מודל גידול מאוס של מתח כירורגי כדי לחקור את המנגנונים של דיכוי מערכת חיסוני לאחר ניתוח והערכת immunotherapies Perioperative רומן

Summary

מודל גידול עכבר של מתח כירורגית משמש לחקור כיצד דיכוי חיסוניים לאחר הניתוח מקדם מחלה גרורתית ולהעריך טיפולים סביב ניתוח immunostimulatory.

Abstract

כריתה כירורגית היא טיפול חיוני עבור רוב חולי הסרטן, אבל ניתוח גורם לתפקוד לקוי של המערכת החיסונית ואת זה כבר קשור להתפתחות של מחלה גרורתית במודלים של בעלי חיים ובחולי סרטן. עבודה פרה מהקבוצה שלנו ואחרים הוכיחה דיכוי עמוק של תפקוד מערכת החיסון מולדים, במיוחד תאי NK בתקופה שלאחר הניתוח וזה ממלא תפקיד מרכזי בהתפתחות המשופרת של גרורות לאחר ניתוח. מחקרים בבעלי חיים מעטים יחסית וניסויים קליניים התמקדו באפיון ולהפוך את ההשפעות המזיקות של ניתוח הסרטן. שימוש במודל של בעלי חיים קפדני של גידולים באופן ספונטני גרורות ומתח כירורגית, השיפור של ניתוח סרטן על ההתפתחות של גרורות ריאות הודגם. במודל זה, תאי סרטן שד 4T1 מושתלים בכרית שומן החלב העכבר. השתלת גידול 14 הודעה יום ב, כריתה של גידול החלב הראשוני מלאה performeד בכל בעלי החיים. קבוצת משנה של בעלי חיים מקבל מתח כירורגיות נוסף בצורה של כריתת כלית בטן. ביום 28, גושים סרטניים ריאות לכימות. כאשר אימונותרפיה ניתנה מייד לפני ניתוח, הפעלה עמוקה של תאים חיסוניים אשר מנעה את ההתפתחות של גרורות לאחר הניתוח התגלתה. בעוד מודל 4T1 שד ניתוח גידול מאפשר הסימולציה של ההשפעות של לחץ בבטן ניתוחי בגרורות סרטניים, תחולתה לסוגי גידולים אחרים צריכה להיבדק. האתגר הנוכחי הוא לזהות immunotherapies הבטוח ומבטיח במודלים של עכברים פרה ולתרגם אותם לטיפולים סביב ניתוח מעשית יינתן לחולי סרטן ניתוח כדי למנוע ההישנות של מחלה גרורתית.

Introduction

ניתוח הוא מרכיב קריטי בטיפול בסרטן לטיפולים בגידולים מוצקים, אך למרות כריתה מלאה, חולים רבים לפתח הישנות גרורתית וסופו של דבר למות ממחלתם. יותר ויותר, תקופה שלאחר הניתוח, כתוצאה מהתגובה הפיזיולוגית ללחץ לניתוח, כוללים קרישת דם, שחרור של גורמי גדילה, דיכוי מערכת החיסונית, מוכרת כזמן קריטי להתפתחות של גרורות. ^1,2 הקבוצה שלנו ואחרים ^3-5 הראו כי בתקופה שלאחר הניתוח המיידית היא זמן ייחודי רגיש להיווצרות של גרורות.

אחד המנגנונים המרכזיים שהיו אחראים לאפקטי prometastatic של ניתוח הוא חוסר תפקוד לאחר ניתוח של רוצח הטבעי (NK) תאים ^1-3. תאי NK הם לימפוציטים ציטוטוקסיות של מערכת החיסון המולדת מעורבת בשליטה על צמיחת גידול וגרורות ^6. תפקוד לקוי של תאי NK לאחר הניתוח תועד in שני חולים אנושיים ^1,7-9 ומודלים של בעלי החיים ^1,10,11. דיכוי תאי NK לאחר הניתוח בקורלציה עם גרורות מוגברות במודלים של בעלי חיים של גרורות ספונטניות ומושתלות ^1,11-14, ואילו במחקרים בבני אדם, פעילות NK נמוכה במהלך התקופה סביב הניתוח קשור בשיעור גבוה יותר של הישנות הסרטן והתמותה ^15,16.

