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Developmental Biology

Geomagnetic क्षेत्र (GMF) और संयंत्र विकास: GMF उत्क्रमण के प्रभाव पर जांच Published: November 30, 2015 doi: 10.3791/53286
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 1
1Department of Life Sciences and Systems Biology, University of Turin, 2Radcliffe Department of Medicine, University of Oxford, John Radcliffe Hospital

Abstract

संयंत्र विकास में सबसे उत्तेजक टिप्पणियों में से एक geomagnetic क्षेत्र की घटना (GMF) बदलाव (या आस) और आवृतबीजी के विकिरण के क्षण के बीच एक संबंध है। इस GMF polarity में परिवर्तन संयंत्र विकास में एक भूमिका निभा सकते हैं कि परिकल्पना का नेतृत्व किया। यहाँ, हम कृत्रिम रूप से GMF की स्थिति उलट करने Arabidopsis thaliana उजागर करके इस परिकल्पना का परीक्षण करने के लिए एक विधि का वर्णन है। हम एक तीन अक्ष magnetometer इस्तेमाल किया और एकत्र आंकड़ों GMF की भयावहता की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया गया। तीन डीसी बिजली की आपूर्ति तीन हेल्महोल्ट्ज़ तार जोड़े से जुड़े थे और GMF की स्थिति को बदलने के लिए एक कंप्यूटर द्वारा नियंत्रित किया गया। पेट्री प्लेटों में बड़े पौधों दोनों सामान्य से अवगत कराया और GMF की स्थिति उलट गया था। शाम जोखिम प्रयोगों भी प्रदर्शन किया गया। उजागर पौधों के प्रयोग के दौरान फोटो खींच रहे थे और छवियों को जड़ लंबाई और पत्ती क्षेत्रों की गणना करने के लिए विश्लेषण किया गया। एराबिडोप्सिस कुल शाही सेना निकाले और मात्रात्मक थारीयल टाइम पीसीआर (qPCR) CRUCIFERIN 3 (CRU3), तांबा परिवहन protein1 (COTP1), रिडॉक्स उत्तरदायी ट्रांसक्रिप्शन Factor1 (RRTF1), फे superoxide dismutase 1, (FSD1), Catalase3 (CAT3), Thylakoidal के जीन की अभिव्यक्ति पर प्रदर्शन किया गया विश्लेषण एस्कोर्बेट peroxidase (TAPX), एक साइटोसोलिक एस्कोर्बेट Peroxidase1 (APX1), और NADPH / श्वसन फट ओक्सीडेस प्रोटीन डी (RbohD)। चार अलग अलग संदर्भ जीन qPCR के परिणामों को सामान्य करने के लिए विश्लेषण किया गया। चार जीन का सबसे अच्छा चयन किया गया था और सामान्य बनाने के लिए सबसे अधिक स्थिर जीन इस्तेमाल किया गया था। हमारे डेटा त्रिअक्षीय कॉयल का उपयोग कर GMF polarity के पीछे पौधों की वृद्धि और जीन अभिव्यक्ति पर महत्वपूर्ण प्रभाव है कि पहली बार दिखा। यह अंततः पी के लिए अग्रणी, एक उच्च चयनात्मक दबाव का औचित्य साबित हो सकता है कि GMF उलट संयंत्र के विकास में परिवर्तन उत्प्रेरण के लिए योगदान देता है कि परिकल्पना का समर्थन करता हैlant विकास।

Introduction

पृथ्वी के चुंबकीय क्षेत्र (या यों geomagnetic क्षेत्र, GMF) पौधों सहित ग्रह पर रहने वाले सभी जीवों के लिए एक अपरिहार्य पर्यावरणीय कारक है। GMF हमेशा पृथ्वी का एक स्वाभाविक विशेषता रही है, इसलिए विकास के दौरान, सभी जीवित जीवों अपनी कार्रवाई का अनुभव किया। सबूत के एक बढ़ती हुई शरीर GMF कई जैविक प्रक्रियाओं 1 को प्रभावित करने में सक्षम है कि पता चलता है। GMF एक समान नहीं है और पृथ्वी की सतह पर इसकी भयावहता और दिशा में महत्वपूर्ण स्थानीय मतभेद हैं। पृथ्वी की सतह पर GMF कम से कम 30 μT से लगभग 70 μT को लेकर परिमाण का एक व्यापक रेंज से पता चलता है। GMF magnetosphere 2 के माध्यम से अपने आरोप लगाया कणों के सबसे deflecting द्वारा सौर हवा के घातक प्रभाव से पृथ्वी और उसके जीवमंडल सुरक्षा करता है।

पौधे पर्यावरण उत्तेजनाओं का जवाब; और इस तरह के प्रकाश और गुरुत्वाकर्षण के रूप में अजैविक कारकों को शास्त्रीय प्रतिक्रियाओं टी किया गया हैhoroughly तथाकथित phototropic और gravitropic प्रतिक्रियाओं को परिभाषित करने से वर्णन किया। बहुत कम, या कुछ भी नहीं, इस विषय पर प्रकाशित किया है और हाल ही में एक समीक्षा कागजात की अधिकता के बावजूद, धारणा और चुंबकीय क्षेत्र के लिए पौधों की प्रतिक्रियाओं के तंत्र पर जाना जाता है। गुरुत्वाकर्षण क्षेत्र के विपरीत, GMF जिससे हाल ही में विविधीकरण और प्रजातीकरण 2 संयंत्र के लिए योगदान दे अंततः एक संभावित प्रेरणा शक्ति माना गया है कि एक महत्वपूर्ण अजैव तनाव कारक का प्रतिनिधित्व संयंत्र विकास के दौरान लगातार बदल दिया है। Geomagnetic बदलाव (या आस) GMF के polarity में परिवर्तन कर रहे हैं। पृथ्वी का जीवन-इतिहास के दौरान, GMF बदलाव कई बार हुआ। ये हर polarity के संक्रमण के दौरान कम GMF शक्ति की अवधि के लिए ग्रह से अवगत कराया। कम GMF शक्ति के इन संक्रमण अवधि जिससे एक उत्प्रेरण, पृथ्वी की सतह तक पहुंचने के लिए सौर हवा से विकिरण की अनुमति दी है हो सकता है कि कुछ लेखकों धारणा हैविकास 2 संयंत्र के लिए अग्रणी अंततः जीन परिवर्तन के लिए प्रेरित करने के लिए काफी मजबूत हो सकता था, जो रहने वाले जीवों के लिए लगातार तनाव,।

