Abstract
Данное исследование было разработано для оценки защитного эффекта штамма Bacillus Сенная против осложнений , связанных с тепловому стрессу. Тридцать два крыс Sprague-Dawley были использованы в этом исследовании. Животных перорально два раза в день в течение двух дней с Б. Сенная штамм BSB3 или PBS. На следующий день после последней обработки, каждая группа была разделена и две экспериментальные группы (один обрабатывали PBS и один обрабатывали B. Сенная) помещали при 45 ° С в течение 25 мин. Две контрольные группы остались в течение 25 мин при комнатной температуре. Все крысы были умерщвлены, и различные параметры были проанализированы во всех группах. Побочные эффекты теплового стресса регистрируются уменьшением ворсинок высоты и общей толщины слизистой оболочки в кишечном эпителии; транслокации бактерий из просвета; увеличилась везикул эритроцитов и возвышение липополисахаридов (ЛПС), уровень в крови. Защитная эффективность лечения оценивали путем предварительнойщению этих побочных эффектов. Протокол был создан для перорального лечения крыс с бактериями для предотвращения теплового стресса осложнений, но этот протокол может быть модифицирован и использован для других путей введения и для анализа различных соединений.
Protocol
Все экспериментальные процедуры были одобрены IACUC из Auburn University, Auburn, Алабама.
1. Подготовка медиа-культуры, посуда и бактериальная культура
- Инокулируйте 10 мл питательного бульона в колбе с одной колонии Сенная палочка BSB3 культуры, выращенной в течение ночи на питательным агаром.
- Сделать 500 мл спорообразования среды 19 (на литр: Бакто питательном бульоне, 8 г; 10% (вес / объем) KCl, 10 мл; 1,2% (вес / объем) MgSO 4 х 7H 2 O, 10 мл, агар, 15 г) и автоклаве при 121 ° С в течение 20 мин. Дать остыть до 50 ° С и добавить следующие стерильные растворы: 1 М Са (NO 3) 2, 1 мл; 0,01 М MnCl 2, 1 мл; 1 мМ FeSO 4, 1 мл.
- Холодный Готовую среду до 40 ° С в течение 20 мин при комнатной температуре и заливают 25 мл в каждую из 20 стерильные чашки Петри в стерильной камере. Пусть среда затвердеть в течение ночи.
- Распространение 0,5 мл ночной культуры Bacillus зиЫШз BSB3 на поверхности среды в чашках Петри. Инкубируйте культуру при 37 ° С в течение 5 дней , пока 90% спорообразования. Reveal поэтапному яркие споры высокой разрешающей микроскопии.
- Урожай бактерии путем добавления 1 мл стерильного физиологического раствора с фосфатным буфером (PBS) к пластине и соскоб бактерий с поверхности, используя стерильный клеточный распределителю. Храните подвеску в холодильнике, пока не понадобится.
- Confirm жизнеспособность бактерий при посеве 0,1 мл соответствующего разведения (10 -5 до 10 -6) бактериальной суспензии на спорообразования средних пластин с последующей инкубацией в течение 18 - 24 ч при 37 о С.
- Количество бактериальных колоний на пластинах с использованием счетчика колоний и расчета титра бактерий в исследуемом суспензию. Готовят бактериальную суспензию с конечной концентрацией 1 × 10 8 КОЕ / мл в PBS.
2. Животные
- Используйте 32 самцов крыс Sprague-Dawley (250 - 300 г). Поддерживать животных под конкретного патогена условиях со свободным доступом к стандартному окатышей корму и воде. Установить среднюю температуру (21 ± 1 ° С), влажность (50 ± 5%) и 12 ч свет-темнота циклом.
3. Экспериментальный дизайн
- Начать лечение животных перорально через зонд 11, после 2 дней акклиматизации. Используйте шприц с иглой через желудочный зонд. Относитесь 16 крыс с B. Сенная BSB3 суспензии (1 мл на крысу) два раза в день в течение двух дней (B. Сенная группа). Относитесь 16 крыс с PBS (1 мл на крысу) два раза в день в течение двух дней (группа PBS) (рисунок 1).
- После обработки подразделяют каждую группу (8 крыс в каждой группе): Группа 1 контроля (PBS / без стресса), Группа 2 B. Сенная (B. Сенная / без стресса), группа 3 - стресс (PBS / тепловой стресс) и Группа B. 4- Сенная + стресс (B. Сенная / тепловой стресс).