למרות זאת, אין כיום טיפולים בסרטן, במיוחד בקשר לשינויי prometastatic המתרחשים לאחר ניתוח הסרטן באופן מיידי. תקופה סביב הניתוח מייצגת חלון טיפולי של הזדמנות שבה להתערב בתהליך גרורתי. בעוד טיפולים בסרטן מסורתיים, כגון כימותרפיה ציטוטוקסית, נחשבים רעילים מדי להינתן לחולים מתאוששים מניתוח קשה ^17, טיפולים חיסוניים הם מועמדים אידיאליים לממשל סביב ניתוח. שימוש סביב ניתוח של ³ IL-2 ו-IFN-i רקומביננטי נחקר in שלב המוקדם של ניסויים קליניים מדגימים את הפוטנציאל שלהם כדי למנוע דיכוי תאי NK לאחר ניתוח ולשפר את ההישרדות ללא התקדמות מחלה ^18-21. למרבה הצער, המשך הפיתוח התעכב בשל סבילות של הטיפול בציטוקינים ספציפי הזה בשילוב עם ניתוח גדול ^17. וירוסים הם גם מפעילים ספציפיים חזקים של תאי NK. המחקר שלנו הוכיח בעבר כי ממשל לפני ניתוח של וירוסים המשכפלים, כגון אנטי סרטני רומן oncolytic וירוסים (OV), וnonreplicating חיסונים נגיפיים, כגון חיסון נגד שפעת, יכול לעכב תפקוד תא מושרה ניתוח NK ולהחליש מחלה גרורתית ^1,22.

מודל הניתוח שתואר במאמר זה יש להקל את הבנתנו את המנגנונים מעורבים בהתפשטות והצמיחה של תאים סרטניים לאחר ניתוח שלנו ואיפשר לנו לחקור את הטיפולים חדשניים ממוקד שיכול להינתן בתקופה סביב הניתוח. כדי להשיג מטרה זו, בעלי חייםמודל של מתח כירורגית וצרור גרורות ספונטני המפותח. המודל עושה שימוש בגידולי סרטן השד בעכבר (BALB / ג - 4T1) כי הם מסוגלים לשלוח גרורות באופן ספונטני מבלוטת החלב העיקרית לאתרים מרוחקים מרובים בפרט הריאות. ביום: 0, תאי סרטן השד מושתלים בכרית שומן חזה עכבר. יום 14 השתלה לאחר גידול ב, כריתה של גידול החלב הראשוני מלאה מתבצעת בכל בעלי החיים. קבוצת משנה של בעלי חיים מקבל מתח כירורגיות נוסף בצורה של כריתת כלית בטן. ביום 28, גושים סרטניים ריאות בהדגישו בניתוח ולא עכברים שליטים ניתוח לעומת מבודדים וכימות. במודל חיה זה של סרטן וניתוחים, ההשפעות של ניתוח בגרורות סרטן הם נחקרות ואת היעילות של ממשל סביב ניתוח של immunotherapies החדשני, כולל שכפול וnonreplicating חיסון ממריצים מבוסס באופן ויראלי נבדקות בפעם הראשונה.

Protocol

1. שמירת 4T1 תאים סרטניים במבחנה

1. תאים סרטניים 4T1 ללא שינוי תרבות בDMEM המלא (DMEM, 10% FBS, 1x פניצילין / סטרפטומיצין) ב10 צלחות תרבית רקמת סנטימטר. דגירה ב37 מעלות צלזיוס, 5% חממת תרבות ₂ רקמות CO.
2. תרבויות פיצול 2-3 פעמים / שבוע. כדי לשמור על תאי כדאיות אופטימליים לא יעלה על מפגש 80%. אין להשתמש בתאים להקמת in vivo גידולים ראשוניים אם תרבויות כבר passaged במבחנה ל> 1 חודש כמו זה מקטין ממאירות ופוטנציאל גרורתי מאשר תאים קודם לכן passaged.

