Summary
ووصف طريقة مرحلتين لإنشاء مرض الكلى المزمن (كد) في الفئران لويس عن طريق إزالة جراحيا 5/6th من كتلة الكلوي. مزيج من إجراء العمليات الجراحية، NOS-تثبيط واتباع نظام غذائي غني بالملح يؤدي إلى نموذج يشبه كد الإنسان، والسماح دراسة الآليات السببية وتطوير تدخلات علاجية جديدة.
Abstract
مرض مزمن في الكلى (كد) هو مشكلة عالمية. تباطؤ التقدم كد من الأولويات الصحية الرئيسية. منذ يتميز كد بواسطة خللا المعقدة من التوازن، النماذج الحيوانية تكاملية ضرورية لدراسة تطور وتقدم من كد. لدراسة تطوير التدخلات العلاجية كد والرواية في كد، ونحن نستخدم نموذج الاجتثاث استئصال الكلية 5/6th، وهو نموذج تجريبي من المعروف جيدا من مرض الكلى التدريجي، تشبه عدة جوانب من كد الإنسان. ويصل إجمالي التخفيض في كتلة الكلوي الكبيبي يسبب التدريجي وإصابة انبوبية-الخلالي، وفقدان النيفرون بقايا والتنمية من ارتفاع ضغط الدم النظامية والكبيبي. كما انه يرتبط مع تقدمية ضمن الكلية الشعرية الخسارة، التهاب الكبيبات و. عوامل الخطر لكد دائما تأثير على وظيفة بطانة الأوعية الدموية. لتقليد هذا، ونحن الجمع بين إزالة 5/6th من كتلة الكلوي مع أكسيد النيتريك (NO) استنزاف واتباع نظام غذائي عالي الملح. بعد وصول والتأقلم، وإعادة الحيواناتالوقت المتفق عليه لNO المانع سينسيز (NG-نيترو-L-أرجينين) (L-NNA) تستكمل لمياه الشرب (20 ملغم / لتر) لمدة 4 أسابيع، تليها استئصال إحدى الكليتين جانب الحق. بعد أسبوع واحد، يتم إجراء استئصال الكلية المجموع الفرعي (SNX) على الجانب الأيسر. بعد SNX، يسمح للحيوانات لاسترداد لمدة يومين تليها LNNA في مياه الشرب (20 ملغم / لتر) لفترة أخرى مدتها 4 أسابيع. واصلت اتباع نظام غذائي عالية من الملح (6٪)، على أن تستكمل في الأرض تشاو (انظر الإطار الزمني الشكل 1)، في كافة مراحل التجربة. ويتبع تطور الفشل الكلوي مع مرور الوقت من خلال قياس البلازما اليوريا، وضغط الدم الانقباضي وبروتينية. من قبل ستة أسابيع بعد SNX، وقد وضعت الفشل الكلوي. يتم قياس وظائف الكلى باستخدام حبوب "المعيار الذهبي" وحمض الهيبوريك شبه الأمينية (PAH) تكنولوجيا إزالة الألغام. ويتميز هذا النموذج من كد من انخفاض في معدل الترشيح الكبيبي (GFR) وتدفق البلازما الكلوي الفعال (ERPF)، ارتفاع ضغط الدم (ضغط الدم الانقباضي> 150 مم زئبق)، بروتينية (> 50 mg/24 ساعة) ويوريمية معتدل (> 10 ملم). وتشمل الميزات النسيجية الضرر انبوبية-الخلالي التي تعكسها التهاب، ضمور أنبوبي وتليف وتصلب الكبيبات التنسيق مما أدى إلى انخفاض كبير من الكبيبات صحي بين السكان بقايا (<10٪). المتابعة حتى بعد 12 أسبوعا تبين SNX مزيد من التقدم من كد.
Introduction
ونظرا لطبيعته التقدمية، التي تلت نهاية المرحلة مرض الكلى، والاعتلال القلب والأوعية الدموية المرتبطة بها والوفيات، كد هي مشكلة متنامية للصحة العامة 1. وبالتالي تباطؤ التقدم كد من الأولويات الصحية الرئيسية. منذ يتميز كد بواسطة خللا المعقدة من التوازن، النماذج الحيوانية تكاملية ضرورية لدراسة تطور وتقدم من كد. تتكون الكلى من مجموعة واسعة من أنواع مختلفة من الخلايا التي تتفاعل مع بعضها البعض. لا يمكن أن تحاكي هذا التعقيد في المختبر.
