Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Immunodeficient चूहे में Oropharyngeal कैंडिडिआसिस के Th17 शोथ मॉडल

Published: February 18, 2015 doi: 10.3791/52538
Automatic Translation
1, 1, 1
1Department of Biological Sciences, School of Dental Medicine, Case Western Reserve University

Protocol

नोट: चूहों का उपयोग प्रयोगों संस्थागत पशु कल्याण समिति (IACUC) के दिशा निर्देशों के अनुसार में प्रदर्शन किया गया।

(संक्रमण के लिए तीन दिन पहले) मैं n इन विट्रो संवर्धित Th17 कोशिकाओं के साथ चूहे - / - 1. चीर-एक पुनर्गठन

  1. घुलनशील की उपस्थिति में अकेले यू-नीचे 96 अच्छी तरह प्लेटें, या 3 एक्स 104 सीडी 4 + CD25 + Foxp3 + Tregs के साथ सह संस्कृति उन में Th17 कोशिकाओं, संस्कृति सीडी 4 + CD44low CD62Lhigh CD25- भोले टी कोशिकाओं (एक्स 104 3) की स्थापना के लिए α-CD3 (1 माइक्रोग्राम प्रति / एमएल), α-CD28 (2 माइक्रोग्राम प्रति / एमएल) Th17 शर्तों के तहत एंटीबॉडी और एंटीजन पेश कोशिकाओं (आईएल -6 (25 एनजी / एमएल), TGF- β का उपयोग कर ध्रुवीकरण (2 एनजी / एमएल) , α-IFN-γ (2 माइक्रोग्राम प्रति / एमएल) और α -IL-4 (2 माइक्रोग्राम प्रति / एमएल)) तीन से चार दिन के लिए।
    नोट: भोले कोशिकाओं और टी regs छँटाई प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल का उपयोग कर हल किया गया (FACS) एकचुंबकीय सेल अलगाव प्रक्रियाओं डी और सुसंस्कृत पहले से 19-22 वर्णित है।
  2. 4 दिन पर, पिपेट का उपयोग Th17 कोशिकाओं resuspending के बाद, संस्कृतियों से उन्हें इकट्ठा, और बाँझ शर्तों के तहत उन्हें अपकेंद्रित्र।
    1. उनकी व्यवहार्यता और phenotyping के लिए जांच करने के लिए इन कोशिकाओं के एक छोटे से विभाज्य ले लो। Propidium आयोडाइड (200 एनजी / एमएल) जोड़ने और प्रवाह cytometry द्वारा तुरंत उनकी व्यवहार्यता का आकलन, RPMI माध्यम के 500 μl में उन्हें Resuspend। Restimulation के बाद आईएल 17A उत्पादन के आकलन के प्रवाह cytometry द्वारा phenotyping प्रदर्शन करना (धारा 6.3 देखें)।
  3. जब तक अन्यथा निर्दिष्ट अपकेंद्रित्र और सभी चरणों में 4 डिग्री सेल्सियस पर 6 मिनट के लिए 480 XG पर बाँझ पीबीएस में कोशिकाओं के मुख्य थोक धो लें।
  4. 6-8 सप्ताह पुरानी CD45.2 Rag1 में दत्तक हस्तांतरण के लिए इन कोशिकाओं का प्रयोग करें - / - immunodeficient चूहों।
    1. ठंड बाँझ पीबीएस का उपयोग करते हुए एक 10 x 7 कोशिकाओं / एमएल सेल घनत्व में कोशिकाओं Resuspend।
    2. Intrap द्वारा कोशिकाओं के 100 μl इंजेक्षनeritoneal इंजेक्शन, एक माउस 1 एक्स 10 6 कोशिकाओं को प्राप्त करता है, जैसे कि एक मिलीलीटर टुबरकुलीन सीरिंज पर 25 जी सुइयों का उपयोग। कुछ चूहों ही पीबीएस या Th17 कोशिकाओं प्राप्त करेंगे, और अन्य चूहों Treg कोशिकाओं के साथ सह सुसंस्कृत थे कि Th17 कोशिकाओं प्राप्त होगा।
      नोट: aseptically सभी चरणों को पूरा करें।

2. सी बढ़ रहा है संक्रमण के लिए श्वेत (एक दिन के संक्रमण से पूर्व)

  1. टीका से पहले, CAF2-1 सी के पांच कालोनियों फैलाने श्वेत प्रयोगशाला बाँझ पीबीएस निलंबन के 100 μl में तनाव, और बाँझ शोरबा को निलंबन जोड़ें।
  2. सी के 5 कालोनियों टीका लगाना खमीर नाइट्रोजन बेस के 50 मिलीलीटर में श्वेत (अमीनो एसिड के बिना YNB) / peptone / Dextrose शोरबा मध्यम और 130 rpm पर 15-18 घंटे के लिए 30 डिग्री सेल्सियस पर एक प्रकार के बरतन इनक्यूबेटर में सेते हैं।
  3. कि कवक के विकास के लिए एक संकेत है, के रूप में बादल के लिए शोरबा मॉनिटर।

3. कैंडिडाफसल काटने वाले और संक्रमण का (दिन) गिनती प्रक्रिया

  1. 15 मिलीलीटर ट्यूब में कैंडिडा शोरबा के 10 मिलीलीटर लीजिए। बड़ी मात्रा के लिए, 50 मिलीलीटर ट्यूब में कैंडिडा इकट्ठा।
  2. जब तक अन्यथा निर्दिष्ट सभी चरणों में आरटी पर 5 मिनट के लिए 1900 XG पर blastospores अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला को हटाने के बाद centrifugation द्वारा blastospores, गोली।
  3. एक से अधिक ट्यूब है, तो छर्रों को बाँझ पीबीएस जोड़ने, कई ट्यूब से कैंडिडा blastospores पूल और गिनती के लिए पीबीएस के 10 एमएल में उन्हें resuspend।
  4. 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब में blastospores के 20 μl लो 2X paraformaldehyde के 20 μl जोड़ने और 15-20 मिनट के लिए आरटी पर सेते हैं। खुर्दबीन के नीचे hemocytometer का उपयोग तय blastospores गणना।
    नोट: Paraformaldehyde कैंसर है। केवल धूआं हुड में undiluted समाधान खोलें।
  5. इस बीच, टी centrifuging से, कम से कम दो बार blastospores धोने दोहरानेपीबीएस में हेम, और blastospores pelleting। संक्रमण के लिए तैयार है, ABSL1 हुड में, आरटी पर 15 मिलीलीटर ट्यूब में छर्रों रखें।
  6. संक्रमण के लिए blastospores resuspending के लिए आरटी पर कुछ बाँझ पीबीएस छोड़ दें।
  7. गिनती के बाद, खमीर कोशिकाओं / एमएल के दो X10 से 8 खमीर blastospore सेल नंबर समायोजित करने के लिए blastospore गोली बाँझ पीबीएस जोड़ें। यह चूहों को संक्रमित करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा कि blastospore निलंबन है।
    नोट: aseptically सभी चरणों को पूरा करें।