2. 4T1 גידול תאי קציר להזרקה

1. תרבות בינונית לשאוב מצלחת תרבית הרקמה באמצעות פיפטה פסטר.
2. הוסף 10 מיליליטר של PBS סטרילי 1x המכיל 2 מיליליטר EDTA. תן פתרון PBS דגירה בצלחת על 37 מעלות צלזיוס, 5% תרבות חממת CO ₂ רקמה ל5-7 דקות.
3. פתרון הקציר PBS מהצלחת, rinsing הצלחת 2-3x עם פתרון, להעביר ל15 צינור חרוטי מיליליטר.
4. תאי צנטריפוגה במשך 5 דקות ב500 XG, 4 ° C, בצנטריפוגה ספסל העליונה.
5. לשאוב supernatant ו resuspend התא גלולה בסרום ללא DMEM.
6. לקבוע את ריכוז תא באמצעות דלפק תא.
7. לדלל תאים עם מדיום סרום ללא ל1x10 ⁶ cells/500 μl (1x10 ⁵ cells/50 μl (לתאי הזרקה ומניחים על קרח.

3. הזרקת עכברים עם 4T1 תאים סרטניים

כל המחקרים בבעלי החיים שבוצעו היו בהתאם להנחיות מוסדיות בשירותים הווטרינריים טיפול בבעלי חיים מאוניברסיטת אוטווה המלצות לכל החיות שקיבלו זריקות orthotopic או שתלי גידול.

1. טיפול בעכברים תת עורי עם עצירות 1 שעות לפני הניתוח לטיפול בכאב (0.05 מ"ג / קילוגרם).
2. לגרום ולשמור על עכבר בהרדמה באמצעות isoflurane 2.5% במהלך תקופת injec tion. צבוט שודד על העכבר כדי לזהות את תגובת הרפלקס. אם אף מזוהה, רמות הרדמה יעילות הם הגיעו. חומר הסיכה העין סטרילי מוחל אז כדי למנוע התייבשות של קרנית.
3. טען 30 G ½ במזרק "Ultra-בסדר" עם בדיוק 50 μl של השעיה תאים. ודא שכל בועות האוויר יוסרו מעמודת המזרק על ידי הקשה על הצד של המזרק כדי לסלק בועות אוויר.
4. העבר את העכבר (בהרדמה) בצד עד הגחון.
5. נקה את אזור ההזרקה באמצעות ספוגית אלכוהול ולהציג את המחט בצורה אופקית וישירות לתוך כרית שומן החלב 4, לוותר מזרק הנפח לאט.
6. השתמש במטלית כותנה לנקות כל דליפה אפשרית.
7. לאפשר עכברים להתאושש מהרדמה.
8. לשמור על עצירות (0.05 מ"ג / קילוגרם) לsc מנוהל ניהול כאב בכל שעה 8 למשך 2 ימים.

4. ניהול Perioperative טיפול ב4T1 נושאת גידול עכברים BALB / ג

= "P1" ילדה> משטר הטיפול והמסלול לממשל חיסון נגד שפעת הוא זהה לטיפול לפני ניתוח וירוס oncolytic.

1. ב13 ימים הזרקת תאי הודעה גידולים, למדוד את הגידול הראשוני באמצעות קליפר חיצוני. מדוד את הקוטר הגדול ביותר האורך (אורך) ואת הקוטר הגדול ביותר הרוחבי (רוחב) עם קליפר. נוסחת ellipsoidal שונה משמשת לחישוב נפח הגידול (גידול נפח = 1/2 (א רוחב באורך ²⁾
2. ב13 ימים הזרקת תאי הודעה גידולים, הגידול הראשוני צריך למדוד כ 1 סנטימטר ^3. כאשר מדידת גידול זה הושג, להכין ריאגנט טיפול סביב ניתוח.
3. וירוס oncolytic הוא טיפולי חדשנית אחד שאפשר לנהל בתקופה סביב הניתוח. הכן וירוס oncolytic (1x10 ⁹ PFU / 1 מיליליטר) בסטרילי PBS 1X ומניחים על קרח לפני הזריקה.
4. עכבר מאובטח ומקוםלעוצר להזרקה לוריד זנב תוך ורידי.
5. בעדינות לחמם זנב עכבר במים ברז חמים כדי לחזות ורידי זנב לרוחב.
6. טען 27 G ½ ב" מזרק אינסולין "עם בדיוק 100 μl של טיפול וירוס oncolytic. ודא שכל בועות האוויר יוסרו מעמודת מזרק.
7. הזרק את העכבר עם 1x10 ⁸ PFU/100 μl / עכבר לאחד מורידי זנב לרוחב. אם המחט מוחדרת כראוי לוריד לרוחב, ללא התנגדות צריכה להיות מורגשת כאשר מדכא את המזרק.

