Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

בניית לשכות החמקן לחשיפת עכברים לאלכוהול במהלך המקביל של כל שלושת הטרימסטר של התפתחות אדם

Published: July 13, 2014 doi: 10.3791/51839
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Department of Neurosciences, School of Medicine, University of New Mexico Health Sciences Center

Summary

אנו מדגימים את בניית תאי אדי אלכוהול תוך שימוש בחומרים זמינים שבו זמנית בבית 6 כלובי עכבר. בנוסף, אנו מתארים את השימוש בם במודל של עכברים של חשיפת אלכוהול עוברית שווה ערך לכל 3 הטרימסטר של הריון אנושי. פרדיגמה זו חושפת את בעלי החיים במהלך הריון ולאחר לידה בימים 1-12.

Abstract

חשיפה לאלכוהול במהלך פיתוח יכולה לגרום לקבוצת כוכבים של מומים מורפולוגיים והתנהגותיים שידועים קולקטיבי הפרעות אלכוהול עוברי ספקטרום (FASDs). בסופו החמור ביותר של הספקטרום היא תסמונת אלכוהול עוברית (FAS), המתאפיינת בפיגור בגדילה, dysmorphology craniofacial, וגירעונות neurobehavioral. מחקרים עם מודלים של בעלי חיים, ובם מכרסמים, שהובהרו מנגנונים מולקולריים ותאיים רבים מעורבים בפתופיזיולוגיה של FASDs. ממשל אתנול למכרסמים בהריון כבר בשימוש למודל חשיפה אנושית במהלך הטרימסטר הראשון והשני של הריון. צריכת אתנול השליש שלישית בבני אדם כבר דגם באמצעות מכרסמים ילוד. עם זאת, מחקרים במכרסמים כמה אפיינו את השפעת חשיפת אתנול במהלך שווה הערך לכל שלושת הטרימסטר של הריון אנושי, דפוס של חשיפה שהיא שכיח אצל נשים בהריון. כאן, אנו מראים כיצד לבנות תאי אדים בקלות oחומרי btainable שיכול להכיל כל אחד עד שישה כלובי עכבר סטנדרטיים. אנו מתארים הפרדיגמה חדר אדים שיכולים לשמש מודל חשיפה לאתנול, עם טיפול מינימאלי, במשך כל שלושת הטרימסטר. המחקרים שלנו מראים כי סכרים בהריון פיתחו סובלנות טבולים משמעותית לאתנול. עם זאת, עכברי יילודים לא פתחו סובלנות חילוף חומרים ואת מספר העוברים, משקל עובר, משקל שליה, מספר גורים / המלטה, מספר גורים / המלטה המתה, ומשקל גור לא נפגע באופן משמעותי כתוצאה מחשיפת אתנול. יתרון חשוב של פרדיגמה זו הוא תחולתה ללימודים עם עכברים גנטיים שונה. בנוסף, פרדיגמה זו ממזערת את הטיפול בבעלי חיים, לבלבל מרכזי במחקר אלכוהול עוברי.

Introduction

שתייה במהלך ההריון יכול לפגוע בעובר, וגרם לשינויים מתמשכים באיברים רבים ומערכות שיקטינו את איכות חיים של אנשים מושפעים ובני משפחותיהם באופן משמעותי. הערכה היא כי כ 10-30% מהנשים שותים במהלך ההריון בארצות הברית, עם שתיית 1-8% ב1,2 דפוס מוגזמת. מגוון של תופעות המיוצרים על ידי חשיפת אתנול במהלך ההתפתחות העובר הוא ידוע קולקטיבי הפרעות ספקטרום אלכוהול עוברי (FASDs). האומדנים אחרונים עולה כי FASDs הוא בעיה מרכזית בבריאות הציבור עם שכיחות גבוהה ככל 2-5% בארה"ב 3. הביטוי החמור יותר של FASDs הוא תסמונת אלכוהול עוברית (FAS), המאופיינת בפיגור בגדילה, מומים Craniofacial, וגירעונות neurobehavioral, כוללים ליקויי למידה. השכיחות של FAS כבר מוערכת .2-0.7% בארה"ב 3. הטיפולים הקיימים כיום לFASDs יעילים רק באופן חלקיופיתוח של טיפולים יעילים יותר מוגבל על ידי עניי ההבנה של היסודות התאיים ומולקולריים של ספקטרום מורכב זה של הפרעות.

נתונים מהמומים המולדים הלאומיים Prevention Study (NBDPS) מצביעים על כך שנשים בהריון לשתות נפוצות ביותר במהלך שליש 1 st, לפני ההריון זוהה, ואחרי התנזרות בשלבים מאוחר יותר של הריון 2. NBDPS גם מצא כי הדפוס השני בשכיחות של צריכת אתנול במהלך ההריון כרוך בשתייה לאורך כל הטרימסטר של הריון 2. הסיבות לכך כוללות חוסר המודעות לגבי ההשפעות מזיקות של חשיפה עוברית אתנול (אפילו במינונים נמוכים), גישה מוגבלת לטיפול טרום לידתי, היסטוריה החיובית להפרעות נוירופסיכיאטריות, וניצול לרעה של או תלות באתנול 4. מעניין לציין, כי NBDPS דיווח כי הדפוס השלישי הנפוץ ביותר של הצריכה מעורבת התנזרות במהלך 1 nd אחרי הצריכה במהלך השליש 3 rd, כאשר הנחה הוא לעתים קרובות כי השתייה היא בטוחה כי organogenesis כבר בעיקר הושלם. עם זאת, שליש 3 rd הוא תקופת גבוהה רגישות לנזק למערכת עצבים הנגרמים אתנול כי זו תקופה שבה מעגלים עצביים עוברים עידון עמוק 2. NBDPS זיהה גם דפוסים אחרים, פחות תכופים של צריכת אלכוהול המתרחשים במהלך הריון, כוללים הצריכה לאורך רח 1 ו -2 הטרימסטר nd אחרי התנזרות במהלך השליש -3 2.

