Summary
内皮功能障碍与许多疾病有关，并预测在人类心血管不良事件。血流介导的舒张功能（FMD）是评价血管内皮功能的超声无创方法。方法的选择和操作者的经验可能会影响结果。在人类研究中的系统方法口蹄疫是在这里讨论。
Abstract
血管内皮细胞是细胞覆盖血管的内部，并提供其结构和功能的作用的单层。内皮细胞充当一个屏障，阻止白细胞粘附和聚集，以及控制渗透性血浆成分。在功能上，影响内皮血管张力。
内皮功能障碍是一种调节血管张力，thombroresistance，细胞增殖和有丝分裂的化学物质之间的不平衡。它是在动脉粥样硬化的第一步骤，并且有冠状动脉疾病，外周动脉疾病，心脏衰竭，高血压和高脂血症相关联。
血管内皮功能障碍的第一个示范涉及直接输注乙酰胆碱和定量冠状动脉造影。乙酰胆碱结合的毒蕈碱受体在血管内皮细胞表面，从而增加细胞内钙而增加镍TRIC氧化氮（NO）的产生。在受试者一个完整的内皮细胞，血管扩张，观察，同时患有血管内皮损伤经历了矛盾的血管收缩。
存在着一种非侵入性的体内测定方法内皮功能使用高分辨率的B模式超声外周动脉。外周动脉的内皮功能密切相关，冠状动脉功能。这种技术在测量肢体缺血的时间反应性充血肱动脉直径百分比变化。
这种技术被称为内皮依赖性，血流介导的血管舒张（FMD）具有在临床研究的设置值。然而，一些生理和技术问题可能影响结果和相应的准则，该技术的准确度已经公布。尽管指引，口蹄疫仍然严重依赖于操作者，并提出一个陡峭的学习曲线。本文介绍了一种标准化的方法，上臂测量口蹄疫的肱动脉，并提供建议，以降低运营商内部的变化。
Introduction
人类血管内皮细胞提供了在体内的结构和功能的作用。在组织切片中，内皮细胞出现小的，包括薄层细胞1-2微米厚坐在上面一层平滑肌细胞（媒体）和一个厚厚的一层结缔组织（外膜）的。作为一个整体，内皮细胞提供了一个广泛区域的血液和血管的平滑肌组织之间的信息交流。据估计，700 平方米和横截面面积的质量为1000-1500克体重70公斤的人，相当于在群众肝脏1。一个健康的内皮细胞可用于机械化学信号传导，保持血管的内环境稳定。内皮功能障碍是这些介质失衡，血管疾病的第一步，本前动脉粥样硬化的组织学证据。一种非侵入性的， 在活体内的方法用于定量人体的血管舒张作用动脉存在。该方法中，内皮依赖性，血流介导的血管舒张（FMD）是广泛用于临床试验。
内皮细胞充当血管的结构组分和生产的胞外基质组分，例如葡糖胺聚糖和纤连蛋白2。在血流和急性损伤动脉长期变化可能导致结构的改变。在功能上，血管内皮细胞参与血管张力，炎性过程，抗血栓形成和抗凝血的调节。内皮细胞的影响血管收缩，通过内皮素而血管舒张是由一氧化氮（NO），前列环素和内皮超极化因子（EDHF）3-6介导的。
内皮功能障碍是任何这些介质和动脉粥样硬化的第一步减值。这并不奇怪，因为疾病的一种机制，它与一些重要的临床相关条件，例如冠状动脉疾病，高血压和糖尿病7-11。重要的是，内皮功能障碍可以在个人未经诊断的心血管疾病进行观察，并预测未来的心血管事件7,12,13的。内皮功能障碍的一项措施，与Framingham评分相结合，可以提供单独或者14以上的措施更多的预后信息。
血管内皮功能障碍的措施可能涉及直接输注药物剂。 Intercoronary输注乙酰胆碱，例如，结合的定量血管造影术证明的受试者具有完整内皮的血管舒张。然而，随着血管内皮损伤的经验似是而非的血管收缩个人。15外周动脉，输液用计，应变容积描记药理剂流量的测量是可能的16。
代理Š直接影响内皮和引发一种化学信号，被称为内皮依赖性的血管扩张剂。乙酰胆碱，例如，作用于毒蕈碱性受体在内皮细胞上，从而增加细胞内钙浓度，活化一氧化氮合酶和血管舒张。影响血管舒张无内皮细胞的参与剂被称为内皮依赖性药物。硝酸甘油，例如，激活可溶性鸟苷酸环化酶和环鸟苷-3'， - 5'-monophasphate（cGMP）的其中通过蛋白激酶介导的血管扩张，在血管壁调节细胞内钙浓度的17。
有一种非侵入性的， 在体内方法用于定量由Celermajer和同事引入血管内皮功能障碍称为“血流介导的内皮依赖性血管舒张”（FMD）18。简单地说，改变动脉血流开放的剪切力敏感的离子赞NELS在内皮。该信号通过第二信使级联tranduced并激活内皮型一氧化氮合酶（eNOS），生成NO。穿过细胞膜此物种扩散到邻近的平滑肌细胞（SMC）。内的SMC，信号转导，从而降低细胞内钙离子浓度，影响血管舒张19。动脉管腔的直径增大，从而增加血流量用的哈根 - Poiseullie方程一致。口蹄疫的效果，可以取消与NO合成酶抑制剂，如单甲基精氨酸（L-NMMA）20的施用。