पौधों पर चुंबकीय क्षेत्र के प्रभाव का वर्णन प्रयोगों की एक विस्तृत विश्लेषण प्रशंसनीय biophysical संपर्क तंत्र की कमी के द्वारा होती परस्पर विरोधी रिपोर्टें, की एक बड़ी संख्या से पता चलता है। दूसरों अंततः, 3 दुविधा में पड़ा रहे हैं, एक परीक्षण योग्य परिकल्पना की कमी है और जबकि कई प्रयोगों, बस अवास्तविक हैं। पिछले वर्षों में, संयंत्र पर चुंबकीय क्षेत्र के प्रभाव पर प्रगति और अनुसंधान की स्थिति 2,4-11 समीक्षा की गई है। हाल ही में, दोनों कम और उच्च चुंबकीय क्षेत्र के प्रभाव को अच्छी तरह से संयंत्र के विकास के 2 पर GMF उलट घटनाओं की भागीदारी पर विशेष ध्यान देने के साथ, एक विचार विमर्श किया गया।

सबसे सीधा मतलब GMF बदलाव संयंत्र विकास एक GMF के संश्लेषण के लिए है कि प्रभावित परिकल्पना को पुष्ट करने के लिएसामान्य और उलट चुंबकीय क्षेत्र की स्थिति के लिए पौधों की प्रतिक्रिया का परीक्षण करके प्रयोगशाला में उलट। परिकल्पना का परीक्षण करने के लिए, इसलिए हम सही ढंग से सामान्य GMF की स्थिति रिवर्स करने में सक्षम है, जो एक त्रिअक्षीय अष्टकोणीय हेल्महोल्त्ज़ कुंडली-जोड़े के चुंबकीय क्षेत्र मुआवजा प्रणाली (त्रिअक्षीय कॉयल) का निर्माण किया।

हम एक मॉडल के पौधे के रूप में Arabidopsis thaliana इस्तेमाल किया है और हम कुछ महत्वपूर्ण जीनों के जीन अभिव्यक्ति पर उलट GMF के प्रभाव का परीक्षण: CRUCIFERIN 3 (CRU3), टाइरोसीन-फॉस्फोरिलेटेड है और इसकी फास्फोरिलीकरण राज्य जवाब में ठीक किया जाता है कि एक 12S बीज भंडारण प्रोटीन को कूटबद्ध करता है Arabidopsis thaliana बीज 12,13 में ए.बी.ए. करने के लिए; मिट्टी घन अधिग्रहण और पराग विकास 14 में प्रमुख समारोह के साथ एक भारी धातु परिवहन / विषहरण superfamily प्रोटीन को कूटबद्ध कि कॉपर परिवहन Protein1 (COTP1); और रिडॉक्स उत्तरदायी ट्रांसक्रिप्शन Factor1 (RRTF1),कि ERF (एथिलीन प्रतिक्रिया कारक) उपप्रजाति बी -3 जीन अभिव्यक्ति रास्ते के synergistic सह सक्रियण की सुविधा और अजैव पार सहिष्णुता प्रदान और जैविक 15 पर जोर दिया है कि एक AP2 डोमेन में शामिल है कि ERF / AP2 प्रतिलेखन कारक परिवार के एक सदस्य को कूटबद्ध।

इसके अलावा हम भी ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रियाओं में शामिल पांच जीन विश्लेषण किया: enzymatically और तेजी से सुपरऑक्साइड आयनों धर्मान्तरित एक साइटोप्लास्मिक एंजाइम को कूटबद्ध कि फे Superoxide Dismutase1, (FSD1), (ओ 2 -) और पानी (एच 2 ओ) हाइड्रोजन पेरोक्साइड के लिए (एच पानी और ऑक्सीजन 17,18 में एच के टूटने 2 ओ 2 उत्प्रेरित कि Catalase3 (कि कूटबद्ध कि CAT3), और एंजाइम; 2 ओ 2) और आणविक ऑक्सीजन (ओ 2) 16 Thylakoidal एस्कोर्बेट peroxidase (TAPX), एक को कूटबद्ध करता है एच 2 ओ scavenges कि chloroplastic thylakoid peroxidase2 19, एच 2 ओ 2 scavenges और कोई नहीं ली गई अणुओं 20 द्वारा मध्यस्थता बाद translational संशोधनों के संभावित ठिकानों में से एक का प्रतिनिधित्व करता है कि एक साइटोसोलिक peroxidase कूटबद्ध कि एस्कोर्बेट Peroxidase1 (APX1); और हे 2 उत्पन्न करता है कि एक एंजाइम को कूटबद्ध कि NADPH- श्वसन फट ओक्सीडेस प्रोटीन डी (RbohD) - और एराबिडोप्सिस 21 में वृद्धि, विकास और तनाव प्रतिक्रियाओं को विनियमित करने में निर्णायक भूमिका निभाता है।

हमारे क्षेत्र उलटा कार्यप्रणाली GMF उलट ए की आकृति विज्ञान और जीन अभिव्यक्ति में एक महत्वपूर्ण परिवर्तन के लिए प्रेरित कर सकते हैं कि पहले सबूत उपलब्ध कराता है thaliana जड़ों और गोली मारता है। इस प्रोटोकॉल की भूमिका की चर्चा संयंत्र आकृति विज्ञान और जीन अभिव्यक्ति पर GMF उत्क्रमण के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए और संयंत्र व्यवहार के अन्य पहलुओं पर GMF उत्क्रमण के संभावित प्रभाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और इस तरह मार्गदर्शन एक अभिनव तरीका प्रदान करता हैसंयंत्र विकास पर GMF पलटने की Le।

Protocol

त्रिअक्षीय का तार 1. सेटिंग

नोट: चित्रा 1 GMF रिवर्स करने के लिए इस्तेमाल किया त्रिअक्षीय कॉयल से पता चलता है।