בניסיון לבנות מודל הדפוסים השונים של צריכת אתנול שנצפו בנשים בהריון, מספר פרדיגמות חשיפת אתנול התפתחותית הוקמו באמצעות בעלי חיים מגוונים, עם חולדות ועכברים להיות 5,6 הנפוץ ביותר. משך ההריון בבעלי החיים אלה בדרך כלל לאסts כ 3 שבועות, אשר תואם את st 1 ו -2 הטרימסטר nd של הריון אנושי. מחקרים במכרסמים רבים העריכו את ההשפעה של מינונים ודפוסי חשיפת אתנול שונים בתקופה זו. דוגמאות לשיטות המשמשות לעתים קרובות לניהול אתנול לעכברים וחולדות בהריון כוללות ניהול באמצעות דיאטות נוזלי 7,8, תוספת של אתנול לשתיית המים 9,10, שתייה מרצון של פתרונות ממותקים סכרין 11, gavage הקיבה 12, שאיפת אדים 13 , ותת עורית או זריקת intraperitoneal 14. תוצאות של מחקרים אלה סכמו כמה מהגירעונות שנצפו בבני אדם עם FASDs, הוכחת כי החשיפה במהלך הריון בשלבים מוקדמים די בכך כדי לגרום נזק למעגלים עצביים על פני המוח (הנסקרת ב 6,15).

גם ניסויים במכרסמים הראו כי חשיפה במהלך שווה הערך ל -3 16-18, אינטובציה intragastric 19, הזרקה תת עורית 20, ומשאיפת אדי 21,22. מחקרים אלו הראו כי באופן משכנע פרץ גדילת המוח הוא תקופה של פגיעות גבוהות להשפעות התפתחותיות של אתנול 6.

כפי שצוין לעיל, שתייה במהלך כל הטרימסטר הריון היא דפוס נפוץ של צריכת אתנול בנשים 2. עם זאת, מעטים יחסית מחקרים העריכו את ההשפעה של דפוס זה של חשיפה תוך שימוש במודלים של בעלי חיים. חלק מהמחקרים אלה לקחו advantagדואר של בעלי חיים הגדולים שבו השליש השווה ערך 3 rd מתרחש ברחם ולא בתקופת הילוד, כמו במקרה של חולדות ועכברים. מודלים של בעלי החיים אלה כוללים פרימטים שאינם בני אדם 23,24 והכבשים 25-27. עם זאת, מודלים של בעלי החיים אלה לא היו בשימוש נרחב במחקר FASDs, בין שאר, בגלל עלות גבוהה והצורך במתקנים לטיפול מיוחדים. מכרסמים היו בשימוש נפוץ יותר כדי לאפיין את ההשפעה של חשיפת אתנול כל טרימסטר על התפתחות העובר 5. גינאה חזירים היו יתרון במיוחד בעניין זה ניתנו פיתוחם הנרחב לנשים בהריון ודמיון בהבשלת מוח לזה של בני האדם 28,29. עם שרקנים, ניתן היה לאפיין את ההשפעה של חשיפת אתנול ברחם הכולל את תקופת הפיתוח המקבילה של השליש השלישי האנושיים 3. העלות הגבוהה יחסית של בעלי חיים אלה, כמו גם את משך ההריון שלהם ארוך יחסית(~ 67 ימים), הגביל את השימוש בם לכמה מעבדות עובדות על מחקר FASDs.

בשל שימוש עלות היעיל ורחב שלהם במחקר ביו, חוקרים השתמשו בחולדות למודל חשיפה לאתנול במהלך כל הטרימסטר של הריון. במחקרים ראשוניים, חולדות שנחשפו במהלך הריון באמצעות תזונה נוזלית ואחריו ממשל של אתנול באמצעות הילודים gastrostomy לגודל באופן מלאכותי (ימים לאחר לידה (P) 1-10) וכתוצאה מכך רמות דם אתנול שיא (BEC) בסכרים של 0.08 גר '/ ד"ל ובגורים 0.16 גר '/ ד"ל. פרדיגמה זו נגרמת על שינויים ארוכי טווח בmyelination עצב ראייה והקטינה את מספר סיבי גליה ברגמן ב30-32 המוח הקטן. באופן דומה, מאייר ומשתפי פעולה באמצעות תנאי גידול מלאכותיים מנוהלים אתנול לסכרי חולדה בהריון באופן כמו בולמוס-באמצעות אינטובציה intragastric ואחריו ממשל יילודים בחלק מהתקופה המקביל טרימסטר 3 rd (P4-9) 33,34. PBECs האימהית וגור eak היתה 0.3 גר '/ ד"ל בשני יום הריונית 20 וP6. הפרדיגמה חשיפה כל טרימסטר זה הביאה לפיגור בגדילה שהיה גדול יותר באופן משמעותי מזה שנצפה בגורים החשופים בתקופות נבחרות של הריון 33. בנוסף, חולדות שנחשפו לאתנול בשווה הערך לכל הטרימסטר הציגו ירידה במספר פורקינג' המוח הקטן ותאי גרגיר שהיה גדול יותר מזה שנצפה בבעלי חיים שנחשפו בתקופות אחרות 34. ירידה במספר תאים בהיפוקמפוס דווחו גם בפרדיגמה זו, אך תופעות אלה מופיעות להיות בראש ובראשונה כתוצאה מחשיפה במהלך השליש השלישי שווה הערך 35 3. שיטה שיש בה ממשל אתנול באמצעות gavage intragastric לשני חולדות הרות ויילודי עכברים שימשה גם למודל כל חשיפת השליש 36. שיטה זו, שהניבה BECs של 0.13 גר '/ ד"ל בסכרים (יום הריונית 17) ו0.24 גר' / ד"ל בגורי P6, לון מושרהשינויים מתמשכים-g ברמות הנוירוטרנסמיטר אוקסידאז בהיפוקמפוס וההיפותלמוס, וביטוי מוגבר של methyltransferases DNA והתיל CPG מחייב חלבון 2 ב37,38 היפוקמפוס. שימוש בפרדיגמה דומה חשיפה (BEC = 0.14-0.2 גר '/ ד"ל בסכרים ו0.2 גר' / ד"ל בגורים), גיל-Mohapel et al. 39 זוהו עלייה במספרם של נוירונים בוגרים חדשים ברכס משוננת של חולדות מבוגרים ש עשוי לייצג מנגנון פיצוי לנזק הנגרם אתנול עצבי או שינוי בתהליך ההבשלה של תאי עצב בוגרים שנולדו. גם חוקרים ניסו לבנות מודל כל חשיפת אתנול שליש על ידי חשיפת סכרים באמצעות דיאטות נוזליים או שתיית מים במהלך שני הריון וההנקה 9,40. עם זאת, השירות של חשיפת הגורים דרך חלב של האמא שלהם הוא מוגבל, כי זה בדרך כלל תוצאות בBECs הנמוכה גור (למשל, .002-.05 גר '/ ד"ל; 41,42).