Celermajer 等人的创新工作已经允许使用高分辨率B型超声后面缺血的反应性充血过程中，以评估在动脉直径的变化。在该技术中，人受试者休息仰卧和肱动脉的直径，测量在纵向平面上。 A型血，pressu再压脉袋是用来产生缺血肢体。以下的血压袖带动脉的直径，再次测量的释放。在剪应力的急剧变化是刺激NO介导的血管扩张。一个简单的公式说明了相对于基线直径（ 式1）的直径的改变。这个方程，充血和基线直径的参数的全面讨论，可以在协议中找到和结果部分。
在多个研究中，百分之口蹄疫已发现预测患者的心血管事件既定的心血管疾病21-24。肱动脉FMD百分比和冠状动脉之间的相关性口蹄疫，建立了安德森等人 ，魔trating外围测量和更多的临床相关的缺血性变化之间的联系到心脏25。口蹄疫并不表明容器的最大血管舒张。为了评估此，口蹄疫可以跟随内皮依赖性，硝酸甘油介导的同一容器中的血管舒张。
有百分之影响口蹄疫的测量技术问题。自从引进该技术，一些研究显示，内学科，跨运营商的变化26度很高。它已经表明，生理因素如吸烟，抗高血压药物，一天中的时间，和空腹状态影响百分之口蹄疫。同样，技术的选择，如相对于测量和闭塞的持续时间的现场箍的位置已被证明影响测量27,28。指南已经出版，描述目前的共识，并允许技术与标准化实验室19,29。
尽管在技术不断发展的共识，血流介导的血管扩张仍严重依赖于操作者用长的学习曲线。 Corretti，例如，推荐一个经验丰富的调查员的监督下，超声医师完成100次独立运作之前。为了保持足够的专业知识水平，每年推荐的技师完成100次。对于研究人员用小样本的人口和有限的资源，学习曲线提供了一个进入门槛。本文将说明在上臂肱动脉血流介导的血管舒张的方法，并提供技术建议，以减少操作符内部的可变性。
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Protocol
下面的过程，发达国家作为一个研究者发起的研究的一部分，审议并通过了由美国加州大学旧金山分校（UCSF）人类研究委员会（CHR）和所有参与者给予知情同意书。
1，设备
- 使用心电图门控图像采集系统，记录并分析口蹄疫。飞利浦HD11超声连接到台式机。
- 从与PC上的一个特殊的画面撷取卡超连接的视频信号。
- 中继来自超声波的音频信号，放大所述信号的心电图门控模块。放大后的信号进行到PC，让图像捕捉软件，在心动周期一致点识别和记录图像。产生从R-波在EKG的急剧偏转的信号。
- 使用5-12 MHz线阵探头在肱动脉的深度优化解决方案。
2。除准备
- 确保学员快速，避免锻炼在考试前8小时，以及避免咖啡因或尼古丁至少四四肢。确保参与者以免影响血管张力和心输出量四个半衰期药物。
注意：饮食，药物和一天中的时间可能会影响结果。 - 进行考试在安静，黑暗的房间在21℃。当进行纵向研究，举办重复考试在一天的同一时间。
3，基线测量
- 让拍摄对象仰卧在考试表格。连接3导心电图在标准位置。解决任何骨科问题，以确保受试者将舒适和考试过程中从运动避免。
- 让受考试开始前休息10分钟。后5分钟的休息，测量被检者的血压用振荡，非侵入性血压监视器。
- 应用5厘米在任一近侧或远侧位置urniquet袖口以证明上臂技术。
- 延长受试者的手臂横向和心脏的水平维持。
- 根据运营商的偏好时，使用表和枕头来约束主体的手臂。
- 将操作者的手臂在抵抗疲劳，并且提供了在手腕支撑的位置处。尽量减少延长的手腕，并保持前臂在解剖中立位置。
- 进行肱动脉的横截面的扫描，开始在二头肌的插入和跟进近侧。使用彩色血流成像，以验证在肱动脉和定位，可作为标志性建筑的侧支血管。
- 当一个合适的位置被找到时，旋转探头90°，以使邻近边缘上的超声波屏幕的左侧显示。维持使用大量的实践和细腻的触感动脉的位置。 Verify中的取向通过推动组织附近的远端边缘。标记被检者的皮肤沿所述探针的远端边缘。
- 对准探针与深或聚焦设置“远”壁肱动脉，以改善图像的横向分辨率。不同与更高的频率提高轴向分辨率的轴向分辨率探头设置。
- 调整探头的角度，以优化的两个近和远壁对比度分辨率。小的变化的角度可导致改进的对比度。估计用一个简单的量角器的角度，如果串行考试是关于这一主题进行。
- 为了确保质量的测量，确保容器是水平的，并与纵向轴线对准。使压力的微小变化（倾侧探头的一端），以帮助使动脉。总体而言，保压光，以帮助防止操作者的疲劳。
- 当进行了优化，保证了“Pignoli的双行”中可以看到íÑ墙壁，对应内膜中层厚度。使用增益调整，以减少回波在血管腔。允许至少2cm内膜中介厚度（IMT）两侧为精确直径测量。
4，基线测量
- 记录使用二维多普勒模式下，基准速度。放置样品门在管腔的中央，保持60°的声波作用角。收集60秒的数据。
5，闭塞相
- 袖带充气至50毫米汞柱的受试者的收缩压以上。使用5厘米止血带袖带会高估收缩压。使用二维多普勒模式来验证闭塞。
