Изображений биологических тканей десорбцией Электроспрей ионизации масс-спектрометрии

Summary

Десорбции с ионизацией электрораспылением масс-спектрометрии (DESI-МС) является внешним метод, по которому образцы, в том числе биологических тканей, могут быть отображены с минимальной подготовки образца. По растеризации примере ниже ионизационного электрода, этот спрей на основе техники обеспечивает достаточное пространственное разрешение различить молекулярных особенностей интересов в срезах тканей.

Abstract

Масс-спектрометрия томография (MSI) предоставляет нецелевые молекулярную информацию с наибольшей специфичностью и пространственное разрешение для исследования биологических тканей в нескольких сотен до десятков микрон масштабе. Когда выполнено в условиях окружающей среды, пробоподготовки становится ненужным, тем самым упрощая протокол, сохраняя при этом высокое качество полученной информации. Десорбции с ионизацией электрораспылением (DESI) представляет собой спрей на основе окружающей техника MSI, который позволяет для прямой выборки поверхностей на открытом воздухе, даже в естественных условиях. При использовании с программным управлением предметный столик, образец развернут под ионизационным DESI, так и через временную область, м / е информации коррелирует с пространственным распределением химических веществ. Точности DESI-MSI выход зависит от ориентации источника и позиционирование по отношению к поверхности образца и впускной масс-спектрометра. Здесь мы рассмотрим, как подготовить срезов тканей для DESI яmaging и дополнительные экспериментальные условия, которые непосредственно влияют на качество изображения. В частности, мы опишем протокол для визуализации срезы головного мозга крыс ткани DESI-MSI.

Introduction

Нецелевые изображений методом масс-спектрометрии облегчает получение информации о химических веществах для открытия и гипотезы генерирующих приложений. Целевые изображений известных химических интерес, с другой стороны, может способствовать увеличению чувствительности и селективности с помощью конкретных разработка метода. Масс-спектрометрия томография (MSI) является наиболее часто выполняемой на тканей с использованием MALDI, ¹ вторичной ионной масс-спектрометрии (ВИМС), ² и окружающих методы ионизации, в том числе десорбции электрораспыления ионизации (DESI), ^{3-лазерной} абляции электрораспыления ионизации ^{(LAESI), 4, 5} и ....

Protocol

1. Ткань Секционирование

1. Магазин флэш цельной тушки ткани в -80 ° C морозильнике до готовности для секционирования.
2. Разрешить образца ткани, чтобы достичь температуры в криомикротомии до срезов (30 мин). Установите лезвие и температуры образца до -30 ° С.
3. Как только ткань достигла температуры, обработка образца с помощью пинцета, вырезать передней или задней части мозга в зависимости от того, какая часть мозга представляет интерес для достаточной монтажной поверхности (например, если в передней части мозга имеет первостепенное значение, установите заднюю часть мозга клещевые).
   1. Применить ~ 0,5 мл Оптимальное соединение ....

Results

3 показан спектр, полученный представитель из необработанной секции мозга крысы. В положительном режиме, масс-спектр преобладают фосфатидилхолины из-за их высокой эффективности ионизации (отнести к положительно заряженным группу четвертичного аммония). Общее изображение ион среза ткани также показано на фиг.3, показывающий обильный сигнала по всему поперечному мозга. Ключевые обнаружены липиды, приводятся в таблице 1 по литературе сравнений.

.......

Discussion

Оптимизации геометрии источника DESI имеет решающее значение для успешных экспериментов MSI. Несколько переменных способствует выравнивание системы непосредственно влияют на чувствительность и разрешение изображения. Если в процессе оптимизации, экспериментатор имеет трудности с получением сигнала, мы рекомендуем использовать красное пятно Sharpie обращено на слайде в качестве ориентира; краситель, родамина 6G, м / Z 443, что дает сильный сигнал в режиме положительных ионов и может быть использован для Первичная оптимиз.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagents
Tissue-Tek O.C.T. Compound	Sakura-Finetek	4583	http://www.sakuraeu.com/products/showitem.asp?cat=11& subcat=48
Ацетонитрил	EMD	AX0156-6	OmniSolv, Уксусная кислота класса LC-MS
	Sigma Aldrich	695092-500 мл
Equipment
Cryostat микротом	Thermo Scientific	CryoStar* NX70	Любой доступный микротом может быть использован для среза ткани http://www.thermoscientific.com/ecomm/servlet/productsdetail?productId=13958375&groupType=PRODUCT&searchType=0&storeId=11152&from=search&ca=cryostar
Омни Спрей® Распылительная головка DESI	Prosolia Inc.		Также можно использовать 2-D Omni Spray® Исходный комплект вместо сборки компонентов эксперимента с визуализацией http://www.prosolia.com/sources.php
Высоковольтные источники питания	Stanford Research Systems, Inc.	PS350/5000V-25W	http://www.thinksrs.com/products/PS300.htm
Канатный нагреватель, RTD, контроллер	Omega		http://www.omega.com/toc_asp/subsectionSC.asp?subsection=M02& book=Нагреватели
Labview	National Instruments	Версия 7.1
Трансляционная стадия	Prior Scientific	Optiscan II	a href="http://www.prior.com/productinfo_auto_motorized_optiscan.html" target="_blank">http://www.prior.com/productinfo_auto_motorized_optiscan.html
AccuTOF Масс-спектрометр	JEOL	JMS-T100LC	Может использоваться любой масс-спектрометр, оснащенный расширенным интерфейсом капиллярного атмосферного давления