Предотвращение теплового стресса побочные эффекты у крыс Сенная палочка Штамм

Summary

Мы описали протокол предотвращения эффектов теплового стресса у крыс путем предварительной обработки полости рта полезными бактериями. Этот протокол может быть модифицирован и использован для различных путей введения и для анализа различных соединений.

Abstract

Данное исследование было разработано для оценки защитного эффекта штамма Bacillus Сенная против осложнений , связанных с тепловому стрессу. Тридцать два крыс Sprague-Dawley были использованы в этом исследовании. Животных перорально два раза в день в течение двух дней с Б. Сенная штамм BSB3 или PBS. На следующий день после последней обработки, каждая группа была разделена и две экспериментальные группы (один обрабатывали PBS и один обрабатывали B. Сенная) помещали при 45 ^° С в течение 25 мин. Две контрольные группы остались в течение 25 мин при комнатной температуре. Все крысы были умерщвлены, и различные параметры были проанализированы во всех группах. Побочные эффекты теплового стресса регистрируются уменьшением ворсинок высоты и общей толщины слизистой оболочки в кишечном эпителии; транслокации бактерий из просвета; увеличилась везикул эритроцитов и возвышение липополисахаридов (ЛПС), уровень в крови. Защитная эффективность лечения оценивали путем предварительнойщению этих побочных эффектов. Протокол был создан для перорального лечения крыс с бактериями для предотвращения теплового стресса осложнений, но этот протокол может быть модифицирован и использован для других путей введения и для анализа различных соединений.

Introduction

Различные стрессоры влияют на здоровье человека и животных. Температура является одним из самых стрессовых факторов, вызывающих хронические, острые и даже смертельные заболевания¹. Во многих случаях были зарегистрированы изменения в морфологии кишечника и потеря целостности кишечного барьера после теплового стресса^2,3. Этот защитный барьер отвечает за защиту от перемещения кишечных бактерий и их токсинов, в частности липополисахаридов (ЛПС), из просвета во внутренний кровоток^4,5. Стабильность кишечной микробиоты существенно влияет на барьерную функцию кишечника, иммунный ответ хозяина и толерантность к стрессовым условиям⁶. ....

Protocol

Все экспериментальные процедуры были одобрены IACUC из Auburn University, Auburn, Алабама.

1. Подготовка медиа-культуры, посуда и бактериальная культура

1. Инокулируйте 10 мл питательного бульона в колбе с одной колонии Сенная палочка BSB3 культуры, выращенной в течение ночи на питательным агаром.
2. Сделать 500 мл спорообразования среды ¹⁹ (на литр: Бакто питательном бульоне, 8 г; 10% (вес / объем) KCl, 10 мл; 1,2% (вес / объем) MgSO ₄ х 7H ₂ O, 10 мл, агар, 15 г) и автоклаве при 121 ^° С в течение 20 мин. Дать остыть до 50 ^° С и добавить следующие стерильные растворы: 1 М Са (NO <....

Results

Средняя температура тела животных до и сразу после теплового стресса был 36,7 ± 0,07 ^° С и 40,3 ± 0,17 ^° С, соответственно (р <0,05). Экспонирование крыс тепла (группа 3) привела к значительному ингибированию роста ворсинок и общей толщины слизистой оболочки (фиг.2, 3). Пероральное введение штамма BSB3, прежде чем стресс защищен кишечника от вредного воздействия тепла.

Транслокации бак.......

Discussion

Воздействие высоких температур приводит к серьезным состоянием здоровья ^29. Профилактика и раннее выявление осложнений , связанных с тепловым стрессом имеют жизненно важное значение ^30. Представленный протокол может быть использован для оценки эффективности различных подходов к профилактике теплового стресса побочных эффектов.

Критические шаги в рамках этого протокола включают: процедуру термообработки (45 ^° С, 25 мин); использование апирог.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Фосфатно-солевой буфер (PBS)	Sigma-Aldrich, Сент-Луис, MO	P4417
Этиловый спирт	Pharmco products Inc. Брукфилд, Коннектикут, США	64-17-5
Агар	VWR	97064-334
Агаровые пластины MacConkey	VWR	470180-742
5% кровяные агаровые пластины	VWR	89405-024
Бруцелла кровяной агар с гемином и витамином K	VWR	89405-032
Буин s	Fixative Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, США	15990
IL-10 Rat ELISA kit	Invitrogen, Camarillo, CA, США	KRC0101
IL-1beta Rat ELISA Kit	Invitrogen, Camarillo, CA, США	KRC0011
IL-6 Rat ELISA Kit	Invitrogen, Camarillo, CA, США	KRC0061
INF-gamma Rat ELISA Kit	Invitrogen, Camarillo, CA, США
TNF-alpha Rat ELISA Kit	Invitrogen, Camarillo, CA, США	KRC3011
Rat LPS ELISA Kit	NeoBioLab, MA, США	RL0275
Environmental Chamber 6020-1	Caron, Marietta, OH, США	6020-1
Centrifuge	Beckman Coulter, Индианаполис, Индиана, США	Optima L-90K
Ultra Centrifuge
Light микроскоп оптическая система	CitoViva Technology Inc., Оберн, Алабама
Колония счетчик	Fisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания, США	RE-3325
Морозильная камера	Haier, Бруклин, Нью-Йорк, США	микропланшет HCMO50LA
Ultra читатель	Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, США	ELx 808
Автоматическая шайба для полос	Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, США	Пипетки ELx50
Gilson	, Pipetman, Франция	P100, P200, P1000
C24 Инкубатор Шейкер	New Brunswick Scientific, Энфилд, Коннектикут, США	Classic C24
Качающийся шейкер	Reliable Scientific, Inc., Несбит, штат Массачусетс, США	55
чашек	Петри Fisher Scientific, Питтсбург, Пенсильвания, США 875713		100 мм x 15 мм
SterilGard III Advance	The Baker Company, Сэнфорд, штат Массачусетс, США	SG403
Колбы для выращивания культур	Corning Incorporated, Corning, Нью-Йорк, США	4995	PYREX 250 мл Колбы Эрленмейера
Оптический спектрометр Genesys 20	Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США.	4001
Sony DXC-33 Видеокамера	Sony
Richardson тестовое стекло	Электронная микроскопия Science, Хатфилд, Пенсильвания, США	80303
Многопоровая система очистки воды	Millipore	Direct-Q
Image-Pro Plus программное обеспечение	Media Cybernetics, MD, США
Тройной лучевой баланс	OHAUS Corporation, Парсиппани, Нью-Джерси, США
Гомогенизатор тканей, Dounce	VWR	71000-518