- 使用定时器来跟踪遮挡的时间尽可能多的血压计会慢慢失去压力超过5分钟。使用二维多普勒模式，以验证完全闭塞。
- 闭塞4时30分后，将二维多普勒门稍浅的纵动脉的轴。调整垂直刻度占2-3倍的速度比基准高。
- 调整在图像捕获软件的设置记录的3:10。
- 开始记录袖带释放之前10秒捕捉到袖带释放，测量时间时，在数据分析期间达到峰值直径的一个重要参数的时间。
6充血
- 松开袖带。由于动脉袖带可释放后表面移动，进行小改动探头的位置，一边听着扩增的声音，以帮助弥补的转变。重新定位的多普勒取样门和声波作用的角度，如果动脉的变化。
- 30秒的速度记录后，切换超声B模式。
- 由于它是常见的探头考试过程中近侧滑动，使用容器的标志或标记的受试者的皮肤来验证探头位置。考试这个阶段是获得准确的关键结果。
- 调整探针的位置或角度，以优化IMT两壁上进行小的变化可以显着改善图象。记录的直径为3分钟。
- 如果重复测量计划，利用拍摄对象的皮肤标记来记录距离肘窝。让拍摄对象弯曲的手臂90°，标志着折痕。从该行早前提出的行措施。
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Representative Results
血流介导的血管舒张的关键变量示于表1中 。
| 变量 | 说明 |
| 平均血流速度（厘米/秒） | 血的平均动脉速度在管腔的中间50％的期间，从多普勒频谱波形，正比于血流量和反比于截面积推定一心跳周期（参见图1）。 |
| 直径（mm） | 如从沿着容器轴线的纵向视图测量的内膜中膜的距离（参见图2）。这是测量基线，并在反应性充血。 |
| 流量（毫升/分钟） | 在循环中的大部分流体流，来自数学从平均流速和直径（见公式2）。 |
| 剪应力（达因/厘米2） | 由循环血液在血管内膜表面，成比例的速度成反比的直径，从平均流速和直径来自所施加的摩擦力（见公式3）。 |
| 口蹄疫％ | 遮挡响应于充血后的动脉直径的变化，在基线直径（见公式1）。 |
表1血流介导的血管舒张的关键变量。
这口蹄疫协议将提供足够的数据来衡量％血流介导的血管舒张，流和剪切应力。记录60秒的基准数据，将有助于帐户的正常生理变化的心脏速率和呼吸。在基线和充血阶段分析软件将计算口径。一些软件包可以在测量平均流速（m /秒）在心动周期的一个点通过时的速度频谱波形，根据积分面积除以在时间平均的速度到达。管径及血流速度将允许研究者计算出下列变量。
公式1。
％FMD被定义为： 
。
公式2。
在毫升意味着流量/分被定义为： 
。
公式3。
剪切应力定义为： 
其中，T w是剪切应力在达因/厘米2，Q为平均体积流量，μ，血液的粘度，被假定为0.035泊。
这个例子人群几乎完全是男性，平均年龄为68±9年白人，74％。整体而言，与会者进行了一些心血管危险因素包括：高血压（84％），高脂血症（78％），吸烟史（86％），肥胖（平均BMI为30±6）。总体而言，参与者的16％进行冠状动脉疾病（CAD）和40％糖尿病的诊断的诊断。
高血压的患病率是PAD组，而非为加元（32％ 对 0％，P <0.001）和糖尿病（56％ 对非PAD组（96％ 对 72％，P = 0.02）高24％，P = 0.02）。在PAD组有较大的腹部肥胖，但不显着（1.04 与 1.00，P = 0.065腰臀比）的水平。同样地，PAD组有较差的低密度脂蛋白（LDL）比非PAD组（68 与 101毫克/分升，P <0.001），但更好的总胆固醇（142 与 174毫克/分升，p值= 0.002）。两组均用适当的药物管理，展示广泛使用Ø˚F他汀类药物和抗高血压药物。在PAD组表现出更高的水平阿司匹林（84％ 对 48％，P = 0.007）和β-受体阻滞剂（60％ 对 28％，P = 0.023），用自己的合并症是一致的。
表3显示了从两组例子血流介导的血管舒张的内容基线特征是相似的每个组示出类似的直径，速度和流量。 PAD的基团，但是，说明更糟血流介导的血管舒张比非PAD组（6.8％ 对 9.1％，p值= 0.021）。结果两组在预期范围内的与心血管危险因素（<10％）的个体。几项研究的回顾显示6-10％的百分比口蹄疫健康成人和使用下臂闭塞31-36加元的人口0-5％A％口蹄疫。 10％以上的值，观察在使用上臂技术37年轻的，健康的成年人。的％FMD每个组都有一个广泛的标准偏差，presen婷契机，进一步细分的基础上口蹄疫％的人群。
图1-4展示口蹄疫期间的各个阶段收集的示例图像， 图1显示，在基线获得的多普勒频谱波形。箭头表示一个心动周期形成的基础，用于计算平均动脉速度的程度。该协议要求均在60秒收集的多个周期的结果。在这个例子中的队列中，平均基线速度为所有参与者为17±6厘米/秒。 PAD和无垫队列之间无显著差异可见。
