Summary
I modelli attuali in vitro per valutare le lenti a contatto (CLS) e altre applicazioni oculari legate sono molto limitate. La piattaforma oculare presentato simula il flusso fisiologico lacrimale, volume lacrimale, l'esposizione all'aria e l'usura meccanica. Questo sistema è molto versatile e può essere applicato a varie analisi in vitro con CL.
Introduction
Due significative aree di interesse all'interno dell'arena di lenti a contatto (CL) comprendono il disagio e lo sviluppo di applicazioni innovative CL. Chiarire i meccanismi alla base CL disagio è un problema che ha eluso il campo per decenni. 8 Lo sviluppo del romanzo, CL funzionali, come i dispositivi di consegna di droga 1,3,9 e biosensori, 10-12 è un'area di crescente interesse, con i mercati potenziali sostanziali. In entrambi i casi, un sofisticato modello in vitro potrebbe fornire informazioni utili per aiutare con la selezione appropriata materiali per lenti o caratteristiche di progettazione durante la fase di sviluppo. Purtroppo, corrente in modelli in vitro per la valutazione CL e altre applicazioni relative oculari sono relativamente grezzo e sofisticato. Tradizionalmente, studi in vitro CL valutare la deposizione di film lacrimale o la consegna di droga sono eseguite in, grandi fiale di volume statiche contenenti un volume di fluido fisso, che Greasupera tly quantità fisiologiche. Inoltre, questo semplice modello manca il componente flusso lacrimale naturale e il riflesso lampeggiante, entrambi i quali sono definendo fattori dell'ambiente oculare.
Lo sviluppo di un fisiologicamente rilevanti "modello" sofisticato, occhio richiederà un approccio multi-disciplinare e richiedono sostanziale validazione vivo. Per queste ragioni, il quadro fondamentale per il nostro modello in vitro occhio è altamente versatile, tale che il modello può essere continuamente migliorata attraverso aggiornamenti e modulazioni futuri. Fino ad oggi, il modello è in grado di simulare volume lacrimale, lacrimazione, usura meccanica e l'esposizione all'aria. Lo scopo è quello di creare un modello in vitro che fornirà risultati significativi, che è predittiva e gratuito per in vivo ed ex vivo osservazioni.
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Protocol
Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in conformità e il rispetto di tutti gli orientamenti pertinenti delineate dalla University of Waterloo del comitato etico ricerca sugli animali. Gli occhi bovini sono generosamente donati da un mattatoio locale.
1. Modello Eye
- Progettazione e produzione di stampi 13
- Progettare modelli occhio secondo le dimensioni medie fisiologiche di occhi umani adulti. 13
- Lasciare uno spazio di 250 micron tra il bulbo oculare ed i pezzi palpebra del modello dell'occhio. Progettare i rispettivi stampi usando software per computer-aided design (CAD).
- Creare un nuovo file o di un file .cad .sldprt con AutoCAD o SolidWorks. Creazione di modelli 3D del globo oculare / palpebra umana. Creare stampi dei modelli e salvare gli stampi come file .stl.
- Importare file .stl in software per la stampante 3D (ad esempio, per makeware replicator2). Specificare i parametri di stampa (posizione, essenzialità, la scala, l'orientamento, la scorrevolezza, ecc 13.
- Salvare il file come file di G-code per stampanti 3D a leggere. Selezionare i materiali come il PLA (acido polilattico), ABS (acrilonitrile butadiene stirene), PC (policarbonato), o una loro combinazione, per stampare gli stampi 13.
- Installare filamento desiderato del materiale di scelta. Importare il file G-code nella stampante 3D da leggere. Stampa lo stampo.
NOTA: In alternativa, produrre stampi oculari utilizzando un computer controllato numerico (CNC) della macchina, se una superficie più liscia sul modello dell'occhio è desiderato. Per la produzione di stampi CNC, materiali per stampi non si limitano più alla plastica termici, ma si estendono a metallo, ceramica e polimeri resistivi, come politetrafluoroetilene. - Aprire l'interfaccia software CNC che è collegato ad un trapano taglio. Costruire stampi 3D in base alla parte anteriore, superiore, laterale e viste prospettiche degli stampi modello bulbo oculare / palpebra precedentemente costruite in interfaccia software di controllo. Selezionare i parametri appropriati per lalavorazione (formato bit, materiale del substrato, spessore del materiale) e procedere al taglio dello stampo.