لدراسة التدخلات العلاجية رواية في كد، ونحن نستخدم نموذج 5/6th استئصال الكلية الاجتثاث، وهو نموذج تجريبي معروفة من مرض الكلى التدريجي، تشبه عدة جوانب من كد الإنسان 2،3. ويصل إجمالي التخفيض في كتلة الكلوي الكبيبي يسبب التدريجي وإصابة انبوبية-الخلالي، وفقدان النيفرون بقايا والتنمية من ارتفاع ضغط الدم النظامية والكبيبي. يترافق ذلك مع البرامج الحديثة اضافة بالصورessive ضمن الكلية فقدان شعري 4، التهاب الكبيبات و. عوامل الخطر لكد دائما تأثير على وظيفة بطانة الأوعية الدموية 5. كنا سلالة الفئران (لويس) التي هي مقاومة للتطوير كد نسبيا، وبالتالي فإننا مجتمعة إزالة 5/6th من كتلة الكلوي مع أكسيد النيتريك (NO) استنفاد 6، 7، 8 واتباع نظام غذائي ملح عالية 9. بعد وصول والتأقلم، والحيوانات تحصل على NO المانع سينسيز (L-NNA) تستكمل لمياه الشرب (20 ملغم / لتر) لمدة 4 أسابيع، تليها استئصال إحدى الكليتين جانب الحق (UNX) مع استمرار L-NNA بعد يومين . بعد أسبوع واحد، يتم تنفيذ المجموع الفرعي استئصال الكلية (SNX) أي إزالة 2/3rds من كتلة الكلوي على الجانب الأيسر. بعد SNX، يسمح للحيوانات لاسترداد لمدة 2 أيام ثم مرة أخرى بنسبة 20 ملغ / لتر في مياه الشرب LNNA لمدة 4 أسابيع. واصلت اتباع نظام غذائي عالية من الملح (6٪)، على أن تستكمل في الأرض تشاو (انظر الإطار الزمني الشكل 1)، في كافة مراحل التجربة. Tانه سبب لأداء UNX على الجانب الأيمن وSNX على الجانب الأيسر هو أن الأوعية الكلوية هي أطول على الجانب الأيسر مما يجعل من الاسهل للوصول إلى الكلى دون تمتد الأوعية كثيرا عندما يتعرض الكلى خارج الجسم . في الأدب، وصفت النماذج التي يتم إزالة أعمدة من الكلية اليسرى أولا، تليها UNX من الكلية اليمنى بعد أسبوع واحد 10،11،12. في أيدينا أظهر هذا النموذج أكثر بكثير السريع تطوير الفشل الكلوي، ولكن أيضا تباين أكبر بكثير في فقدان وظائف الكلى. ويتبع تطور الفشل الكلوي مع مرور الوقت من خلال قياس البلازما اليوريا، وضغط الدم الانقباضي وبروتينية. من قبل ستة أسابيع بعد SNX، وقد وضعت الفشل الكلوي، والتي تتميز انخفاض ملحوظ في معدل الترشيح الكبيبي (69٪) وتدفق البلازما الكلوي فعالة (62٪) 13 ارتفاع ضغط الدم (ضغط الدم الانقباضي> 150 مم زئبق)، بروتينية (> 50 mg/24 HR) ومعتدل يوريمية (> 10 ملم). وتشمل الميزات النسيجية tubulالضرر O-الخلالي التي تعكسها التهاب، ضمور أنبوبي وتليف وتصلب الكبيبات التنسيق مما أدى إلى انخفاض كبير من الكبيبات صحي بين السكان بقايا (<10٪). المتابعة حتى بعد 12 أسبوعا تبين SNX مزيد من التقدم من كد، وتوفير فرصة لتقييم التدخلات العلاجية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
يتم تنفيذ جميع التجارب وفقا لدليل تجريبي خطوط الأخلاقية الحيوانية للجنة الحيوان أوتريخت التجريبية. يتم تنفيذ البروتوكول بتوجيه وموافقة من مؤسسة رعاية الحيوان المؤلف واللجنة الاستخدام.