图2示出了基线血管直径的一例的B模式图像。箭头表示内膜内膜距离，依据管腔直径，测定的位置。在这个例子中的队列中，平均基线直径为所有参与者为4.20±0.57毫米。之间的无显著差异PAD和无PAD组被看见。
图3示出了袖带释放的反应性充血相之后立即得到一个例子多普勒频谱波形。黄色箭头指示袖口释放的时刻。在最初5秒压脉袋后得到的波形来计算反应性充血速度。对于所有参与者，平均反应性充血速度为74±26厘米/秒。无显著差异PAD和无PAD组之间可见。
图4示出了在反应性充血相例如B模式图像获得的袖带释放后60秒。像的基准直径，内中膜内膜的距离来计算反应性充血直径。对于所有参与者，平均反应性充血直径为4.53±0.59毫米。 PAD和无PAD亚群之间的差异进行了接触，但并没有达到，显着性（P = 0.08）。基线和R之间的差eactive充血直径形成的％FMD可变分子的基础。
| 特点 | 所有患者 （N = 50） | PAD （N = 25） | 无垫 （N = 25） | P-值 |
| 年龄，平均（SD），Y | 68±9 | 68±6 | 68±11 | 0.89 |
| 男性（％） | 98 | 100 | 96 | 0.31 |
| 高加索人（％） | 74 | 84 | 64 | 0.37 |
| 体重指数 | 30±6 | 29±7 | 30±4 | 0.73 |
| 腰臀比（％） | 1.02±0.06 | 1.04±0.06 | 1.00±0.05 | 0.07 |
| 收缩期血压（毫米汞柱） | 13677; 19 | 139±22 | 134±15 | 0.33 |
| 舒张压（毫米汞柱） | 79±10 | 78±11 | 80±10 | 0.47 |
| ABI指数 | 0.93±0.27 | 0.72±0.16 | 1.14±0.16 | <0.001 |
| 合并症 | ||||
| 高血压（％） | 84 | 96 | 72 | 0.02 |
| 高脂血症（％） | 78 | 88 | 68 | 0.09 |
| 冠心病HX（％） | 16 | 32 | 0 | 0.00 |
| 糖尿病（％） | 40 | 56 | 24 | 0.02 |
| 药物 | ||||
| 阿司匹林（％） | 66 | 84 | 48 | 0.01 |
| ACE抑制剂（％） | 48 | 52 | 44 | 0.57 |
| β受体阻滞剂（％） | 44 | 60 | 28 | 0.02 |
| 他汀类药物（％） | 66 | 68 | 64 | 0.77 |
| 胰岛素（％） | 30 | 14 | 6 | 0.39 |
| PAD的风险因素 | ||||
| 吸烟史（％） | 86 | 92 | 79 | 0.24 |
| 总胆固醇（毫克/分升） | 158±38 | 142±31 | 174±37 | 0.00 |
| 低密度脂蛋白（毫克/分升） | 85±32 | 68±27 | 101±29 | <0.001 |
| 高密度脂蛋白（毫克/分升） | 44±11 | 43±11 | 46±10 | 0.30 |
| 甘油三酯（毫克/分升） | 153±119 | 165±125 | 141±115 | 0.49 |
| 糖化血红蛋白（％） | 6.3±1.5 | 6.5±1.5 | 6.1±1.6 | 0.38 |
| 血清肌酐（毫克/分升） | 1.11±0.84 | 1.28±1.15 | 0.95±0.22 | 0.17 |
| 表皮生长因子受体（毫升/分钟） | 80±21 | 75±21 | 86±21 | 0.10 |
| 白蛋白（克/分升） | 4.0±0.3 | 4.0±0.3 | 4.1±0.3 | 0.43 |
表2样本人群的基线特征，以下数据是ARandomly选中的参与者子集的ω-PAD试验（NCT01310270）和队列的截手臂。所有与会者都提到了旧金山退伍军人医疗中心的门诊血管外科门诊外周动脉疾病（PAD）的评估病人。 PAD的诊断依据的踝肱指数<0.9目前的指导方针。患者不可动脉（ABI> 1.4）被排除在外。列入“无填充”组在此基础上ABI> 0.9，并没有PAD，CAD和心血管疾病。
| 特点 | 所有患者 （N = 50） | PAD （N = 25） | 无垫 （N = 25） | P-值 |
| 基线动脉直径（SD）毫米 | 4.20±0.57 | 4.11±0.60 | 4.29±0.53 | 0.27 |
| 基准速度（SD），厘米/秒 | 17±6 | 18±6 | 16±5 | 0.13 |