4. चूहे संक्रमण (सेल हस्तांतरण के बाद 3-5 दिन)

नोट: पहले 19,23-25 ​​वर्णित के रूप में बुनियादी संक्रमण प्रक्रिया का प्रदर्शन किया जाता है।

  1. / - - पीबीएस या तीन दिन पहले कोशिकाओं प्राप्त चूहों कि चीर-एक वजन।
  2. अपने शरीर के वजन का उपयोग कर संवेदनाहारी एजेंटों की खुराक की गणना। Intr के द्वारा, 1 मिलीलीटर टुबरकुलीन सीरिंज पर 25 जी सुइयों का उपयोग, Ketamine / xylazine मिश्रण (16.1 मिलीग्राम / एमएल और 1.6 मिलीग्राम / एमएल) प्रशासन द्वारा चूहों anesthetizeaperitoneal इंजेक्शन।
    1. शरीर के वजन के प्रति 10 ग्राम 50 μl प्रशासन। (यानी, Ketamine की 0.8 मिलीग्राम और शरीर के वजन के xylazine / 10 ग्राम के 0.08 मिलीग्राम या ketamine का 80 मिलीग्राम और शरीर के वजन के प्रति किलोग्राम xylazine के 8 मिलीग्राम क्रमशः)। पैर के अंगूठे चुटकी प्रतिक्रिया के लिए संज्ञाहरण के बाद हर 15 मिनट पर गौर करें।
      नोट: यह खुराक संक्रमण की प्रक्रिया के लिए पर्याप्त है जो संज्ञाहरण के 60-90 मिनट, प्रेरित करेगा।
    2. बाहर सुखाने से कॉर्निया को रोकने के लिए चूहों की आंखों में नेत्र स्नेहक मरहम लागू करें। आँख स्नेहक बाहर शुष्क कर सकते हैं, नेत्र स्नेहन हर 45 मिनट दोहराएँ।
  3. संज्ञाहरण के दौरान चूहों के पुनर्जलीकरण मदद करने के लिए, forelimb के लिए subcutaneously वापस आसन्न पर खारा (0.9% सोडियम क्लोराइड) के 1 मिलीलीटर इंजेक्षन।
  4. एक नया, साफ पिंजरे प्राप्त करते हैं। एक बार संक्रमित नए पिंजरे में प्रत्येक माउस रखकर, एक समय में संक्रमण की प्रक्रिया एक माउस का पालन करें। पहले पीबीएस / नकली संक्रमण प्रदर्शन करना है, और फिर Candida संक्रमण gro के लिए आगे बढ़ेंups।
  5. Anesthetized माउस उठाओ और जीभ के आधार प्रकट करने के लिए चौड़े मुंह खोलें।
    1. Sublingually 90 मिनट के लिए मौखिक गुहा में, पीबीएस या blastospore निलंबन के 50 μl के साथ संतृप्त एक 3 मिमी व्यास कपास की गेंद रखें। कपास गेंदों कदम नहीं है यह सुनिश्चित करना कि, फेफड़ों की भीड़ को रोकने के लिए वापस चूहों हर 15 मिनट के सामने पलटें और।
  6. मौखिक गुहा में शाम या Candida टीका के 90 मिनट सुनिश्चित करने के लिए हर माउस के लिए एक टाइमर सेट करें।
  7. गर्मी दीपक (4 फुट दूर) के तहत एक पिंजरे, और गर्मी जेल पैड पर प्रत्येक माउस में उन्हें रखो।
  8. जीभ जीभ lacerating दांत से बचने के लिए, दांत से अंदर और दूर वापस ले लिया है कि सुनिश्चित करें।
  9. 90 मिनट के अंत में, माउस के मुंह से कपास की गेंद को हटा दें। 75 मिनट की तुलना में जल्दी संज्ञाहरण से ठीक हो सकता है कि किसी भी माउस के लिए देखें। ऐसे एक मामले में, केवल ketamine (40 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ उन्हें फिर से anesthetize।

5. पोस्ट procedurई (90 मिनट संज्ञाहरण के दौरान) की निगरानी

  1. 90 मिनट संज्ञाहरण के दौरान गर्मी जेल पैड का प्रयोग करें।
    1. शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए और घुटन को रोकने के लिए, चूहों नियमित मकई सिल माउस बिस्तर पर ठीक करने की अनुमति नहीं है।
  2. संज्ञाहरण से वसूली के बाद, पीठ पर दो स्थानों में बाँझ 0.9% सोडियम क्लोराइड subcutaneously के एक अतिरिक्त 1 मिलीलीटर प्रशासन।
  3. पांच पीबीएस (नकली) पिंजरे प्रति टीका चूहों के लिए ऊपर रखें। पिंजरे प्रति घर में केवल 1-2 संक्रमित चूहों।
  4. आदतों और समग्र स्वास्थ्य सौंदर्य, शरीर के वजन में परिवर्तन को नोट करने के लिए प्रक्रिया के बाद हर दिन के पहले अक्षर के साथ प्रक्रिया कार्ड भरें।

6. सूजन का आकलन

6.1) वजन में कमी

  1. संक्रमण की प्रक्रिया के लिए पहले दिन पर शुरू होने वाले संक्रमण के दौरान हर दिन चूहों वजन।
    नोट: आमतौर पर, Th17 कोशिकाओं के साथ और कोई टी regs के साथ इंजेक्शन immunodeficient चूहों 20 का शिकारकी वजह से -30% वजन घटाने कवक बोझ 19 की वृद्धि हुई और सूजन exacerbated।