هو فعل كد في ذكر الفطرية لويس الفئران (تشارلز ريفر، Sulzfeld، ألمانيا) في سن 8 أسابيع. يتم إيواء الفئران تحت الظروف القياسية في بيئة، وعلى ضوء درجة الحرارة والرطوبة التي تسيطر عليها.
1. التحضير لعملية جراحية
- تعقيم الأدوات الجراحية:
- 1 الأنسجة طالب ملقط 1-2 أسنان 12 سم
- 1 طالب ملقط نمط القياسية
- 2 ملقط Semken
- 1 مايو مقص
- 1 طالب مقص القزحية
- 1 أولسن-هيغار حامل إبرة مع مقص
- بطانية
- تحقق قائمة الجرد:
- طاولة العمليات مع لوحة الاحترار ومصباح
- O
- الأنسجة
- صبي
- موازين
- مجموعة التشغيل العقيمة
- 5X5 شاش معقم و10X10
- 70٪ كحول
- 0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم
- 1 مل حقنة
- الإبر (25G)
- جل فوم: spongostan
- VICRYL 4.0 و 5.0
- البوبرينورفين 0.03 مغ / كغ (1:10 المخفف في الملح الفسيولوجية)
- قفص نظيفة للفئران بعد الجراحة
2. استئصال إحدى الكليتين الجانب الأيمن
- تطهير الجدول مع الكحول 70٪.
- مكان الفئران في مربع الاستقراء ولحث التخدير مع 4٪ isoflurane وو 1 لتر من تدفق O 2. ملاحظة: اعتمادا على سلالة الفئران المستخدمة، توصف قبل وتسكين المحيطة بالجراحة، وهذا يحتاج إلى أن تناقش مع الطبيب البيطري المحلي.
- نقل الفئران إلى طاولة ومكان الأنف في مخروط. يتم وضع الفئران ومخروط الأنف على وسادة التدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم في الجرذ. الفئران أناق التهوية بمزيج من 2٪ isoflurane وو 1 ليتر O 2.
- حلاقة الجهة من الفئران وتعقيم مع الكحول. غسل وتطهير اليدين وارتداء القفازات الجراحية المعقمة. ارتداء قبعة الرأس وقناع. جعل بنتيجة 1 - 1.5 سم شق بالتوازي مع الأضلاع باستخدام ملقط التشريحية ومقص حادة. فضح الكلى عن طريق تشريح حادة في عضلات الظهر.
- القطب السفلي من الكلى مرئيا، بعناية استخدام الملقط حادة صغيرة لقبضة الأنسجة الدهنية محيط بالكلية. تخريج الكلى عن طريق سحب بلطف على الدهون محيط بالكلية مع ملقط. الحرص على عدم تعكير صفو الغدة الكظرية أثناء هذا الإجراء. الغدة الكظرية ويمكن إزالتها بسهولة عن طريق وضع ملقط في موقع وسطي في الأنسجة الدهنية وانتقلت بلطف صعودا بين الغدة الكظرية والكلى كما هو مبين في الشكل 2.
- وضع الكلى بلطف على شاش واضحة من الأنسجة المحيطة الدهون والضامة. تحديد الشريان الكلوي والوريد ووضع رباط (5.0VICRYL) مع عقدة واحدة حول الأوعية، ولكن لا ربط قبالة عقدة.
- تحريك عقدة فضفاضة بعناية على طول الأوعية نحو الشريان الأورطي من قبل ما يقرب من 0.5 سم، لخلق مساحة بين الكلى وعقدة. ويتم ذلك لمنع ضمد من الانزلاق بعد القطع.
- ربط عقدة مع اثنين من عقدة مزدوجة. إذا توقفت التروية، فإن اللون في الكلى تغيير على الفور إلى البني. لا تقطع نهايات ضمد.
- قطع الأوعية الكلوية على مقربة من الكلى وإزالة الكلى. سحب بلطف على الغايات طويلة من ضمد للتحقق من نزيف من الأوعية الكلوية. ربطة يجب أن يبقى في مكان على متن السفينة. قطع نهايات طويلة من ضمد. ملاحظة، سوف الأوعية الكلوية بقايا التراجع في تجويف البطن على الفور.