| 基线量（SD），毫升/分钟 | 145±68 | 151±84 | 138±47 | 0.51 |
| 基线剪应力（SD），达因/厘米2 | 12±4 | 13±5 | 11±3 | 0.07 |
| 反应性充血直径（SD）毫米 | 4.53±0.59 | 4.38±0.60 | 4.68±0.55 | 0.08 |
| 反应性充血速度（SD），厘米/秒 | 74±26 | 70±25 | 78±27 | 0.32 |
| 反应性充血流量（SD），毫升/分钟 | 735±340 | 658±327 | 812±342 | 0.11 |
| 反应性充血剪应力（SD），达因/厘米2 | 46±18 | 46±19 | 47±18 | 0.79 |
| 肱动脉FMD（％） | 8.0±3.7 | 6.8±3.5 | 9.1±3.6 | 0.02 |
表3。血流介导的血管舒张分析，作为在协议中所述，基准直径和速度是60秒的数据的平均值。在60秒后闭塞，得到反应性充血直径。反应性充血速度是第5秒的袖带释放之后获得的多普勒频谱波形的时间平均的速度。
肱动脉的图1基准速度的测量。多普勒频谱的波形是由一个图象分析系统捕获。单心动周期箭头之间所示。图像分析系统可以计算出平均动脉流速。 请点击这里查看该图的放大版本。
图2基准直径测量的双行Pignoli的，对应于内膜和边界上的肱动脉（黄色箭头）的两个浅表和深部边缘可见。该图像显示正确的水平和垂直对齐。 请点击这里查看该图的放大版本。
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袖口公布后立即如图3充血的速度测量。多普勒频谱波形是可见的。袖口释放的瞬间可以将图像（黄色箭头）左侧的急剧增加，速度可以理解的。的图像的上半部分示出了样品门的前袖释放的定位。袖口释放后，动脉可能会转移到更浅的位置。配售门闭塞动脉的轴上面有助于弥补袖口发布后动脉垂直移动， 请点击这里查看该图的放大版本。
图4充血直径测量。的纵向视图袖口发布后的索引段中是可见的。直径的变化小，并且可以通过图像分析软件进行定量。上浅表墙上的IMT边界是沿着索引段（黄色箭头）清晰可见。方向轴的宽度代表增加从基线直径的10％。 请点击这里查看该图的放大版本。
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Discussion
内皮功能障碍是影响血管张力和在动脉粥样硬化的发展中的早期步骤中的化学介质的不平衡。测定动脉的反应性的方法，以评估这些化学途径的状态。评估反应的直接和间接方法的不同血管床的存在，从直接输注的内皮激动剂在冠状循环中的食指38的非侵入性，脉冲波形的分析。
肱动脉FMD是一个已建立的技术用于通过高频超声波间接地评价血管内皮功能。有优势，在临床试验中使用口蹄疫。首先，该技术是非侵入性的，易于理解，从而简化了障碍招聘。此外，使用侵入性技术，如在无症状患者的冠状动脉血管造影术引起的伦理问题。接下来，口蹄疫要求受preparatio的最低金额N进行比较，以侵入性技术，整个考试可以在很短的时间量内完成。只要闭塞持续时间保持在指导方针和科目适当筛选，提出了口蹄疫很少关注安全问题。相对容易的口蹄疫的研究使得在纵向研究串行检查是可行的，但其在检测治疗效果的使用是有争议的。同样地，根据目前的临床指南，口蹄疫是不适合用于表征个体的风险是心血管事件或临床决策39。分析软件的开发可以快速分析，致盲，并重复分析。最后，技术是公认的并且许多研究已经使用的技术中公布的，允许结果40的比较。
有，但是，面临的挑战，以在审判中成功使用口蹄疫。首先，该技术提供了一个很长的学习曲线。目前的指南建议一个新技术完成100下一个有经验的操作人员独立工作之前扫描。接着，设备的费用可能是过高的小型实验室。主题制剂是重要的因素，如吸烟，药物，餐后状态，高血糖，时间-日期，环境温度，以及最近的运动能够影响反应19,29的幅度。这需要仔细指令参与者和严格遵守研究方案。在老年人，改变血管扩张可能会降低口蹄疫19的预测值。
在协议中，如上所述，测定％FMD，在60秒后闭塞。研究表明峰值口蹄疫可能这个窗口41,42外发生。该协议允许的峰值3分钟后通缩口蹄疫连续录制拍摄。应当注意这需要丰富的经验，并导致更长的分析时间。上臂邻同样，选择cclusion是有争议的。在一项研究，比较了不同闭塞位置具有类似的剪切应力刺激，更大的血管扩张被认为与上臂技术，表明该扩张的一些成分不被编号为20介导的。在一项荟萃分析的使用口蹄疫研究，机器人等报道广泛％口蹄疫与大多数研究（81.2％）用于上臂技术43。在调整了性别，年龄，冠心病的存在下，与糖尿病后，将下臂的技术被发现降低％FMD（平均差2.47％CI 0.55-4.39）。而缺血性触发（上与下臂）的位置被发现是重要的，测量的位置（肘窝与上述肘窝）没有显著有关意味着口蹄疫。在信号强度的差异可能与局部缺血床的大小。目前的指导方针支持使用或者上臂和下臂技术，这laboratorieŠ采用跨试验一致的方法。
有一些在口蹄疫的关键步骤。首先，主体制剂是至关重要的，因为许多因素，例如药物，饮食，尼古丁和锻炼可能影响参与者的响应。交感神经兴奋降低口蹄疫，因此采取适当步骤，以尽量减少分心或不适的参加者44。接着，选择肱动脉的适当的索引段将提高测试精度。不同的内膜线是用于测量封闭后，直径的变化很重要。直径的变化小，典型地5-10％5mm的动脉或50-100微米，和动脉的直径的纵向变化。操作员的疲劳是常见的超声探头可考到容器具有不同直径的部分中滑动。有视觉上不同的地标，如侧支血管或内侧钙化区域，验证号是很重要的E索引段。利用立体定向钳举行探头或者干脆标志着拍摄对象的皮肤可以帮助维持索引段。同样，步骤，以防止无意中将他们的手臂，如肩膀和前臂限制枕头的问题，建议。
如果保持探针通过手，必须小心，以防止操作者的疲劳或反复性使用损伤。我们建议安排参加者与任何设备，使操作者的前臂是在解剖中立位置。尽量减少包装在泡棉胶带保持探头或使用立柱夹紧电缆，减少了存放探头在静态姿势10分钟所需的力所需要的力。
在充血测量速度和直径的关键技术难题。该协议要求测量30秒的多普勒频谱波形记录的速度，然后切换到B模式成像直径measuremeNTS。袖口发布后5-10秒之间将出现峰值速度和容器可在这段时间内移动位置。如果探针是关闭的纵向轴线或声波作用角> 60°时，波形的幅值将是不准确的。略定位所述样品门在容器的纵向轴线以上将有助于帐户的任何偏移。当来自多普勒到B模式的切换，它保持对索引段的位置是很重要的。这是可能的动脉发生了转变，而且只有很短的时间窗（25秒），以优化充血直径测量的图像。通常，只有小的变化来探测压力，纵向取向和角度是必要的，以产生索引段的质量的图像。如果容器完全丧失，快速横向扫描多达动脉将使识别索引段，内膜最回声部分，和看问题的正确角度。然后，旋转探头的纵向视图返回到索引段的适当视图。
简单的步骤，可以提高口蹄疫研究的质量和一致性。加州大学旧金山分校综合血管生理学和实验治疗学（VIPERx）实验室使用的质量控制协议进行口蹄疫研究的时候。首先，参与者给出的标准说明和预访的电话，以确保他们避免药物和行为影响的研究。接下来，一组标准的流片所使用的研究人员，以确保考试进行同样的方式为每个参与者和重要的步骤是不容忽视的。最后，后考试的六点分级制度是用来评价每个研究。重要的因素，例如相对于探针，解剖标志的存在，并且内膜线的程度的容器的取向被包括，以确保满足这些关键步骤。
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Disclosures
作者什么都没有透露。
Acknowledgments
从血管集成生理学和实验治疗学（VIPERx）实验室，这项工作是由外科加州旧金山大学的系和北加州理工学院的研究与教育基金的支持。说明该项目是由国家研究资源中心支持奖号码KL2RR024130。内容完全是作者的责任，并不一定代表美国国家研究资源中心和美国国立卫生研究院的官方意见。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Philips HD 11XE ultrasound | Philips Healthcare | ||
| 5-12 MHz linear array transducer | Philips Healthcare | L12-5 | |
| Ultrasound gel | Parker Laboratories | ||
| Vascular Research Tools v.5.0 | Medical Imaging Applications, LLC | ||
| MIA Gating module | Medical Imaging Applications, LLC | ||
| Windows XP | Microsoft, Inc | ||
| Hand-held aneroid manometer | Welch Allyn | DS66 |
References
- Gerlach, E., Nees, S., Becker, B. F. The vascular endothelium: a survey of some newly evolving biochemical and physiological features. Basic Res Cardiol. 80, 459-474 (1985).
- Sato, T., Arai, K., Ishiharajima, S., Asano, G. Role of glycosaminoglycan and fibronectin in endothelial cell growth. Experimental and molecular pathology. 47, 202-210 (1987).
- Yanagisawa, M., et al. A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells. Nature. 332, 411-415 (1988).
- Ignarro, L. J., Buga, G. M., Wood, K. S., Byrns, R. E., Chaudhuri, G. Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide. Proceedings of the National Academy of Sciences. 84, 9265-9269 (1987).
- Moncada, S., Higgs, E. A., Vane, J. R. Human arterial and venous tissues generate prostacyclin (prostaglandin x), a potent inhibitor of platelet aggregation. The Lancet. 309, 18-21 (1977).
- Ozkor, M. A., et al. Endothelium-derived hyperpolarizing factor determines resting and stimulated forearm vasodilator tone in health and in disease. Circulation. 123, 2244-2253 (2011).
- Suwaidi, J. A., et al. Long-Term Follow-Up of Patients With Mild Coronary Artery Disease and Endothelial Dysfunction. Circulation. 101, 948-954 (2000).
- Neunteufl, T., et al. Systemic endothelial dysfunction is related to the extent and severity of coronary artery disease. Atherosclerosis. 129, 111-118 (1997).
- Taddei, S., et al. Hypertension Causes Premature Aging of Endothelial Function in Humans. Hypertension. 29, 736-743 (1997).
- Perticone, F., et al. Prognostic Significance of Endothelial Dysfunction in Hypertensive Patients. Circulation. 104, 191-196 (2001).
- Williams, S. B., Cusco, J. A., Roddy, M. -A., Johnstone, M. T., Creager, M. A. Impaired nitric oxide-mediated vasodilation in patients with non-insulin-dependent diabetes mellitus. Journal of the American College of Cardiology. 27, 567-574 (1996).
- Schindler, T. H., et al. Prognostic value of abnormal vasoreactivity of epicardial coronary arteries to sympathetic stimulation in patients with normal coronary angiograms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23, 495-501 (2003).
- Halcox, J. P., et al. Prognostic value of coronary vascular endothelial dysfunction. Circulation. 106, 653-658 (2002).
- Yeboah, J., et al. Predictive value of brachial flow-mediated dilation for incident cardiovascular events in a population-based study the multi-ethnic study of atherosclerosis. Circulation. 120, 502-509 (2009).
- Ludmer, P. L., et al. Paradoxical vasoconstriction induced by acetylcholine in atherosclerotic coronary arteries. New England Journal of Medicine. 315, 1046-1051 (1986).
- Higashi, Y., et al. Effect of the angiotensin-converting enzyme inhibitor imidapril on reactive hyperemia in patients with essential hypertension: relationship between treatment periods and resistance artery endothelial function. Journal of the American College of Cardiology. 37, 863-870 (2001).
- Linke, A., Erbs, S., Hambrecht, R. Exercise and the coronary circulation—alterations and adaptations in coronary artery disease. Progress in cardiovascular diseases. 48, 270-284 (2006).
- Celermajer, D. S., et al. Non-invasive detection of endothelial dysfunction in children and adults at risk of atherosclerosis. The Lancet. 340, 1111-1115 (1992).
- Thijssen, D. H. J., et al. Assessment of flow-mediated dilation in humans: a methodological and physiological guideline. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 300, (2011).
- Doshi, S. N., et al. Flow-mediated dilatation following wrist and upper arm occlusion in humans: the contribution of nitric oxide. Clinical science. 101, London, England. 629-635 (2001).
- Brevetti, G., Silvestro, A., Schiano, V., Chiariello, M. Endothelial Dysfunction and Cardiovascular Risk Prediction in Peripheral Arterial Disease: Additive Value of Flow-Mediated Dilation to Ankle-Brachial Pressure Index. Circulation. 108, 2093-2098 (2003).
- Neunteufl, T., et al. Late prognostic value of flow-mediated dilation in the brachial artery of patients with chest pain. The American Journal of Cardiology. 86, 207-210 (2000).
- Gokce, N., et al. Predictive value of noninvasivelydetermined endothelial dysfunction for long-term cardiovascular events inpatients with peripheral vascular disease. Journal of the American College of Cardiology. 41, 1769-1775 (2003).
- Gokce, N., et al. Risk Stratification for Postoperative Cardiovascular Events via Noninvasive Assessment of Endothelial Function: A Prospective Study. Circulation. 105, 1567-1572 (2002).
- Anderson, T. J., et al. Close relation of endothelial function in the human coronary and peripheral circulations. Journal of the American College of Cardiology. 26, 1235-1241 (1995).
- De Roos, N. M., Bots, M. L., Schouten, E. G., Katan, M. B. Within-subject variability of flow-mediated vasodilation of the brachial artery in healthy men and women: implications for experimental studies. Ultrasound in medicin., & biology. 29, 401-406 (2003).
- Berry, K. L., Skyrme-Jones, R. A., Meredith, I. T. Occlusion cuff position is an important determinant of the time course and magnitude of human brachial artery flow-mediated dilation. Clinical science. 99, London, England. 261-267 (2000).
- Betik, A. C., Luckham, V. B., Hughson, R. L. Flow-mediated dilation in human brachial artery after different circulatory occlusion conditions. American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 286, 442-448 (2004).
- Corretti, M. C., et al. Guidelines for the ultrasound assessment of endothelial-dependent flow-mediated vasodilation of the brachial arteryA report of the International Brachial Artery Reactivity Task Force. Journal of the American College of Cardiology. 39 (1001), 257-265 (2002).
- Grenon, S. M., et al. n-3 Polyunsaturated fatty acids supplementation in peripheral artery disease: the OMEGA-PAD trial. Vascular medicine. 18, London, England. 263-274 (2013).
- Moens, A. L., Goovaerts, I., Claeys, M. J., Vrints, C. J.
- Gnasso, A., et al. Association between wall shear stress and flow-mediated vasodilation in healthy men. Atherosclerosis. 156, 171-176 (2001).
- Verma, S., et al. Cross-sectional evaluation of brachial artery flow-mediated vasodilation and C-reactive protein in healthy individuals. European Heart Journal. 25, 1754-1760 (2004).
- Donald, A. E., et al. Methodological Approaches to Optimize Reproducibility and Power in Clinical Studies of Flow-Mediated Dilation. Journal of the American College of Cardiology. 51, 1959-1964 (2008).
- Witte, D. R., et al. Is the Association Between Flow-Mediated Dilation and Cardiovascular Risk Limited to Low-Risk Populations. Journal of the American College of Cardiology. 45, 1987-1993 (2005).
- Benjamin, E. J., et al. Clinical Correlates and Heritability of Flow-Mediated Dilation in the Community: The Framingham Heart Study. Circulation. 109, 613-619 (2004).
- Nosova, E. V., et al. Short-term Physical Inactivity Impairs Vascular Function. Journal of Surgical Research. 10, (2014).
- Axtell, A. L., Gomari, F. A., Cooke, J. P. Assessing Endothelial Vasodilator Function with the Endo-PAT. Journal of Visualized Experiments. , (2000).
- Greenland, P., et al. ACCF/AHA Guideline for Assessment of Cardiovascular Risk in Asymptomatic AdultsA Report of the American College of Cardiology Foundation/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines Developed in Collaboration With the American Society of Echocardiography, American Society of Nuclear Cardiology, Society of Atherosclerosis Imaging and Prevention, Society for Cardiovascular Angiography and Interventions, Society of Cardiovascular Computed Tomography, and Society for Cardiovascular Magnetic Resonance. Journal of the American College of Cardiology. 56, (2010).
- Inaba, Y., Chen, J. A., Bergmann, S. R. Prediction of future cardiovascular outcomes by flow-mediated vasodilatation of brachial artery: a meta-analysis. The international journal of cardiovascular imaging. 26, 631-640 (2010).
- Black, M. A., Cable, N. T., Thijssen, D. H. J., Green, D. J. Importance of Measuring the Time Course of Flow-Mediated Dilatation in Humans. Hypertension. 51, 203-210 (2008).
- Chironi, G., Craiem, D., Miranda-Lacet, J., Levenson, J., Simon, A. Impact of shear stimulus, risk factor burden and early atherosclerosis on the time-course of brachial artery flow-mediated vasodilation. Journal of Hypertension. 26, 508-515 (2008).
- Bots, M. L., Westerink, J., Rabelink, T. J., Pd Koning, E. J. Assessment of flow-mediated vasodilatation (FMD) of the brachial artery: effects of technical aspects of the FMD measurement on the FMD response. European Heart Journal. 26, 363-368 (2005).
- Hijmering, M. L., et al. Sympathetic activation markedly reduces endothelium-dependent, flow-mediated vasodilation. Journal of the American College of Cardiology. 39, 683-688 (2002).
