | Optic fiber taps and mask are custom-made | |
References
- Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. Global and regional burden of disease and risk factors. Lancet. 367, 1747-1757 (2001).
- Mathers, C. D., Boerma, T., Ma Fat, D. Global and regional causes of death. Br. Med. Bull. 92, 7-32 (2009).
- Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents. Circ. Res. 40, 320-328 (1977).
- Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Ann. Neurol. 17, 497-504 (1985).
- Bergeron, M. Inducing photochemical cortical lesions in rat brain. Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9, Unit 9 16 (2003).
- Lee, J. K., et al. Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model. Surg. Neurol. 67, 620-625 (2007).
- Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations. Acta Neuropathol. 72, 315-325 (1987).
- Schroeter, M., Jander, S., Stoll, G. Non-invasive induction of focal cerebral ischemia in mice by photothrombosis of cortical microvessels: characterization of inflammatory responses. J. Neurosci. Methods. 117, 43-49 (2002).
- Kitagawa, K., et al. Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery. J. Cereb. Blood Flow Metab. 18, 570-579 (1998).
- Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope. J. Neurosci. Methods. 170, 35-44 (2008).
- Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , 1st, Academic Press. New York. (1997).
- Piao, M. S., Lee, J. K., Jang, J. W., Kim, S. H., Kim, H. S. A mouse model of photochemically induced spinal cord injury. J. Korean Neurosurg. Soc. 46, 479-483 (2009).
- Silva, V. M., Corson, N., Elder, A., Oberdorster, G. The rat ear vein model for investigating in vivo thrombogenicity of ultrafine particles (UFP). Toxicol. Sci. 85, 983-989 (2005).
- Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. Photochemically induced spinal cord injury in the rat. Brain Res. 367, 296-300 (1986).
- Van Reempts, J., Van Deuren, B., Van de Ven, M., Cornelissen, F., Borgers, M. Flunarizine reduces cerebral infarct size after photochemically induced thrombosis in spontaneously hypertensive rats. Stroke. 18, 1113-1119 (1987).
- Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx. 2, 396-409 (2005).
- Kleinschnitz, C., et al. Blocking of platelets or intrinsic coagulation pathway-driven thrombosis does not prevent cerebral infarctions induced by photothrombosis. Stroke. 39, 1262-1268 (2008).
- Porritt, M. J., et al. Photothrombosis-induced infarction of the mouse cerebral cortex is not affected by the Nrf2-activator sulforaphane. PLoS One. 7, e41090 (2012).
- Baskin, Y. K., Dietrich, W. D., Green, E. J. Two effective behavioral tasks for evaluating sensorimotor dysfunction following traumatic brain injury in mice. J. Neurosci Methods. 129, 87-93 (2003).
- Markgraf, C. G., et al. Comparative histopathologic consequences of photothrombotic occlusion of the distal middle cerebral artery in Sprague-Dawley and Wistar rats. Stroke. 24, 286-292 (1993).
- Wester, P., Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D. A photothrombotic 'ring' model of rat stroke-in-evolution displaying putative penumbral inversion. Stroke. 26, 444-450 (1995).
- Hu, X., Wester, P., Brannstrom, T., Watson, B. D., Gu, W. Progressive and reproducible focal cortical ischemia with or without late spontaneous reperfusion generated by a ring-shaped, laser-driven photothrombotic lesion in rats. Brain Res. Brain Res. Protoc. 7, 76-85 (2001).
- Maxwell, K. A., Dyck, R. H. Induction of reproducible focal ischemic lesions in neonatal mice by photothrombosis. Dev. Neurosci. 27, 121-126 (2005).
- Kuroiwa, T., et al. Development of a rat model of photothrombotic ischemia and infarction within the caudoputamen. Stroke. 40, 248-253 (2009).