עכברים יש גם שימשו extensively לאפיין את ההשפעות של חשיפת אתנול התפתחותית. מניות זה מודל חיה רבות של נקודות החוזק שתואר לעיל למודל החיה החולדה, עם יתרון נוסף שזני עכבר מהונדסים גנטי רבים זמינים 5. עכברים כבר השתמשו בהצלחה כדי לאפיין את ההשפעות של אתנול במהלך st 1, 2 nd או 3 הטרימסטר שלישי של הריון 43,44. עם זאת, ההשפעה של כל חשיפת השליש על בעלי חיים אלה לא מאופיין היטב כי זה מבחינה טכנית יותר קשה לחשוף עכברים במהלך שווה הערך לכל הטרימסטר של הריון אנושי. לדוגמא, גידול מלאכותי וgavage קיבה, אשר שימש בהצלחה בחולדות, דורשים נהלים מיוחדים יותר בעכברים 45. למיטב ידיעתנו, מחקר אחד בלבד עד כה ניסה לחקור את ההשפעה של כל חשיפת אתנול השליש באמצעות עכברים; בעלי החיים אלה נחשפו לפתרון אתנול בשתיית מים דוריהריון והנקה ng 46. BECs האימהית היתה BECs 0.07 גר '/ ד"ל והגור לא נקבעה, אך צפוי להיות חלק מאותם בסכרים.

כאן, אנו מתארים מודל חדש לחשיפת אתנול כל טרימסטר של עכברים שבו אלכוהול ניתן לשני סכרים וילודים בהריון באמצעות תאי משאיפת אדים. תאי החמקן נבנו על בסיס עיצוב קודם 47. אנו מספקים הוראות מפורטות כיצד לבנות את תאי שאיפה ולבצע את נהלי החשיפה. כמו כן אנו מספקים מידע על BECs שניתן להשיג, ואת ההשפעה של חשיפה על הישרדות גור וצמיחה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

נהלי כל החיה אושרו על ידי האוניברסיטה למדעי הבריאות בניו מקסיקו, מרכז הטיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת שימוש.

1. החמקן עצרת קאמרית

  1. גיליונות פוליקרבונט לחתוך עם מסור או פאזל עגולים לממדים שנקבעו בווידאו לחלק העליון, תחתון, קדמי, אחורי, צדדים, ודלת (איור 1 ולוח 1).
  2. עם מסור או פאזל עגול, לחתוך פתיחה 8 סנטימטרים גבוהה על ידי 16 אינץ' רחבה באמצע הפנל הקדמי.
  3. למדוד ולסמן את החורים לציר הפסנתר על אינץ 18 ידי 10 גיליון פוליקרבונט אינץ' שיהפוך את הדלת של החדר.
  4. בדלת, לקדוח חורי כיור דלפק עם מקדח אינץ 5/16, ועם מקדח אינץ 3/16, לקדוח החור לברגים. הקפד לקדוח חורי כיור דלפק בצד הפנימי של הדלת לראשי הבורג.
  5. הכן את גיליונות פוליקרבונט לריתוך.
  6. להרכיב לכאן ולכאןNT, לוחות גב, וצד על הלוח התחתון באמצעות ולד על # 16.
  7. לאטום כל פערים בין פנלים עם ולד על # 16.
  8. צרף את הפנל העליון עם ולד על # 16.
  9. השתמש במלחציים בר או ספרי לימוד כבדים להחזיק הכל במקום ואילו הריתוכים לרפא.
  10. צרף 1 אינץ על ידי פיסת פוליקרבונט 12 אינץ על אינץ פנל 1 הקדמי מתחת לפתיחת הקובץ המצורף של ציר הדלת.
  11. אפשר לפחות 24 שעות לולד על לרפא.
  12. חותכים 2 חתיכות של צינורות PEX 12 סנטימטרים וחתיכה של צינורות PEX ארוכים 1 אינץ 1.
  13. עם מקדח 5/16, לקדוח חור בכל אחד מצינורות PEX אינץ 12 כ 1 עד 2 סנטימטר מקצה אחד.
  14. צרף 2 x 12 צינורות PEX אינץ למחבר T-3/8 אינץ 'עם החורים ממוקמים במרחק של המחבר.
  15. מכסה את הקצוות הפתוחים של צינורות PEX עם 3/8 תקעי אינץ.
  16. צרף את ציר הפסנתר ללוח הקדמי ואת הדלת באמצעות 4-40 ברגים במכונה ואגוזים.
  17. שימוש בדלת כמדריך, מ 'ארון החורים דרושים לציר הפסנתר על spacer 1 אינץ בלוח הקדמי של החדר.
  18. עם מקדח אינץ 3/16, לקדוח חורים בפנל הקדמי לציר הפסנתר.
  19. צרף את הדלת וציר פסנתר ללוח הקדמי באמצעות 4-40 ברגים במכונה ואגוזים.
  20. להרכיב את מהדק לעבור כפי שמוצג בוידאו עם מכונת כביסה ואגוז בכל צד של זרוע הצד.
  21. מארק ותרגיל 3/16 חורי אינץ לרכיסת מלחציים בלוח הקדמי ולצרף לעבור מלחציים עם 4-40 ברגים במכונה ואגוזים.
  22. הוספת חותמות נורת גומי 3/8 אינץ לחלק הפנימי של הדלת.
  23. עם מקדח משעמם 5/8 אינץ', לקדוח חור במרכז הפנל העליון לנמל הכניסה.
  24. לקדוח חור 1/2 סנטימטר בתחתית / מרכז של הלוח האחורי לנמל היציאה.
  25. להרכיב את נמל היציאה על ידי לחיצה על חלק ההברגה של הסנטימטר 3/8 מתאמים דרך הקיר דרך הקיר האחורי של חדר האדים בחור נמל יציאה. צרף את האגוז מפנימי של החדר כדי להחזיק במקום.
  26. הסר את הכיסוי המגן מגיליונות פוליקרבונט.
  27. צרף את פיסת צינורות PEX 1 אינץ לT-המחבר ולאלץ את צינורות PEX דרך החור בחלק העליון של החדר מבפנים.
  28. צרף מרפק 90 3/8 אינץ לחלק העליון של צינורות PEX 1 אינץ מבחוץ.
    הערה: לקדוח חור 1/2 סנטימטר בדלת ולהכניס septa חותם 1/2 סנטימטר לתוך החור.
  29. חזור על השלבים 1-22 לאוויר לשלוט בתא בלבד.