  1. जिसका जांच त्रिअक्षीय कुंडलियों में डाला जाता है तीन अक्ष magnetometer, चालू करें।
  2. डेटा तीन अक्ष magnetometer से एकत्र होने की अनुमति देता है कि magnetometer सॉफ्टवेयर कंप्यूटर पर मुड़ें और लांच।
  3. GMF की भयावहता की गणना करने के magnetometer द्वारा रिपोर्ट घटक मूल्यों का प्रयोग करें। Magnetometer मूल्यों के साथ उदाहरण के लिए: Bx = 6.39 μT द्वारा = 36.08 μT, BZ = 20.40 μT निम्न समीकरण का उपयोग करके 41.94 μT की एक क्षेत्र शक्ति की गणना: बी = बी GMF + बी अतिरिक्त जहां बी अतिरिक्त = (BX 2 + 2 + Bz 2) द्वारा आधा (यानी, उदाहरण में 41.9 μT।)
  4. तीन डीसी बिजली की आपूर्ति पर (दोहरी रेंज: 0-8V / 5 ए और 0-20V / 2.5A, 50W) मुड़ें तीन coupl से जुड़ा हर एक कोहेल्महोल्ट्ज़ कॉयल की es और एक GPIB कनेक्शन (चित्रा 1 बी) के माध्यम से एक कंप्यूटर से जुड़ा।
  5. बिजली की आपूर्ति के सेट voltages के एक उलट चुंबकीय क्षेत्र वेक्टर के साथ वांछित चुंबकीय क्षेत्र उत्पन्न करने के लिए। एक नए परिणामी बी उत्पन्न करने के लिए उदाहरण के लिए, 1.3 चरण में है और यहाँ वर्णित इंस्ट्रूमेंटेशन के कुंडल के आकार के साथ ही बी GMF साथ, वी के voltages सेट एक्स = 0.00 वी, वी Y = 30.52 वी, वी जेड = 0.00 वी = बी GMF + बी त्रिअक्षीय कॉयल = (6.38, -36.08, 20.39) μT। यानी, एक ही बी GMF के रूप में परिमाण, लेकिन एक अलग दिशा की ओर इशारा करते के साथ एक नए क्षेत्र।
  6. 1.3 में वर्णित प्रक्रिया का उपयोग करके magnetometer सॉफ्टवेयर के साथ नए क्षेत्र को सत्यापित करें।
  7. दोनों सामान्य करने के लिए पौधों को बेनकाब और धारा 2 में वर्णित के रूप में पेट्री प्लेटों का उपयोग करके GMF की स्थिति उलट।
  8. के बराबर क्षेत्र की भयावहता रखकर दिखावा जोखिम प्रयोगों प्रदर्शन | बी GMF | और कीपिंगGMF की है कि लेकिन के बराबर क्षेत्र के ऊर्ध्वाधर घटक क्षेत्र उलट हालत की तुलना त्रिअक्षीय कुंडलियों में बराबर धाराओं के साथ क्षेत्र की क्षैतिज घटक की दिशा (यानी, "उत्तर, पूर्व या पश्चिम") में फेरबदल। 1.5 में वर्णित के रूप में कॉयल की वोल्टेज बदलकर यह मत करो।
    नोट: यह दिखावा जोखिम संभावित सूक्ष्म हीटिंग या तो कॉयल से कंपन प्रभाव स्वयं या कॉयल को नियंत्रित करने के लिए इस्तेमाल इलेक्ट्रॉनिक्स से बाहर नियम।
  9. डेटा प्रयोगों के शेष के प्रदर्शन और / या व्याख्या कर्मियों से अंधा क्षेत्र की स्थिति को लागू करने से डबल अंधा प्रयोगों चलाएँ।

संयंत्र सामग्री और संयंत्र के विकास के लिए शर्तों का 2. तैयारी

  1. Arabidopsis thaliana के बीज का प्रयोग करें, ecotype कोलंबिया 0 (कर्नल 0), एक 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में तो जगह है और सतह एक 5% के साथ इलाज के द्वारा बाँझ (डब्ल्यू / वी) कैल्शियम हाइपोक्लोराइट समाधान और 0.02% (वी / वी) ट्राइटन एक्सनिरंतर झटकों के साथ 25-28 डिग्री सेल्सियस पर 10-12 मिनट के लिए 80% इथेनॉल (EtOH), में 100। तो 100% EtOH के साथ धोने, 80% EtOH के साथ दो बार कुल्ला और अंत में बाँझ आसुत पानी से कुल्ला।
  2. जोड़कर मध्यम संशोधित Murashige और Skoog 22 (एमएस) के 1 एल तैयार: एमएस के 2.297 ग्राम (0.5 एक्स एमएस बेसल नमक के मिश्रण), 10 ग्राम सुक्रोज, 1 एल, KOH के साथ समायोजित पीएच 5.8-6.0 विआयनीकृत पानी ऊपर। 20 मिनट, 120 डिग्री सेल्सियस के लिए अगर और आटोक्लेव के 16 ग्राम जोड़ें।
  3. सम्पिण्डन पहले, प्रत्येक (120 x 120 मिमी 2) वर्ग पेट्री प्लेटों में मध्यम से 80 मिलीलीटर डालना। एक मोमी फिल्म के साथ प्लेटों को सील तो थाली पर तीस बाँझ बीज बोते हैं, और।
  4. शक्ति और अंकुरण सिंक्रनाइज़, और फिर या तो सामान्य करने के लिए पेट्री प्लेटों का पर्दाफाश या GMF उलट करने के लिए 2 दिनों के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में क्षैतिज प्लेटों Vernalize।
  5. त्रिअक्षीय कॉयल के अंदर और त्रिअक्षीय कॉयल के बाहर दोनों समानांतर प्रयोगों में एक ऊर्ध्वाधर स्थिति में 22 डिग्री सेल्सियस पर एक जलवायु नियंत्रित वातावरण में बीज का पर्दाफाशसोडियम वाष्प लैंप का उपयोग 8 घंटा अंधेरे और 16 घंटा प्रकाश की एक फोटो पीरियड अनुसूची के तहत (220 x 10 -6 ई -2 मीटर -1)। दीपक के लाल घटक को कम करने के लिए रोशनी के लिए एक नीले रंग की जिलेटिन फिल्म का प्रयोग करें।
  6. सामान्य (नियंत्रण) दोनों के लिए शाही सेना निकासी और उलटा (उपचार) GMF स्थितियों से पहले 10 दिनों के लिए पौधों को बेनकाब।
  7. प्रदर्शन के बाद, पेट्री डिश की तस्वीरें ले लो।
  8. जड़ लंबाई और पत्ती क्षेत्रों की गणना करने के ImageJ सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें।
    1. संक्षेप में, तो पेट्री प्लेट की और वास्तव में थाली की ओर पार कि एक लाइन आकर्षित करने के लिए "" सीधे लाइन विकल्प का उपयोग करके छवि को खोलने, पेट्री थाली की ओर मापने।
    2. "विश्लेषण" मेनू में "सेट पैमाने" का चयन और "ज्ञात दूरी" बॉक्स (जैसे, 120 मिमी), तो लंबाई (मिमी) की इकाई डालने में वास्तविक दूरी डालने; अंत में सभी मापन के लिए सेटिंग्स उपलब्ध बनाने के लिए "वैश्विक" विकल्प पर क्लिक करें।
    3. Roo के लिएटी लंबाई, मुक्तहस्त उपकरण का उपयोग करके ध्यान से जड़ के आकार का पालन करें। "विश्लेषण" मेनू में "उपाय" विकल्प का उपयोग करके लंबाई मापने। चित्र में सभी जड़ों को मापने के लिए और आगे सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए फाइल को बचाने के लिए आगे बढ़ें।
    4. पत्ती क्षेत्र के लिए, "छवि" मेनू से विकल्प और फिर "रंग दहलीज" समायोजित का उपयोग करें। व्यक्ति का पत्ता का चयन करें और "विश्लेषण" मेनू में "कणों का विश्लेषण" का चयन करें। सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए अलग-अलग माप की बचत करें।