- لطخة الكلى رفعه الجافة وتزن عليه.
- إغلاق شق العضلات والهيكل العظمي مع تشغيل الغرز مع VICRYL 5.0. حقن 0.10 مل (0.03 ملغ / كلغ) بوبرينورفين ايم في أطرافه الخلفية. إغلاقالجلد مع VICRYL 4.0 مع الغرز داخل الجلد. هذا يمنع الفئران من فتح الجرح. ملاحظة: نظرا للاكتئاب الجهاز التنفسي في الفئران لويس، ونحن لا تعطي إلا تسكين بعد العملية فقط قبل إغلاق isoflurane و.
- إيواء الفئران في قفص الانفرادي نظيفة مع سهولة الوصول إلى الطعام والماء. ضع نصف القفص على الاحترار سادة O / N والتحقق من الفئران بعناية في اليوم التالي. عندما يتم إغلاق الجرح والفئران نشطا، والذي هو عادة بين 6 و 12 ساعة بعد الجراحة، والفئران يمكن وضعها مرة أخرى إلى السكن المجموعة.
3. الجانب الأيسر استئصال الكلية المجموع الفرعي
- بعد سبعة أيام، يتم إجراء نفس الاستعدادات على الجانب الأيسر أما الجانب الأيمن كما هو موضح 2،1-2،5. قبل الجراحة، يتم حساب كمية الأنسجة الكلوية التي تحتاج إلى إزالة المقابلة لحوالي 2/3rds من وزن الكلية اليمنى. إعداد قطع صغيرة من الرغوة هلام (Spongostan، وجونسون آند جونسون، نيو جيرسي) قبل الجراحة. ضع مقص حاد حول القطب العلوي من الكلية اليسرى وبتر القطب العلوي في ضربة واحدة (على موقع مقص، انظر الشكل 3). تغطية مباشرة مع قطعة من رغوة جل وممارسة ضغوط خفيفة مع شاش معقم.
- كرر مع القطب السفلي من الكلى كما هو الحال في 3.3.
- رفع الكلى لمنع تخثر الدم على الجلد. الحفاظ على ضغط معتدل على كلا منصات رغوة الجل مع شاش معقم حتى يتوقف النزيف. عندما استمر النزيف، إضافة وسادة رغوة آخر.
- وضع بقايا الكلى مع ملتصقة فوم هلام داخل البطن. إغلاق العضلات والجلد واتبع 2،9-2،12.
4. الشام جراحة
- ضوابط تعمل الشام الخضوع لنفس الإجراء من أجل فضح الكلى. وبدلا من اقتلاع الكلى أو قطع القطبين بعد أسبوع واحد يتم الأرتيميا Decapsulated كلا الكلى في فترة أسبوع واحد، مع الحرص على عدم تعكير صفو الغدد الكظرية. إغلاق الجرح والرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية هي معرفentical إلى 2.11 و 2.12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بعد استئصال الكلية المجموع الفرعي، يتم ترك حوالي 1/6th من مجموع كتلة الكلوي. ويبين الشكل 4 وزن الجزء إزالة من الكلية اليمنى مع المتوسط والانحراف المعياري في اثنين من التجارب السابقة. ينبغي للمرء أن نضع في اعتبارنا أنه في الأسبوع بعد UNX، يحدث تضخم في الكلية اليسرى؛ مشيرا إلى أن الوزن الذي يحتاج إلى إزالتها محسوبة على أساس وزن الكلية اليمنى دائما النتائج في أقل من إزالة 5/6th. ومع ذلك، لأنه ليس من الممكن تحديد وزن الكلية اليسرى أثناء الجراحة، وهذا هو السبيل الأكثر دقة لإزالة ما يقرب من 5/6th من كتلة الكلوي الأصلي.
