Protocol
注：使用する前に、関連するすべての物質安全データシート（MSDS）を参照してください。塩化水銀は有毒化学物質です。それと関連するすべてのソリューションを渡す際に個人用保護具（手袋、安全ゴーグル、および白衣）を着用しなければなりません。重金属のために指定された明確に表示化学廃液ボトル内のソリューションを処分。
5 mMの脱気したギ酸アンモニウム緩衝液（pH7.5）の調製
- HPLCグレードの水450ミリリットルにギ酸アンモニウム緩衝液の0.1576グラムを溶解します。 1 Mギ酸および7.5から1 M水酸化アンモニウムで上記溶液のpHを調整します。 500ミリリットルのメスフラスコに、このソリューションを移し、5 mMのギ酸アンモニウム溶液を作製するために検量線にHPLC水を追加します。
- アルゴンで10分間パージするための真空システムの下で5 mMのギ酸アンモニウム緩衝液を脱気。アルゴン下で二回繰り返して、ストア・ソリューション。使用の日に、血友病0.2ミクロンフィルターを通して緩衝液をフィルタE使用。
水銀（II）塩化物溶液の調製
- 0.2375グラムの水銀（II）塩化物を秤量。 0.035 M水銀（II）塩化物溶液を生成するために5mMのギ酸アンモニウム緩衝液25ml中に溶解します。
- 7.5×10 -4 Mのソリューションを作成するために、9.785ミリリットルの5mMのギ酸アンモニウムバッファーに0.214ミリリットル0.035 M水銀（II）塩化物溶液を追加します。アルゴンガスを7.5×10 -4 Mの水銀（II）溶液をブランケット。
CGGCストック溶液の調製
- HPLCグレードのアセトニトリルの0.118ミリリットルで、dicysteinylテトラペプチド、CGGC 2.0mgのを溶解した後、5 mMのギ酸アンモニウム、5mMのCGGC原液を得アルゴンで脱気されたpHが7.5の緩衝液1.0647ミリリットルを追加します。
- 7.5×10 -4 M CGGC溶液を得5mMのアンモニウム形成のpHの1,275μlの7.5バッファに5 mMのCGGC原液の225μLを加えます。
4.準備水銀（II）とCGGCの種々の反応混合物
- 水銀の0.5比（II）：CGGC液1の調製
- 1.5mlの微小管に5 mMのギ酸アンモニウム、pH7.5の緩衝液を255μLを入れます。ギ酸アンモニウム緩衝液1.5 mlマイクロチューブに7.5×10 -4 Mの水銀（II）塩化物溶液の30μlのを追加します。
- 10秒のためのソリューションをVORTEX。その後、1.5mlの微小に7.5×10 -4 M CGGC溶液を15μlを添加します。 10秒のためのソリューションをVORTEX。ソリューションは、質量分析計に注入前に10分間放置してみましょう。
- 水銀の1の比率（II）：CGGC液1の調製
- 1.5mlの微小管に5 mMのギ酸アンモニウム、pH7.5の緩衝液を240μLを入れます。ギ酸アンモニウム緩衝液1.5 mlマイクロチューブに7.5×10 -4 Mの水銀（II）塩化物溶液の30μlのを追加します。
- 10秒のためのソリューションをVORTEX。そして、1.5ミリリットルマイクロ遠心チューブに7.5×10 -4 M CGGC溶液を30μlを添加します。 4.1節で説明したと同様に繰り返します。
- 水銀の2比（II）：CGGC液1の調製
- 1.5mlの微小管に5 mMのギ酸アンモニウム、pH7.5の緩衝液を210μLを入れます。ギ酸アンモニウム緩衝液1.5 mlマイクロチューブに7.5×10 -4 Mの水銀（II）塩化物溶液の30μlのを追加します。
- 10秒のためのソリューションをVORTEX。その後、1.5mlの微小管に7.5×10 -4 M CGGC溶液を60μlを添加します。 4.1節で説明したと同様に繰り返します。
CEEC原液の5準備
- ペプチドを溶解させ、HPLCグレードのアセトニトリルの0.145ミリリットルで、dicysteinylテトラペプチド、CEECの3.5 mgの溶解。その後5mMのギ酸アンモニウム、0.5メートルを生成するためにアルゴンで脱ガスされたpHが7.5の緩衝液13.067ミリリットルを加えますM CEECソリューション。
- すべてのペプチドが溶解するまで溶液をボルテックス。 7.5×10 -5 M CEEC溶液を得、1.5 mlのマイクロ遠心チューブに、1.125ミリリットル0.5 mMのをpH7.5のバッファーをCEEC液および5mMのギ酸アンモニウムの0.375ミリリットルを追加します。ボルテックス混合されるまで。
水銀（II）とCEECソリューションの様々な反応混合物の調製6。
- 1の調製：水銀（II）の比は0.5：CEEC溶液
- 1.5mlの微小管に5 mMのギ酸アンモニウム、pH7.5の緩衝液を255μLを入れます。ギ酸アンモニウム緩衝液1.5 mlマイクロチューブに7.5×10 -4 Mの水銀（II）塩化物溶液の30μlのを追加します。
- 10秒のためのソリューションをVORTEX。その後、1.5mlの微小管に7.5×10 -4 M CEEC溶液を15μlを添加します。 4.1節で説明したと同様に繰り返します。
- 水銀（II）の1：1の比：1の調製CEECソリューション
- 240を配置81; 1.5ミリリットルマイクロ遠心チューブに5 mMのギ酸アンモニウム、pH7.5の緩衝液のリットル。ギ酸アンモニウム緩衝液1.5 mlマイクロチューブに7.5×10 -4 Mの水銀（II）塩化物溶液の30μlのを追加します。
- 10秒のためのソリューションをVORTEX。その後、1.5mlの微小管に7.5×10 -4 M CEEC溶液を30μlを添加します。 4.1節で説明したと同様に繰り返します。
- 水銀（II）の2比：1の調製CEECソリューション
- 1.5mlの微小管に5 mMのギ酸アンモニウム、pH7.5の緩衝液を210μLを入れます。ギ酸アンモニウム緩衝液1.5 mlマイクロチューブに7.5×10 -4 Mの水銀（II）塩化物溶液の30μlのを追加します。
- 10秒のためのソリューションをVORTEX。その後、1.5mlの微小管に7.5×10 -4 M CEEC溶液を60μlを添加します。 4.1節で説明したと同様に繰り返します。
7. ANALYオービトラップESI質量分析による水銀（II）とCGGCサンプルの反応混合物をシュッ
- ESI質量分析計16の準備
- 500μlのガラスシリンジに校正標準の100μLを描画します。
- 、MSポンプのシリンジクレードルに注射器を置き、チューブを取り付け、質量分光光度計の中に注入します。
- ファイルのアイコンを選択し、ファイル名を入力して実行するためのファイル名を設定します。
- データ取得モジュールで取得するデータボタンを選択し、150スキャンを収集します。
- ソフトウェアのデータ処理モジュールを開くことによって、較正基準を検証するクロマトグラムを分析します。モジュールを開き、メニューをファイルに移動して、「オープン」を選択し、ダイアログボックスでファイルを選択します。クロマトグラムのピークが基準の比率を質量電荷に相関していることを確認します。
- 500μlのHPLCグレードのメタノールを描画することにより500μlのガラスシリンジをきれいにして、Mを分配ビーカーにエタノール。
- ガラスシリンジにHPLCグレードのメタノール500μlのを描画し、ステップ7.1.2のとおりにシステムをフラッシュします。
- パラメータを設定するためのソフトウェアの方法のセットアップ・モジュールを選択します。スキャンモードメニューを選択し、FTMSなどの分析器を特定し、「OK」をクリックしてください。シースガス流量：10、ソース温度：0、キャピラリー電圧：37 V、チューブレンズ：95 V、スプレー電圧：4.20 kVのその後のリアルタイムビュースペクトルページのさまざまなアイコンをクリックすることで、以下のパラメータを設定します、フローは10.00μL/ minで、アナライザを評価：FTMS、スキャン数：150。
- ESI質量分析計でCGGCサンプルを実行します
- 5 mMのギ酸アンモニウムpH7.5のバッファーを実行します。
- 、500μlのガラスシリンジに5 mMのギ酸アンモニウム緩衝液500μlを置き、MSポンプのシリンジクレードルにそれを置き、チューブを取り付けます。
- 1-2分間チューブを介してバッファを実行します。
- ランのファイル名を設定しますファイルのアイコンを選択し、ファイル名を入力して。
- モジュール内の取得データ]ボタンを選択し、150スキャンを収集します。
- 150スキャンを収集した後に収集を停止するには[実行]ボタンをクリックします。
- データブラウザモジュールを開き、メニューをファイルに移動して、「オープン」を選択し、ダイアログボックスでファイルを選択します。ペプチドまたは水銀（II） - ペプチド複合体に似ていることに何の483、683、1163および1363のピークのm / zが存在しないことを確認します。
- 0.5水銀（II）：CGGC比液1を実行します。
- 0.5水銀（II）：注射器への試料のCGGC比1の250μLを入れます。
- チューブ、および素数装置を取り付け、MSポンプのシリンジクレードルに注射器を置きます。
- ファイルのアイコンを選択し、ファイル名を入力して実行するためのファイル名を選択します。