- Измерьте ректальную температуру каждой крысы с использованием ElecTronic цифровой термометр. Хранить крыс групп 1 и 2 при комнатной температуре в течение 25 мин. Место животных групп 3 и 4 в климатической камере при 45 ° С и относительной влажности 55% в течение 25 мин.
- Затем измеряют ректальную температуру каждой крысы во всех группах с использованием электронно-цифровой термометр. Поместите всех животных при комнатной температуре в течение 4 часов.
- Обезболить крыс с изофлуран (2 - 4%) в герметичную банку анестезии и наблюдать, пока крысы не глубоко анестезию (отсутствие ответа на носок щепотку). Эвтаназии крыс быстрым обезглавливание с гильотиной.
- Сбор туловища кровь от каждой крысы 20 (15 - 16 мл) с апирогенной пипеток Into апирогенной пробирки , чтобы получить сыворотку , и сразу же берут образцы крови (7 мкл от каждой крысы) с пипеткой для микроскопического исследования.
- Помещенный пробирки с кровью в холодильнике в течение не менее 30 мин, чтобы позволить свертывание. Центрифуга трубки при температуре 20 ° С, 7000 мкг в течение 10 мин и быстроудалить сыворотку с помощью пипетки. Алиготе сыворотки , полученной от каждой крысы в 50 мкл объемы и хранить при температуре -20 ° С до анализа.
4. Хирургические процедуры
- Вырезать / обрезать весь мех от брюшной полости и грудной клетки нижней стороны каркаса с электрическими ножницами. Поместите тушку в стерильной камере и лечить бритую поверхность тушки с 70% -ным спиртом.
- Используйте стерильный скальпель, чтобы создать срединный разрез брюшной полости. Удалить печень, брыжеечные лимфатические узлы, селезенка и тонкой кишки у каждой крысы с использованием стерильного пинцета.
5. Анализ бактериальная транслокация
- Поместите каждую пробу печени, брыжеечных лимфатических узлов и селезенки, в предварительно взвешенную стерильные пробирки и взвешивают. Рассчитывают вес образца как разницу между весом трубки с пробой и весом пустой трубы.
- Добавить стерильной PBS к трубе, чтобы получить разведение 1:10 (вес / объем) образца и homogeределить каждого образца с помощью стерильной гомогенизатора стеклотканью для получения гомогенной суспензии 21.
- Сделать серийные разведения (10 -1 до 10 -4) каждого образца в стерильной PBS. Тарелка 0,1 мл всех разведений каждой ткани на поверхности МакКонки и в 5% кровяной агар и Brucella кровяной агар с гемина (0,005 г / л) и витамин К1 (0,01 г / л) пластин.
- Выдержите МакКонки и в 5% кровяном агаре аэробно и пластины бруцеллы чашках с кровяным агаром в анаэробных условиях при 37 ° С 22.
- Количество колоний аэробных бактерий после 24 часов, и колонии анаэробных бактерий после 48 ч инкубации с использованием счетчика колоний. Экспресс результаты в виде числа колониеобразующих единиц (КОЕ) в грамм ткани.
6. Гистологический анализ
- Удалите небольшие образцы кишечника у каждой крысы с помощью хирургической процедуры (шаги 4.1 - 4.2). Фикс образцы в Fixative Буэна, встраивать в парафин,подготовить 6 мкм секции и секции окрашиваются гематоксилином и эозином с использованием стандартных процедур 23.
- Используйте систему микроскопа высокого разрешения для измерения высоты ворсинок кишечника и общей толщины слизистой оболочки в каждом образце (увеличение 100X) 24. Анализ 4 образцов от каждой крысы и сделать по крайней мере двадцать измерений в каждом образце. Экспресс результаты в микронах.
7. Анализ цитокина
- Использование коммерческих наборов крысы ELISA для IL-1; IL-6; TNF-α; INF-γ и IL-10 для измерения уровней цитокинов в сыворотке крови в соответствии с протоколом производителя.
- Генерировать стандартные кривые для каждого набора проб, проанализированных с использованием стандартов для соответствующего комплекта. Определить уровень цитокинов в каждом образце путем сравнения экспериментальных данных с соответствующей стандартной кривой.
8. Анализ липополисахарида
- Анализ уровня LPS в сыворотке с помощью крысы LPS ELISA набор поПротокол производителя. Расчетный концентрацию LPS в образцах путем сравнения полученных значений со значениями стандартной кривой.
9. Высокое разрешение световой микроскопии крови
- Используйте систему микроскопа , описанного ранее 25,26. Используйте платформу виброизоляции в качестве основы для системы микроскопа и видеокамеры и компьютера 25 для записи изображения в реальном времени . Калибровка тестовых изображений с помощью слайд Ричардсон , как описано выше 27.
- Поместите 7 мкл свеженарисованного крови из каждой крысы на предметное стекло, покровное, фотографии и записывать десять кадры изображений 72 × 53,3 мкм 2 в каждом образце (увеличение 1,700X).
- Измерение концентрации везикул с использованием программного обеспечения, которое обеспечивает с высокой разрешающей способностью прямого просмотра оптических изображений в реальном масштабе времени. Проверьте как минимум 20 кадров изображения для каждого условия эксперимента 28.
10. Statisтики
- Экспресс все значения как среднее и стандартное отклонение. Провести статистический анализ и график зависимости. Анализ результатов с Т-тест два образца, установите уровень значимости 0,05 для определения статистической значимости.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Средняя температура тела животных до и сразу после теплового стресса был 36,7 ± 0,07 ° С и 40,3 ± 0,17 ° С, соответственно (р <0,05). Экспонирование крыс тепла (группа 3) привела к значительному ингибированию роста ворсинок и общей толщины слизистой оболочки (фиг.2, 3). Пероральное введение штамма BSB3, прежде чем стресс защищен кишечника от вредного воздействия тепла.
Транслокации бактерий из кишечника определяли с помощью бактериологического анализа брыжеечных лимфатических узлов (MLN), печени и селезенки каждой крысы. Бактериальные культуры в концентрации 1,7 · 10 3 ± 4,6 · 10 2 КОЕ / г ткани (рис 4) были выделены только из MLN и печени крыс , предварительно обработанных ПБС , а затем подвергается воздействию высокой температуры (группа 3). Все испытанные образцы от контрольных крыс (группы 1, 2) и от теплонапряженных животныхполучил штамм BSB3 (группа 4) были стерильны. Бактерии не были выделены из образцов селезенке.
Нет изменение IL-1; ИЛ-6, TNF-α, уровни ИНФ-Г цитокины были зарегистрированы в теплонапряженных крыс. В сыворотке животных , которым вводили PBS перед воздействием тепла значительное повышение уровней IL-10 и LPS было найдено (группа 3) - ( На рисунках 5, 6). Предварительная обработка с B. Сенная BSB3 (группа 4) предотвратить возникновение IL-10 и LPS в сыворотке теплонапряженных животных.
Значительное увеличение концентрации свободных везикул (1,4 ± 0,2) × 10 6 (3,8 ± 0,3) × 10 6 везикулы мкл -1 (р <0,001) было найдено в крови крыс, получавших PBS до того теплового стресса (рис 7 , 8). В группе животных, предварительно обработанных с BSB3 никаких изменений в количестве свободных пузырьках не был найден на кормеэр воздействие тепла (Рисунок 7).