3. एराबिडोप्सिस कुल शाही सेना निकालना, मात्रात्मक रीयल टाइम पीसीआर (qPCR) प्रतिक्रिया की स्थिति और एराबिडोप्सिस के लिए प्राइमर

  1. अलग से 30 गोली मारता है और 30 जड़ों लीजिए और तुरंत तरल नाइट्रोजन में फ्रीज। तब मोर्टार और मूसल के साथ तरल नाइट्रोजन में पीस लें।
  2. विनिर्माण का उपयोग करके एक शुद्धि किट और RNase मुक्त DNase उपचार किट का उपयोग कर कुल शाही सेना को अलगएर के निर्देशों।
  3. निर्माता के निर्देशों के अनुसार एक शाही सेना नैनो किट और केशिका जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके नमूना गुणवत्ता और मात्रा की जाँच करें। Spectrophotometrically शाही सेना की मात्रा का ठहराव की पुष्टि करें।
  4. कुल शाही सेना और निर्माता की सिफारिशों के अनुसार पहली कतरा cDNAs प्राप्त करने के लिए एक सीडीएनए रिवर्स प्रतिलेखन किट का उपयोग कर यादृच्छिक प्राइमरों के 2 ग्राम का प्रयोग करें।
  5. एक आंतरिक लोड हो रहा है मानक के रूप में ROX साथ SYBR हरे मैं का उपयोग कर एक वास्तविक समय प्रणाली पर सभी प्रयोगों को पूरा करें।
  6. 2x SYBR ग्रीन qPCR मास्टर मिक्स के 12.5 μl, सीडीएनए के 0.5 μl और 100 एनएम प्राइमरों से मिलकर मिश्रण के 25 μl के साथ प्रतिक्रिया प्रदर्शन। 1 टेबल में सूचीबद्ध प्राइमरों का प्रयोग करें। नियंत्रण में (जीनोमिक डीएनए संदूषण के लिए नजर रखने के लिए रिवर्स प्रतिलेखन बिना कुल शाही सेना का उपयोग) गैर-आरटी नियंत्रण और गैर टेम्पलेट नियंत्रण (पानी के बजाय टेम्पलेट) को शामिल करें।
  7. मानक का उपयोग कर सभी प्राइमरों जोड़े के लिए प्राइमर दक्षता की गणनावक्र विधि 23।
  8. CRU3, COTP1, RRTF1: निम्नलिखित पीसीआर स्थितियों का प्रयोग करें। 95 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट, 95 डिग्री सेल्सियस, 58 डिग्री सेल्सियस पर 30 सेकंड, और 72 डिग्री सेल्सियस पर 30 सेकंड में 15 एस के 40 चक्र; UBP6, eEF1Balpha2, Act1, GAPC2, CAT3 TAPX, APX1, RbohD, FeSOD1 10 न्यूनतम 95 डिग्री सेल्सियस पर, 95 डिग्री सेल्सियस, 57 डिग्री सेल्सियस पर 20 सेकंड, और 72 डिग्री सेल्सियस पर 30 सेकंड में 15 एस के 40 चक्रों।
  9. प्रत्येक annealing और विस्तार चरण के बाद प्रतिदीप्ति पढ़ें। सभी रन के लिए, थर्मल प्रोफ़ाइल में हदबंदी खंड को शामिल करके 55 डिग्री सेल्सियस से 95 से एक पिघलने वक्र विश्लेषण करते हैं। हदबंदी प्रोफ़ाइल (तापमान के एक समारोह के रूप में प्रतिदीप्ति की साजिश) देखने के लिए परिणाम टैब के माध्यम से पहुँचा हदबंदी वक्र स्क्रीन, का प्रयोग करें। प्रयोग की हदबंदी खंड के दौरान एकत्र डाटासेट विश्लेषण / सेटअप स्क्रीन का उपयोग विश्लेषण के लिए चुना जाता है कि सुनिश्चित करें।
  10. एल का निर्धारण करेंतीन तकनीकी प्रतिकृति 24,25 में विश्लेषण तीन स्वतंत्र आरएनए एक्सट्रेक्शन से सीडीएनए का उपयोग कर एक दस गुना कमजोर पड़ने श्रृंखला (1- गुना 3 से 10) के प्रदर्शन से सीमा चक्र मूल्य (सीटी मूल्य) के लिए टेम्पलेट एकाग्रता की inear सीमा होती है।
  11. सीटी मूल्यों को प्राप्त करने के लिए वास्तविक समय पीसीआर साधन सॉफ्टवेयर के साथ सभी प्रवर्धन भूखंडों का विश्लेषण करें। जांचना और के रूप में इस प्रकार है सबसे अच्छा गृह व्यवस्था जीन के स्तर के साथ रिश्तेदार आरएनए स्तर मानक के अनुसार: 3.11.1) परिणाम टैब के माध्यम से भूखंडों स्क्रीन प्रवर्धन का उपयोग, डेटा विश्लेषण चयन / सेटअप स्क्रीन का उपयोग कर विश्लेषण किया जाना चाहिए, जिसके लिए रैंप या पठार का चयन करें, और उसके बाद कमांड पैनल पर प्रतिदीप्ति मेनू से DRN (आधारभूत सही सामान्यीकृत प्रतिदीप्ति) का चयन करें। नमूना कुओं के लिए सीटी मूल्यों को प्रदर्शित करने के परिणाम टैब के माध्यम से नमूना मान स्क्रीन प्लेट पर पहुँचें।
  12. चार अलग-अलग संदर्भ जीन का प्रयोग करें [जैसे, साइटोप्लास्मिक glyceraldehyde-3-फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज, (GAPC2), यूबीक्यूटिन विशिष्टआईसी प्रोटीज 6 (UBP6), Actin1 (Act1) और बढ़ाव कारक 1 बी अल्फा सबयूनिट 2 (eEF1Balpha2)] वास्तविक समय पीसीआर के परिणाम को सामान्य करने के लिए। एक विश्लेषण सॉफ्टवेयर 26 का उपयोग जीन शीर्ष क्रम का चयन करें; और सामान्य बनाने के लिए सबसे अधिक स्थिर जीन का उपयोग करें।
    1. संक्षेप में, नमूना नाम युक्त जीन नाम और पहली पंक्ति से युक्त पहला स्तंभ के साथ एक एक्सेल शीट पर इनपुट डेटा का आयोजन। फिर मेनू-पट्टी से विश्लेषण सॉफ्टवेयर का चयन करें। इनपुट डेटा का चयन करने के लिए संवाद बॉक्स का उपयोग करें।
    2. इसके बाद, खेतों नमूना नाम, जीन के नाम और सरल उत्पादन केवल जाँच करें। विश्लेषण करने के लिए जाओ बटन पर क्लिक करें। सबसे स्थिरतापूर्वक व्यक्त उम्मीदवार जीन के रूप में (छोटी स्थिरता मूल्य है) शीर्ष स्थान पर जीन का चयन करें।
  13. गोली मारता है और जड़ों दोनों में अंतर गुना परिवर्तन अभिव्यक्ति दिखा कर प्लॉट डेटा।