مع مرور الوقت، مع الفئران كد تطوير ارتفاع ضغط الدم، يوريمية، وفقر الدم، وبروتينية انخفاض ملحوظ في معدل الترشيح الكبيبي وERPF. بعد 6 أسابيع، وقد وضعت كد المعمول بها، مناسبة نقطة الوقت لاختبار تدخلات الإنقاذ. مع مرور الوقت، لوحظ تطور قوي من ارتفاع ضغط الدم وبروتينية في حين الهيماتوكريتوظيفة الكلى (GFR وERPF) تظهر تدهور معتدل (الشكل 5). أعراض أخرى أننا لا نركز عليها في تجاربنا تشمل خللا في الكالسيوم فوسفات والتمثيل الغذائي للدهون، وغيرها الكثير. اعتمادا على سلالة من الفئران، ويمكن تطوير كد تختلف بشكل ملحوظ 14، 15، 2. أضفنا النظام الغذائي عالية من الملح وNO مانع للحث على ارتفاع ضغط الدم واختلال وظيفي البطانية.
وتعقب تطور الفشل الكلوي عن طريق جمع البول (لقياس كمية البروتين والكرياتينين) والدم (البلازما اليوريا والكرياتينين) وضغط الدم الانقباضي. ونحن ندرك يمكن اتباعها أن التنمية من ارتفاع ضغط الدم أكثر دقة عند استخدام القياس عن بعد بدلا من ذيل تخطيط التحجم الكفة. ويمكن حساب تصفية الكرياتينين ولكنه يميل إلى التقليل من انخفاض في GFR بسبب إفراز الكرياتينين الأنبوبي واسعة في الفئران 16، مؤكدا على أهمية الأسلوب معيار الذهب لتحديد وظيفة الكلى من حبوب والتخليص PAH 17، 18، 19. Koeners وآخرون. وصف الإجراء الكامل 20. وتحسب حبوب والتخليص PAH من تركيزهم في عينة البول (U)، ومعدل تدفق البول (V)، وتركيز البلازما الخاصة بهم (P). أظهرنا سابقا انخفاض ملحوظ في معدل الترشيح الكبيبي وERPF في هذا النموذج باستخدام تكنولوجيا إزالة الكلاسيكية، في حين أن هذا كان أقل وضوحا من التغييرات في البلازما الكرياتينين، والبلازما واليوريا، والكرياتينين أو التخليص 13.
الشكل 1. يشار إلى خط الزمن من L-NNA، وارتفاع حمية الملح، UNX وSNX. القياسات الطولية لتحديد وظيفة الكلى وإنهاء الوقت نقطة. عندما تعد المتابعة اللازمة بعد SNX، لا يمكن أن تستمر 6٪ كلوريد الصوديوم الغذائي مع مرور الوقت.
98fig2.jpg "/>
الشكل 2. تشريح الغدة الكظرية. لإزالة الغدة الكظرية من دون إزعاج ذلك، ملقط مكان في الدهون بين الكلى والغدة الكظرية، والانتقال من أعلى القطب سفينة إلى الأعلى حيث تشير بواسطة الخط الأحمر. الرقم مقتبس من طبعة الولايات المتحدة 20 من تشريح غراي من جسم الإنسان، 1918.
الشكل (3). استئصال الكلية المجموع الفرعي. الخطوط الحمراء تشير حواف القطع. الرقم مقتبس من طبعة الولايات المتحدة 20 من تشريح غراي من جسم الإنسان، 1918.
الشكل 4: النسبة المئوية لإزالة الأنسجة الكلوية بعد استئصال الكلية المجموع الفرعي في تجربتين مختلفة. إكسب 1، ن = 16، إكسب 2، ن = 23.
E = "دائما"> 
الشكل 5. تطوير الفشل الكلوي في الفئران كد تنتهي بعد 6 أسابيع SNX (خطوط sdashed ن = 5) مقابل الاصحاء (خطوط pdashed ن = 5) والجرذان كد تنتهي بعد 12 أسبوعا SNX (£ ن = 8) مقابل صحية ضوابط (• ن = 8). الفئران كد تلقى L-NNA حتى الاسبوع 4 وارتفاع حمية الملح من الاسبوع 1 حتى إنهاء (لا يظهر في الرسوم البيانية). SNX يدفع ارتفاع ضغط الدم (التي تقاس tailcuff تخطيط التحجم) (A)، يوريمية (B)، وفقر الدم (C) وبروتينية (D) وملحوظ الحد من GFR (E) وERPF (F) 13. * يشار P <0.05 مقابل الاصحاء لكل نقطة زمنية اختبارها من قبل اتجاهين ANOVA مع Bonferroni آخر اختبار لرسوم بيانية A، B و D. ويتم اختبار الرسوم البيانية C، E و F مع اثنين من الذيلاختبار t لمدة 6 أسابيع و 12 نقطة زمنية. انقر هنا لعرض أكبر شخصية .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الاستئصال الجراحي لل5/6th من كتلة الكلوي في الفئران لويس، جنبا إلى جنب مع اتباع نظام غذائي غني بالملح وNOS تثبيط مؤقت يؤدي إلى نموذج من كد كد يشبه الإنسان وتسمح دراسة الآليات السببية ونجاعة التدخلات العلاجية في كد.