Рисунок 1. Схема исследования. Две группы крыс (16 крыс в каждой группе) обрабатывали перорально через зонд с B. Сенная BSB3 (B. Сенная группа) или PBS (группа PBS) дважды в день. На 3-й день каждая группа была разделена на 8 крыс в каждой группе. Крысы из группы 3 и 4 помещали при 45 ° С в течение 25 мин. Контрольные животные (группы 1 и 2) выдерживали при комнатной температуре. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2. Измерение кишечных ворсинок Высота (A) через слизистые и толщина (В) у крыс. Крыс предварительно обработанных PBS илиB. Сенная BSB3 подвергали воздействию 45 о С (стресс) или до комнатной температуры (контроль). Каждая группа состояла из 8 крыс. были взяты двадцать измерения каждого параметра в каждом образце. Значения представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения. Полученные результаты были проанализированы с Т-тест два образца на уровне значимости 0,05 для определения статистической значимости. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3. Гистологические Изображения слизистая оболочка кишечника окрашивали гематоксилином и эозином. Крысы были предварительно обработаны PBS или B. Сенная BSB3 и экспонировали до 45 о С (стресс) или до комнатной температуры (контроль) A. PBS / отсутствие стресса;. B. PBS / тепловой стресс; C. Б. Сенная / отсутствие стресса; Д. В. Сенная / тепловой стресс. Вили высота обозначена стрелками. Bar 200 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4. Общее количество бактерий в тканях крыс. Крыс предварительно обрабатывали PBS или B. Сенная BSB3 подвергали воздействию 45 о С (стресс) или до комнатной температуры (контроль). Каждая группа состояла из 8 крыс. Брыжеечные лимфатические узлы, печень и селезенка были асептически удалена от каждой крысы, гомогенизируют и высевали на чашки с агаровой среде для восстановления аэробных и анаэробных бактерий. Общее кол-транслоцированы бактерий (аэробных и анаэробных) представлена в виде колониеобразующих единиц (КОЕ) на грамм ткани. Значения представлены в виде среднее значение и стандартное отклонение. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 5. Уровень IL-10 в сыворотке крыс. Крысы , предварительно обработанных PBS или B. Сенная BSB3 подвергали воздействию 45 о С (стресс) или до комнатной температуры (контроль). Каждая группа состояла из 8 крыс. Сыворотка крови получали от каждой крысы и анализировали с помощью ELISA набор для коммерческой крысы. Значения представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения. Полученные результаты были проанализированы с Т-тест два образца на уровне значимости 0,05 для определения статистической значимости. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 6. Концентрация LPS в сыворотке крыс. Крысы , предварительно обработанных PBS или B. Сенная BSB3 подвергали воздействию 45 о С (стресс) или до комнатной температуры (контроль). Каждая группа состояла из 8 крыс. Сыворотка крови получали от каждой крысы и анализировали с помощью ELISA набор для коммерческой крысы. Значения представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения. Полученные результаты были проанализированы с Т-тест два образца на уровне значимости 0,05 для определения статистической значимости. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 7. Количество везикул в крови крыс. Крыс предварительно обработанныхс PBS или B. Сенная BSB3 подвергали воздействию 45 о С (стресс) или до комнатной температуры (контроль). Маленькую капельку (7 мкл) свеженарисованного крови помещали на предметное стекло, покрывали, фотографировали и записал десять кадров изображения в каждом образце (увеличение 1,700X). Концентрация везикул измеряют с использованием программного обеспечения, которое обеспечивает высокое разрешение прямого видения оптических изображений в реальном масштабе времени. Двадцать кадров изображений были рассмотрены для каждого условия эксперимента. Значения представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения. Полученные результаты были проанализированы с Т-тест два образца на уровне значимости 0,05 для определения статистической значимости. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 8. Увеличение Veсиклей Концентрация в крови после теплового стресса. Видеоизображение крови крыс , предварительно обработанных с PBS до воздействия комнатной температуры (А) или до 45 ° С (В). Маленькую капельку (7 мкл) свеженарисованного крови помещали на предметное стекло, покрывали, фотографировали и записал десять кадров изображения в каждом образце (увеличение 1,700X). Пузырек обозначается как В. Bar 6 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Воздействие высоких температур приводит к серьезным состоянием здоровья 29. Профилактика и раннее выявление осложнений , связанных с тепловым стрессом имеют жизненно важное значение 30. Представленный протокол может быть использован для оценки эффективности различных подходов к профилактике теплового стресса побочных эффектов.
Критические шаги в рамках этого протокола включают: процедуру термообработки (45 ° С, 25 мин); использование апирогенной материалов в процессе сбора и обработки крови для предотвращения загрязнения с энтеротоксинов; держать в сыворотке крови аликвот при -20 ° С , чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания; и после стерильной процедуры во время анализа бактериальной транслокации. Протокол был создан для перорального лечения крыс с бактериями для предотвращения теплового стресса побочных эффектов. Для других способов введения и других соединений, этот протокол может быть изменен. Например, время трeatment до того теплового стресса может быть продлен. Пероральное введение может быть изменен на ректального введения. Сенная палочка бактерии были использованы для предотвращения теплового стресса осложнений при пероральном лечении животных перед воздействием повышенной температуры. Для того, чтобы вылечить осложнения теплового стресса, этот протокол может быть изменен за счет использования бактерий для лечения животных после воздействия тепла.
Было показано , что повышение температуры тела вызвал увеличение эритроцитарной везикуляцией, и это было полностью предотвращено путем предварительной обработки с B. Сенная бактерии. Таким образом, увеличение концентрации пузырьков в крови при воздействии тепла может указывать на уровень теплового стресса и обеспечивает диагностические показания для устойчивости эритроцитов и их устойчивость к нагреванию. Это также очень полезный и быстрый тест для оценки эффективности профилактического лечения против теплового стресса осложнений. Индукция OF белки теплового шока в качестве маркера теплового стресса был ранее обсуждался 30, но этот подход требует больших затрат времени и не может быть использован в режиме реального времени диагностики ответ на тепловой стресс.
Изложенный подход для предотвращения теплового стресса побочных эффектов является простым, экономически эффективным и не требует дополнительного оборудования или специальных средств. Будущее применение этой работы поможет понять механизмы защиты от стресса осложнений тепла и охарактеризовать новые процедуры для этой защиты. Этот метод имеет значение для дорожных рабочих, военнослужащих, спортсменов - группы людей, которые подвержены риску теплового удара во время интенсивной физической активности на открытом воздухе 29. Предлагаемый подход позволяет исследовать уровень теплового стресса и оценить различные методы для защиты здоровья людей, работающих в экстремальных условиях.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| Ethyl Alcohol | Pharmco products Inc. Brookfield, CT, USA | 64-17-5 | |
| Agar | VWR | 97064-334 | |
| MacConkey agar plates | VWR | 470180-742 | |
| 5% blood agar plates | VWR | 89405-024 | |
| Brucella blood agar plate with Hemin, and Vitamin K | VWR | 89405-032 | |
| Bouin’s Fixative | Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA | 15990 | |
| IL-10 Rat ELISA kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0101 | |
| IL-1beta Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0011 | |
| IL-6 Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0061 | |
| INF-gamma Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC4021 | |
| TNF-alpha Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC3011 | |
| Rat LPS ELISA Kit | NeoBioLab, MA, USA | RL0275 | |
| Environmental Chamber 6020-1 | Caron, Marietta, OH, USA | 6020-1 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA | Optima L-90K | |
| Ultra Centrifuge | |||
| Light microscope optical system | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Colony counter | Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, USA | RE-3325 | |
| Freezer | Haier, Brooklyn, NY, USA | HCMO50LA | |
| Ultra microplate reader | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx 808 | |
| Auto Strip Washer | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx50 | |
| Pipettes | Gilson, Pipetman, France | P100, P200, P1000 | |
| C24 Incubator Shaker | New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA | Classic C24 | |
| Rocking Shaker | Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA | 55 | |
| Petri dishes | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, USA | SG403 | |
| Culture Growing Flasks | Corning Incorporated, Corning, NY, USA | 4995 | PYREX 250 ml Erlenmeyer flasks |
| Optical Spectrometer Genesys 20 | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA. | 4001 | |
| Sony DXC-33 Video camera | Sony | ||
| Richardson test slide | Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA | 80303 | |
| Millipore water purification system | Millipore | Direct-Q | |
| Image-Pro Plus software | Media Cybernetics, MD, USA | ||
| Triple Beam Balance | OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, USA | ||
| Tissue Homogenizer, Dounce | VWR | 71000-518 |
References
- Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J.
- Lambert, G. P. Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke. Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).
- Yu, J., et al. Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study. Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).
- Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. New Frontiers in Thermoregulation and Exercise. Sports Med. 16, 163-167 (1993).
- Lambert, G. P. Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects. J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).
- Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance. Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).
- Khan, M. W., et al. Microbes, intestinal inflammation and probiotics. Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).
- Quigley, E. M. M. Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults. Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).
- Gore, C., et al. Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years. Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).
- Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. Gut microbiota, probiotics and diabetes. Nutr. J. 13, (2014).
- Eutamene, H., et al. Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats. J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).
- Ait-Belgnaoui, A., et al. Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats. Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).
- Fujiya, M., et al. The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter. Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).
- Cutting, S. M.
- Pinchuk, I. V., et al. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics. Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).
- Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V.
- Gracheva, N. M., et al. The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).
- Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. JMM Case Report. 1, (2014).
- Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores. Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).
- Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. eds H.G. Vogel & W.H. Vogel. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).
- Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice. J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).
- Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 118, 229-241 (2004).
- Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery. J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).
- Ribeiro, S. R., et al. Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet. Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).
- Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser. Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).
- Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats. J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).
- Richardson, T. M. Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at. Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).
- Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures. J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).
- Leon, L. R., Helwig, B. G. Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response. J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).
- Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit. Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).