4. सांख्यिकीय विश्लेषण

  1. मानक त्रुटि ± मतलब मूल्यों के रूप में डेटा व्यक्त करें। सह तुलना करेंntrol और विचरण (एनोवा) और Bonferroni और डन-Sidak समायोजित संभावना परीक्षण (0.95% विश्वास) के साथ की Tukey परीक्षण के विश्लेषण के प्रदर्शन से उपचार समूहों।

Representative Results

इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य जब सेट GMF रिवर्स करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं चित्रा 1 ए के रूप में दिखाया geomagnetic क्षेत्र (GMF) के पलटने संयंत्र विकास और Arabidopsis thaliana ecotype कर्नल 0. त्रिअक्षीय कॉयल के जीन की अभिव्यक्ति को प्रभावित कर सकता है कि क्या आकलन करने के लिए एक तरीका प्रदान करने के लिए है प्रोटोकॉल में 1.5 चरण में वर्णित के रूप में उपयुक्त ड्राइव वोल्टेज (चित्रा 1 बी) के साथ प्राप्त की। त्रिअक्षीय कॉयल के आयाम हैं ~ कई पेट्री प्लेटों की मेजबानी करने के उलट GMF शर्तों के साथ पर्याप्त स्थान की अनुमति दी है, जो 2 एक्स 2 एक्स 2 3 मीटर,। नियंत्रण एक ही पर्यावरण की स्थिति में है और सामान्य GMF मूल्यों पर बड़े हो रहे थे। GMF की स्थिति सामान्य करने के लिए जोखिम के 10 दिनों के बाद और उलट, पौधों के phenotype स्पष्ट रूपात्मक परिवर्तन दिखाया। चित्रा 2 में दिखाया गया है, (सामान्य GMF की स्थिति में उगाया जाता है, यानी) नियंत्रण पौधों काफी (डन-Sidak और Bonferroni समायोजित समस्या <0.001 के साथ रूट लंबाई से पता चला है;उलट GMF के संपर्क में पौधों के संबंध में (17.53 मिमी के साथ एन = 32), छात्र टी = 10.68, DF = 31) उच्च मूल्यों (29.41 मिमी, SEM = 1.04 SEM = 0.58; एन = 36)। GMF उलट पौधों में, शूटिंग के आकृति विज्ञान भी पत्रक विस्तार का एक कम विकास दिखा द्वारा बदल दिया गया था। छात्र की टी = 31.32, DF, सामान्य स्थिति से अवगत कराया संयंत्रों 4.95 मिमी 2 (SEM 0.025, एन = 54), उलट GMF स्थिति से अवगत कराया पौधों काफी पता चला है, जबकि (डन-Sidak और Bonferroni समायोजित समस्या = <0,001 के एक औसत पत्ती क्षेत्र से पता चला = 53) कम पत्ती क्षेत्र मूल्यों (3.71 मिमी 2; SEM = 0.032; एन = 54)। इसलिए, उलट GMF शर्तों के एराबिडोप्सिस का जोखिम जड़ लंबाई और पत्ती क्षेत्र दोनों में कमी प्रेरित किया।

पत्ता विस्तार और जड़ विकास प्रभाग और कोशिकाओं 27 के बढ़ाव दोनों पर निर्भर हैं। इसलिए, संयंत्र विकास, उत्पादकता और समग्र फिटनेस <एक इष्टतम shoot- और जड़-प्रणाली वास्तुकला पर निर्भर कर रहे हैंसमर्थन> 28। उलट GMF स्थिति से अवगत कराया पौधों की कम जड़ लंबाई और पत्ती आकार चुंबकीय क्षेत्र तीव्रता में बदलाव अनुभव करने के लिए न केवल एक संवेदन प्रणाली की उपस्थिति में सक्षम संकेत मिलता है, लेकिन यह भी गुरुत्वाकर्षण की तुलना में चुंबकीय क्षेत्र "दिशा" में परिवर्तन करने के लिए प्रतिक्रिया करने के लिए। GMF उलट पौधों की वृद्धि को प्रभावित कर सकता है कि परिकल्पना GMF उत्क्रमण की स्थिति काफी पौधों के विकास को प्रभावित कर सकते दिखाना है कि जो हमारे प्रयोगों में सम्मोहक सबूत पाता है।

रूपात्मक परिवर्तन भी जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन के साथ थे। गृह व्यवस्था जीन के अलावा, सबसे स्थिर जीन बढ़ाव कारक 1 बी अल्फा सबयूनिट 2 था। जीन (CRU3, COTP1, RRTF1) के पहले समूह जीन अभिव्यक्ति में एक नाटकीय परिवर्तन (चित्रा 3) से पता चला है। सभी तीन जीनों की अभिव्यक्ति में काफी आरक्षित करने के लिए अवगत कराया संयंत्रों में लगभग 2.5 गुना (पी <0.05) की वृद्धि हुई थी गोलीडी GMF की स्थिति। CRU3 की जड़ अभिव्यक्ति सामान्य GMF स्थिति से अवगत कराया पौधों में जड़ों में upregulated, लेकिन (पी <0.05) उलट GMF परिस्थितियों में downregulated काफी था। विपरीत (चित्रा 3) सामान्य परिस्थितियों में downregulated और GMF पलटने की उपस्थिति में upregulated गया है, जो COTP1 और RRTF1, के लिए मिला था।

Cruciferin (एक 12 एस ग्लोब्युलिन) ए के बीज में सबसे प्रचुर मात्रा में भंडारण प्रोटीन होता है thaliana और अन्य crucifers और किसी न किसी जालिका में एक अग्रदूत के रूप में संश्लेषित है। यह तो प्रोटीन भंडारण रिक्तिकाएं 13 में पहुंचा दिया है। अंकुरण अंकुर नाइट्रोजन का एक प्रारंभिक स्रोत के रूप में प्रयोग किया जाता है जो cruciferin, के टूटने की आवश्यकता है। नीचे विनियमन गिरावट cruciferin की सेल संरचनाओं या सेल घटकों विकास 29,30 आई द्वारा भ्रूण के विकास को कम कर देता। हमारे परिणाम CRU3 की अपरेगुलेशन के साथ संबद्ध पता चलता है किइस प्रकार अपने overexpression GMF उत्क्रमण के लिए और कहा कि संवेदनशील में इस जीन संयंत्र विकास की कमी के लिए योगदान कर सकते हैं यह दर्शाता है कि एक कम पत्ती विस्तार और एक कम जड़ लंबाई। इसके अलावा, GMF उलट एक कम जड़ लंबाई के साथ संबद्ध है, जो जड़ों में CRU3 की एक महत्वपूर्ण डाउनरेगुलेशन, लाती है। कॉपर पौधों में प्रमुख प्रक्रियाओं के लिए एक आवश्यक सहायक कारक है, लेकिन यह जब अधिक में हानिकारक प्रभाव डाल रही है; इस प्रकार, तांबा परिवहन overexpressing पौधों की वृद्धि समझौता। GMF उत्क्रमण का प्रभाव इस प्रकार कम पौधों की वृद्धि, समझा गोली मारता है और जड़ों दोनों में COTP1 की एक महत्वपूर्ण overexpression था। आयन तनाव कसकर सेल की रेडोक्स राज्य से जुड़ा हुआ है जो क्लोरोप्लास्ट चयापचय, नुकसान पहुंचाता है। Arabidopsis में प्रतिलेखन कारक RRTF1 31 बदलता Redox को समायोजित करने की क्षमता के लिए जुड़े जीन की अभिव्यक्ति के लिए महत्वपूर्ण है। इसलिए, जब पौधों उनके शारीरिक और विकास को बदलने में सक्षम बाहरी उत्तेजनाओं को उजागर कर रहे हैंअल कार्यक्रमों के लिए इस महत्वपूर्ण प्रतिलेखन कारक के एक overexpression की उम्मीद है। GMF के उलट इस प्रकार उलट GMF की स्थिति के लिए पौधों की उच्च ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रियाओं का संकेत है, गोली मारता है और जड़ों दोनों में RRTF1 की एक महत्वपूर्ण overexpression प्रेरित किया।

रोचक परिणाम ऑक्सीडेटिव तनाव में शामिल पांच जीन का विश्लेषण करके प्राप्त कर रहे हैं। सामान्य में, शूटिंग में निकाले और विश्लेषण सभी जीनों पौधों सामान्य में बड़े हो या GMF शर्तों (चित्रा 4 और 5 चित्रा) उलट गया था जब महत्वपूर्ण मतभेद (पी> 0.05) नहीं दिखा था। हालांकि, एक महत्वपूर्ण नीचे विनियमन हमेशा उलट GMF स्थिति से अवगत कराया पौधों की जड़ों में मनाया गया। विशेष रूप से, CAT3 (चित्रा 5), APX1, FSD1, RBOHD और TAPX (चित्रा 4) से डाउनरेगुलेशन के आदेश का पालन उच्चतम डाउनरेगुलेशन दिखाया।

एक करने के लिए क्रॉस सहिष्णुताजैविक और जैविक तनाव कई जैव रासायनिक रास्ते में शामिल विभिन्न जीनों की सक्रियता के द्वारा प्रदान की जाती है। RRTF1 प्रतिलेखन कारक इन रास्ते 15,31 के जीन की अभिव्यक्ति के synergistic सह सक्रियण की सुविधा, और संभवतः ऑक्सीडेटिव तनाव 32 में शामिल किया जा सकता है। ऑक्सीजन सफाई कम हो जाता है, इसलिए जब RRTF1 की अपरेगुलेशन उम्मीद है। जड़ सफाई एंजाइमों की डाउनरेगुलेशन वृद्धि हुई ऑक्सीडेटिव तनाव के जवाब में कार्य करता है जो RRTF1 की अपरेगुलेशन, साथ संबद्ध है। CAT3, APX1 और TAPX के नाटकीय जड़ डाउनरेगुलेशन FSD1 की डाउनरेगुलेशन द्वारा सुपरऑक्साइड आयनों dismutate करने के लिए कम क्षमता के साथ है जो एच 2 ओ 2, मांजना जड़ कोशिकाओं की कम क्षमता इंगित करता है। ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रियाओं उलट GMF धारणा के मुख्य स्थल होना दिखाई देते हैं जो जड़ों में अधिक है।


चित्रा 1. geomagnetic क्षेत्र मुआवजा प्रणाली। (तीन सीधा कुल्हाड़ियों से प्रत्येक के लिए अष्टकोणीय कॉयल की एक जोड़ी शामिल) (ए) त्रिअक्षीय कॉयल geomagnetic क्षेत्र वेक्टर रिवर्स करने के लिए प्रयोग किया जाता है। (बी) एक कंप्यूटर नियंत्रित बिजली की आपूर्ति हेल्महोल्ट्ज़ कॉयल के प्रत्येक जोड़ी से जुड़ा है। (इन आंकड़ों में voltages मनमानी कर रहे हैं) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा एराबिडोप्सिस आकृति विज्ञान पर geomagnetic क्षेत्र पलटने की 2. प्रभाव। जोखिम, नियंत्रण पौधों के दस दिनों के बाद (सामान्य, GMF स्थिति से अवगत कराया उन यानी) एक काफी बड़ा जड़ लंबाई और अधिक expan दिखानेदेद पत्रक उलट GMF की स्थिति से अवगत कराया गया है कि पौधों की तुलना में। मीट्रिक बार = 18 मिमी। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा एराबिडोप्सिस जीन अभिव्यक्ति पर geomagnetic क्षेत्र उत्क्रमण के 3. प्रभाव। जोखिम के दस दिनों के बाद, नियंत्रण और इलाज के पौधों की कुल शाही सेना निकाला गया था और अभिव्यक्ति के विश्लेषण के लिए वास्तविक समय पीसीआर से विश्लेषण किया। । COTP1, कॉपर परिवहन Protein1; RRTF1, रिडॉक्स उत्तरदायी ट्रांसक्रिप्शन Factor1 GMF के पलटने के प्रभाव CRU3, Cruciferin 3 का परीक्षण किया गया है कि सभी जीनों के जीन की अभिव्यक्ति में एक कठोर परिवर्तन के लिए प्रेरित करने के लिए किया गया था। सलाखों के मानक त्रुटि का संकेत; तारक पी एल के बीच महत्वपूर्ण (पी <0.05) मतभेदों को इंगित करता हैउलट और सामान्य GMF स्थिति से अवगत कराया चींटियों। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा एराबिडोप्सिस एंटीऑक्सीडेंट से संबंधित जीन अभिव्यक्ति पर geomagnetic क्षेत्र पलटने की 4. प्रभाव। जोखिम के दस दिनों के बाद, नियंत्रण और इलाज के पौधों की कुल शाही सेना अलग है और वास्तविक समय पीसीआर का उपयोग जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए कार्यरत हैं। GMF के पलटने का असर शूट जीन अभिव्यक्ति में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन के लिए प्रेरित करने के लिए किया गया था; हालांकि, एक कठोर डाउनरेगुलेशन उलट GMF परिस्थितियों में विकसित पौधों की जड़ जीन अभिव्यक्ति में मनाया गया TAPX, Thylakoidal एस्कोर्बेट Peroxidase;। APX1, एस्कोर्बेट Peroxidase1; FSD1, फे Superoxide Dismutase1; RbohD, एनए। DPH / श्वसन फट ओक्सीडेस प्रोटीन डी सलाखों के मानक त्रुटि का संकेत; तारों के उलट और सामान्य GMF स्थिति से अवगत कराया पौधों के बीच महत्वपूर्ण (पी <0.05) मतभेद इंगित करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा एराबिडोप्सिस Catalase 3 (CAT3) जीन अभिव्यक्ति पर geomagnetic क्षेत्र पलटने की 5. प्रभाव। जोखिम के दस दिनों के बाद, नियंत्रण और इलाज के पौधों की कुल शाही सेना अलग है और वास्तविक समय पीसीआर का उपयोग जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए कार्यरत हैं। GMF के पलटने का असर शूट जीन अभिव्यक्ति में कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन के लिए प्रेरित करने के लिए किया गया था; हालांकि, एक कठोर डाउनरेगुलेशन उलट GMF परिस्थितियों में विकसित पौधों की जड़ जीन अभिव्यक्ति में मनाया गया। सलाखों के मानक त्रुटि का संकेतआर; तारों के उलट और सामान्य GMF स्थिति से अवगत कराया पौधों के बीच महत्वपूर्ण (पी <0.05) मतभेद इंगित करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

हमने हाल ही में एक अद्भुत सह-संबंध GMF reversals और पारिवारिक जाने वाली आवृत्तबीजी प्रजातियों में से अधिकांश के मोड़ 2 हुआ जब समय के बीच मौजूद है कि पता चला है। हालांकि, GMF उलट खुद को संयंत्र जीन अभिव्यक्ति और आकृति विज्ञान में महत्वपूर्ण परिवर्तन उत्पन्न हो सकता है कि उत्तेजक परिकल्पना और विविध GMF तीव्रता के प्रभाव पर अध्ययन की अधिकता, धारणा के बावजूद प्रदर्शन किया गया कभी नहीं किया है। यहाँ हम पहली बार के लिए हमारी प्रयोगशाला में GMF रिवर्स करने के लिए एक त्रिअक्षीय अष्टकोणीय हेल्महोल्त्ज़ कुंडली का उपयोग करता है, और परिवेश के चुंबकीय क्षेत्र के उलट प्ररूपी परिवर्तन और पौधों में जीन की अभिव्यक्ति के मॉडुलन पैदा कर सकता है कि एक विधि दिखा।

संयंत्र के विकास के प्रयोगों (2 एक्स 2 एक्स 2 एम 3) के लिए पर्याप्त मात्रा अधिक GMF उलट (या संशोधन) प्राप्त करने के लिए, हम एक अष्टकोणीय हेल्महोल्त्ज़ कुंडली प्रणाली का निर्माण किया। इस प्रणाली (आमतौर पर हेल्महोल्ट्ज़ कॉयल अंगूठी के आकार और छोटे होते हैं) व्यावसायिक रूप से उपलब्ध नहीं हैऔर निर्माण के लिए लागत काफी थे। महत्वपूर्ण बात है, इस प्रणाली के संशोधित चुंबकीय क्षेत्र में असाधारण समय-स्थिरता और एकरूपता के साथ मजबूत क्षेत्र संशोधन, बचाता है।