जीभ का 6.2) प्रोटोकॉल स्कोरिंग

  1. ग्रीवा अव्यवस्था के बाद सीओ 2 asphyxiation द्वारा चूहों बलिदान।
  2. जबड़े खोलें और कैंची और संदंश के साथ जीभ बाहर काटना। जीभ पकड़ कुंद संदंश का प्रयोग करें, और कैंची मुंह से वापस करने के लिए बाहर तक पहुँचने का उपयोग कर जीभ के पीछे के अंत काटकर अलग कर देना करने के लिए।
  3. Immunocytochemical hematoxylin और eosin जीभ ऊतकों की (एच एंड ई) धुंधला के लिए, बर्फ के ठंडे पीबीएस के साथ जीभ ऊतकों कुल्ला। 15 मिलीलीटर ट्यूब में / एन 2-3 जीभ के लिए 10% formalin के 5 मिलीलीटर जोड़ें और हे उन्हें ठीक।
    1. अगले दिन, formalin को हटाने और हाइपर-निर्धारण को रोकने के लिए 70% इथेनॉल के 5 मिलीलीटर में ऊतकों विसर्जित कर दिया। सेक्शनिंग और आयल वर्गों के धुंधला, आयल एम्बेडिंग के साथ जारी रखने के लिए व्यावसायिक सेवा करने के लिए उन्हें बाहर भेजें।
      नोट: वाणिज्यिक ऊतक विज्ञान सेवा इन चरणों को पूरा करने के लिए प्रयोग किया जाता है।
    2. स्लाइड वापस वाणिज्यिक ऊतक विज्ञान सेवा से कर रहे हैं एक बार, ग्रेड एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के नीचे ऊतक वर्गों देख द्वारा सूजन।
      1. 0 कोई सूजन जा रहा है, और 5 सबसे गंभीर सूजन होने के साथ 0-5 से स्कोर। तालिका 1 का उपयोग सूजन स्कोर।

    Th17 कोशिकाओं द्वारा 6.3) cytokine उत्पादन

    नोट: अत्यधिक टीएनएफ-α उत्पादन अत्यधिक इम्युनोपैथोलोजी के लिए readouts में से एक है। चूहों adoptively Th17 कोशिकाओं के साथ स्थानांतरित कर रहे हैं जब केवल, यह Th17 कोशिकाओं में अत्यधिक टीएनएफ-α उत्पादन के साथ जुड़ा हुआ है कि इम्युनोपैथोलोजी कारण बनता है।

    1. पहले से वर्णित विधियों 19,26 का उपयोग कर तिल्ली, गर्भाशय ग्रीवा लिम्फ नोड्स, कक्षा lymphnodes, और जीभ से एक एकल कोशिका निलंबन, ले लीजिए।
    2. Brefeldin ए (10 माइक्रोग्राम प्रति / एमएल) के साथ चार घंटे के लिए phorbol myristate एसीटेट (पीएमए) (50 एनजी / एमएल) और ionomycin (500 एनजी / एमएल) के साथ कोशिकाओं Restimulate एल में जोड़ाAST 2 घंटा। पीबीएस के साथ कोशिकाओं को धो लें और निर्माता के निर्देशों के अनुसार एक वाणिज्यिक फिक्सेशन / permeabilization के किट का उपयोग कर उन्हें ठीक।
    3. पहले से 19 के रूप में वर्णित fluorochrome संयुग्मित विरोधी टीएनएफ-α, विरोधी आईएल 17A और आतंक विरोधी-γt एंटीबॉडी का उपयोग इंट्रा सेलुलर साइटोकाइन धुंधला प्रदर्शन करते हैं।
    4. / एमएल अंतिम एकाग्रता 3 माइक्रोग्राम प्रति - संक्षेप में, विरोधी टीएनएफ-α, विरोधी आईएल 17A और आतंक विरोधी-γt एंटीबॉडी, 2 पर प्रत्येक एंटीबॉडी के कॉकटेल के साथ 1x permeabilization के बफर में कोशिकाओं resuspend।
    5. आरटी पर 1 घंटे के लिए कोशिकाओं को सेते हैं।
    6. ऊष्मायन के बाद, 1X permeabilization के बफर के साथ कोशिकाओं को धो लें।
    7. प्रवाह cytometry विश्लेषण के लिए 0.5% गोजातीय सीरम albumin साथ पीबीएस के 500 μl में सेल गोली Resuspend।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

इस मॉडल में, चीर-1 में कैंडिडा -infected चूहों और असंक्रमित चूहों दोनों - / - immunodeficient पृष्ठभूमि adoptively संक्रमण के 3-5 दिन पहले Th17 कोशिकाओं के साथ स्थानांतरित कर दिया गया। 10-12 चूहों के एक कुल 2 प्रत्येक शाम संक्रमित समूहों में चूहों, और Candida संक्रमित समूहों में से प्रत्येक में 4-5 से, प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया गया। इंजेक्शन के Th17 कोशिकाओं क्रमशः (चित्रा 1 ए) Thy1.1 या CD45.1 धुंधला का उपयोग vivo में पता लगाया गया कि इतनी भोली कोशिकाओं, congenic Thy1.1 या CD45.1 चूहों से प्राप्त किए गए। सह-हस्तांतरित टी regs CD45.1 Th17 कोशिकाओं से अलग करने CD45.2 चूहों से प्राप्त किए गए। कुछ प्रयोगों के लिए, सीबी-17 Thy1.2 SCID प्राप्तकर्ता चूहों, Thy1.1 BALB / ग चूहों और congenic Thy1.2 चूहों से प्राप्त टी regs से प्राप्त Th17 दाता कोशिकाओं का इस्तेमाल किया गया था। केवल + कैंडिडा चूहों -infected, लेकिन नहीं असंक्रमित चूहों भर्ती और पुनर्गठन CD45.1 के विस्तार का प्रदर्शन (चित्रा 1 ए) में शुरू की है कि यह दर्शाता है। परिणाम प्रत्येक समूह में एक माउस से डेटा का प्रतिनिधित्व करते हैं।