5. כריתה מלאה של גידול ראשוני ובטן השמאל Nephrectomy

1. ב14 ימים הזרקת תאי הודעה גידולים, ליזום טיפול סביב ניתוח שיגרתי הבאים אוניברסיטת אוטווה טיפול בבעלי חיים והשירות הוטרינרי אישר פרוטוקולים. טיפול בעכברים תת עורי עם עצירות 1 שעות לפני הניתוח לטיפול בכאב (0.05 מ"ג / קילוגרם). לגרום ולשמור על הרדמה באמצעות isoflurane 2.5% במהלך הניתוח. Under מעוקר תנאים ושימוש במכשירי ניתוח סטרילי, אתר כירורגית מגולח ומצוחצח. בעלי חיים מנוהלים נוזלים תת עורי וסיכת עיניים לפני הניתוח.
2. לעשות חתך קטן (1-2 סנטימטר אורך) בעדינות ובאופן מוחלט להסרת הגידול 4T1 העיקרי מכרית שומן החלב.
3. סגירת החתך עם 2-3 סיכות 9 מ"מ.
4. לחשוף את הבטן על ידי חיתוך דרך העור והשכבה התת עורית לאורך קו האמצע הגחון של העכבר.
5. עושה חתך בalba Linea (3-4 סנטימטר) כדי לגשת הצפק עכבר.
6. לחשוף את הצד הפנימי השמאלי של הבטן על ידי הזזת המעיים שמעל לצד. ודא המעיים נשמרים לחים עם גזה סטרילית מלוחה ספוג.
7. בעזרת זוג מלקחיים בוטה כירורגית, אחוז בכליה השמאלית בעדינות.
8. שימוש בתפר 3-0 מצופה שעווה קלועה משי קשור ללולאה, ולקשור hilum של הכליה השמאלית ובטוח עם 3 קשרים כירורגית. הסר את הכליה השמאלית עם surgiמספריים קאל.
9. בדוק את עניבת התפר בקפידה כדי להבטיח שעצירת דימום נאותה מושגת.
10. סגור את השכבה התת עורית עם תפר לולאה רציף באמצעות 5-0 שכבה קלוע נספגת, אז מצרך עור באמצעות 9 סיכות מ"מ. צעדים 5.2-5.10 צריכים לדרוש 10 דקות / בעלי חיים.
11. לשמור על עצירות (0.05 מ"ג / קילוגרם) לsc מנוהל ניהול כאב בכל שעה 8 למשך 2 ימים.

6. עכברים ועיבוד וכימות של נטל גידול ריאות והרדמת חסד

1. ב28 ימים לאחר הזרקת 4T1 גידול, להרדים עכברים על פי פרוטוקול טיפול בבעלי חיים ושירותים וטרינריים, באוניברסיטת אוטווה.
2. לרסס את עכבר עם 70% אתנול.
3. לעשות חתך ראשוני עם מספריים, ממש מתחת לכלוב הצלעות.
4. לחשוף את בית החזה על ידי חיתוך דרך העור והשכבה התת עורית לאורך קו האמצע הגחון של חלל החזה של העכבר.
5. לעשות חתכים לרוחב דרך עור ורקמות בכל צד עד neck של העכבר.
6. לנתח את הריאות על ידי בעדינות לתפוס את הריאות בזמן לגזום משם רקמת החיבור מעל ומתחת לריאות.
7. Presoak חולץ ריאות בקור PBS להסיר דם שייר, ואז למקם ב10% שנאגרו פורמלין.
8. לצלם את כל ריאה להערכת גרורות סרטניים. שוקל ריאות לכימות נטל גידול.