प्रणाली सामान्य स्थिति की एक हजार वें GMF के मूल्य को कम करने के लिए या चुंबकीय क्षेत्र के तीन आयामों में से किसी को उल्टा करने के लिए बनाया गया है और बनाया गया है। हालांकि, कॉयल के डिजाइन एक उच्च चुंबकीय क्षेत्र ताकत उत्पन्न करने के लिए अनुमति नहीं है। इसलिए, मौजूदा स्वरूप में इस यंत्र पौधों या अन्य जीवों पर उच्च चुंबकीय क्षेत्र ताकत के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए डिजाइन प्रयोगों के लिए उपयुक्त नहीं है।

प्रयोगशाला में, इस विधि में वर्णित उन लोगों के लिए इसी तरह GMF के परिवर्तन चुंबकीय क्षेत्र विचलित और धातु के भीतर ही उन्हें ध्यान केंद्रित है, जो उच्च चुंबकीय पारगम्यता के साथ लौह धातु प्लेटें, द्वारा प्रायोगिक क्षेत्र के आसपास के द्वारा परिरक्षण सहित विभिन्न तरीकों से प्राप्त किया गया है। गुहेल्महोल्ट्ज़ कॉयल का उपयोग कर के ई लाभ प्रणाली इस प्रकार यह न केवल इन विट्रो अध्ययन के लिए (पेट्री डिश के उपयोग के साथ) के रूप में आदर्श है, लेकिन यह भी कर रही है, पौधों और अधिक प्राकृतिक परिस्थितियों (प्रकाश, हवा परिसंचरण, आदि) को उजागर करने की अनुमति देता है इन विवो पौधों की वृद्धि और विकास के प्रयोगों के लिए। हमारी प्रणाली के आयाम इस प्रकार कई पेट्री प्लेटों या कुछ छोटे मेजबानी करने के लिए अनुमति देता है, (चित्रा 1 ए देखें) एक 25 x 25 x 25 सेमी 3 गोलाकार मात्रा में प्राकृतिक GMF की <1/1000 अप करने के लिए एक दमन की अनुमति देता है कि एक जगह बनाने पौधों की वृद्धि के लिए बर्तन।

यहाँ प्रस्तुत विधि संयंत्र जीव विज्ञान के अध्ययन के लिए लागू किया गया है; हालांकि, इस प्रणाली विषाणु विज्ञान और सूक्ष्म जीव विज्ञान सहित प्रयोग की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए अनुमति देता है, साथ ही नेमाटोड (जैसे, Caenorhabditis एलिगेंस), arthropods और (चूहों और चूहों सहित) छोटे जानवरों पर अध्ययन करता है। इसलिए, परिकल्पना का परीक्षण GMF की कि उलट सक्षम हैरूपात्मक और ट्रांसक्रिप्शनल परिवर्तन भी शायद अंत में भी मानव कोशिकाओं के लिए, कई अन्य रहने वाले सिस्टम के लिए बढ़ाया जा सकता है, प्रेरित करने के लिए।

GMF लगातार बदल रहा है और अस्थिर है। इसलिए, हमारे प्रयोगों में एक बड़ी चुनौती वांछित नई GMF मूल्यों को प्राप्त करने के क्रम में GMF की एक निरंतर मुआवजा प्रदान करना है। यह केवल magnetometer मूल्यों और वोल्टेज मुआवजे के पढ़ने के माध्यम से चुंबकीय क्षेत्र मूल्यों का एक सतत नियंत्रण के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है। इसलिए, सिस्टम GMF का धीरे-धीरे बदलती हिस्सा क्षतिपूर्ति कर सकते हैं, लेकिन यह उच्च आवृत्ति उतार चढ़ाव के लिए कुछ भी नहीं है।

अंत में, GMF वेक्टर रिवर्स करने के लिए त्रिअक्षीय कॉयल के उपयोग GMF वेक्टर के इस उलट संयंत्र रूपात्मक परिवर्तन और अंतर जीन अभिव्यक्ति के लिए प्रेरित करने में सक्षम है कि प्रदर्शन करने के लिए महत्वपूर्ण भूमिका निभाई थी। प्रस्तुत विधि के साथ प्राप्त परिणामों परिकल्पना कि GMF पुन के समर्थन में एक सम्मोहक सबूत प्रदानversals भूवैज्ञानिक timescales पर 2 संयंत्र विकास के लिए ड्राइविंग बलों में से एक हो सकता है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Three-axis magnetometer Bartington  Mag-03MC triaxial fluxgate magnetometer
Magnetometer power supply Bartington  Mag-03PSU triaxial fluxgate magnetometer
Magnetometer software Bartington  Mag03DAM triaxial fluxgate magnetometer
DC power supply  Agilent Technologies E3642A
Calcium hypochlorite  Sigma 211389
Triton X-100  Sigma X100 
Ethanol  Sigma 2860
GroLux Sodium vapor lamps  OSRAM Sylvania 600W
RNeasy Plant RNA kit  Qiagen 74903
RNase-Free DNase  Qiagen 79254
Agilent 2100 Bioanalyzer Agilent Technologies G2938B
NanoDrop ND-1000  Thermo Fisher Scientific not available
High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit  Applied Biosystems 4368813
Mx3000P Agilent Technologies 401512
2x MaximaTM SYBR Green qPCR Master Mix  Fermentas International, Inc K0221
Parafilm Sigma P7793-1EA
Murashige and Skoog Basal Medium Sigma M5519 
Petri dish square (120 x120 mm2) Sigma Z692344 

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References

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विकास जीवविज्ञान अंक 105 geomagnetic क्षेत्र, संयंत्र विकास जीन अभिव्यक्ति एंटीऑक्सीडेंट जीन चुंबकीय क्षेत्र उलट त्रिअक्षीय हेल्महोल्ट्ज़ कॉयल
Geomagnetic क्षेत्र (GMF) और संयंत्र विकास: GMF उत्क्रमण के प्रभाव पर जांच<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; विकास और जीन एक्सप्रेशन
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Bertea, C. M., Narayana, R.,… More

Bertea, C. M., Narayana, R., Agliassa, C., Rodgers, C. T., Maffei, M. E. Geomagnetic Field (Gmf) and Plant Evolution: Investigating the Effects of Gmf Reversal on Arabidopsis thaliana Development and Gene Expression. J. Vis. Exp. (105), e53286, doi:10.3791/53286 (2015).

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