2. Rack ומיזוג משלוח עצרת

  1. אם הצבת התאים על העגלה / המדף שהוזכר ברשימת החומרים, להרכיב את העגלה על פי הוראות היצרן.
  2. עם ברגים ואומי חילוף, לצרף חתיכה של פוליקרבונט גרוטאות למדף כדי להחזיק את הרגולטורים זרימת האוויר.
  3. בכל מקום על פיסת פוליקרבונט, סימן והתרגיל 3/4 חורי אינץ לרגולטורי זרימת אוויר הגרוטאות ולצרף רגולטורים עם האגוזיםסיפק.
  4. צרף 3/8 אינץ דרך קיר מתאם ליציאות הכניסה ויציאה של זרימת אוויר הרגולטורים.
  5. להרכיב את בקבוק אתנול עם אבן האוורור, # 8 פקק ושחרור מהיר בשורה מחברים.
  6. באמצעות 3/8 צינורות Tygon אינץ, לחבר את זרימת הרגולטורים למשאבת האוויר ובקבוק אתנול כפי שמוצג באיור 1.
  7. לאוויר החדר בלבד, לצרף את נמל היציאה של רגולטור זרימת האוויר לכניסה 3/8 אינץ מרפק 90 עם צינורות Tygon 3/8 אינץ', כפי שמוצג באיור 1.

איור 1
איור 1. ייצוג סכמטי של התצורה של תאי האדים. T-מחבר מחובר למשאבת אוויר הרעש הנמוך. צד אחד של T-המחבר מחובר ישירות לרגולטור זרימת אוויר לאוויר רק חדר האדים. ים האחרIDE הוא לפצל שוב וצורף ל2 רגולטורים זרימת אוויר שונים, אחד לאוויר ואחד לאתנול. תא האוויר מחובר ישירות לרגולטור כפי שמוצג. לחדר אדי אתנול, רגולטור זרימת אוויר אחד מחובר לאבן aerator השקוע באתנול נוזלי בבקבוק המסנן. נמל זרוע הצד של בקבוק המסנן מחובר עם התפוקה של רגולטור האוויר כפי שצוין. אדי אתנול התמזגו והאוויר מחוברים אז לכניסה של חדר אדי אתנול. הצינורות לשקע (לא מוצגים) מחוברים לשקע אוורור בחדר.

3. צ'יימברס החמקן המבחן ולהתאים את רמות אתנול

  1. הוספת 600 מיליליטר של אתנול 190 הוכחה לבקבוק של המסנן, הכנס את אבן האוורור, ולהתחבר למפרצון צינור לזרועו השנייה של הבקבוק.
  2. דלתות לסגור קאמריות ותור במשאבת אוויר.
  3. התאם רגולטורים זרימת אוויר, כך שקרוב למחצית מכמות אוויר זורם דרך האלכוהול הנוזלי כמו האוויר הוא מעורבב עם. Adjust האוויר רק זרימת אוויר לזרימה המשולבת של האלכוהול והאוויר של חדר אתנול.
  4. אפשר לתאים כדי לאזן לפחות 30 דקות לפני מדידת ריכוז אוויר אתנול.
  5. למדוד את ריכוז אוויר אתנול על ידי מיצוי 5 מיליליטר של אוויר עם מחט 18G ומזרק 60 מיליליטר דרך המחיצה. לדלל מדגם זה עם אוויר חדר על ידי הציור את הבוכנה חזרה ל60 מיליליטר (1:12 דילול). למדוד את רמת אוויר אתנול באמצעות נשימה בהתאם להוראות יצרן. יש צורך בדילול של אוויר החדר כדי להשיג רמות אדי אלכוהול בטווח זיהוי של נשימה.
    הערה: אם משתמש ברמות של חשיפה לאלכוהול שונות הדילול ייתכן שיצטרך להיות מותאם.
  6. כנקודת מוצא, להתאים את הרגולטורים זרימת האוויר כדרושים להשגת ריכוז אלכוהול באוויר של כ 4.5-5 גר '/ ד"ל (גרם של אלכוהול מתאדה לד"ל של אוויר).

4. גידול בעלי חיים

  1. נקבות בית הקבוצה C578BL / 6 עכברים (ישנים 2-3 חודשים) במשך שבוע לפחות 1 כדי לסנכרן את מחזורי השחלות.
  2. בנפרד לשכן זכר עכברי C57BL / 6 (ישנים 2-5 חודשים) לפחות 2 שבועות.
  3. לאחר סינכרון, לשים נקבה אחת עם זכר אחד במשך 5 ימים כדי לאפשר להזדווגות.
  4. בעקבות הזדווגות, להסיר זכרים ונקבות בנפרד בית ולהכניס אותם לתוך תאים.

5. חשיפת אתנול החמקן לפני ואחרי לידה

  1. לחשוף את הסכרים בהריון לאדי אתנול למשך 4 שעות בכל יום החל מהשעה 10:00 במהלך מחזור האור (אורות מ06:00-6:00) חוץ מיום לידה, כדי למנוע מות גור.
  2. שוקל סכרים ביום הריונית (G) 5, G13-G14, G18 ו- G20 למעקב הריון; מצעים שונה בימים שנקבות נשקלו כדי למזער את הטיפול.
  3. כל יום להחליף את המזון לקבוצות אתנול חשוף, כדי למנוע הצריכה של כדורים עם כל אתנול ספג לתוכם.
  4. ביוםלידה אל תחשוף את בעלי חיים. לאחר הלידה לחשוף את הסכרים וגורים במשך 4 שעות בכל יום החל מהשעה 10:00 מP1-P12.
  5. שוקל גורים על P2, P8, P12, P25 ו; ולשנות את המצעים בP8 P12 וכדי למזער את טיפול נוסף.
  6. מייד לאחר החשיפה האחרונה (P12), להעביר את הכלובים לחדר דיור בעלי חיים סטנדרטי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