نموذج استئصال الكلية 5/6th هو نموذج معروف وصفت على نطاق واسع لكد. ومع ذلك، ببساطة إزالة 5/6th من كتلة الكلى لا تؤدي إلى الفشل الكلوي الفوري في جميع سلالات الفئران. نحن نستخدم الفئران لويس إلى دراسة آثار العلاجات المستندة إلى الخلايا في كد كما توفر GFP + لويس الفئران 21 يسمح خلية لتتبع الخلايا المانحة تدار في المتلقي (nonGFP +) الفئران. الفئران لويس هي مقاومة للتطوير والتنمية إصابة الكلى من كد نسبيا وبطيئة بالمقارنة مع السلالات الأخرى 22، 15. ولذلك، فإننا مجتمعة إزالة 5/6th من كتلة الكلوي مع NO نضوب واتباع نظام غذائي عالي الملح لأن هذا يشبه عدة جوانب من كد الإنسانمثل ارتفاع كمية الملح واختلال وظيفي البطانية. القراء أن نأخذ في الاعتبار أن الحاجة إلى الجمع بين استئصال الكلية 5/6th مع ارتفاع حمية الملح و / أو NO نضوب يعتمد على سلالة من الفئران المستخدمة في التجارب.
أجرينا استئصال الكلية 5/6th في إجراء خطوتين بدلا من إجراء من خطوة واحدة كما يعتبر هذا النحو أقل وطأة للحيوان، ويرتبط مع معدل وفيات أقل المرتبطة جراحة ويفضل من قبل لجنة الحيوانية لدينا التجريبية. فضلنا شق الجناح بدلا من laparatomy للوصول إلى الكلى كما يرتبط البطن مع ارتفاع خطر الإصابة الجرح، وتخفيف من الغرز، تحت الجلد فتق والالتصاقات إلى الأمعاء بالمقارنة مع شق الجناح. وعلاوة على ذلك، إذا كان التصميم التجريبي ينطوي على تدخل مع البطن - كما هو الحال في دراستنا التجريبية لإدارة خلايا نخاع العظام في الشريان الكلوي من بقايا laparotomies الكلى أداء لSNX ليس قبلferable كما laparotomies المتكررة ينبغي تجنبها.
بعد الاستئصال الجراحي لل5/6th من كتلة الكلوي، يمكن أن يحدث العديد من المشاكل الخطيرة. خلال UNX يمكن أن تكون هناك صعوبات تحقيق الاستقرار في الكلى منذ الدهون المحيطة وفصل بسهولة. طريقتين يمكن استخدامها للحصول على الكلى عرضة للخطر. 1) استخدام ملقط أصغر للحصول على قبضة على الأوعية الكلوية عن طريق تحريك بلطف إلى أسفل من القطب السفلي من الكلية نحو الأوعية الدموية وسحب بعناية حتى تتمكن من تحقيق الاستقرار في الكلى. 2) استخدام ملقط حادة لسحب بعناية الكلى من البطن. عندما يتعرض الكلى، ويمكن استخدام الشاش لوقف النزيف الذي قد يحدث خلال هذا الإجراء. لمنع النزيف، وبدء سحب الدهون في القطب السفلي من الكلى، حيث يتم إرفاق بقوة الدهون إلى الكلى.