केवल टी regs के साथ-हस्तांतरित सह रहे हैं कि चूहों में, Foxp3 + CD45.1 नकारात्मक सीडी 4 + कोशिकाओं CLN में पता चला रहे थे। इस इंजेक्शन के टी regs भी संक्रमण की साइट (चित्रा 1 बी) के लिए भर्ती किया गया है कि पता चलता है। परिणाम प्रत्येक समूह में एक माउस से डेटा का प्रतिनिधित्व करते हैं। / - - चीर-एक संक्रमित जबकि वजन और संक्रमण के चार दिन बाद बरामद खो, cortisone के immunosuppressed चूहों को ठीक नहीं किया था, लेकिन आगे खो वजन, के रूप में पहले 27 दिखाया। दोनों टी regs की उपस्थिति या अनुपस्थिति में Th17 कोशिकाओं प्राप्त किया है कि चूहों के समूह शुरू में वजन खो दिया है। हालांकि, वजन घटाने से बरामद टी regs प्राप्त किया और चूहों कि संक्रमण का संकल्प लिया। 2 मीटरबर्फ प्रत्येक कैंडिडा संक्रमित समूह में शाम संक्रमित समूह में प्रयोग किया जाता है, और 4 थे। Cortisone के समूह में तीन चूहों थे। Th17 कोशिकाओं प्राप्त चूहों कि केवल, (चित्रा 2) 19 उत्तरोत्तर वजन खो दिया है। उस समूह में चूहों की कुछ euthanized किया जा सकता था। ये परिणाम है कि समूह के सभी चूहों के वजन के औसत दिखाते हैं। न्यूट्रोफिल संक्रमण की प्रारंभिक मंजूरी के लिए आवश्यक हैं हालांकि, ऊतक में उनकी निरंतर उपस्थिति और भर्ती अनसुलझे सूजन का एक संकेत है। इसलिए न्युट्रोफिल घुसपैठ ऐसे दिन-7 संक्रमण के बाद के रूप में बाद में समय बिंदुओं पर एक न्युट्रोफिल मार्कर की अभिव्यक्ति, जीआर-1, निर्धारित करने से, संक्रमित जीभ में जांच की गई थी। Th17 कोशिकाओं प्राप्त है कि चूहे ही, टी regs (3B चित्रा) के साथ इंजेक्शन चूहों की तुलना में, जीआर -1 + न्यूट्रोफिल भी दिन-4 संक्रमण के बाद सहित उच्च भड़काऊ पैठ (चित्रा 3A) था। इन परिणामों से पता चला है कि presenc मेंटी regs के ई, चूहों और अधिक कुशलता से सूजन का संकल्प लिया है और संक्रमण से बरामद किया।

संक्रमण के बाद 7 दिन पर, तिल्ली (SPLN), CLN और जीभ ऊतकों अलग थे, और एकल कक्ष निलंबन फ्लो विश्लेषण के लिए किए गए थे। CLN Th17 कोशिकाओं ही प्राप्त किया है कि चूहों में CD45.1 Th17 कोशिकाओं (चित्रा 1) और बढ़ टीएनएफ-α उत्पादन (चित्रा -4 ए, 4 बी) में वृद्धि हुई पता चला। दूसरी ओर, टी प्राप्तकर्ताओं Th17 कोशिकाओं (चित्रा 1 व 4 ए, 4 बी) द्वारा Th17 कोशिकाओं की आवृत्ति और कम टीएनएफ-α उत्पादन में कमी आई दिखाया Reg। इन प्रयोगों में, दो चूहों से काटा और जमा एक माउस की CLN, और जीभ के ऊतकों से डेटा दिखाए जाते हैं। शुरुआती समय-बिंदुओं पर आईएल 17A उत्पादन टी में अधिक था हालांकि समूहों, Th17 कोशिकाओं द्वारा आईएल 17A उत्पादन (नहीं दिखाया डेटा) कम से कम था दोनों में बाद में समय बिंदुओं पर, प्राप्तकर्ताओं 19 Reg। समय-समय पर एसिड शिफ़ का धुंधलाटी regs प्राप्त किया है कि चूहों के रूप में अच्छी तरह से संक्रमण (चित्रा 5) के बाद दिन-5 और दिन-7 पर फंगस को मंजूरी दे दी है, जबकि जीभ की, केवल Th17 कोशिकाओं प्राप्त किया है कि चूहों में फंगल hyphae वृद्धि हुई दिखाया। इसके अलावा, जीभ सूजन के ऊतकविकृतिविज्ञानी स्कोरिंग भी केवल Th17 कोशिकाओं (चित्रा 6) प्राप्त किया है कि चूहों की तुलना में, टी regs प्राप्त किया है कि चूहों में कम सूजन के स्कोर से पता चला है। सूजन स्कोरिंग ऐसे papillae की उपस्थिति के रूप में जीभ histopathological मापदंडों के आधार पर किया गया था, (चल रही ऊतकों की मरम्मत का संकेत) गैर हल करने के संक्रमण का संकेत hyphae हमलावर सतही उपकला परत दिखाई खमीर या hyphae के intactness, बेसल परत का उमड़ना, और प्रतिरक्षा कोशिकाओं (न्यूट्रोफिल और Th17 कोशिकाओं) घुसपैठ की उपस्थिति। इन परिणामों से सीधे संक्रमण कम नहीं किया Th17 कोशिकाओं की है कि इंजेक्शन का प्रदर्शन किया है, लेकिन प्राथमिक सी की वजह से फंगल बोझ और इम्युनोपैथोलोजी वृद्धि हुई श्वेत infection, टी regs के सह-हस्तांतरण इम्युनोपैथोलोजी ameliorated जबकि।

चित्र 1
चित्रा 1. इंजेक्ट Th17 कोशिकाओं और टी reg कोशिकाओं सी के draining लिम्फ नोड्स (CLN) में भर्ती है और विस्तार श्वेत चूहों संक्रमित (ए) चीर-1 -।। / - CD45.2 चूहों Th17 कोशिकाओं या Th17 साथ पुनर्गठन किया गया + टी 5 दिनों के लिए Th17 शर्तों के तहत ध्रुवीकरण कर रहे थे कि कोशिकाओं Reg। Th17 कोशिकाओं CD45.2 चूहों से प्राप्त किया गया CD45.1 congenic चूहों और टी reg के कोशिकाओं से प्राप्त किया गया। कुछ चूहों किसी भी कोशिकाओं (शाम या Candida + पीबीएस) प्राप्त नहीं किया था। प्रत्येक समूह में प्राप्तकर्ता चूहों नकली नियंत्रण के साथ या सी से संक्रमित थे श्वेत। संक्रमण के बाद 5 दिन पर, CLN ISOLAT थेएड एक एकल कोशिका निलंबन बनाने के लिए और (FSC, एसएससी बिखराव के सभी ल्यूकोसाइट्स पर gated) फ्लो द्वारा Th17 व्यक्त कोशिकाओं इंजेक्ट CD45.1 ट्रैक करने के लिए (बी) चीर-1 -। / - चूहों Th17 कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन किया गया CD45.2 या Th17 + टी reg के 'ए' के रूप में कोशिकाओं और सी से संक्रमित। श्वेत। CLN एक एकल कोशिका निलंबन बनाने के लिए और CD45.1 और (सभी सीडी 4 कोशिकाओं पर gated) फ्लो द्वारा इंट्रासेल्युलर Foxp3 अभिव्यक्ति को मापने के लिए अलग थे। भूखंडों में टी reg के फाटकों नकारात्मक CD45.1, Foxp3 + सीडी 4 + कोशिकाओं को दिखाते हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. इंजेक्ट Th17 कोशिकाओं सी में वजन घटाने का कारण । टी regs की श्वेत संक्रमित चूहों और सह-प्रशासन वजन घटाने से वसूली में सुधार। SCID सीबी-17 चूहों चित्रा 1 ए में के रूप में Th17 कोशिकाओं या Th17 + टी reg के कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन किया गया। तीन दिन बाद, प्राप्तकर्ता चूहों सी से संक्रमित थे श्वेत। प्रत्येक समूह में कुछ चूहों दिखावा नियंत्रण से संक्रमित थे। Immunosuppressed चूहों cortisone के एसीटेट (Cort) इंजेक्शन प्राप्त किया। D-1 (एक दिन के संक्रमण से पूर्व) में दिखाया गया है करने के लिए सम्मान के साथ सी albicans के साथ संकेत दिया कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन और संक्रमित चूहों में प्रतिशत वजन में परिवर्तन,। डाटा असंक्रमित (शाम + पीबीएस) चूहों से वजन डेटा के लिए सामान्यीकृत रिश्तेदार हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