איור 2 א עולה כי שני עכברים בהריון וצאצאי ילוד נחשפו לריכוזי אדי אתנול יציבים יחסית בתאים. נעו אלה בין 4-6 גר '/ ד"ל. איור 2 מראה את BECs הושגה בעכברים בהריון כפונקציה של זמן. BECs נמדדה באמצעות דהידרוגנז אלכוהול סטנדרטי מבוסס assay 48. בG5, BECs עלתה במהירות ל ~ 60 מ"מ שעה 2 לאחר תחילת החשיפה והגיעה לשיאו בסוף תקופת חשיפת 4 שעות. BECs ירד בהדרגה ל ~ 12 מ"מ אחרי 4 שעות נוספות לאחר תום החשיפה. על ידי G13-14, חלה ירידה דרמטית בBECs כ 60% מהרמות שזוהו בG5. בנוסף, רמות BECs עלו לאט יותר וירדו במהירות רבה יותר, וכתוצאה מכך נוכחות קצרה יותר של אתנול בדמם של העכברים בהריון. בטווח קרוב (20-G18), BECs הופחתה בהמשך לכ 30% מהרמות שזוהו בG5. ממצאים אלה עולים בקנה אחד עם developmאף אוזן גרון של סובלנות חילוף חומרים מהירה לאתנול בעכברים בהריון. איור 2C מראה כי צאצאי ילוד נחשפו לBECs ליד 30 מ"מ. BECs עלתה בהדרגה בבעלי חיים אלה, והגיע לשיא בסוף תקופת חשיפת 4 שעות, ולהקטין בהדרגה לרמות בסיס 8 שעות לאחר סיומה של הפרדיגמה חשיפת 4 שעות. בניגוד לסכרים בהריון, לא היה הבדל בין BECs נמדדה בילודים שנחשפו מוקדם (P2) (P7-P12) מאוחר לעומת בתקופה הילוד. ממצאים אלה מצביעים על כך שעכברי יילודים לא פתחו סובלנות חילוף חומרים לאתנול.

איור 2
רמות תא אדי אתנול איור 2. אפיון של רמות אתנול.) נשארו יחסית קבועה לאורך כל שלבי הריון ולאחר לידה של paradig החשיפהמ '. כדי למדוד את הרמות אלה, תא האוויר בוטל עם מזרק דרך מחיצת הגומי, מדולל באוויר הסביבה, וגורש ליציאת המפרצון של נשימה (ראה וידאו לפרטים נוספים). ערכים התקבלו מ5 ו -4 סיבובים חשיפה שונים לשלבי הריון ולאחר לידה, בהתאמה. B) רמות אתנול דם נמדדו בנקודות זמן שונות להצביעו ימי הריון מוערכים בסכרים בהריון (n = 5-7 סכרים). מגבלת השיכרון המשפטית (17.4 מ"מ או 0.08 גר '/ ד"ל) מצויינים על ידי הקו המקווקו. בר האפור מציין את זמן הסכרים נחשפו לאתנול. C) זהה בB אבל לעכברים בילוד (n = 5-9 גורים מהמלטות שונות).

איור 3 מראה כי הפרדיגמה החשיפה לא השפיעה על עלייה במשקל בסכרים או את הגורים באופן משמעותי. טבלה 2 מראה כי חשיפת אתנול לא השפיעה על מספר fetu קיימא באופן משמעותיSES, מספר העוברים נספגים, משקל עובר, ומשקל שליה (הנמדדים בטווח קרוב). טבלה 2 מראה גם כי מספר הגורים בכל המלטה ותמותת גור לא נפגעו באופן משמעותי כתוצאה מחשיפת אתנול. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של נתון זה.

איור 3
איור 3. חוסר השפעה של חשיפת אתנול במשקולות סכר וגור. א) עלייה במשקל סכר כפונקציה של יום ההריון המוערך (n = 8-12). המשקל ביום הריונית משוער 5 תואם את המשקל שנמדד ביום הראשון של חשיפה. עלייה במשקל ב ') גור כפונקציה של גיל (n = 7-9). עבור שני הלוחות, הברים השגיאה קטנים יותר מהסימנים. <target = "_blank" href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/51839/51839fig3highres.jpg"> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

מידות (אינץ') גובה רוחב
עליון 32 22
תחתית 32 22
קדמי 32 14
בחזרה 32 14
צד 1 21.5 14
צד 2 21.5 14
דלת 18 10

טבלת 1. ממדים של יריעות פוליקרבונט.

אוויר EtOH
7.50 ± 1.08, n = 6 7.33 ± 1.52, n = 6
ממוצע עובר משקל (גרם): ~ E18 1.04 ± 0.09, n = 6 0.82 ± 0.09, n = 6
ממוצע שלית משקל (גרם): ~ E18 0.12 ± 0.003, n = 6 0.14 ± 0.01, n = 6
מספר העוברים השקועים Re: ~ E18 0.50 ± 0.34, n = 6 0.50 ± 0.50, n = 6
מספר גורים / ההמלטה 7.11 ± 0.67, n = 9 6.89 ± 0.42, n = 9
מספר גורים / המלטה המתה 0.11 ± 0.11, n = 9 0.66 ± 0.24, n = 9

טבלה 2. טרום ואפיון שלאחר לידה של הפרדיגמה חשיפת אדי עכבר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

כאן, אנו מתארים בפירוט את השיטות לבניית תאי משאיפת אדים. החומרים והכלים הנדרשים כדי לבנות התאים זמינים ממספר הספקים המסחריים והצעדים לבניית התאים הם פשוטים יחסית. המערכת שאנו מתארים כאן אינה מכילה כל שסתומי סימון בקו כדי למנוע חזרה זרימה וערבוב. לא הצליחו למדוד כל אתנול לזיהוי באוויר רק תאים המצביעים על כך אין לנו כל ערבוב או זרימה לאחור של אתנול באוויר רק תאים. האוויר רק תאים צריכים להיבדק לאדי אתנול מעת לעת (יש לציין שתא האוויר תמיד צריך להיבדק לפני קאמרי אתנול כדי למנוע זיהוי של אדי אתנול שיורית נוכח נשימה ו / או המזרק). באופן אידיאלי, צריכים להיות ממוקמים בחדרי חדרים ייעודיים במתקן הטיפול בבעלי החיים שבו כלובי עכבר יכולים להיות שוכנו ברציפות למשך הדוארהפרדיגמה xposure, ומבטלת את הצורך להעביר את העכברים, ובכך להפחית את הלחץ. חדר סטנדרטי עם שקע אוורור הוא כל מה שצריך לפרדיגמה זו. עם זאת, אם בחדר משותף עם חוקרים אחרים, ייתכן שיהיה צורך למקם את התאים בחדר עם תאים מופרדים כדי לצמצם את החשיפה של בעלי חיים אחרים לריח אתנול. כל תא יכול להכיל עד 6 כלובי עכבר רגילים, מה שהופך את שיטה פחות עבודה אינטנסיבית של חשיפה מאשר, למשל, gavage intragastric.