Representative Results

מודל עכבר לשחזור של מתח כירורגית כי תוצאות בשיפור הדרמטי של גרורות ריאות כבר מפותח. בהודעה 28 יום חיסון 4T1 גידול (ו14 ימים שלאחר כריתה + / גידול - כריתת כלית בטן), ריאות נקצרו ודמיינה לגרורות. ניתוח באופן ברור מגדיל את הכמות של גרורות ריאתי בהשוואה לעכברים שלא טופלו כפי שהודגם בצילומי ריאות (איור 1 א), ספירה של גושי ריאות (איור 1) ומשקל ריאות (תרשים 1C). ממשל לפני ניתוח של שכפול נגיף oncolytic וחיסון שפעת מומת מציל באופן משמעותי את השפעות prometastatic של ניתוח הסרטן (איורים 1 א-C).

כדי לקבוע אם תאי NK לשחק תפקיד מתווך במניעת גרורות טיפול שלאחר חיסון, תאי NK היו מתרוקנים פרמקולוגית באמצעות אנטי asialo-GM-1 במודל גרורות הסרטני. בהעדרו של נ"קתאים, ראה ביטול של האפקט הטיפולי של immunotherapies סביב הניתוח (2A דמויות ו2B). הנתונים אלה מצביעים על כך שהסרת גרורות סרטניים במודל הלחץ כירורגית שלנו מתווכת בעיקר באמצעות הפעלת oncolytic וירוס וחיסון נגד שפעת של תאי NK ותמוגה גידול NK תיווך שלאחר מכן. כדי להמשיך ולאפיין את תפקוד תא NK הבא ממשל סביב ניתוח של וירוס oncolytic וחיסון נגד שפעת, לשעבר vivo להרוג תאי NK הוערך. בקצרה, ונקווה ומסודר DX5 + תאי NK היו מבודדים מsplenocytes של ניתוח הדגישו ועכברי בקרה. הם cocultured במשך שעה 4 עם תאי מטרת כרום שכותרת YAC-1, בEffector שונה כדי למקד את היחסים, ואחרי מדידה של שחרור כרום supernatant עם דלפק גמא. פגם משמעותי ניתוח מושרה בcytotoxicity תא NK יחד עם התאוששות משמעותית של הרג NK הבא ממשל סביב ניתוח של וירוס וinfl oncolyticחיסון uenza בהשוואה לניתוח בלבד (2C דמויות ו2D) נצפה. יחדיו, תוצאות אלה ממחישות כי דיכוי תאי NK סביב הניתוח ניתן לטפל בהצלחה ומחלה גרורתית מופחתת עם טיפולי immunostimulatory רומן.

איור 1. חיסון חדשני נגד סרטן oncolytic וירוס ושפעת סביב ניתוח כטיפול נגד שיפור מושרה ניתוח של גרורות בריאות. הערכת 4T1 גרורות סרטניים ריאות ביום 28 מקבוצות טיפול מוצעות לתצלומים () של ריאות נציג, (ב) ספירה של גידול ריאה גושים ומשקולות ריאות (C). הנתונים הם נציג של 3 ניסויים דומים עם n = 5-10/group (*, p = 0.01; ** p <0.0001; ns, לא משמעותי). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2. מתח כירורגי מגדיל גרורות סרטניים ריאות על ידי פגיעה בתאי NK. (A, B) כימות של גרורות סרטניים ריאות בניתוח הדגישה עכברים שטופלו בטיפול סביב ניתוח רומן. (C, D) היכולת של DX5 מטוהר + תאי NK מהניתוח הדגישה ובקרה שלא טופלה על מנת להרוג תאי גידול. הנתונים מוצגים כממוצע אחוז (+ / - SD) של שחרור כרום מבארות בשלושה עותקים עבור E המצוינת: יחסי T. הנתונים הם נציג של 3 ניסויים דומים שבו n = 4-5/group (*, p = 0.01; ** p <0.005; ns, לא משמעותי)./ Www.jove.com/files/ftp_upload/51253/51253fig2highres.jpg "target =" _blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Discussion

כריתה כירורגית היא עמוד התווך של טיפול בחולים עם ממאירויות סולידיות מקומיות. אפילו עם כריתה מלאה, חולים רבים לפתח הישנות גרורתית וסופו של דבר למות ממחלתם. תקופה שלאחר הניתוח המיידי מספקת סביבה אידיאלית להיווצרות של גרורות בסרטן, מווסתת, במידה רבה, על ידי דיכוי תאי NK לאחר ניתוח. למרות זאת, הוא נשאר חלון טיפולי, כי הוא התעלם במידה רבה. כרגע אין טיפולים נגד סרטן סטנדרטי סביב ניתוח נועדו למנוע גרורות לאחר ניתוח. האתגר הנוכחי הוא לזהות טיפולים בטוחים ומבטיחים שיפעילו את תאי NK בתקופה סביב הניתוח ובכך מונעת את הקמתה של מחלת micrometastatic. טיפולים אלה חייבים להיות מאופיינים בקפדנות על בטיחות ויעילות במודלים של בעלי חיים פרה ולאחר מכן תורגמו לניסויים קליניים תוכננו מהורהר.

היחס הראשוניnale לפתח מודל גידול עכבר של מתח כירורגית הוא לחקור מנגנונים של דיכוי מערכת החיסונית והתפשטות גרורה לאחר ניתוח וכדי להעריך immunotherapies החדשני עם פוטנציאל לשימוש עתידי בחולי הסרטן שעברו ניתוח להסרת הגידול הראשוני. כדי להשיג מטרה זו, מודל סרטן שד 4T1 עכברי בשילוב עם לחץ כירורגית פותח. בעוד ששורת תאי 4T1 היא עכברי "סרטן שד", הסיבה להשתמש בקו זה תא היא שחזור של גרורות ספונטניות שמאפשר לנו להעריך את ההשפעות של לחץ כירורגית במודל סרטן מציאותי. בהקשר זה, את המקור האמיתי של ממאירות הוא פחות חשוב מהביולוגיה ופוטנציאל גידול גרורתי. המרכיב החיוני השני של המודל שלנו הוא הפיתוח של הליך כירורגי של בעלי חיים להידמות ניתוח סרטן אנושי באופן הדוק. במודל זה לחץ של בעלי החיים כירורגית, 4T1 גידול השד הראשוני הוא נכרת לאחר שהוא מגיע 1 סנטימטר ^3. כיניתוחי סרטן בחולים אנושיים כרוכים בדיכוי מערכת החיסונית משמעותי, כריתת כליה פתוחה בטן בקבוצות טיפול "מתח כירורגית" מבוצע בנוסף. כפי שהוא משווה עם כריתת גידול קונבנציונלית יותר בבני אדם, האופי פולשני של כריתת כליה השמאלית מלאה הוא מאוד דומה לסוגים רבים של טיפולים כירורגיים לממאירויות מוצקות, כוללים ניתוחים לטיפול בסרטן מעי גס, סרטן השחלות, סרטן הכליה, סרטן לבלב, ריאות וושט סרטן. בנוסף, אנו טוענים שהשינויים העמוקים הפיסיולוגיים המתרחשים perioperatively, בשל laparotomy + כריתת כליה, כראוי מתרבה השינויים הפיסיולוגיים המכריע המתרחשים בעקבות ניתוח פולשני עבור רוב מחלות ממאירות מוצקות. כדי לשלוט על גורמים סביב ניתוח שעלולה להוביל ללחץ מוגזם כירורגית ותמותה, משך ההרדמה וניתוח ולשמור על טמפרטורת גוף במהלך הניתוח מוגדר במדויק. כל הפרמטרים הללו מתבצעים בדיוקד שהוגדר בפרוטוקול הניתוח שלנו כדי לשקף את הטיפול שגרתי סביב ניתוח בחולי סרטן בבני אדם.

העיתוי של הטיפולים סביב הניתוח הוא מרכיב קריטי נוסף למודל ההצלה סביב הניתוח. טופלו עכברי נושאי גידול 4T1 בעבר עם 3 משטרים של חיסון נגד שפעת: neoadjuvant (ניתנו 5 ימים לפני הניתוח), סביב ניתוח (שניתן באותו היום של ניתוח) וסביב ניתוח + multidose (נתון ביום של ניתוח, ואחריו 2 מנות נוספות ניתנו גזרים 5 ימים). למרבה הפלא, כל 3 המצבים של טיפול חיסון ירד באופן משמעותי גרורות ריאות ^22. עם זאת, חיסון נגד שפעת מנוהל perioperatively כגרורות מופחתות מנה אחת בצורה היעילה ביותר. באופן קולקטיבי, ניסויים אלה מדגישים את החשיבות של התקופה סביב הניתוח המיידית כמו חלון טיפולי צר להתערב בתהליך גרורתי.

שימוש סביב ניתוח של immunotherapies החדשני כגון oncolyוירוס וחיסונים טיק יש באופן בלעדי היו מוגבלים לקבוצת המחקר שלנו. אנחנו הוכיחו בפעם הראשונה שממשל סביב ניתוח של וירוסי ORF oncolytic הרומן וvaccinia יכול להפוך דיכוי תאי NK לאחר ניתוח במודלים של בעלי החיים ^1. וחשוב יותר, הצלה זו של תפקוד מערכת החיסון בקורלציה עם ירידה בהיווצרות של גרורות לאחר הניתוח. במחקרים בבני אדם, חולי ניתוח הסרטן לאחר ניתוח צמצמו cytotoxicity תא NK וOV סביב הניתוח במידה ניכרת מגביר את פעילות תאי NK בחולי סרטן ^1. שימוש בחיסוני מניעה זמין באופן מסחרי, שהוכחנו כי ממשל חיסון נגד שפעת סביב הניתוח צמצם באופן משמעותי גרורות סרטניים והשתפר cytotoxicity תא NK במודלי גידול פרה. במחקרים בבני אדם, חיסון נגד שפעת משופרת באופן משמעותי את פעילות תאי NK בתורמים אנושיים בריאים וחולי ניתוח הסרטן ^22.

גישות רבות משמשות כדי להפחית cancהישנות אה, כולל כימותרפיה והקרנות, אך טיפולים אלה מנוהלים בדרך כלל שבועות עד חודשים לפני (neoadjuvant) או לאחר ניתוח (adjuvant). מחקר בתחום זה מראה שהתקופה שלאחר הניתוח המיידית היא קריטית בקביעת שיעורי הישנות גידול לטווח ארוך. לכן, התערבויות קליניות בצורה של immunotherapies בתקופה קריטית זו עשויות להיות יתרונות לטווח ארוך משמעותיים. המחקרים שלנו תוך שימוש במודל של עכברים של גרורות ריאות ספונטניות ומתח כירורגית מספקים הזדמנות ייחודית לחקור טיפולים חדשים ולקבוע את הפוטנציאל שלהם כדי למנוע דיכוי חיסוני סביב ניתוח בחולי ניתוח סרטן ובכך גם להפחית את שיעורי הישנות הסרטן.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)	Corning Cell-Gro	10-013-CV
Inactivated Fetal Bovine Serum (FBS)	HyClone	SH30396.03
Penicillin/Streptomycin	Gibco	15070-063
1x Sterile Phosphate Buffered Saline (PBS)	Corning Cell Gro	21-031-CV
Buprenorphine	Chiron, Guelph	RXN309968
Isoflurane	Baxter Corp	1001936040
1/2 Ultra-fine syringe	Terumo	30 G, SS05M3009
9 mm Staples	Braintree	ACS BX
5-0 Braided absorbable suture	Covidien	UL-202
3-0 Wax braided silk suture	Covidien	S-194
Formalin	Fisher	SF100-20
4T1 Tumor cells	ATCC	CRL-2539
BALB/c mice	Charles Rivers Labs	Strain Code:028