فمن المهم لخلق مساحة بين عقدة حول سفينة الكلى والكلى لمنع النزيف بعد إزالة الكلى كما عقدة يمكن خلعالأوعية الكلوية نتيجة لتدفق الدم واردة، بسرعة ملء البطن مع الدم. A الشاش يمكن استخدامه لإزالة الدم وينبغي تطبيق ضغط لوقف النزيف. استخدام ملقط لقبضة الكلوي ووضع رباط جديد. عندما لا يمكن تتبع السفن الكلوي مرة أخرى، والحفاظ على الضغط حتى يتم إيقاف النزيف. إضافة 1 مل من الملح الفسيولوجية لمنع الجفاف بسبب نزيف في تجويف البطن والانتظار حوالي 5 دقائق قبل أن يغلق العضلات وطبقة الجلد. رصد الفئران اضافية بعناية للأيام التالية. عندما ضمد لا يزال قائما بعد إزالة الكلى ولكن الأوعية الكلوية والنزيف، وينتهي طويلة من ضمد يمكن استخدامها لادراك التعادل قبالة السفن.
عندما بعد تشريح القطبين، على الرغم من الضغوط على عقد منصات رغوة الجل إذا استمر النزيف، وهذا هو الأرجح بسبب إصابة الشريان الكلوي كبير أو الحوض الكلوي. هذا النزيف يمكن وقفها من خلال وضع منصات جديدة رغوة الجل على الجرح، مع الحرص على عدم التحركلوحة رغوة خلال رفع بقايا منذ السفن الأكبر حجما على مقربة من نقير، والانتظار لفترة أطول.
ويمكن إرجاع الدم في البول حتى 2 أيام بعد الجراحة. عند تلف الحوض الكلوي أو سفينة كلوي كبيرة استمرت لتنزف، وسيكون هناك أثرا مستديما من بيلة دموية. الفئران مع بيلة دموية مستمرة بعد عملية جراحية تحتاج إلى أن يتم التخلص نظرا لأنه ليس من الممكن لوقف النزيف. إذا لوحظ بيلة دموية في نقطة وقت لاحق بعد الجراحة، والتي يمكن أن تحدث لتصل إلى 2 أسابيع بعد الجراحة، وينبغي أيضا أن يتم التخلص من الفئران منذ الدم لديه متخدر داخل الحوض الكلوي وسوف تسد في نهاية المطاف الحالب والمثانة، مما يؤدي إلى انسداد.
عندما يكون مطلوبا مزيد من التنمية السريعة من الفشل الكلوي، وبروتوكول يمكن عكسها، أي أولا إزالة أعمدة تليها استئصال إحدى الكليتين في وقت لاحق في الأسبوع. وقد استخدم هذا النموذج في عكس سلالات الفئران الأخرى، انظر على سبيل المثال ليو وآخرون.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
نشكر كريستا دن Ouden لها المساعدة التقنية الممتازة. وأيد هذه التقنية ماليا من قبل مؤسسة الكلى الهولندية، ومنحة C06.2174. ويدعم MCV من قبل المنظمة الهولندية للأبحاث العلمية (NWO) VIDI-منحة 016.096.359.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| L-NNA | Sigma-aldrich | N5501 | |
| Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm | Johnson&Johnson | Ms0005 | |
| Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 | Ethicon | V303H | |
| Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 | Ethicon | V392H | |
| Buprenorphine (0.3 mg/ml) | Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals | unknown | |
| Equipment | |||
| Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm | Fine Science Tools (FST) | 91121-12 | |
| Student Standard Pattern Forceps | FST | 91100-12 | |
| Mayo Scissors | FST | 14010-15 | |
| 2X Semken Forceps | FST | 11008-13 | |
| Student Iris Scissors | FST | 91460-11 | |
| Olsen-Hegar Needle Holder | FST | 12002-14 | |
|
|||
References
- AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization. N. Engl. J. Med. 351 (13), 1296-1305 (2004).
- Fleck, C., Appenroth, D., et al. Suitability of 5/6 nephrectomy (5/6NX) for the induction of interstitial renal fibrosis in rats--influence of sex, strain, and surgical procedure. Exp. Toxicol. Pathol. 57 (3), 195-205 (2006).
- Griffin, K. A., Picken, M. M., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A. K. Functional and structural correlates of glomerulosclerosis after renal mass reduction in the rat. J. Am. Soc. Nephrol. 11 (3), 497-506 (2000).
- Kang, D. H., Kanellis, J., et al. Role of the microvascular endothelium in progressive renal disease. J. Am. Soc. Nephrol. 13 (3), 806-816 (2002).
