Lo Streptococcus pneumoniae forma lesioni microscopiche discrete non purulente nel cuore. Viene delineato il protocollo per un modello murino di formazione di microlesioni cardiache. Vengono fornite istruzioni sulla visualizzazione delle microlesioni mediante microscopia, sulla discriminazione tra microlesioni precoci e tardive e sui metodi per rilevare il rimodellamento cardiaco nei cuori degli animali convalescenti.
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In questo articolo
Sommario
Abstract
Durante batteriemia Streptococcus pneumoniae può traslocare attraverso l'endotelio vascolare nel miocardio e formare batteri-riempite discrete lesioni microscopiche (microlesioni) che sono notevoli per l'assenza di infiltrarsi cellule immunitarie. Grazie alla loro rilascio di prodotti cardiotossici, S. pneumoniae entro microlesioni si pensa di contribuire allo scompenso cardiaco che è spesso osservato durante fulminato malattia pneumococcica invasiva negli adulti. Qui è dimostrato un protocollo per infezione sperimentale del mouse che porta alla formazione di riproducibili microlesion cardiaco entro 30 ore. L'istruzione è fornita sull'identificazione microlesion in ematossilina e eosina sezioni cuore colorato e le distinzioni morfologiche tra inizio e fine microlesioni sono evidenziati. L'istruzione è fornita su un protocollo per la verifica di S. pneumoniae entro microlesioni utilizzando anticorpi contro pneumococco polisaccaride della capsula emicroscopia a immunofluorescenza. Infine, è previsto un protocollo di intervento antibiotico che salva i topi infetti e per l'individuazione e la valutazione di formazione della cicatrice nel cuore dei topi convalescente. Insieme, questi protocolli faciliteranno lo studio dei meccanismi molecolari alla base dell'invasione cardiaco pneumococco, la morte dei cardiomiociti, rimodellamento cardiaco a seguito di esposizione a S. pneumoniae, e la risposta immunitaria al pneumococchi nel cuore.
Introduzione
Ricovero di adulti per polmonite acquisita in comunità (CAP) comporta un rischio documentato per eventi avversi cardiaci che contribuisce alla mortalità 1-4. In un recente studio condotto da Corrales-Medina et al. Sono risultati associati con e / o responsabile del 27% dei decessi polmonite associata 3 complicazioni cardiache. Streptococcus pneumoniae (pneumococco), la causa più comune di PAC e sepsi 5, è stata direttamente associata ad eventi avversi cardiaci a ben il 19% dei pazienti adulti ricoverati 6. Eventi cardiaci avversi associati con polmonite includono insufficienza nuovo o peggiorata cardiaco c....
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Protocollo
NOTA: Tutti gli esperimenti del mouse sono stati esaminati e approvati dalla cura degli animali e Istituzionale Usa Comitati presso l'Università del Texas Health Science Center a San Antonio (protocollo # 13032-34-01C). La cura degli animali e protocolli sperimentali aderito Diritto Pubblico 89-544 (Animal Welfare Act) e successivi emendamenti, Servizi pubblici Salute linee guida, e la Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio (US Department of Health & Human Services).
1. Infezione
- Ottenere topi BALB / c di entrambi i sessi di età compresa tra 10-12 settimane di età tra.
GLI APPUNTI. pneum....
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Risultati
Visualizzazione di microlesioni da H & E
Microlesioni cardiaci sono stati osservati nei ventricoli di H & E macchiato sezioni cardiache di topo con IPD seguenti la loro sfida ip con TIGR4. Figura 1 dimostra l'aumento delle dimensioni di queste lesioni tra 24 e 30 ore dopo l'infezione (HPI), con maggior numero di ematossilina -stained (cioè, viola-blu) pneumococchi visibile all'interno della lesione. Microlesioni sono stati caratterizzati.......
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Discussione
In questo rapporto, un metodo altamente riproducibile per indurre S. pneumoniae mediata microlesioni cardiaci nei topi durante IPD e le tecniche per la loro visualizzazione è dimostrata. I topi sono infettati con una dose di batteri che supera la soglia del sistema immunitario di attestazione, portando a batteriemia alta qualità, simile a quella che si verifica durante la sepsi umana, e conduce ad eventuali traslocazione batterica nel miocardio. Per ragioni ancora sconosciute, S. pneumoniae nel cuore è.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse in questo studio.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dalla sovvenzione 13IRG14560023 dell'American Heart Association e dalle sovvenzioni NIH AI078972 e HL108054 a CJO. Il supporto per AOB è stato fornito dal NIH National Center for Advancing Translational Sciences, dal NIH ULTR001120 e dall'F31 A110417701.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Brodo Todd-Hewitt | Composto Neogen | 7161A | |
| OCT | Tissue-Tek (Sakura Finetek) | 4583 | |
| Triton X-100 | Fisher Scientific (Acros) | 9002-93-1 | |
| Siero di capra normale | Abcam | ab7481 | |
| anti-sierotipo 4 antisiero pneumococco | Statens Serum Institut | 16747 | |
| capra anti-coniglio FITC coniugato anticorpo | Jackson ImmunoResearch | 111-096-144 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| Fluorsave | Millipore | 345789 | |
| Permount | Fisher Scientific | S70104 | |
| Ampicillina | Sigma | A9393 | |
| acido fosfomolibdico 0,2% | Scienze della microscopia elettronica | 26357-01 | |
| 0,1% Rosso Sirio in acido picrico | Scienze della microscopia elettronica | 26357-02 | |
| Acido cloridrico 0,01 N | Scienze della microscopia elettronica | 26357-03 | |
| Vetrini per microscopio Tissue Tack | Polysciences, Inc | 24216 | |
| Unguento veterinario Paralube | Dechra | 12920060 | |
| Kit di colorazione ematossilina ed eosina | non specificato | standard |
Riferimenti
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality. Circulation. 125, 773-781 (2012).
- Corrales-Medina, V. F., et al.
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Ristampe e permessi