- データ取得モジュールで取得するデータボタンを押して、150スキャンを収集し、収集を停止するには[実行]ボタンをクリックします。
- モジュールを開き、メニューをファイルに移動して、「オープン」を選択し、ダイアログボックスでファイルを選択します。クロマトグラムは、単独でCGGCペプチドのための1つを含むピークが含まれていることを確認します。
- 500μlのギ酸アンモニウム緩衝液で吸引した後、ビーカーにギ酸アンモニウムバッファーを分配することによって、注射器を洗浄します。
- MSの廃棄物のボタンを選択し、チューブに500μlのギ酸アンモニウム緩衝液で3回洗浄します。
- 500μlのメタノールで吸引した後、ビーカーにメタノールを分配することによって、注射器を洗浄します。
- 500μlのメタノールでチューブ1時間をフラッシュします。
- MSの負荷検出器のボタンを選択します。
- シリンジにギ酸アンモニウム緩衝液500μlを追加します。
- チューブ、および素数装置を取り付け、MSポンプのシリンジクレードルに注射器を置きます。
- ファイルのアイコンを選択し、ファイル名を入力して実行し、バッファのファイル名を選択します。
- 押す取得データボタンと150スキャンを収集した後、停止実行ボタンをクリックします。
- データブラウザモジュールを開き、メニューをファイルに移動して、「オープン」を選択し、ダイアログボックスでファイルを選択します。 CGGCラン：クロマトグラムは、前水銀からのピークの空隙であることを確認します。
- 1水銀（II）：CGGC比液1を実行します。
- シリンジにCGGC比サンプル：1の水銀（II）：1の250μLを入れます。
- 7.2.2.15までの流れ7.2.2.2で説明したように、同様に繰り返します。
- 2水銀（II）：CGGC比液1を実行します。
- シリンジにCGGC濃度サンプル：2水銀（II）：1の250μLを入れます。
- 7.2.2.15までの流れ7.2.2.2で説明したように、同様に繰り返します。
- 5 mMのギ酸アンモニウムpH7.5のバッファーを実行します。
8.オービトラップESI質量分析法による水銀およびCEECサンプルの反応混合物の分析
- ESI質量分析計でCEECサンプルを実行します
- 繰り返し分析手順（ステップ7.1〜7.2）CEECサンプルや様々な化学量論比での水銀（II）とCEECの反応混合物を使用。
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Representative Results
研究は、ESI質量分析により2テ トラペプチド、CGGC及びCEEC（ 図1）のための可能な水銀-ペプチド複合体組成物を特徴づけるために実施しました。 1：0.5、1：1、及び1：2（水銀（II）：ペプチド）CGGCまたはCEECと水銀の複合体（II）は、三つの異なるモル比での水銀の混合物（II）とペプチド溶液を反応させて調べました。水銀の濃度（II）が7.5×10 -6 Mとに応じて変化させるペプチド濃度でした。
図1. Dicysteinylペプチド構造。dicysteinylテトラペプチドの化学構造、CGGCとCEEC。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図2 水銀のESI MS（II）及びギ酸アンモニウム緩衝液、変化するのHg 2+を含有する pH7.5の中で7.5×10 -6 MのHg 2+を含有する溶液からCGGCエレクトロスプレーイオン化オービトラップ質量スペクトル：CGGC化学量論比：（ ）1：0.5の比、（B）1：1の比、及び（C）1：2の比率。挿入図は指示された水銀ペプチド複合体の水銀同位体パターンを示す。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図3 ESI水銀のMS（II）およびCEEC。からのエレクトロスプレーイオン化質量スペクトルオービトラップCEEC化学量論比：（A）1：0.5の比、（B）1：1の比、及び（C 1）ギ酸アンモニウム緩衝液、変化するのHg 2+を含有する pH7.5の中で7.5×10 -6 MのHg 2+を含有する溶液 ：2の比率。挿入図は指示された水銀ペプチド複合体の水銀同位体パターンを示す。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
エレクトロスプレーイオン化オービトラップ質量クロマトグラムは、（II）の化学量論比ペプチドに様々な水銀でCGGC（ 図2）とCEECと水銀（II）錯体（ 図3）のために収集した（1：0.5、1：1と1：2）。観察された水銀 - ペプチド複合体のタイプは複合体中の水銀イオンの数ならびにDEPROの数を決定するために使用される別個の水銀同位体ピーク（インセット）を示しますtonations。例えば、 図1bの挿入図は、水銀の7つの天然に存在する同位体に対応するペプチド-水銀付加物、中の水銀同位体の署名を示しています：196のHg（0.146パーセント）、198のHg（10.02パーセント）、199のHg（16.84パーセント）カッコ内はパーセント天然の存在量と、200のHg（23.13パーセント）、201のHg（13.22パーセント）、202のHg（29.80パーセント）、204のHg（6.85パーセント）、。 3：二つの主要な同位体200 Hgのと202のHgは2.3の個別の相対強度比を示します。したがって、この1水銀同位体クラスターの最も強烈な同位体ピークは、付加物（のm / z = 539）のためのモノアイソトピック質量を構成しています。これは、[（CGGC-2H +水銀）+ H] +付加物を形成するために2つのシステインチオールの脱プロトン化によって形成される二配位複合体と相関します。これは次のように分析が行われます。
[（CGGC-2H +水銀）+ H] +のためのm / z値はEQUです（ - 2 + 202 1 338）= 539にアル。
図1Aの挿入図は、[（2CGGC-4H + 2HG）+ H] +（ 図4）のためのChemCalプログラムを用いて計算した二水銀複合体に対応するペプチド水銀付加物、水銀同位体の署名を示しています。理論上のプロトン化されたモノアイソトピック質量を計算同位体クラスター内の第九の同位体ピークである、1077.061のm / z値に対応する。 図1（a）挿入図はまた、第九のピークである1077.1のm / z値に対応する同位体ピークを示し、観察された同位体クラスターインチしたがって、この同位体クラスタの元の付加物は、[（2CGGC-4H + 2HG）+ H] +のために割り当てることができます。
図4.理論的同位体パターン[（2CGGC-4H + 2HG）+ H] + [（2CGGC-4H + 2HG）+ H] +の理論的な同位体パターンChemCalプログラムを使用して計算されます。矢印は、モノアイソトピックピークを示している。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図5.カチオン化付加物である。水銀-ペプチド複合体に関連するいくつかのカチオン化ナトリウム、カリウム付加物である。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図5は CGGCによって形成された水銀-ペプチド複合体に関連するいくつかのカチオン化ナトリウムやカリウム付加物を示しています。ナトリウムイオン付加付加物が22質量単位大きいトンですハンカリウム付加物を38質量単位大きいであり、一方、プロトン化された水銀CGGC複合体に対応します。支配的なプロトン化CGGCダイマー（のm / z = 677）はまた、ナトリウム（のm / z = 699）とカリウムイオン（のm / z = 715）とカチオン種を形成しています。これはさらに、プロトン化又はカチオン化付加物のための2つの質量単位の減少をもたらしたであろうジスルフィドを形成するシステインのチオール基の酸化、なしCGGC二量体の形成を確認します。
図6は 、水銀-ペプチドイオン[（CEEC-4H + 2HG）+ H]に関連付けられた重複ピークを1と2の電荷状態を重複 + 1と2の電荷状態にある。 拡大版を表示するには、こちらをクリックしてくださいこの図の。
[（CEEC-4H + 2HG）+ H] +。[（CEEC-4H + 2HG）+ H]の理論的な同位体パターンについては、図7の理論的同位体パターンは、+ ChemCalプログラムを使用して計算されます。矢印は、モノアイソトピックピークを示している。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
1と2担当水銀CEEC付加物に関連するピークを重ね6に示す図 。それはのために計算されたように、2つの水銀錯体と一致している水銀-ペプチドイオン[（CEEC-4H + 2HG）+ H]で+ 1電荷および883これのm / z値に関連付けられている同位体ピークを示します[（CEEC-4H + 2HG）+ H] ChemCalプログラム（ 図7）を使用して +。理論上のプロトン化モノアイソトピック質量は883.032のm / z値に対応しています。
883.03のモノアイソトピックピークと上記観察[（CEEC-4H + 2HG）+ H] +付加物はさらに0.5質量単位を示す対応するピークを含む別の付加物と重なっています。オービトラップ質量分析器によって達成非常に高い解像度で、これらの重なり合うピークは+2の電荷を有する付加体に対応すると仮定することができます。したがって、以下のように、重複する複合体はイオン化されたモノアイソトピック質量を計算することができる。 図8の同位体ピーク間のm / z差は0.5であり、それらの間の質量差は1原子質量単位であることを示しています。したがって、充電状態が+2です。水銀 - ペプチド複合体の質量を計算するために、モノアイソトピックピークについてのm / zは荷電状態で乗算し、正に荷電した錯イオンを行った2つのプロトンの質量から減算されます。
2付加物のための計算：
同位体ピーク間のm / zの差は 0.5であります
同位体ピーク間の質量差がある1 AMU（1中性子）
0.5 = 2により、Z = 1分周
プロトン化されたモノアイソトピックピークのためのm / zが （883.53×2）である- 2 = 1765.06
プロトン化されたモノアイソトピックピーク、[（2CEEC-8H + 4HG）+ H] +、上記のm / z値は1765.056（ 図8）としてChemCalプログラムにより計算された理論値と一致しています。
図8。 理論ChemCalプログラムを用いて計算した[（2CEEC-8H + 4HG）+ H] +。[（2CEEC-8H + 4HG）+ H]の理論的な同位体パターン+ための同位体パターン。矢印は、モノアイソトピックピークを示している。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
ESIオービトラップ質量分析計で水銀ペプチド複合体を分析することの利点は、上記のように、すべてのイオンの電荷が容易に割り当てることができるということです。基本的なアミノ末端を含むペプチドは、容易に正電荷を安定化させることができます。エレクトロスプレーイオン化や、オービトラップのような高分解能質量分析計を使用する場合は、より大きな+1電荷を有するペプチドイオンの電荷状態は、イオントラップ質量分析器、より低い解像度と比較してより容易に決定することができます。
図3A および図6）に関連付けられた重複ピークは、また、タンデムMSによって分析しました。これは、得られた信号は、上述のように期待される化合物に属し、水銀対ペプチド比のより高い濃度で形成されたアーティファクトをクラスタ化されていないことが示され、任意のMS-MSフラグメンテーションを示さありませんでした。
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Discussion
疎水dicysteinylテトラペプチドCGGC（C 10 H 18 N 4 O 5 S 2; = 338 MW）は、図2 及び表1に示すように（ 図1）は 、水銀（II）と複合体を形成しさらに、ペプチド二量体および三量体を形成します。増分反応混合物中のペプチドの量が増加します。 [+ = 1015（3M + H）]のm / z関連する二量体の値[（2M + H）+ = 677]とトリマーによって示されるように、CGGCのチオール基は、実験条件下でジスルフィドを形成するために酸化されませんでした。これらの関連CGGC種の形成は、このテトラペプチドの疎水性によるものである可能性があります。以前dicysteinylトリペプチド7について報告されているように2水銀（II）:(ペプチド）2錯体：1水銀（II）：ペプチド1 CGGC水銀が1に対応する錯体の2つのタイプを形成します。しかし、過剰なまたは同等の水銀（II）の存在下で、それはまた、FORMS 2：2 [水銀（II）] 2（ペプチド）2錯体。
CEECテトラカルボキシル化dicysteinyl（C 16 H 26 N 4 O 9 S 2; MW = 482）水銀と（ 図1）複合体を形成する（II） 図3 および表1に示すように、それは容易にはとしてCEEC二量体を形成しませんでした。それは、より疎水性CGGCのために観察します。 1水銀（II）：ペプチドと1：2の水銀（II）:(ペプチド）2錯体CGGCに匹敵する、それは水銀が1に対応する複合体を形成します。 2 [水銀（II）] 2：（ペプチド）より容易に2複雑なしかし、補助カルボキシレート基とは、2を形成します。 1 [水銀（II）] 2：ペプチド複合体と4：2 [水銀（II）] 4：CGGCについて観察されなかった（ペプチド）2ペプチド複合体、また、過剰な水銀では、2を形成します。
複合fに対する観測信号の概要ormed m / z値を表1に示すとおりです。
表 水銀ペプチド複合信号の 1 概要。ギ酸アンモニウム緩衝液、pH 7.5でLTQ /オービトラップMSクロマトグラム中の水銀ペプチド複合体信号。
ペプチドなどdicysteinylテトラペプチド補助結合基の存在：私たちは、水銀（II）と2つのdicysteinylのテトラペプチドの反応は水銀（II）の初期比に依存している複合体を形成することを明らかにしました。また、指定されたエレクトロスプレーイオン化条件下で形成された複合体中の水銀およびペプチドの正確な化学量論は、異なる水銀同位体分布パターンに基づいて、高分解能ESI質量分析法を用いて決定することができます。
システイニルPEPTを反応させるには水銀（II）とのIDEは、注意がジスルフィド結合を形成するシステインのチオール基の酸化を防ぐために注意しなければなりません。記載されたプロトコル内で、緩衝液を慎重に脱気し、アルゴン下で保存しました。また、全ての反応サンプルを、ESI質量分析による分析の直前に調製されます。
2テトラペプチド、CEECとCGGC間の溶解度の違いに起因して、種々の濃度のストック溶液を調製しました。 CGGCペプチドの冷凍ストックをアセトニトリルで湿潤させ、容易に7.5×10 -4 M CGGC溶液を生成するために5mMのギ酸アンモニウム緩衝液（pH7.5）に続いて溶解させました。 CEECは、低濃度で調製した7.5×10 -5 M、水銀の前（II）：、その低い溶解性のペプチド反応混合工程。水銀を分析するための最適な希釈（II）錯体があるため、ペプチドおよび可能にする溶解度を10 -5 Mであるとみなされました質量分析計内の残留物の除去のため。 CGGCソリューションとの契約では、CEEC残基は、時折、チューブの交換が必要チューブに付着。
水銀ペプチド複合体の分析のためのESI質量分析法を使用することの重要性は、分析物のそのソフトイオン化です。これは無視でき断片化分子イオンの分析を容易にします。この作業に示すように、署名水銀同位体分布パターンに基づいて、水銀 - ペプチド複合体の化学量論を特徴付けるために使用することができます。しかし、揮発性緩衝系は、ESI質量分析法による分析のために必要です。これは、溶解のために揮発性の低い溶媒または緩衝化媒体を必要とする分析物を同定するための実用的な使用を制限することができます。
我々は以前に7,8述べたように、ESI質量分析は、水銀とPEPTの化学量論の正確な決意のための高感度な分析ツールを提供指定されたエレクトロスプレーイオン化条件の下で水銀 - ペプチド複合体でIDE。しかし、中の複合体の含有量のより正確な決意を提供するために（例えば、1 H、13 C、199 HgのNMR分光法、拡張X線吸収微細構造、または電位差17-18）追加のメソッドを使用する必要があります溶液。
我々は、オービトラップ質量分析器とのESIは、水銀 - ペプチド複合体を分析するために使用され得ることを示しました。我々は、この技術は、他の金属イオンと種々の低分子化合物との複合体の分析に向けて適用することができることを期待します。これは、異なる同位体の形態で存在することができる他の金属イオンによって形成された複合体を分析するために特に有用であろう。
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Acknowledgments
MN-Sは全米科学財団からの支援を承認、RUIは、著者は感謝してサーモフィッシャーサイエンティフィックLTQオービトラップXL質量分析計を使用するためにノースカロライナ大学グリーンズボロ校でトライアド質量分析施設を承認CHE 1011859.を付与します。作者はこの作品に関する有用な提案やコメントのためにノースカロライナ大学グリーンズボロ校でダニエル・トッド、ヴィンセントシーカ、およびBrandie Erhmannに感謝します。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mercury(II) chloride | Sigma-Aldrich | 429724 | Highly toxic |
| Ammonium formate | Sigma-Aldrich | 516961 | |
| Formic acid | Sigma-Aldrich | F0507 | |
| Ammonium hydroxide | Fisher | A512-P500 | |
| HPLC water | Fisher | W5-4 | |
| HPLC Acetonitrile | Fisher | BP2405-1 | |
| HPLC Methanol | Fisher | A452-4 |
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