- Baylis, C. Nitric oxide synthase derangements and hypertension in kidney disease. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 21 (1), 1-6 (2012).
- Bongartz, L. G., Braam, B., et al. Transient nitric oxide reduction induces permanent cardiac systolic dysfunction and worsens kidney damage in rats with chronic kidney disease. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 298 (3), 815-823 (2010).
- Fujihara, C. K., De N, G., Zatz, R. Chronic nitric oxide synthase inhibition aggravates glomerular injury in rats with subtotal nephrectomy. J. Am. Soc. Nephrol. 5 (7), 1498-1507 (1995).
- Fujihara, C. K., Sena, C. R., Malheiros, D. M., Mattar, A. L., Zatz, R. Short-term nitric oxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 290 (3), F632-F640 (2006).
- Dikow, R., Kihm, L. P., et al. Increased infarct size in uremic rats: reduced ischemia tolerance? J. Am. Soc. Nephrol. 15 (6), 1530-1536 (2004).
- Elrashidy, R. A., Asker, M. E., Mohamed, H. E. Pioglitazone attenuates cardiac fibrosis and hypertrophy in a rat model of diabetic nephropathy. J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 17 (3), 324-333 (2012).
- Haylor, J., Schroeder, J., et al. Skin gadolinium following use of MR contrast agents in a rat model of nephrogenic systemic fibrosis. Radiology. 263 (1), 107-116 (2012).
- Moriguchi, Y., Yogo, K., et al. Left ventricular hypertrophy is associated with inflammation in sodium loaded subtotal nephrectomized rats. Biomed. Res. 32 (2), 83-90 (2011).
- van Koppen, A., Joles, J. A., et al. Healthy bone marrow cells reduce progression of kidney failure better than CKD bone marrow cells in rats with established chronic kidney disease. Cell Transplant. , (2012).
- Baylis, C., Corman, B. The aging kidney: insights from experimental studies. J. Am. Soc. Nephrol. 9 (4), 699-709 (1998).
- Szabo, A. J., Muller, V., Chen, G. F., Samsell, L. J., Erdely, A., Baylis, C. Nephron number determines susceptibility to renal mass reduction-induced CKD in Lewis and Fisher 344 rats: implications for development of experimentally induced chronic allograft nephropathy. Nephrol. Dial Transplant. 23 (8), 2492-2495 (2008).
- Darling, I. M., Morris, M. E. Evaluation of "true" creatinine clearance in rats reveals extensive renal secretion. Pharm. Res. 8 (10), 1318-1322 (1991).
- Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney Int. 38 (1), 167-184 (1990).
- Myers, G. L., Miller, W. G., et al. Recommendations for improving serum creatinine measurement: a report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program. Clin. Chem. 52 (1), 5-18 (2006).
- Hostetter, T. H., Meyer, T. W. The development of clearance methods for measurement of glomerular filtration and tubular reabsorption. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 287 (5), F868-F870 (2004).
- Koeners, M. P., Racasan, S., Koomans, H. A., Joles, J. A., Braam, B. Nitric oxide, superoxide and renal blood flow autoregulation in SHR after perinatal L-arginine and antioxidants. Acta. Physiol. (Oxf). 190 (4), 329-338 (2007).
- van den Brandt, J., Wang, D., Kwon, S. H., Heinkelein, M., Reichardt, H. M. Lentivirally generated eGFP-transgenic rats allow efficient cell tracking in vivo. Genesis. 39 (2), 94-99 (2004).
- Kreutz, R., Kovacevic, L., Schulz, A., Rothermund, L., Ketteler, M., Paul, M. Effect of high NaCl diet on spontaneous hypertension in a genetic rat model with reduced nephron number. J. Hypertens. 18 (6), 777-782 (2000).
- Liu, Z. C., Chow, K. M., Chang, T. M. Evaluation of two protocols of uremic rat model: partial nephrectomy and. 25 (6), 935-943 (2003).
- Griffin, K. A., Picken, M., Bidani, A. K. Method of renal mass reduction is a critical modulator of subsequent hypertension and glomerular injury. J. Am. Soc. Nephrol. 4 (12), 2023-2031 (1994).
- Meyer, F., Ioshii, S. O., et al.