ניתן לשנות את הפרדיגמה החשיפה בקלות על פי הדרישה של ניסוי ספציפי. יכולים להיות חשופים לבעלי חיים אתנול במהלך שווה הערך לכל הטרימסטר של הריון אנושי. יצוין, כי שווה הערך התפתחותי המכרסמים להתפתחות אנושית יכול להשתנות בהתאם למה שמוח האזור נחשב ומה התפתחותיים תהליך אחד הוא מעוניין (נוירוגנזה, אינטגרציה הסינפטי, וכו '). במחקר זה, שהגדרנו שלושה תחומים שלישייםמסטר השווה ערך כתקופת פרץ גדילת המוח. חוקרים מעודדים להתייעץ אתר תרגום זמן 49. על סמך התוצאות שמוצגים באיור 2, אנו ממליצים כי חשיפה להתחיל ברמה נמוכה יותר של אדי אתנול (למשל, ~ 3 גר '/ ד"ל) וגדל בהדרגה, כדי לפצות על הפיתוח של סובלנות מטבולים. במהלך יישומו של הנוהל, חוקרים צריכים לעקוב מקרוב BECs בימי הריון שונים כדי לקבוע אם כתוצאה מרמות יציבה יותר בסכרים בהריון. מעכב של דהידרוגנז אלכוהול כבר בשימוש כדי למנוע ההתפתחות של סובלנות בעכברים שנחשפו לאתנול בתאי אדי 50. עם זאת, זה לא מומלץ, כי סוכן זה לשמש בעכברים בהריון, כי מחקרים מראים יש לו השפעות טרטוגניות פוטנציאלי שעלולות לסבך את הפרשנות של תוצאות 51,52. יתר על כן, זריקות מכל סוג שתגרומנה ללחץ נוסף לסכר בהריון,פוטנציאל בלבול הניסוי 53.

בניגוד לסכרים בהריון, חשיפת תא אדים בתקופת הילוד לא לגרום להתפתחות של סובלנות מטבולים. BECs לא היו שונה בין P2 ו-P7 12 עכברים. BECs השיא היתה דומה לאלה שהתגלו בסכרים בG13-14 וגבוהות במקצת מאלה שאותרו בG18-20. עם זאת, BECs לקחה יותר זמן לחזור לנקודת התחלה בגורים. זה עדיין לא נקבע אם חשיפת אתנול בתאי אדים במהלך תקופת ההריון משנה את הקיבולת של צאצאי ילוד כדי לעכל אתנול. עם זאת, בהתבסס על הספרות, הוא יהיה צפוי לגורים שנחשפו במהלך הריון כדי אתנול להציג ירידה או קיבולת ללא שינוי כדי לעכל אתנול 54,55 מעט. במחקרים שלנו אנחנו לא להבחין בהבדל במשקל גור ממוצע, והנתונים שלנו מראים כי עד סוף ההריון, BECs האימהית בקושי להתעלות מעל השיכרון המשפטי ללא מורדואר מ 2 שעות. נתונים אלה מראים כי האמהות אינן מושפעות באופן משמעותי מהחשיפה לאלכוהול במהלך התקופה שלאחר הלידה. יחד עם זאת, זה צריך להיחקר עוד יותר במיוחד אם בעלי חיים שנחשפו לרמות גבוהות יותר אתנול.

יש פרדיגמה חשיפה זו יש מספר מגבלות. נקבות עכברים שלא נחשפו בחמשת הימים הראשונים של הריון, כי הם התרבו עם הזכרים בתקופה זו. מרווח רבייה קצר יותר יכול להיות ניסיון (למשל, 2-3 ימים), אבל זה עלול לגרום לירידה במספר של נשים שנכנסו להריון. לחלופין, ניתן גידלו בעלי חיים לזמן קצר יותר ונקבות בדק עבור תקעי הזדווגות. מגבלה נוספת היא שכל העכברים בתא נתון יכולים להיות חשופים רק לריכוז אחד של אדי אתנול. יתר על כן, כמה היבטים של הפרדיגמה תא חשיפת אדי אתנול הם מלחיצים, כגון העובדה שסכרים הם שוכנו ביחידים לאורך רוב ההריון ונחשפיםלריח אתנול חזק. ייתכן גם שחשיפת אדי אתנול גורמת לכמה שינויים במערכת הנשימה של סכרים ו / או גורים. בנוסף, חשיפה לחולדות ילודים היא לא מודל מושלם של חשיפת אדם במהלך השליש השלישי (לדוגמא, יחידת השליה, העובר אינה קיים במודל זה). עם זאת, אנו טוענים כי את היתרונות של פרדיגמה זו עולים חולשות שלו, ושזה יכול להיות מודל שימושי כדי לאפיין את המנגנונים מעורבים בפתופיזיולוגיה של FASDs.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