"Src =" / फ़ाइलें / ftp_upload / 52,538 / 52538fig3highres.jpg "/>
चित्रा 3. इंजेक्ट Th17 कोशिकाओं सी में जीभ इम्युनोपैथोलोजी कारण। Albicans के चूहों और टी regs के सह-प्रशासन सी की जीभ की इम्युनोपैथोलोजी। Histological मूल्यांकन कम कर देता है और संक्रमित श्वेत चूहों संक्रमित। चूहे संकेत कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन और चित्रा 1 ए में के रूप में संक्रमित थे। संक्रमण के बाद 5 दिन पर, जीभ। चूहों से अलग थे (ए) जीभ के बाण के समान वर्गों सूजन और प्रतिरक्षा कोशिकाओं की घुसपैठ (यदि) का आकलन करने के लिए एच एंड ई के साथ दाग रहे थे। (पा) और (ईपी) papillae और क्रमशः जीभ की उपकला परत निरूपित। At50X बढ़ाई देखी गयी स्लाइड्स की सूक्ष्म छवियों। (बी) विरोधी जीआर-एक एंटीबॉडी का उपयोग जीआर-एक न्युट्रोफिल मार्कर के लिए Histological immunostaining (Cloपूर्वोत्तर: यदि द्वारा चिह्नित संक्रमण के बाद 5 दिन पर जीभ वर्गों में 1A8-Ly6g) (ब्राउन)। दिखाए जाते हैं 100X बढ़ाई पर देखा स्लाइड के सूक्ष्म छवियों। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
टी regs चित्रा 4. सह-प्रशासन इंजेक्ट Th17 कोशिकाओं में TNF- α कम कर देता है। (ए) चीर-1 - / - CD45.2 चूहों Th17 कोशिकाओं या Th17 + टी reg के कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन और सी से संक्रमित थे श्वेत चित्रा 1 ए में के रूप में। संक्रमण के बाद 5 दिन पर, CLN और जीभ ऊतकों एक एकल कोशिका निलंबन बनाने के लिए अलग थे। इन कोशिकाओं को इंट्रासेल्युलर staini पहले पीएमए और ionomycin साथ restimulated गयाएनजी और फ्लो विश्लेषण करती है। Th17 कोशिकाओं के intracellular आतंक विरोधी-γt और TNF- α अभिव्यक्ति के प्रवाह cytometric समोच्च भूखंडों दिखाए जाते हैं। (बी) के 'ए' में के रूप में प्रदर्शन प्रयोगों से TNFαpositive कोशिकाओं के प्रतिशत के सांख्यिकीय प्रतिनिधित्व (सीडी 4 + कोशिकाओं पर gated)। डाटा असंक्रमित समूह में चार चूहों, और प्रत्येक संक्रमित समूह में 6 चूहों का प्रतिनिधित्व करते हैं, और दो ​​स्वतंत्र प्रयोगों से जमा कर रहे हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5. वृद्धि इम्युनोपैथोलोजी भी सी में वृद्धि कवक बोझ के साथ जुड़ा हुआ है। Albicans के चूहों संक्रमित। सीबी-17 SCID mic केई / Balb सी Th17 कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन, या Figure1A में के रूप में Th17 + टी reg के कोशिकाओं, और सी से संक्रमित थे गया श्वेत। संक्रमित चूहों से जीभ के histological मूल्यांकन दिखाया गया है। संक्रमण के बाद 7 दिन पर, जीभ काटा गया और फंगल घावों, सूजन और घुसपैठ कोशिकाओं की (यदि) का आकलन करने के लिए, और (सीए) कवक पता लगाने के लिए समय-समय पर एसिड शिफ़ की (पीए) के साथ दाग। स्लाइड at100X बढ़ाई देखा गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 6
चित्रा 6 टी regs सी में इम्युनोपैथोलोजी उन्नति। Albicans के संक्रमित चूहों। SCID चूहों BALB / ग Th17 कोशिकाओं के साथ पुनर्गठन, या Th17 + टी reg कोशिकाओं चित्रा 1 ए, के रूप में और सी से संक्रमित थे गया श्वेत। चित्रा 5 में के रूप में मूल्यांकन संक्रमित चूहों से जीभ का मतलब ऊतकीय स्कोर के सांख्यिकीय प्रतिनिधित्व। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