- Sintesi di Oculari Uso PDMS
- Utilizzando una siringa, misurare 10 ml volume di PDMS (polidimetilsilossano) base e riempire in una provetta da centrifuga 15-50 ml. Aggiungere 10% w / v della soluzione di elastomero in peso totale di PDMS. Con una bacchetta, mescolare bene le soluzioni.
- Versare la soluzione PDMS nel bulbo oculare e la palpebra stampi. Lasciare le PDMS a stabilirsi a RT O / N (o per almeno 12 ore) per avviare la polimerizzazione e per consentire bolle per sciogliere fuori del polimero.
NOTA: assicuratevi che non vi siano bolle rimaste nel PDMS che potrebbe salire o espandere. - Successivamente, mettere gli stampi in forno a 75 ° C (167 ° F) per 1 ora o 150 ° C (302 ° F) per 5 min. Per un gel morbido, lasciare che i PDMS siedono a temperatura ambiente per almeno 48 ore per polimerizzare completamente.
- Mettere i campioni in un congelatore per alcuni minuti; questo si ridurrà le PDMS e semplificarela rimozione dei campioni dagli stampi. Estrarre i oculari dagli stampi usando una spatola sottile.
- Per la consegna della soluzione nello spazio tra il bulbo oculare e pezzi palpebra, collegare un tubo di politetrafluoroetilene 1/16 "x 1/8" con un connettore tubo accoppiatore uguale gamba 1/16 "e fissarlo al pezzo palpebra al foro tubazione .
- Sintesi del bulbo oculare brano nel formato Agarosio
NOTA: Il pezzo bulbo oculare può essere sintetizzato utilizzando altri polimeri quali agarosio. La seguente procedura può anche essere modificato per produrre oculari da una varietà di tipi di agar, come PDA (patata destrosio agar) o SDA (Sabouraud Dextrose agar).- Per produrre un gel 2% (2 g / 100 ml), misura 2 g di agarosio e mescolare con 100 ml di acqua ultrapura. Portare la soluzione ad ebollizione (100 ° C) in modo che l'agarosio si scioglie completamente. Lasciate che la soluzione raffreddare per 5 min.
- Versare la soluzione nello stampo bulbo oculare e lasciare che la soluzione si raffreddi per 30 minuti a temperatura ambiente. Togliere i pezzi bulbo oculare con una spatola. Conservare l'agar bulbo oculare in un -20 ° C freezer per un uso successivo. Per gli studi di microbiologia, sterilizzare gli stampi bulbo oculare in autoclave e / o UV-irradiazione.
- Incorporazione di bovino Cornea su PDMS Eyeball
NOTA:. Questo protocollo è stato adattato da Parekh et al 14- Eseguire la dissezione e incorporazione delle cornee bovini in condizioni sterili sotto una cappa a flusso laminare. Acquisire gli occhi e sezionare lo stesso giorno.
- Ruotare la cappa a flusso su per 10 minuti prima dell'uso e sanificare con il 70% di alcol etanolo. Assicurarsi che tutti i materiali e gli strumenti sono sterili in autoclave a 273 ° F / 133 ° C per 45 minuti, e posizionati non meno di 4 pollici dall'ingresso cappa a flusso.
- Immergere l'occhio bovina in un becher contenente una soluzione di iodio-povidone diluito per 2 min. Lavare l'occhio in un bicchiere contenente tampone fosfato (PBS) pH 7.4. Uso di pinze posto delicatamente l'occhio su una capsula di Petri di vetro, corneale a faccia in su.
- Rimuovere il muscolo e tessuto adiposo in eccesso tagliando in corrispondenza dei punti di fissaggio sclerali con le forbici fine scollamento. Smaltire il tessuto in eccesso in un bicchiere sterile designato per rifiuti di origine animale.
- Utilizzando micro-forbici, rimuovere la congiuntiva dall'occhio. Avvolgere l'occhio con garza sterile, mantenendo una distanza di almeno 1 cm dal limbo.
- Usando un bisturi, incidere la sclera circa 2 mm dalla regione limbus e superficialmente in modo da evitare la penetrazione della coroide sottostante e corpo vitreo. estendere con attenzione l'incisione di 360 ° con un bisturi o forbici dissezione senza deformare la cornea dalla sua curvatura naturale.
- Con pinza sottile, rimuovere la cornea dall'occhio. Utilizzando pinze, rimuovere con attenzione qualsiasi tessuto uveale aderente e risciacquare cornea con PBS.
- Conservare la cornea a 31ºC in un contenitore sterile con la culturamedio (come ad esempio Medium 199) contenente 3% siero fetale bovino per mantenere l'umidità dei tessuti e nutrimento delle cellule.
- Prima della sperimentazione, riposare la cornea asportata sul bulbo oculare PDMS, e fissare i due pezzi insieme con una clip-on specializzato.
2. Blink-piattaforma
- Progettazione e produzione della Blink-platform
NOTA: Il lampeggio piattaforma si compone di tre parti funzionali: modello dell'occhio (descritto nella sezione 1), sistema di ingranaggi e sistema elettronico.- Progettazione e produzione della piattaforma di batter l'utilizzo di CAD e stampa 3D, simile a quella descritta per il modello oculare (punto 1.1). Progettare il sistema di ingranaggi in modo tale che traduce semplice rotazione dei motori nei movimenti laterali e rotativi delle oculari. 15
- Utilizzando il pignone e ingranaggio, tradurre moto di rotazione di un motore passo-passo nel movimento laterale di un pignone, che è collegato ai pezzi palpebra.
- Usando ilsistema di ingranaggi coniugato, amplificare un moto di rotazione da un motore passo-passo in tre (o più) dei moti rotatori per tre diversi pezzi bulbo oculare.
- Allineare i due sistemi di ingranaggi, uno per la palpebra e uno per bulbo oculare, in modo che la distanza tra i due sono costanti. Assemblare il sistema elettronico con un microcontrollore, scudo motore, e due motori.
NOTA: utilizzare due motori passo-passo per fornire i motori di rotazione, che si traduce dal sistema di ingranaggi in un movimento lampeggiante. - Collegare i due motori passo-passo con un sistema costituito da un scudo motore impilati sul microcontrollore. Collegare e configurare i componenti elettronici a lavorare con i prodotti software open source.
- Programmare il sistema per controllare i parametri del motore quali giri al minuto (RPM), numero di round in avanti, il numero di giri a rovescio, e lo stile di svolta.
NOTA: fare riferimento al "file di codice Arduino" supplementare per i dettagli. - Scaricare il software di sistema dal masito nufacturers '.
- Installare il software e aprirlo. Scrivere il codice per il controllo di motori passo passo nella configurazione desiderata. Collegare il sistema con una sorgente per alimentare il sistema elettronico in modo che i motori si muovono nella maniera desiderata come definito dal ricercatore.
NOTA: fare riferimento al "file di codice Arduino" supplementare.
- Montaggio con microfluidica (Artificial strappo Solution)
- Prendere il bulbo oculare sintetizzato e pezzi delle palpebre e li scivolare sui loro corrispondenti clip-on per il modello dell'occhio. Collegare il tubo che si unisce con una siringa e posizionato sulla pompa microfluidica con il pezzo palpebra (sezione 1.2.5). Prova di funzionamento la piattaforma e verificare per il movimento costante.
- Primo il tubo e verificare la presenza di un flusso costante di soluzione di lacrime artificiali (ATS). La ricetta per ATS è stato riportato in precedenza. 16
- spostare manualmente le parti eye-modello insieme in piano, in modo che il bulbo oculare e l'occhiocoperchio sono in contatto. Impostare la portata della pompa microfluidi ai valori desiderati. Impostare portate fisiologici a 1-1,5 ml / min. 17
- Avviare la pompa e gli attuatori per iniziare esperimento. Per gli esperimenti di consegna della droga, posizionare la lente a contatto farmaci contenenti sul pezzo bulbo oculare.
- Lasciare che il fluido flusso continuo a goccia a goccia in 12-pozzetti. Ad intervalli di tempo stabiliti desiderati, quantificare la concentrazione dell'analita o di droga utilizzando metodi di rilevamento comuni come la spettroscopia UV-Vis o fluorescenza. 1,4,18
- Per gli studi che valutano la deposizione di componenti lacrimali su lenti a contatto, posizionare la lente a contatto sul pezzo "bulbo oculare". Raccogliere il fluido a flusso continuo, che può essere scartata.
- Dopo gli intervalli di tempo desiderati, rimuovere la lente a contatto dal pezzo bulbo oculare e preparare la lente per ulteriore analisi come la microscopia confocale.
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Representative Results
Gli stampi occhio sintetizzati ottenute dalla officina e dalla stampa 3-D sono riportati nella Figura 1. Questi stampi possono essere utilizzati con una varietà di polimeri, come PDMS e agarosio, per produrre oculari con le proprietà desiderate. L'assemblaggio cenno della piattaforma modello occhio con una pompa a siringa microfluidica è mostrato in Figura 2. La piattaforma simula usura meccanica tramite la rotazione del pezzo bulbo oculare, e l'esposizione aria attraverso laterale dentro e fuori il movimento del pezzo palpebra. fluido lacrimale è infuso nella palpebra da una pompa microfluidica alla portata desiderata, ed il fluido a flusso continuo può essere raccolto in un 12-pozzetti.
La procedura per la dissezione di un obiettivo bovina, e il montaggio su un oculare PDMS è illustrato nella figura 3. I tessuti in eccesso sono separate dall'occhio e scartati, seguita dalla rimozionedella congiuntiva. La rimozione della cornea inizia con un'incisione nella sclera vicino al limbus. La Figura 4 mostra la varietà di oculari che potrebbero essere utilizzati per varie analisi in vitro. I pezzi bulbo oculare montati visualizzati sono sintetizzati da PDMS, agar, e una cornea bovina ex-vivo montati su un pezzo bulbo oculare PDMS.
La figura 5 illustra uno studio valutare il rilascio di un antibiotico, moxifloxacina, dalla CLS. 18 Quando misurata nel modello flaconcino tradizionali, rilascio del farmaco avviene entro i primi 2 ore seguita da una fase di plateau. Al contrario, il modello dell'occhio romanzo mostra rilascio del farmaco ad essere lenta e sostenibile per un massimo di 24 ore. 18 Uno studio valutare la deposizione di colesterolo sulle CL è mostrata in Figura 6. Il colesterolo nel studio è stato fluorescente etichettato in forma di NBD -cholesterol (7-nitrobenz-2-ossa-1,3-diazol-4-il-colesterolo), e deposition è stato ripreso con scansione laser microscopia confocale. I risultati indicano che vi sono differenze sostanziali quando gli studi di deposizione vengono eseguiti in una fiala rispetto al modello dell'occhio.
Figura 1. stampi dell'oculare. (A) del bulbo oculare pezzo stampo da officina. (B) degli occhi coperchio stampo dalla stampa 3-D. Fai clic qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2. Una piattaforma oculare in vitro. (A) movimento circolare simula usura meccanica. (B) movimento laterale produce aria intermittenteesposizione. (C) infusione di liquido lacrimale in palpebra. (D) Raccolta pozzetti. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 3. dissezione e l'incorporazione della cornea bovina. (A) La rimozione del tessuto in eccesso. (B) Rimozione della congiuntiva. (C) incisione nella regione limbus. (D) La cornea asportato può essere memorizzato o montato su un pezzo bulbo oculare PDMS. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 4. oculari campione. Esempio di PDMS oculare con una lente a contatto, un pezzo occhio agar, e ex vivo della cornea bovina oculare montata. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 5. consegna della droga utilizzando la piattaforma oculare in vitro. Rilascio di moxifloxacina da lenti a contatto usa e getta giornaliere da (a) un grande volume flacone statica e (B) il modello dell'occhio (Re-stampa con il permesso della Associazione per la Ricerca e la Visione e Oftalmologia). 18 Tutti i dati sono riportati come media ± deviazione standard. si prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 6. deposizione colesterolo utilizzando la piattaforma oculare in vitro. Immagini confocali mostrano una sezione trasversale di etafilcon A, nelfilcon A, nesofilcon A, B Ocufilcon, delefilcon A, somofilcon A, narafilcon A dopo 4 ore di incubazione con NBD-colesterolo nel fiala e il modello occhio. cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Ci sono tre fasi critiche all'interno del protocollo che richiedono particolare attenzione: la progettazione e produzione di stampi (punto 1.1), il montaggio piattaforma (sezione 2.2.1-2.2.3), e monitorare il percorso sperimentale (sezione 2.2.4-2.2.7 ). In termini di progettazione e produzione di stampi (sezione 1.1), il pezzo bulbo oculare dovrebbe essere progettato in funzione delle dimensioni di una cornea umana. Tuttavia, può richiedere più prototipi dello stampo prima che un pezzo bulbo oculare può essere creato che si adatta perfettamente una lente a contatto commerciale (CL). Inoltre, i 250 micron deve essere mantenuto quando il bulbo oculare e pezzo palpebra sono in contatto per assicurare il fluido lacrimale fluisce uniformemente durante l'intero modello occhio quando un CL è presente. Questa distanza può essere cambiato in iterazioni future, ma non dovrebbe essere inferiore a 150 micron, per consentire alla sufficiente spaziatura per adattarsi a un CL. L'assemblea piattaforma (sezione 2.2.1-2.2.3) richiede particolare attenzione in modo tale che il bulbo oculare e la parte della palpebra entrano in Contact durante il movimento lampeggio. Se gli oculari non sono in contatto perfetto, allora la simulazione di una palpebra chiusa e sfregamento meccanico fallisce. L'operatore deve osservare la piattaforma in movimento per alcuni cicli per garantire che sia il bulbo oculare e la palpebra sono in contatto, e che sfregamento avviene come programmato. L'attuale piattaforma è stata progettata per funzionare continuamente più di un mese, ma l'operatore deve sempre verificare la stabilità del sistema ogni 24 ore quando si esegue un esperimento (sezione 2.2.4-2.2.7). Questo è importante in quanto la piattaforma corrente non possiede un controllo di temperatura o umidità, e le fluttuazioni di questi parametri potrebbe asciugare la CLS. In questo caso, posizionare il modello dell'occhio entro una camera umidità e temperatura controllate. Inoltre, per esperimenti di somministrazione di farmaci, il fluido a flusso continuo raccolta deve essere analizzato o conservato almeno ogni 2 ore per evitare significativa evaporazione del campione.
Attualmente ci sono due limiti del presentatimodello di occhio. La prima limitazione è per quanto riguarda l'esposizione all'ambiente circostante. Attualmente, perché i pezzi occhio non sono racchiusi in una camera controllata, modifiche quali la temperatura e l'umidità nella zona di lavoro influenzeranno vari aspetti degli esperimenti. Per esempio, se l'ambiente è troppo secco, poi la CLS asciugano rapidamente e potrebbero staccarsi dal pezzo bulbo oculare, o il fluido flusso continuo potrebbe evaporare. Per risolvere questo problema, iterazioni future ospiterà il modello occhio in una camera a temperatura e umidità controllate. Il secondo limite riguarda il pezzo complessità bulbo oculare. Attualmente, gli oculari sono semplici, composte di PDMS o agarosio, nessuno dei quali rappresenta veramente proprietà della superficie corneale. Il lavoro futuro avrà lo scopo di produrre modelli dell'occhio che imita più stretti le strutture di superficie corneale.
In vitro ricerca oculare è generalmente considerata come la fase di test precedente per la ricerca in vivo. Però,è importante tenere presente che la ricerca in vitro può essere complementare a dati in vivo, fornendo approfondimenti critici che altrimenti non realizzabili dai soli studi in vivo. Purtroppo, l'attuale modelli in vitro per CLS test sono rudimentali e mancano diversi componenti chiave per simulare adeguatamente l'ambiente in vivo. Per esempio, studi in vitro CL vengono eseguite in fiale contenenti 2-5 ml di tampone fosfato, 1-6 che supera notevolmente volumi lacrimali fisiologiche a 7,0 ± 2 microlitri. 7 Inoltre, due fattori importanti dell'ambiente oculare, lacrimazione naturale e il riflesso lampeggiante, sono assenti dalla semplice modello flaconcino statico. I limiti del modello flacone convenzionale sono stati riconosciuti dai ricercatori, e sono stati fatti tentativi per creare unico in modelli occhio vitro simulano l'ambiente oculare, includendo una componente ricostituzione microfluidica lacrima 20-24 e / o l'esposizione all'aria intermittente. 25,26 Non sorprendentemente, i risultati generati da questi esperimenti sono molto diversi da quelli ottenuti con il modello fiala convenzionale, e può più strettamente assomigliare dati in vivo. 20-25 Pertanto, lo sviluppo di un intricati nel modello di occhio vitro per esaminare CL forniranno nuove informazioni sull'interazione di materiali per lenti con la superficie oculare, e contribuire a facilitare lo sviluppo di nuovi materiali e nuove applicazioni per CLS nei prossimi decenni.
Probabilmente, uno degli aspetti più dibattuti della vitro modello di occhio è se l'occhio assomiglia ad un dissipatore infinito, che è particolarmente importante quando si tratta di consegna di droga dalla CLS. In condizioni sink infinite, il volume della soluzione circostante è significativamente superiore al volume di saturazione droga, tale che il rilascio del farmaco non è influenzata dalla solubilità del farmaco. 27 avvocati per il flaconcino come acceptable modello occhio sostengono che la cornea, congiuntiva, e circostante tessuti oculari insieme funzioni come un lavandino infinita. Mentre in teoria, questo può essere vero, il farmaco deve prima sciogliere nel liquido lacrimale. Questo passaggio limitante tariffa non è probabilmente una condizione lavandino, e sarà dipende sia volume lacrimale e portata come simulato dal nostro modello.
L'identità unica del modello presentato risiede nella sua capacità di emulare il film lacrimale. Adottando un disegno a due pezzi, una sezione bulbo oculare "corneale / sclerale" ed una "palpebra", è possibile creare un sottile strato uniforme diffusione del film lacrimale attraverso il pezzo bulbo oculare quando entrambi i pezzi vengono in contatto. Per simulare ulteriormente la superficie oculare, usura meccanica e l'esposizione all'aria è incorporato nel modello attraverso due attuatori meccanici. Poiché il pezzo palpebra si muove lateralmente, simula la chiusura dell'occhio e l'esposizione all'aria intermittente. La rotazione del bulbo oculare simula l'usura meccanica prodotta during lampeggiante. Il sistema è accoppiato con una pompa microfluidica, che infonde il modello occhio con fluido lacrimale con un flusso fisiologico o ogni altra portata desiderata. Il film lacrimale si forma ogni volta che le due parti entrano in contatto, e rottura rottura avviene quando i due pezzi separati.
L'obiettivo è quello di creare una piattaforma di prova universale per valutare CL per varie analisi in vitro. Per essere versatile, i pezzi bulbo oculare possono essere sintetizzati da vari polimeri, come polidimetilsilossano (PDMS) o agar. Per semplici studi oculari, questi polimeri, che rappresentano superfici idrofobiche e idrofile, rispettivamente, sarà sufficiente. Tuttavia, poiché sono necessari ulteriori analisi complesse, per esempio, gli studi di penetrazione della droga oculare o tossicità, dovranno essere ulteriormente modificato i pezzi degli occhi. Queste ulteriori modifiche al modello, come l'inserimento di una cornea ex vivo come mostrato, sono relativamente fattibile. Tuttavia, ulteriori studi di validazionesono necessari, e il lavoro futuro avrà lo scopo di migliorare la validità di questo modello attraverso il confronto con modelli in vivo.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Gli autori vorrebbero riconoscere la nostra fonte di finanziamento NSERC 20/20 di rete per lo sviluppo della avanzati oftalmici materiali.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Arduino Uno R3 (Atmega328 - assembled) | Adafruit | 50 | Board |
| Stepper motor | Adafruit | 324 | Motor and Motor shield |
| Equal Leg Coupler 1.6mm 1/16" | VWR | CA11009-280 | 50 pcs of tube connector |
| Tubing PT/SIL 1/16"x1/8" | VWR | 16211-316 | Case of 50feet |
| PDMS | Dow Corning | Sylgard 184 Solar Cell Encapsulation | |
| Agarose, Type 1-A, low EEO | Sigma-Aldrich | A0169-25G | |
| PHD UltraTM | Harvard Apparatus | 703006 | MicroFluidic Pump |
| Bovine cornea | Cargill, Guelph/ON | ||
| Soldidworks | Dassault Systemes | Software | |
| 3-D printing | University of Waterloo - 3D Print Centre | ||
| Dissection tools | Fine Science Tools | General dissection tools | |
| Medium 199 | Sigma-Aldrich | Culture medium storage for cornea | |
| Fetal bovine serum | Thermo Fisher | Add to culture medium, 3% total volume |
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