יש המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

נתמך על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענקי R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 וK12-GM088021. המחברים מודים סמנתה ל Blomquist לקבלת סיוע טכני ובני זוג. קווין קולדוול ודונלד פרטרידג' להערכה ביקורתי של כתב היד ווידאו.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Polycarbonate 1/4" clear 48" x 24" McMaster-Carr 8574K23 10
Foam Rubber bulb seal 3/8"w x 7/32"h McMaster-Carr 93085K67 10 ft
Weld-on #16 McMaster-Carr 7515A11 3
Piano hinge 12" long McMaster-Carr 1658A11 2 x 1 ft
Hold-down toggle clamps standard McMaster-Carr 5126A26 8
PEX tubing 1/2" McMaster-Carr 51275K88 10 ft
Barbed Tee tube fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5463K608 1
Barbed plug fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5462K79 1
Barbed Elbow tube fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5463K596 1
3/8" Through-Wall Adapters, Tube to Threaded Pipe McMaster-Carr 5463K851 1
Phillips Machine screw 4-40 McMaster-Carr 91772A112 1
Machine screw hex nut 4-40 McMaster-Carr 90480A005 1
Panel-mount flowmeter 2-20 McMaster-Carr 41945K76 3
FLASK, FILTER 1,000 ml 6/PACK VWR 89001-800 2
Precision Seal Septa VWR 89084-490 1
VWR Black Rubber Stopper #8 1-hole VWR 59581-367 1
TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50' VWR 89068-556 1
TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50' VWR 89068-502 1
Aerator Stone P2120 VWR 32573-007 1
3/8" T-connectors Pk of 20 VWR 46600-060 1
VWR Disconnectors tapered Pk of 10 VWR 46600-110 1
3/8 Hose Barb valved in-line coupling Colder Products Company HFCD17612 1
Air pump medium capacity LMI Manufacturers DB60L 1
Nexelate Wire Shelving 36"W X 24"D X 63"H Global industrial T9A990135 1
Stem Casters Set of (4) 5" Polyurethane Wheel Global industrial T9A500591 1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). World Health Organization Who. Alcohol use and binge drinking among women of childbearing age--United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 61 (28), 534-538 (2012).
  2. Ethen, M. K., et al. Alcohol consumption by women before and during pregnancy. Matern Child Health J. 13, 274-285 (2009).
  3. May, P. A., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15, 176-192 (2009).
  4. Wendell, A. D. Overview and epidemiology of substance abuse in pregnancy. Clin Obstet Gynecol. 56, 91-96 (2013).
  5. Cudd, T. A. Animal model systems for the study of alcohol teratology. Exp Biol Med (Maywood. 230, 389-393 (2005).
  6. Valenzuela, C. F., Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper, L. Does moderate drinking harm the fetal brain? Insights from animal models). Trends Neurosci. 35, 284-292 (2012).
  7. Sliwowska, J. H., Song, H. J., Bodnar, T., Weinberg, J. Prenatal Alcohol Exposure Results in Long-Term Serotonin Neuron Deficits in Female Rats: Modulatory Role of Ovarian Steroids. Alcohol Clin. Exp. Res. 10, (2013).
  8. Sutherland, R. J., McDonald, R. J., Savage, D. D. Prenatal exposure to moderate levels of ethanol can have long-lasting effects on hippocampal synaptic plasticity in adult offspring. Hippocampus. 7, 232-238 (1997).
  9. Naassila, M., Daoust, M. Effect of prenatal and postnatal ethanol exposure on the developmental profile of mRNAs encoding NMDA receptor subunits in rat hippocampus. J Neurochem. 80, 850-860 (2002).
  10. Servais, L., et al. Purkinje cell dysfunction and alteration of long-term synaptic plasticity in fetal alcohol syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 9858-9863 (2007).
  11. Brady, M. L., Allan, A. M., Caldwell, K. K. A limited access mouse model of prenatal alcohol exposure that produces long-lasting deficits in hippocampal-dependent learning and memory. Alcohol Clin Exp Res. 36, 457-466 (2012).
  12. Bake, S., Tingling, J. D., Miranda, R. C. Ethanol exposure during pregnancy persistently attenuates cranially directed blood flow in the developing fetus: evidence from ultrasound imaging in a murine second trimester equivalent model. Alcohol Clin Exp Res. 36, 748-758 (2012).
  13. Cuzon, V. C., Yeh, P. W., Yanagawa, Y., Obata, K., Yeh, H. H. Ethanol consumption during early pregnancy alters the disposition of tangentially migrating GABAergic interneurons in the fetal cortex. J Neurosci. 28, 1854-1864 (2008).
  14. Godin, E. A., et al. Magnetic resonance microscopy defines ethanol-induced brain abnormalities in prenatal mice: effects of acute insult on gestational day 7. Alcohol Clin Exp Res. 34, 98-111 (2010).
  15. Gil-Mohapel, J., Boehme, F., Kainer, L., Christie, B. R. Hippocampal cell loss and neurogenesis after fetal alcohol exposure: insights from different rodent models. Brain Res Rev. 64, 283-303 (2010).
  16. Diaz, J., Samson, H. H. Impaired brain growth in neonatal rats exposed to ethanol. Science. 208, 751-753 (1980).
  17. Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Neonatal ethanol exposure impairs eyeblink conditioning in weanling rats. Alcohol Clin Exp Res. 22, 270-275 (1998).
  18. West, J. R., Hamre, K. M., Pierce, D. R. Delay in brain growth induced by alcohol in artificially reared rat pups. Alcohol. 1, 213-222 (1984).
  19. Tran, T. D., Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Binge-like ethanol exposure during the early postnatal period impairs eyeblink conditioning at short and long CS-US intervals in rats. Dev Psychobiol. 49, 589-605 (2007).
  20. Ikonomidou, C., et al. Ethanol-induced apoptotic neurodegeneration and fetal alcohol syndrome. Science. 287, 1056-1060 (2000).
  21. Heaton, M. B., Paiva, M., Madorsky, I., Siler-Marsiglio, K., Shaw, G. Effect of bax deletion on ethanol sensitivity in the neonatal rat cerebellum. J Neurobiol. 66, 95-101 (2006).
  22. Ryabinin, A. E., Cole, M., Bloom, F. E., Wilson, M. C. Exposure of neonatal rats to alcohol by vapor inhalation demonstrates specificity of microcephaly and Purkinje cell loss but not astrogliosis. Alcohol Clin Exp Res. 19, 784-791 (1995).
  23. Kraemer, G. W., Moore, C. F., Newman, T. K., Barr, C. S., Schneider, M. L. Moderate level fetal alcohol exposure and serotonin transporter gene promoter polymorphism affect neonatal temperament and limbic-hypothalamic-pituitary-adrenal axis regulation in monkeys. Biol Psychiatry. 63, 317-324 (2008).
  24. Schneider, M. L., et al. Moderate-level prenatal alcohol exposure alters striatal dopamine system function in rhesus monkeys. Alcohol Clin Exp Res. 29, 1685-1697 (2005).
  25. Ramadoss, J., Hogan, H. A., Given, J. C., West, J. R., Cudd, T. A. Binge alcohol exposure during all three trimesters alters bone strength and growth in fetal sheep. Alcohol. 38, 185-192 (2006).
  26. Ramadoss, J., Lunde, E. R., Pina, K. B., Chen, W. J., Cudd, T. A. All three trimester binge alcohol exposure causes fetal cerebellar purkinje cell loss in the presence of maternal hypercapnea, acidemia, and normoxemia: ovine model. Alcohol Clin Exp Res. 31, 1252-1258 (2007).
  27. Ramadoss, J., Tress, U., Chen, W. J., Cudd, T. A. Maternal adrenocorticotropin, cortisol, and thyroid hormone responses to all three-trimester equivalent repeated binge alcohol exposure: ovine model. Alcohol. 42, 199-205 (2008).
  28. Byrnes, M. L., Reynolds, J. N., Brien, J. F. Brain growth spurt-prenatal ethanol exposure and the guinea pig hippocampal glutamate signaling system. Neurotoxicol Teratol. 25, 303-310 (2003).
  29. Catlin, M. C., Abdollah, S., Brien, J. F. Dose-dependent effects of prenatal ethanol exposure in the guinea pig. Alcohol. 10, 109-115 (1993).
  30. Phillips, D. E., Krueger, S. K. Effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on glial cell development in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 10, 197-206 (1992).
  31. Phillips, D. E., Krueger, S. K., Rydquist, J. E. S. hort- Short- and long-term effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on the development of myelin and axons in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 9, 631-647 (1991).
  32. Shetty, A. K., Burrows, R. C., Wall, K. A., Phillips, D. E. Combined pre- and postnatal ethanol exposure alters the development of Bergmann glia in rat cerebellum. Int J Dev Neurosci. 12, 641-649 (1994).
  33. Maier, S. E., Chen, W. J., Miller, J. A., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability regional differences in alcohol-induced microencephaly as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during rat brain development. Alcohol Clin Exp Res. 21, 1418-1428 (1997).
  34. Maier, S. E., Miller, J. A., Blackwell, J. M., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: regional differences in cell loss as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during brain development. Alcohol Clin Exp Res. 23, 726-734 (1999).
  35. Livy, D. J., Miller, E. K., Maier, S. E., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: effects of binge-like alcohol exposure on the developing rat hippocampus. Neurotoxicol Teratol. 25, 447-458 (2003).
  36. Kelly, S. J., Lawrence, C. R. Intragastric intubation of alcohol during the perinatal period. Methods Mol Biol. 447, 101-110 (2008).
  37. Perkins, A., Lehmann, C., Lawrence, R. C., Kelly, S. J. Alcohol exposure during development: Impact on the epigenome. Int J Dev Neurosci. 31, 391-397 (2013).
  38. Tran, T. D., Kelly, S. J. Alterations in hippocampal and hypothalamic monoaminergic neurotransmitter systems after alcohol exposure during all three trimester equivalents in adult rats. J Neural Transm. 106, 773-786 (1999).
  39. Gil-Mohapel, J., et al. Altered adult hippocampal neuronal maturation in a rat model of fetal alcohol syndrome. Brain Res. 1384, 29-41 (2011).
  40. Popovic, M., Caballero-Bleda, M., Guerri, C. Adult rat's offspring of alcoholic mothers are impaired on spatial learning and object recognition in the Can test. Behav Brain Res. 174, 101-111 (2006).
  41. Guerri, C., Sanchis, R. Alcohol and acetaldehyde in rat's milk following ethanol administration. Life Sci. 38, 1543-1556 (1986).
  42. Matta, S. G., Elberger, A. J. Combined exposure to nicotine and ethanol throughout full gestation results in enhanced acquisition of nicotine self-administration in young adult rat offspring. Psychopharmacology (Berl. 193, 199-213 (2007).
  43. Olney, J. W. Fetal alcohol syndrome at the cellular level). Addict Biol. 9, 137-149 (2004).
  44. Sulik, K. K. Genesis of alcohol-induced craniofacial dysmorphism. Exp Biol Med (Maywood). 230, 366-375 (2005).
  45. Lewis, S. M., et al. Modifying a displacement pump for oral gavage dosing of solution and suspension preparations to adult and neonatal mice). Lab Anim (NY). 39, 149-154 (2010).
  46. Cebolla, A. M., et al. Effects of maternal alcohol consumption during breastfeeding on motor and cerebellar Purkinje cells behavior in mice. Neurosci Lett. 455, 4-7 (2009).
  47. Becker, H. C., Hale, R. L. Repeated episodes of ethanol withdrawal potentiate the severity of subsequent withdrawal seizures: an animal model of alcohol withdrawal "kindling". Alcohol Clin. Exp. Res. 17, 94-98 (1993).
  48. Galindo, R., Valenzuela, C. F. Immature hippocampal neuronal networks do not develop tolerance to the excitatory actions of ethanol. Alcohol. 40, 111-118 (2006).
  49. Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species. J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).
  50. Becker, H. C., Diaz-Granados, J. L., Weathersby, R. T. Repeated ethanol withdrawal experience increases the severity and duration of subsequent withdrawal seizures in mice. Alcohol. 14, 319-326 (1997).
  51. Ukita, K., Fukui, Y., Shiota, K. Effects of prenatal alcohol exposure in mice: influence of an ADH inhibitor and a chronic inhalation study. Reprod Toxicol. 7, 273-281 (1993).
  52. Varma, P. K., Persaud, T. V. Influence of pyrazole, an inhibitor of alcohol dehydrogenase on the prenatal toxicity of ethanol in the rat. Res Commun Chem Pathol Pharmacol. 26, 65-73 (1979).
  53. Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. Laboratory routines cause animal stress. Contemp Top Lab Anim Sci. 43, 42-51 (2004).
  54. Arias, C., Molina, J. C., Mlewski, E. C., Pautassi, R. M., Spear, N. Acute sensitivity and acute tolerance to ethanol in preweanling rats with or without prenatal experience with the drug. Pharmacol Biochem Behav. 89, 608-622 (2008).
  55. Nizhnikov, M. E., Molina, J. C., Varlinskaya, E. I., Spear, N. E. Prenatal ethanol exposure increases ethanol reinforcement in neonatal rats. Alcohol Clin Exp Res. 30, 34-45 (2006).

Tags

רפואה גיליון 89 עוברי אתנול חשיפה פרדיגמה אדים פיתוח אלכוהוליזם טרטוגניות בעלי חיים עכבר מודל
בניית לשכות החמקן לחשיפת עכברים לאלכוהול במהלך המקביל של כל שלושת הטרימסטר של התפתחות אדם
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper,… More

Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper, L. A., Valenzuela, C. F. Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development. J. Vis. Exp. (89), e51839, doi:10.3791/51839 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter