Summary
उड़ान (MALDI-TOF) मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) सीधे रक्त संस्कृति शोरबा करने का मैट्रिक्स की मदद से लेजर desorption / आयनीकरण समय के आवेदन बैक्टीरिया की पहचान expedites. प्रस्तुत विधि सीधे रक्त संस्कृति शोरबा से ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया की पहचान के लिए एक तेजी से और विश्वसनीय तरीका है.
Abstract
नैदानिक सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशाला की एक महत्वपूर्ण भूमिका खून संक्रमण के कारण बैक्टीरिया की तेजी से पहचान प्रदान करना है. पारंपरिक पहचान ही परिपक्व है ठोस अगर पर कालोनियों के बाद उपलब्ध पहचान के साथ संकेत रक्त संस्कृति शोरबा के उप संस्कृति की आवश्यकता है. MALDI-TOF एमएस ठोस मीडिया पर कालोनियों पर लागू किए जाने नैदानिक प्रासंगिक बैक्टीरिया के बहुमत की पहचान के लिए एक विश्वसनीय, तेजी से विधि है. यह बैक्टीरिया की प्रजातियों की पहचान तेजी लाने और नैदानिक प्रबंधन में सुधार करने की क्षमता है के रूप में सीधे रक्त संस्कृति शोरबा के लिए MALDI-TOF एमएस के आवेदन एक आकर्षक दृष्टिकोण है. हालांकि, पर काबू पाने के लिए एक महत्वपूर्ण समस्या यदि नहीं हटाया, एमएस स्पेक्ट्रा के साथ हस्तक्षेप और अपर्याप्त या कम भेदभाव पहचान स्कोर में परिणाम कर सकते हैं, जो रक्त संस्कृति नमूनों में निहित दखल रेजिन, प्रोटीन और हीमोग्लोबिन की पूर्व विश्लेषण हटाने है. इसके अलावा यह bacter ध्यान केंद्रित करने के लिए आवश्यक हैआइए पर्याप्त गुणवत्ता की स्पेक्ट्रा विकसित करने के लिए. प्रस्तुत विधि एकाग्रता, शुद्धि, और एक संकेत रक्त संस्कृति शोरबा से बैक्टीरिया की जल्दी पहचान के लिए अनुमति देने के ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया की निकासी का वर्णन करता है.
Introduction
कारण बैक्टीरिया खून के संक्रमण (बीएसआई) के साथ रोगियों 6-48% 1 से लेकर उच्च में अस्पताल में मृत्यु दर जारी रहती है. उपयुक्त अनुभवसिद्ध एंटीबायोटिक का वितरण अस्तित्व को बढ़ावा देता है और गंभीर पूति के साथ रोगियों के सबसेट में, उचित उपचार के लिए प्रत्येक घंटे की देरी अस्तित्व 2,3 कमी आई को संबद्ध करता है. तदनुसार, नैदानिक प्रयोगशाला का एक मुख्य उद्देश्य तेजी से पता लगाने, पहचान और नैदानिक फैसले को सूचित करने के लिए रक्त संस्कृतियों में बैक्टीरिया की उपस्थिति संवाद है. यह सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशाला ने हाल ही में ग्राम दाग 4 रिपोर्टिंग और के समय में रोगाणुरोधी चिकित्सा पर सबसे बड़ा प्रभाव है कि प्रदर्शन किया गया है, एक पर्यवेक्षणीय अध्ययन दिखा दिया कि उड़ान मास स्पेक्ट्रोमेट्री की मैट्रिक्स की मदद से लेजर desorption / आयनीकरण समय (MALDI-TOF एमएस) रक्त संस्कृति बतख पर सीधे प्रदर्शन ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया 5 के कारण बीएसआई में से एक तिहाई से अधिक में विहित प्रभावित करते हैं.
6,7 की पहचान के लिए एक प्रभावशाली प्रयोगशाला उपकरण के लिए प्रेरित किया. प्रौद्योगिकी अब अच्छी तरह से स्थापित है और ठोस मीडिया 6,8 पर अलग सूक्ष्मजीवों का तेजी से और सटीक पहचान के लिए कई प्रयोगशालाओं में एकीकृत किया गया है. रक्त संस्कृति की वजह से कम कीमत पर सूक्ष्मजीवों के पहले के एक पहचान प्राप्त करने के लिए संभावित दोनों चिकित्सकों और प्रयोगशाला प्रबंधकों को सूक्ष्मजीवों अपील के लिए "सकारात्मक" संकेत दिया है कि (ईसा पूर्व) शोरबा के लिए MALDI-TOF एमएस के प्रत्यक्ष आवेदन.
लेकर ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया के सफल पहचान की रिपोर्ट के साथ पहचान के मानक प्ररूपी संस्कृति आधारित विधियों, की तुलना में रक्त संस्कृति शोरबा के लिए MALDI-TOF एमएस के प्रत्यक्ष आवेदन के नैदानिक उपयोगिता मनाया संवेदनशीलता की व्यापक रेंज द्वारा सीमित किया गया है 47-98.9 % 9-11. संवेदनशीलता में बदलाव की संभावनाई.पू. शोरबा रचना, प्रारंभिक जीवाणु एकाग्रता, नमूना तैयार करने के तरीकों में बदलाव के रूप में अच्छी तरह से अध्ययन आबादी 9 में आई ग्राम नकारात्मक जीवों की सरणी से संबंधित है. इन अन्य प्रकाशित प्रोटोकॉल के साथ तुलना में यहाँ प्रस्तुत विधि इथेनॉल, अमोनियम क्लोराइड या अतिरिक्त (गैर मैट्रिक्स) acetonitrile के प्रयोग से बचा जाता है. नतीजतन बैक्टीरिया गोली संभावित प्ररूपी संवेदनशीलता परीक्षण तरीकों शोरबा में इन जीवों को सीधे आवेदन करने के लिए अनुमति देता है (प्रोटीन निष्कर्षण के बिंदु तक) व्यवहार्य रहेगा. इसके अलावा, प्रस्तुत विधि सस्ता, विश्वसनीय और समय 12 'पर हाथ' न्यूनतम के साथ रक्त संस्कृति ग्राम दाग परिणाम के 25 मिनट के भीतर उपलब्ध जीवाणु की पहचान, साथ तेजी से होना दिखाया गया है.
इस विधि ग्राम नकारात्मक बी की पहचान करने के लिए सकारात्मक रक्त संस्कृति बतख को सीधे आवेदन फार्मिक एसिड निष्कर्षण का उपयोग एक साधारण घर में स्पिन सेल प्रोटोकॉल हैMALDI-TOF एमएस प्रौद्योगिकी के साथ acteria.
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Protocol
"सकारात्मक" के रूप में 1. रक्त संस्कृति बतख फ्लैग
- सतत निगरानी ऊष्मायन कैबिनेट से संकेत रक्त संस्कृति बोतल निकालें और एक जैविक सुरक्षा कैबिनेट में जगह. नोट: बोतलों खतरनाक सूक्ष्मजीवों शामिल कर सकते हैं और सार्वभौम सावधानियों का पालन करने की आवश्यकता है. कारण नमूने में संक्रामक एयरोसौल्ज़ के जोखिम के लिए, सभी नमूने प्रक्रियाओं एक जैवसुरक्षा द्वितीय श्रेणी लामिना का प्रवाह कैबिनेट में प्रदर्शन किया जाना चाहिए.
2. ग्राम दाग तैयार किया जाता है
- स्थानीय संस्थागत प्रोटोकॉल के अनुसार संकेत रक्त संस्कृति शोरबा से एक ग्राम दाग तैयार करें. नोट: ग्राम नकारात्मक जीवों माइक्रोस्कोपी पर पहचाने जाते हैं जब रक्त संस्कृति शोरबा निम्न विधि के अनुसार कार्रवाई की है. ग्राम पॉजिटिव जीवों की पहचान कर रहे हैं, आनुवंशिक पहचान और प्रतिरोध मार्कर को निशाना बनाने के लिए एक वैकल्पिक आणविक विधि (इस लेख में संबोधित नहीं) शोरबा 13 को लागू किया जाता है.
- धीरे 2-3X inverting द्वारा रक्त संस्कृति बोतल मिश्रण.
- जैव सुरक्षा कैबिनेट के भीतर एक सुरक्षा रक्त हस्तांतरण इस उपकरण के लिए एक 10 मिलीलीटर सिरिंज देते हैं.
- रक्त संस्कृति बोतल के लिए रक्त का हस्तांतरण युक्ति देते और सिरिंज में शोरबा के 5 एमएल वापस ले लें. एक सीरम को अलग ट्यूब में aspirated ई.पू. शोरबा स्थानांतरण.
रक्त संस्कृति शोरबा 4. एकाग्रता
- लाल रक्त कोशिकाओं की एक बड़ी मात्रा को हटा जो 15 मिनट के लिए 1250 XG पर सीरम को अलग ट्यूब अपकेंद्रित्र.
- महाप्राण और तुरंत जेल / द्रव इंटरफ़ेस ऊपर बफी कोट के लगभग 1 मिलीलीटर छोड़ने के लिए सावधान किया जा रहा है एक बाँझ हस्तांतरण पिपेट का उपयोग कर सतह पर तैरनेवाला त्यागने. नोट: एरोबिक बोतलें जेल / द्रव इंटरफ़ेस एक अपारदर्शी सफेद रंग प्रदर्शित होने के साथ ट्यूब के नीचे करने के लिए लाल रक्त कोशिकाओं का एक स्पष्ट विभाजन दिखा. इसके विपरीत, जबजेल / द्रव इंटरफ़ेस कारण lysed लाल रक्त कोशिका घटकों पर तैरनेवाला में निलंबित शेष एक गहरे लाल रंग के रूप में प्रकट होता है अपघट्य अवायवीय रक्त संस्कृति शोरबा के लिए आवेदन किया.
5. केन्द्रापसारण धोने कदम दोहराएँ
- धीरे एक बाँझ विंदुक के साथ जेल अंतरफलक ऊपर बफी कोट तरल पदार्थ के अंतिम 1 मिलीलीटर मिश्रण है और फिर एक 1.5 एमएल microcentrifuge ट्यूब में पूरी मात्रा हस्तांतरण. 30 सेकंड के लिए 288 XG पर नया ट्यूब अपकेंद्रित्र.
- एक नया 1.5 एमएल microcentrifuge ट्यूब में एक प्लास्टिक डिस्पोजेबल 1 मिलीलीटर हस्तांतरण पिपेट का उपयोग कर सतह पर तैरनेवाला स्थानांतरण और गोली के साथ ट्यूब त्यागें. नोट: यह ख्याल गोली के हस्तांतरण से बचने के लिए लिया जाता है कि इस चरण में महत्वपूर्ण है. इस सतह पर तैरनेवाला pigmented बनी हुई है और गोली हमेशा स्पष्ट रूप से नहीं देखा जाता है अवायवीय ई.पू. बोतल से कार्रवाई की जा रही एक नमूना के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है.
अवशिष्ट कोशिकाओं के 6. Lysis
बैक्टीरियल प्रोटीन की 7. एक्सट्रैक्शन
- महाप्राण और फिर जितना संभव तरल निकाल दिया जाता है यह सुनिश्चित करना कि एक अच्छी टिप विंदुक के साथ आकांक्षा का उपयोग, सतह पर तैरनेवाला त्यागने.
- 10 μl फार्मिक एसिड (70% v / v) में गोली Resuspend. नोट: यह त्वचा के संपर्क में आता है, तो यह या साँस है अगर चींटी एसिड शरीर को प्रभावित कर सकते हैं. समाधान की तैयारी या जोड़ तोड़ जब यह r हैस्टाफ व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण के अलावा एक धूआं कैबिनेट का उपयोग करने वाले ecommended.
- एक समरूप resuspended समाधान सुनिश्चित करने के लिए पिपेट का उपयोग अच्छी तरह से मिलाएं. शारीरिक रूप से गोली बाधित करने के लिए पिपेट टिप का उपयोग एक अधिक समरूप समाधान सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक हो सकता है.
MALDI-TOF के 8. तैयारी लक्ष्य प्लेट
- लक्ष्य हाजिर प्रति तैयार निलंबन के 2 μl के साथ एक साफ MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट टीका लगाना. विफल रही पढ़ता के कभार समस्या को दूर करने के लिए प्रत्येक नमूने के लिए 3 लक्ष्य साइटों तैयार करें.
- MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट सूखे की अनुमति दें. सुखाने की दर थाली भर में हवा के प्रवाह को अधिकतम करने के लिए धूआं हुड के किनारे पर थाली रखकर बढ़ाया जा सकता है.
- मैट्रिक्स समाधान के 1 μl (10 मिग्रा / मिली α-cyano-4-hydroxycinnamic एसिड (HCCA), 50% acetonitrile, 2.5% trifluoroacetic एसिड) के साथ प्रत्येक सूखे स्थान ढ़कें. नोट: यह conta में आता है अगर यह या साँस है अगर मैट्रिक्स समाधान शरीर को प्रभावित कर सकते हैंत्वचा के साथ सीटी. तैयारी या समाधान की जोड़ तोड़ जब यह कर्मचारियों के व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण के अलावा एक धूआं कैबिनेट इस्तेमाल की सिफारिश की है.
- MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट के ऊपर वर्णित के रूप में धूआं अलमारी के किनारे पर सूखे की अनुमति दें. एक समरूप तैयारी प्लेट पर लक्ष्य स्थलों में से प्रत्येक भरता सुनिश्चित करें.
मास स्पेक्ट्रोमीटर में 9. प्लेस MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट
- MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमीटर में MALDI-TOF लक्ष्य थाली डालें. थाली वसंत लोड प्लेटों से भरा बैठा है सुनिश्चित करें. नोट: सभी लक्ष्य स्पॉट सूख रहे हैं जब तक लक्ष्य की थाली डालने नहीं है.
- रबड़ की मुहर आवश्यक निर्वात की स्थिति पैदा की जा सकती है अनुमति देने के लिए एक प्रकार का वृक्ष, धूल और बालों की साफ है सुनिश्चित करें.
- MALDI-TOF चरण ढक्कन बंद करें और फिर साधन के मोर्चे पर "बाहर / में" बटन दबाएँ. ढक्कन अब बंद है और आवश्यक निर्वात पैदा किए जाने की अनुमति होगी.
10. MALDI-TOF एमएस एसpectra अधिग्रहण
- MALDI Biotyping और FlexControl सॉफ्टवेयर खोलें.
- टंकण सॉफ्टवेयर के भीतर "फाइल" शीर्षक से लटकती मेनू से "नया वर्गीकरण" का चयन करें. इस परियोजना का नाम और उसके बाद "नया" का चयन करें. टाइपिंग सॉफ्टवेयर के भीतर सेटअप पूरा करने के लिए "अगली" का चयन करें.
- नियंत्रण सॉफ्टवेयर खिड़की के भीतर लक्ष्य प्लेट की स्क्रीन पर ग्राफिक पहचान. बाईं माउस बटन को दबाकर रखते हुए टीका स्पॉट पर माउस ले जाकर उपयोग में हैं कि MALDI-TOF लक्ष्य स्पॉट पर प्रकाश डाला.
- चयनित लक्ष्य पदों पर कहीं भी क्लिक करें और फिर लटकती मेनू से "analytes जोड़ने" का चयन करने के लिए सही माउस बटन का प्रयोग करें.
- लक्ष्य स्थलों में से प्रत्येक के लिए "आईडी" कॉलम को रक्त संस्कृति की पहचान विवरण जोड़ें और "अगली" जब पूरा क्लिक करें.
- वाणिज्यिक "वर्गीकरण" स्पेक्ट्रा डेटाबेस का चयन करें और "अगली" का चयन करें. नोट: Laboratories संदर्भ स्पेक्ट्रा की संख्या में वृद्धि करने के लिए घर में या वाणिज्यिक डेटाबेस अतिरिक्त उपयोग कर सकते हैं.
- "समाप्त" पर क्लिक करें और MALDI-TOF एमएस स्पेक्ट्रा पैदा शुरू होगा. नोट: MALDI-TOF सेटिंग्स निर्माण की सेटिंग्स (रैखिक सकारात्मक मोड, 60 हर्ट्ज लेजर आवृत्ति, 20 केवी त्वरण वोल्टेज, 16.7 केवी IS2 वोल्टेज, 170 nsec निकासी देरी, और 2,000-20,137 एम / जेड श्रेणी) के अनुसार थे.
- MALDI नियंत्रण सॉफ्टवेयर चोटियों उत्पन्न करने में विफल रहता है, स्पेक्ट्रा का मार्गदर्शन अधिग्रहण (विधि वर्णित नहीं) किया जा सकता है.
MALDI-TOF एमएस स्कोर का 11. पोस्ट विश्लेषण व्याख्या
- स्पेक्ट्रा का अधिग्रहण और विश्लेषण पूरा हो गया है एक बार, प्रत्येक लक्ष्य के लिए पहचान की सूची का विस्तार करने के लिए टाइपिंग सॉफ्टवेयर पर प्रजातियों की पहचान करने के लिए अगले "+" बटन का चयन करें.
- शीर्ष 5 समान हैं अगर, यह देखते हुए शीर्ष 5 पहचान का अध्ययन करें. स्कोर में एक ही लक्ष्य की ≥ 1.7 के साथ बेताल शीर्ष 5 पीढ़ीमौके मिश्रित बतख की संभावना उठाया. नोट: MALDI-TOF प्रौद्योगिकी मिश्रित बतख का पता लगाने के लिए गरीब संवेदनशीलता है. एक शोरबा मिश्रित प्रजातियों में शामिल है जब उदाहरण के लिए, एक उच्च आत्मविश्वास स्कोर मिश्रित प्रजातियों में से सिर्फ एक के लिए पहचाना जा सकता है.
- एक स्कोर ≥ 2.0, एक लक्ष्य मौके पर उच्चतम मैच के लिए विख्यात है जब प्रजातियों की रिपोर्ट.
- एक लक्ष्य मौके पर उच्चतम स्कोर 1.7 ≥, लेकिन <2.0, केवल पीढ़ी रिपोर्ट है जब. शीर्ष 5 पहचान के अतिरिक्त मापदंड सहमत हैं, तो प्रजातियों स्तर तक रिपोर्ट.
MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट का 12. निकालना
- सभी स्पेक्ट्रा MALDI-TOF मशीन पर "बाहर / में" बटन पूर्ण प्रेस कर रहे हैं.
- MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट संदूक को खोलने और MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट हटा दें.
- एक पुन: प्रयोज्य MALDI-TOF लक्ष्य प्लेट, शराब का उपयोग कर स्वच्छ सभी लक्ष्य स्पॉट का उपयोग करने और इसे साफ और शुष्क है एक बार आरटी पर MALDI-TOF प्लेट की दुकान है.
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Representative Results
उत्पन्न MALDI-TOF एमएस स्पेक्ट्रा स्पेक्ट्रा की एकीकृत संदर्भ डेटाबेस की तुलना कर रहे हैं. लघुगणक स्कोर संभावित पीढ़ी स्तर पर पहचान (चित्रा 1) और प्रजातियों के लिए संभावित पहचान के लिए ≥ 2.0 (चित्रा के लिए आवश्यक एक स्कोर ≥ 1.7 की सिफारिश के साथ परीक्षण के लिए अलग और संदर्भ डेटाबेस आइसोलेट्स के बीच मैच का विश्वास, के लिए सौंपा है 2). टाइपिंग सॉफ्टवेयर द्वारा मिलान स्कोर ≥ 1.7 और पहले 5 पहचान (चित्रा 1) 12 के अनुरूप है जब प्रजातियों स्तर तक रिपोर्ट. 3 इस मामले कोलाई और Serratia में, मिश्रित प्रजातियों में से एक रक्त संस्कृति शोरबा विश्लेषण किया जाता है जब परिणाम दर्शाता चित्रा marcescens. शीर्ष 5 मिलान किया स्पेक्ट्रा बेताल होते हैं. यह पहले से मिश्रित पीढ़ी ही मिश्रित बतख 12 के लगभग 30% में इस विधि द्वारा की पहचान की जाएगी कि प्रदर्शन किया गया है. यह एक मिश्रित शोरबा के साथ यह संभव है कि जानकारी होना जरूरी है. तालिका 1 monomicrobial बतख की 91.8% हासिल की जिसमें इस विधि का सत्यापन अध्ययन से पहले प्रकाशित परिणामों का सारांश एक उच्च आत्मविश्वास स्कोर के साथ एक प्रजाति के अनुरूप एक रिपोर्ट के लिए क्रमश: 100% और 97.0% जीनस क़बूल और प्रजातियों, 12 के साथ> 1.7 की एक MALDI-TOF स्कोर,.
चित्रा 1. MALDI-TOF एमएस 1.861 के एक लघुगणक स्कोर के साथ Escherichia कोलाई के लिए स्पेक्ट्रा उत्पन्न. सही करने के लिए टाइपिंग सॉफ्टवेयर के द्वारा की पहचान पहले 5 मैचों है. प्रजातियों लगातार कोलाई के रूप में बताया जाता है कि ध्यान दें. 1.861 के स्कोर के साथ और शीर्ष 5 मैचों ई. होने के साथ कोली पहचान माना जाता है प्रजातियों स्तर से 12 विश्वसनीय. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
चित्रा 2. MALDI-TOF एमएस 2.216 के एक लघुगणक स्कोर के साथ Pseudomonas aeruginosa के लिए स्पेक्ट्रा उत्पन्न. सही करने के लिए टाइपिंग सॉफ्टवेयर के द्वारा की पहचान पहले 5 मैचों है. प्रजातियों लगातार 2.216 के उच्च स्कोर पहचान पहचान की प्रजातियों स्तर को विश्वसनीय माना जाता है के साथ. Pseudomonas aeruginosa के रूप में बताया जाता है कि ध्यान दें. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
चित्रा 3. MALDI-TOF एमएस कोलाई और Serratia marcescens युक्त एक मिश्रित रक्त संस्कृति शोरबा के लिए स्पेक्ट्रा उत्पन्न. सही करने के लिए पहली बार 5 मिलान किया स्पेक्ट्रा में Escherichia कोलाई और Serratia marcescens दोनों रिपोर्टों में जो टाइपिंग सॉफ्टवेयर के द्वारा की पहचान पहले 5 मैचों हैं . इस मिश्रित पीढ़ी ही मिश्रित शोरबा संस्कृतियों 12 के लगभग एक तिहाई में पहचाना जाता है. भविष्य में सॉफ्टवेयर का बेहतर संस्करण मिश्रित संस्कृतियों का पता लगाने में सुधार हो सकता है. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
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MALDI-TOF एमएस की तुलना तालिका 1. सत्यापन डेटा subcultured कालोनियों पर बाद में प्ररूपी पहचान के साथ रक्त संस्कृति शोरबा पर सीधे प्रदर्शन किया. सहमत पहचान रक्त संस्कृति शोरबा ≥ 1.7 पर एक मास स्पेक्ट्रोमेट्री स्कोर की आवश्यकता है. इस तालिका में पिछले एक प्रकाशन 12 से अनुकूलित है. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
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Discussion
पोस्ट centrifugation कदम अलग हो घटकों रीमिक्स करने के लिए नहीं पर्याप्त देखभाल के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं कि रक्त संस्कृति शोरबा के लिए MALDI-TOF एमएस लागू करते समय यह महत्वपूर्ण है. यह MALDI-TOF स्पेक्ट्रा के साथ हस्तक्षेप spikes उत्पादन हो सकता है जो हीमोग्लोबिन सहित रक्त संस्कृति घटक है और मानव सेलुलर प्रोटीन, दूर करने के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है.
एमएस प्रजातियों के लिए ≥ 2.0 के स्कोर के कटौती और जीनस पहचान के लिए ≥ 1.7 की सिफारिश बनाती हालांकि, अन्य रिपोर्टों ई.पू. शोरबा 10,12,14-18 को लागू किए जाने पर लागू किया जा सकता है कम लघुगणक स्कोर (≥ 1.4 1.6 ≥ रेंज) का सुझाव दिया है. नैदानिक सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं में कम एमएस पहचान स्कोर के कार्यान्वयन केवल उपयुक्त स्थानीय विनियामक और सत्यापन प्रक्रिया के बाद विचार किया जाना चाहिए.
कभी कभी गरीब स्पेक्ट्रा या तो मिलान नहीं कर रहे हैं जो इस विधि द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं, या एल के साथ सूचित कर रहे हैंआत्मविश्वास के स्कोर ओउ. प्रत्येक को अलग करने के लिए डुप्लिकेट या तीन प्रतियों स्पॉट प्रदर्शन कर एक ही स्थान में विफल रहता है जब प्रयोग दोहराए जाने की असुविधा को कम कर सकते हैं. कभी कभी, सभी डुप्लिकेट स्पॉट की पहचान के लिए पर्याप्त स्कोर नहीं होगा. गरीबों की पहचान के कारण रक्त संस्कृति शोरबा में बैक्टीरिया के एक कम प्रारंभिक एकाग्रता का एक परिणाम के रूप में, और अधिक सामान्यतः अधूरा डेटाबेस सेट की वजह से हो सकता है, या हो सकता है. प्रस्तुत विधि <1.7 चिकित्सीय आइसोलेट्स के 8% का सामना करना पड़ा और anaerobic रक्त संस्कृति की बोतलें 12 पर प्रदर्शन किया जब एक मामूली प्रबलता था के स्कोर के लिए एक प्रकाशित सत्यापन सेट में.
MALDI-TOF एमएस प्रौद्योगिकी ठोस मीडिया पर अलग भी जब सभी चिकित्सकीय सामना करना पड़ा ग्राम नकारात्मक जीवाणुओं को अलग करने में असमर्थ है. उदाहरण के लिए, ई. कोली शिगेला प्रजातियों से प्रतिष्ठित नहीं किया जाएगा और साल्मोनेला पीढ़ी speciated नहीं किया जा सकता. परिणामों में बताया गया है कि यह वें पहचान करने के लिए महत्वपूर्ण हैरक्त संस्कृति शोरबा पर सीधे MALDI-TOF का उपयोग करते समय में मिश्रित प्रजाति का पता लगाने के लिए संवेदनशीलता 11,12,18,19 कम है.
कुल मिलाकर, इस दृष्टिकोण नकारात्मक रक्त संस्कृति एक रक्त संस्कृति शोरबा संकेतन के 25 मिनट के भीतर आइसोलेट्स ग्राम के 90% से अधिक की पहचान करने के लिए एक तेजी से सस्ती और विश्वसनीय तरीका प्रदान करता है.
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Disclosures
लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषित.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BACTEC Plus Aerobic/F Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 442192 | |
| BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 442265 | |
| BACTEC Peds Plus Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 442194 | |
| Vacutainer - Blood transfer device | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 364880 | Single use sampling device reducing the risk of needlestick injury |
| Vacutainer SST 5.0 ml, Advance plus | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 367954 | Serum separating tube |
| Syringe 10 ml | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 302143 | |
| Transfer pipette | Samco, USA | 222-20S | |
| Transfer pipette (fine tipped) | Samco, USA | 232-20S | |
| Microcentrifuge tube (2.0 ml) | Eppendorf, Hamburg, Germany | 0030.120.094 | |
| Sterile water (DNAse and RNAse free) | Life Technologies, Carlsbad, California, USA | 10977-015 | |
| Formic acid | Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA | F0507 | |
| Matrix solution | Bruker Daltonics, Bremen Germany | 285074 | 10 mg/ml α-cyano-4-hydroxycinnamic acid, 50% acetonitrile, 2.5% trifluoroacetic acid |
| Benchtop microflex LT MALDI-TOF MS | Bruker Daltonics, Bremen Germany | Utilizing BioTyper 3.1 (Build 65) and FlexControl 3.3 (Build 99) software |
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