स्कोर लक्षण
0 0 - नहीं दिखाई खमीर या hyphae, जीभ की पृष्ठीय सतह पर बरकरार सतही उपकला, स्पष्ट रूप से उपस्थित और undamaged papillae (मई या ऊतक के भीतर मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं में घुसपैठ नहीं किया जा सकता है), बेसल परत, कोई घुसपैठ प्रतिरक्षा कोशिकाओं का कोई और अधिक मोटा होना।
1 1 - नहीं दिखाई खमीर या hyphaई, प्रचंड या थोड़ा क्षतिग्रस्त सतही उपकला, कम से कम नुकसान और निराला घुसपैठ प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ स्पष्ट रूप से उपस्थित papillae।
2 2 - papillae कम है, लेकिन नुकसान, बेसल परत का मोटा होना और लगातार घुसपैठ प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ मौजूद है।
3 3 - दिखाई खमीर और हमलावर hyphae, क्षतिग्रस्त papillae, क्षतिग्रस्त उपकला के कभार घावों, बेसल परत का मोटा होना और और प्रतिरक्षा कोशिकाओं में घुसपैठ के छोटे समूहों के सबूत के कभार समूहों।
4 4 - दिखाई खमीर और हमलावर hyphae, क्षतिग्रस्त papillae, क्षतिग्रस्त उपकला, प्रतिरक्षा कोशिकाओं के न्यूनतम घुसपैठ, बेसल परत और प्रतिरक्षा कोशिकाओं घुसपैठ की लगातार समूहों का उमड़ना की लगातार घावों के सबूत के लगातार समूहों।
5 5 - पृष्ठीय सतह भर hyphae पर हमला, बड़े पैमाने पर क्षतिग्रस्त उपकला, की बड़ी घुसपैठ के व्यापक सबूतकुछ प्रतिरक्षा कोशिकाओं, या नहीं detectable papillae, बेसल परत का उमड़ना और प्रतिरक्षा कोशिकाओं घुसपैठ की अत्यधिक लगातार और बड़े समूहों।

तालिका 1: Histological स्कोरिंग मान

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

इस मॉडल को मौखिक सी उत्प्रेरण पर आधारित है श्वेत संक्रमण निर्भर Th17 सूजन। क्योंकि टी regs के अभाव की वजह से, Th17 सेल प्रेरित सूजन अनर्गल है और खराब सुलझाया इम्युनोपैथोलोजी की ओर जाता है। इन विट्रो Th17 कोशिकाओं दत्तक हस्तांतरण के लिए इस्तेमाल किया गया के रूप में ध्रुवीकरण भोले सीडी 4 कोशिकाओं ली गई। - 40 सुसंस्कृत सीडी 4 + कोशिकाओं का 50% 3 दिन चारों ओर से detectable आईएल 17A अभिव्यक्ति (Th17 कोशिकाओं) दिखाने के लिए, और इसलिए चूहों में इंजेक्शन के लिए इस्तेमाल किया गया। मॉडल के प्रमुख लाभ Th17 कोशिकाओं कुशलतापूर्वक टी reg के इंजेक्शन के साथ ameliorated जा सकता है कि संक्रमण विशिष्ट इम्युनोपैथोलोजी का कारण है। इस प्रकार मॉडल एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में टी reg के इंजेक्शन के साथ immunomodulation रणनीतियों का परीक्षण करने के लिए नियोजित किया जा सकता है। शोथ आसानी से संक्रमित चूहों की Th17 कोशिकाओं द्वारा वजन घटाने, histopathological स्कोरिंग और समर्थक भड़काऊ साइटोकाइन उत्पादन के आधार पर मूल्यांकन किया है।

टी के बादवह Th17 कोशिकाओं के हस्तांतरण, वे जीभ, संक्रमण के प्राथमिक साइट सहित माध्यमिक ल्य्म्फोइड अंगों और विभिन्न ऊतकों के लिए चले गए दत्तक। संक्रमण के बाद, अन्य भड़काऊ कोशिकाओं को भी संक्रमण साफ करने के लिए जीभ के लिए भर्ती किया गया था। हालांकि, टी reg के मध्यस्थता immunomodulation बिना, Th17 कोशिकाओं खुद को संक्रमण को हल लेकिन बढ़ इम्युनोपैथोलोजी का कारण नहीं था। टी regs के सह-हस्तांतरण पूरी तरह से सूजन का संकल्प लिया। दिलचस्प है, टी regs के अभाव में exacerbated सूजन के साथ चूहे, भी फंगल बोझ वृद्धि हुई दिखाया। हमारी पिछली रिपोर्ट इस टी regs के साथ उन लोगों की तुलना में, चूहों में कम आईएल 17A उत्पादन की वजह से था कि पता चला है। हमारे वर्तमान प्रयोगों यह भी कारण संभवतः बढ़ रही उपकला कोशिका apoptosis के द्वारा, सूजन और बढ़ गया और कवक बोझ 28 की वृद्धि हुई है कि वृद्धि की टीएनएफ-α करने के लिए हो सकता है कि इस विचार का समर्थन है। म्यूकोसा में आईएल 17A की immunoprotective प्रभाव को ध्यान में रखते, हम हम कवक बोझ बढ़ाने के साथ निरीक्षण कि भड़काऊ विकृति Th17 कोशिकाओं या मेजबान प्रतिरोध की कमी से उत्पादन आईएल 17A के कारण नहीं है कि विश्वास करते हैं। यह कारण टीएनएफ-α और इंजेक्शन Th17 कोशिकाओं द्वारा उत्पादित संभवतः अन्य समर्थक भड़काऊ साइटोकिन्स के कारण होता है। / - - Th17 कोशिकाओं से रहित चूहों केवल न्यूनतम सूजन और संक्रमण के बाद के संकल्प और केवल Th17 कोशिकाओं गंभीर वजन घटाने के आगे घुटने टेक प्राप्त किया है कि उन (चित्रा 1) दिखाने के इस चीर कि अवलोकन द्वारा मान्य किया जा सकता है। / - - चूहों ज्यादा इम्युनोपैथोलोजी 27 बिना प्राथमिक OPC के संक्रमण स्पष्ट है कि इस डेटा के अनुरूप है, यह भी पहले कि चीर दिखाया गया है। / - - चूहों 17,29,30 इन शर्तों के तहत, आश्रित आईएल 17A सहज प्रतिरक्षा कोशिकाओं के उत्पादन पर क्षतिपूरक तंत्र चीर में संक्रमण साफ करने के लिए दिखाया गया है। आईएल 17A संक्रमण के प्रारंभिक चरणों में एक सुरक्षात्मक भूमिका निभा रहे हैं Th17 कोशिकाओं और न्युट्रोफिल भर्ती द्वारा उत्पादित हालांकि, साथ में ले ली, excटीएनएफ-α और Th17 कोशिकाओं द्वारा अन्य साइटोकिन्स, और न्यूट्रोफिल कारणों की निरंतर उपस्थिति का essive उत्पादन इम्युनोपैथोलोजी exacerbated। Th17 कोशिकाओं द्वारा उत्पादित टीएनएफ-α के अलावा समर्थक भड़काऊ साइटोकिन्स की भूमिकाओं इम्युनोपैथोलोजी के संदर्भ में जांच की जा रह है।

मॉडल के प्रमुख सीमा है कि यह मानव OPC के लिए physiologically प्रासंगिक है कि क्या सवाल है। Th17 कोशिकाओं Th17 कोशिकाओं की पुरानी सक्रियण ओपीसी में रोगजनक है कि क्या कई मौखिक रोगों में रोग मध्यस्थों, होना दिखाया गया है हालांकि जांच की जा रह है। सी की भूमिका जिसका अर्थ हाल के निष्कर्षों के साथ सूजन और कैंसर में श्वेत, मौखिक गुहा में Th17 इम्युनोपैथोलोजी जांच 31 के एक सक्रिय क्षेत्र है। इस प्रकार यहाँ वर्णित है कि मॉडल और अधिक ध्यान से Th17 कोशिकाओं के विशिष्ट भूमिकाओं अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और कैसे वे मौखिक प्रतिरक्षाविज्ञानी बीमारियों और मौखिक कैंसर में विस्तृत अंतर्दृष्टि दे, सहज प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ बातचीत।

तकनीक में महत्वपूर्ण कदम उचित भर्ती और adoptively हस्तांतरित Th17 कोशिकाओं का विस्तार है। इस स्थानांतरण से पहले इन विट्रो polarized Th17 कोशिकाओं की व्यवहार्यता और आईएल 17A उत्पादन पर बहुत निर्भर है। यह फ्लो द्वारा उनकी व्यवहार्यता और साइटोकाइन उत्पादन 19 का विश्लेषण करती है परीक्षण करने के लिए सबसे अच्छा है। Th17 सेल इंजेक्शन और चूहों के संक्रमण के समुचित निष्पादन संक्रमण निर्भर Th17 इम्युनोपैथोलोजी को बढ़ावा मिलेगा। इस मॉडल के रूप में अच्छी तरह से अन्य संक्रमणों के संदर्भ में Th17 इम्युनोपैथोलोजी और मौखिक सूजन को विफल करने के लिए रणनीति का परीक्षण करने के लिए लागू किया जा सकता है। इसके अलावा, इस मॉडल का उपयोग कर, एक माध्यमिक फिर से संक्रमण प्रदर्शन और पुराने संक्रमण के संदर्भ में इम्युनोपैथोलोजी exacerbating में Th17 कोशिकाओं की भूमिका का अध्ययन कर सकते हैं। इस मॉडल immunodeficient चूहों शामिल है, यह पुरानी कैंडिडा संक्रमण आवर्ती से ग्रस्त हैं, जो एड्स और पीआईडी ​​रोगियों में देखा मौखिक dysbiosis करने के लिए बहुत प्रासंगिक हो सकता है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
CAF-2 University of Pittsburgh (Sarah Gaffen) - Candida culture
U-bottom 96 well plates  Fisher 055588 Used for cell culture
a-CD3  eBiosciences 16-0031-85 Polarization of cells to Th17 conditions
a-CD28  eBiosciences 16-0281-85 Polarization of cells to Th17 conditions
m-IL-6 Bio Basic RC232 Polarization of cells to Th17 conditions
h-TGF-b  R&D 240-B Polarization of cells to Th17 conditions
a-IFN-g  eBiosciences 16-7311-85 Polarization of cells to Th17 conditions
a-IL-4  eBiosciences 16-7041-85 Polarization of cells to Th17 conditions
α-IL17A ef660 eBiosciences 50-7177-82 Used for cell culture - 1:50
α-TNFa-PE-Cy7 eBiosciences 25-7423-41 Used for cell culture - 1:100
α-RORgt PE  eBiosciences 12-6981-82 Used for cell culture - 1:50
YNB w/o amino acids)/Peptone/Dextrose broth medium  Bio Basic S507.SIZE Mediium for candida growth
Shaker incubator  New Brunswick Scientific Innova 4300 Incubation growth for candida
15 ml tubes Bio Basic BT888-SY Used for cell culture and candida growth
50 ml tubes Bio Basic CT 788-YS Used for cell culture and candida growth
Table top Centrifuge VWR International LLC 82017-654 For pelleting candida -900 g
Allegra Centrifuge Beckman Coulter 392302 Cell culture - 480 g
1.5 ml eppendorf tubes Bio Basic BT620-NS Preparing final concentration of candida
2x paraformaldehyde Electron Microscopy Sciences 15710 Fixing candida for count
Hemocytometer VWR International LLC 15170-172 Counting cells
PBS - Phosphate Buffered Saline Bio Basic PD8117 Preparation of buffers
Ketamine/xylazine  Case Western Reserve University - Animal Resource Center - Obtained from ARC approved protocol for anesthesia
Ophthalmic lubricant ointment  Allergan - Eye ointment for animals to prevent dryness
Saline (0.9% NaCl) G Biosciences 786-561 Administerd to animals to prevent dehydration
3-mm-diameter cotton wool ball  VWR International LLC BP7603 3 mm balls for candida infection
Heat gel pads Case Western Reserve University - Animal Resource Center - for maintaining the body temperaturre and fast recovery
Hematoxylin and Eosin staining Histoserv - MD - Tissue histology
10% formalin  Electron Microscopy Sciences JC1111/MC Tissue histology
70% ethanol  VWR International LLC 97064-490 Sterilization purpose
PMA - Phorbol 12-myristate 13-acetate Sigma-Aldrich P1585-1MG Restimulation of cells
Ionomycin Life Technologies 124222 1mg Restimulation of cells
Fixation permeabilization kit eBiosciences E16913-106 Fixing cells for Flow cytometry
Tuberculin syringes BD Biosciences 309659 Mice injection
25 G x 3/8 needles BD Biosciences 309626 Mice injection
Rag1 -/- mice Jackson laboratories Stock no: 002216 Recipient mice
CD45.1 congenic mice Jackson laboratories Stock no:002014  Donor Th17 cells
CB17-SCID mice Jackson laboratories Stock no: 001303 Recipient mice
Balb/c mice Jackson laboratories Stock no: 000651 Donor Th17 cells

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Allam, J. P., et al. IL-23-producing CD68(+) macrophage-like cells predominate within an IL-17-polarized infiltrate in chronic periodontitis lesions. Journal of Clinical Periodontology. 38 (10), 879-886 (2011).
  2. Loesche, W. J. Periodontal disease: link to cardiovascular disease. Compendium Of Continuing Education In Dentistry. 21 (6), 463-466 (2000).
  3. Sfyroeras, G. S., Roussas, N., Saleptsis, V. G., Argyriou, C., Giannoukas, A. D. Association between periodontal disease and stroke. Journal Of Vascular Surgery. 55 (4), 1178-1184 (2012).
  4. Huppler, A. R., Bishu, S., Gaffen, S. L. Mucocutaneous candidiasis: the IL-17 pathway and implications for targeted immunotherapy. Arthritis Research & Therapy. 14 (4), 217 (2012).
  5. Sitheeque, M. A., Samaranayake, L. P. Chronic hyperplastic candidosis/candidiasis (candidal leukoplakia). Critical Reviews In. Oral Biology And Medicine : An Official Publication Of The American Association Of Oral Biologists. 14 (4), 253-267 (2003).
  6. Canabarro, A., et al. Association of subgingival colonization of Candida albicans and other yeasts with severity of chronic periodontitis. Journal Of Periodontal Research. 48 (4), 428-432 (2013).
  7. Urzua, B., et al. Yeast diversity in the oral microbiota of subjects with periodontitis: Candida albicans and Candida dubliniensis colonize the periodontal pockets. Medical Mycology. 46 (8), 783-793 (2008).
  8. Ergun, S., et al. Oral status and Candida colonization in patients with Sjogren's Syndrome. Medicina Oral, Patologia Oral Y Cirugia Bucal. 15 (2), e310-e315 (2010).
  9. Hernandez, Y. L., Daniels, T. E. Oral candidiasis in Sjogren's syndrome: prevalence, clinical correlations, and treatment. Oral Surgery, Oral Medicine, And Oral Pathology. 68 (3), 324-329 (1989).
  10. Gall, F., et al. Candida spp. in oral cancer and oral precancerous lesions. The New Microbiologica. 36 (3), 283-288 (2013).
  11. Grady, J. F., Reade, P. C. Candida albicans as a promoter of oral mucosal neoplasia. Carcinogenesis. 13 (5), 783-786 (1992).
  12. Dwivedi, P. P., Mallya, S., Dongari-Bagtzoglou, A. A novel immunocompetent murine model for Candida albicans-promoted oral epithelial dysplasia. Medical Mycology. 47 (2), 157-167 (2009).
  13. Cheng, S. C., Joosten, L. A., Kullberg, B. J., Netea, M. G. Interplay between Candida albicans and the mammalian innate host defense. Infection and Immunity. 80 (4), 1304-1313 (2012).
  14. Marodi, L., Johnston, R. B. Invasive Candida species disease in infants and children: occurrence, risk factors, management, and innate host defense mechanisms. Current Opinion In Pediatrics. 19 (6), 693-697 (2007).
  15. Kumamoto, C. A. Inflammation and gastrointestinal Candida colonization. Current Opinion In. Microbiology. 14 (4), 386-391 (2011).
  16. Kraneveld, E. A., et al. The relation between oral Candida load and bacterial microbiome profiles in Dutch older adults. PloS One. 7 (8), e42770 (2012).
  17. Hernandez-Santos, N., et al. Th17 cells confer long-term adaptive immunity to oral mucosal Candida albicans infections. Mucosal Immunology. 6 (5), 900-910 (2013).
  18. Hasina, R., et al. ABT-510 is an effective chemopreventive agent in the mouse 4-nitroquinoline 1-oxide model of oral carcinogenesis. Cancer Prevention Research. 2 (4), 385-393 (2009).
  19. Pandiyan, P., et al. CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells promote Th17 cells in vitro and enhance host resistance in mouse Candida albicans Th17 cell infection model. Immunity. 34 (3), 422-434 (2011).
  20. Pandiyan, P., et al. The role of IL-15 in activating STAT5 and fine-tuning IL-17A production in CD4 T lymphocytes. J Immunol. 189 (9), 4237-4246 (2012).
  21. Pandiyan, P., Lenardo, M. J. The control of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cell survival. Biology Direct. 3 (6), (2008).
  22. Pandiyan, P., Zheng, L., Ishihara, S., Reed, J., Lenardo, M. J. CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells induce cytokine deprivation-mediated apoptosis of effector CD4(+) T cells. Nat Immunol. 8 (12), 1353-1362 (2007).
  23. Conti, H. R., Huppler, A. R., Whibley, N., Gaffen, S. L., et al. Animal models for candidiasis. Current Protocols In Immunology. Coligan, J. E., et al. 105, 11-19 (2014).
  24. Conti, H. R., et al. Th17 cells and IL-17 receptor signaling are essential for mucosal host defense against oral candidiasis. J Exp Med. 206 (2), 299-311 (2009).
  25. Kamai, Y., et al. New model of oropharyngeal candidiasis in mice. Antimicrobial Agents And Chemotherapy. 45 (11), 3195-3197 (2001).
  26. Pandiyan, P., Bhaskaran, N., Zhang, Y., Weinberg, A. Isolation of T cells from mouse oral tissues. Biological Procedures Online. 16 (1), 4 (2014).
  27. Gladiator, A., Wangler, N., Trautwein-Weidner, K., LeibundGut-Landmann, S. Cutting edge: IL-17-secreting innate lymphoid cells are essential for host defense against fungal infection. J Immunol. 190 (2), 521-525 (2013).
  28. Leppkes, M., Roulis, M., Neurath, M. F., Kollias, G., Becker, C. Pleiotropic functions of TNF-alpha in the regulation of the intestinal epithelial response to inflammation. International Immunology. 26 (9), 509-515 (2014).
  29. Bishu, S., et al. The adaptor CARD9 is required for adaptive but not innate immunity to oral mucosal Candida albicans infections. Infection and Immunity. 82 (3), 1173-1180 (2014).
  30. Quintin, J., et al. Differential role of NK cells against Candida albicans infection in immunocompetent or immunocompromised mice. Eur J Immunol. 44 (8), 2405-2414 (2014).
  31. Ramirez-Garcia, A., et al. Candida albicans and cancer: Can this yeast induce cancer development or progression. Critical Reviews In Microbiology. , 1-13 (2014).

Tags

चिकित्सा अंक 96 Th17 टी माउस मॉडल मौखिक सूजन candida मौखिक संक्रमण और इम्युनोपैथोलोजी
Immunodeficient चूहे में Oropharyngeal कैंडिडिआसिस के Th17 शोथ मॉडल
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bhaskaran, N., Weinberg, A.,… More

Bhaskaran, N., Weinberg, A., Pandiyan, P. Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice. J. Vis. Exp. (96), e52538, doi:10.3791/52538 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter