Abstract
وقد صممت هذه الدراسة لتقييم تأثير وقائي من سلالة العصوية الرقيقة ضد مضاعفات للإجهاد الحراري. واستخدمت اثنان وثلاثون الفئران سبراغ داولي في هذه الدراسة. تم علاج الحيوانات شفويا مرتين في اليوم لمدة يومين مع B. الرقيقة BSB3 سلالة أو برنامج تلفزيوني. في اليوم التالي بعد العلاج الاخير، تم تقسيم كل مجموعة وضعت مجموعتين تجريبيتين (معاملة واحدة مع برنامج تلفزيوني ومعاملة واحدة مع B. الرقيقة) في 45 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة. بقيت مجموعات المراقبة اثنين لمدة 25 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. الموت الرحيم كانت جميع الفئران وجرى تحليل العوامل المختلفة في جميع الفئات. يتم تسجيل الآثار الضارة للإجهاد الحراري من انخفاض ارتفاع الزوائد ومجموع سمك الغشاء المخاطي في ظهارة الأمعاء. النبات من البكتيريا من التجويف. زيادة تحوصل من كريات الدم الحمراء ورفع مستوى عديدات سكر شحمية (LPS) مستوى في الدم. يتم تقييم فعالية وقائية من العلاج قبلمداخلة تكلم فيها متكلم من هذه الآثار الجانبية. تم تعيين بروتوكول يصل لعلاج عن طريق الفم للجرذان مع البكتيريا للوقاية من مضاعفات الإجهاد الحراري، ولكن هذا البروتوكول يمكن تعديلها واستخدامها لطرق أخرى للإدارة وتحليل مركبات مختلفة.
Protocol
وقد وافق جميع الإجراءات التجريبية التي IACUC جامعة أوبورن، صحراء، ولاية ألاباما.
1. إعداد الثقافة وسائل الإعلام، صحون والبكتيرية الثقافة
- تطعيم 10 مل من المرق المغذي في قارورة مع مستعمرة واحدة من ثقافة BSB3 العصوية الرقيقة، ونمت بين عشية وضحاها على طبق من المغذيات أجار.
- جعل 500 مل من تبوغ المتوسطة 19 (لكل لتر: Bacto المغذيات مرق، 8 غرام؛ 10٪ (ث / ت) بوكل، 10 مل؛ 1.2٪ (ث / ت) MgSO 4 × 7H 2 O، 10 مل، أجار، 15 ز) والأوتوكلاف على 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. السماح لتبرد إلى 50 درجة مئوية وإضافة الحلول العقيمة التالية: 1 M الكالسيوم (NO 3) 2، 1 مل. 0.01 M MnCl 2، 1 مل. FeSO 1 ملم 4، 1 مل.
- متوسطة استعداد بارد إلى 40 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتصب 25 مل في كل من 20 أطباق بتري معقمة في الحكومة العقيمة. دع المتوسطة يصلب بين عشية وضحاها.
- انتشرت 0.5 مل من الثقافة بين عشية وضحاها من Bacillus الرقيقة BSB3 على سطح المتوسط في أطباق بتري. احتضان الثقافة في 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام حتى 90٪ تبوغ. الكشف عن الجراثيم المرحلة المشرقة التي كتبها عالية الدقة المجهر.
- البكتيريا الحصاد عن طريق إضافة 1 مل من الفوسفات العقيمة مخزنة المالحة (PBS) على لوحة وكشط البكتيريا من سطح باستخدام رش خلية العقيمة. تخزين تعليق في الثلاجة لحين الحاجة إليها.
- تأكيد بقاء البكتيريا عن طريق طلاء 0.1 مل من التخفيف المناسب (10 -5 إلى 10 -6) من تعليق البكتيرية على لوحات متوسطة تبوغ تليها الحضانة ل18 - 24 ساعة على 37 درجة مئوية.
- عدد المستعمرات البكتيرية على لوحات باستخدام عداد مستعمرة وحساب عيار البكتيريا في تعليق اختبارها. إعداد تعليق البكتيرية مع التركيز النهائي 1 × 10 8 كفو / مل في برنامج تلفزيوني.
2. الحيوانات
- استخدام 32 من ذكور فئران سبراغ داولي (250-300 ز). الحفاظ على الحيوانات في ظل ظروف معينة خالية من مسببات الأمراض مع حرية الوصول إلى طعام بيليه القياسي والمياه. إنشاء متوسط درجة حرارة (21 ± 1 درجة مئوية) والرطوبة (50 ± 5٪)، ودورة ضوء الظلام 12 ساعة.
3. تصميم تجريبي
- بدء العلاج من الحيوانات عن طريق أنبوب تغذية عن طريق الفم 11، 2 بعد أيام من التأقلم. استخدام المحاقن مع إبرة أنبوب تغذية عن طريق الفم. علاج 16 الفئران مع B. الرقيقة تعليق BSB3 (1 مل لكل فأر) مرتين في اليوم لمدة يومين (B. مجموعة الرقيقة). علاج 16 الفئران مع برنامج تلفزيوني (1 مل لكل فأر) مرتين في اليوم لمدة يومين (مجموعة PBS) (الشكل 1).
- بعد العلاج، تقسيم كل مجموعة (8 الفئران في كل مجموعة) المجموعة: 1- التحكم (PBS / لا الإجهاد)، المجموعة 2- B. الرقيقة (B. الرقيقة / لا الإجهاد)، المجموعة 3- الإجهاد (PBS / الإجهاد الحراري) والمجموعة 4- B. الرقيقة + الإجهاد (B. الإجهاد الرقيقة / الحرارة).
- قياس درجة حرارة الجسم من كل فأر باستخدام كهربائيترونيك ميزان الحرارة الرقمي. حافظ على الفئران المجموعات 1 و 2 في درجة حرارة الغرفة لمدة 25 دقيقة. مكان الحيوانات في المجموعات 3 و 4 في غرفة المناخ في 45 درجة مئوية والرطوبة النسبية 55٪ لمدة 25 دقيقة.
- بعد ذلك، وقياس درجة حرارة الجسم من كل فأر في جميع الفئات باستخدام ميزان الحرارة الرقمي الالكتروني. إخضاع جميع الحيوانات في درجة حرارة الغرفة لمدة 4 ساعة.
- تخدير الفئران مع isoflurane (2-4٪) في جرة التخدير قابل للغلق ومراقبة حتى يتم تخدير الفئران عميقا (غياب استجابة لقرصة أخمص القدمين). الموت ببطء الفئران عن طريق قطع الرأس السريع مع المقصلة.
- جمع الدم جذع من كل فأر 20 (15-16 مل) مع ماصات apyrogenic في أنابيب apyrogenic للحصول على المصل وعلى الفور أخذ عينات من الدم (7 ميكرولتر من كل فأر) مع ماصة للفحص المجهري.
- وضع أنابيب مع الدم في الثلاجة لمدة 30 دقيقة على الأقل للسماح للتخثر. أنابيب الطرد المركزي في 20 درجة مئوية، 7000 x ج لمدة 10 دقيقة وبسرعةإزالة المصل مع ماصة. قسامة المصل تم الحصول عليها من كل فأر في 50 مجلدا ميكرولتر ومخزن في -20 درجة مئوية حتى الفحص.
4. إجراء العمليات الجراحية
- قص / تقليم جميع الفراء من البطن والصدر من الجانب السفلي من الذبيحة مع المقصات الكهربائية. وضع الجثة في خزانة معقمة وعلاج سطح حلق الذبيحة مع 70٪ من الكحول.
- استخدام مشرط معقم لخلق شق خط الوسط من البطن. إزالة الكبد والغدد الليمفاوية المساريقي والطحال والأمعاء الدقيقة من كل فأر باستخدام الملقط معقمة.
5. تحليل إزفاء الجرثومي
- وضع كل عينة من الكبد والغدد الليمفاوية والطحال المساريقي في أنابيب معقمة قبل وزنه ووزن. حساب وزن العينة أن هناك فرق بين وزن أنبوب مع عينة والوزن من أنبوب فارغ.
- إضافة برنامج تلفزيوني العقيمة في أنبوب للحصول على تخفيف 01:10 (ث / ت) لعينة وhomogenize كل عينة مع الخالط الأنسجة زجاجي معقم للحصول على تعليق متجانسة 21.
- جعل التخفيفات المتسلسلة (10 -1 إلى 10 -4) من كل عينة في برنامج تلفزيوني العقيمة. لوحة 0.1 مل من جميع التخفيفات من كل الأنسجة على سطح لماكونكي و 5٪ أجار الدم والبروسيلا أجار الدم مع هيمن (0.005 غرام / لتر) وفيتامين K1 (0.01 جم / لتر) لوحات.
- احتضان لماكونكي و 5٪ لوحات أجار الدم هوائيا والبروسيلا لوحات أجار الدم تحت الظروف اللاهوائية عند 37 درجة C 22.
- عدد مستعمرات البكتيريا الهوائية بعد 24 ساعة، ومستعمرات البكتيريا اللاهوائية بعد 48 ساعة من الحضانة باستخدام عداد مستعمرة. التعبير عن النتائج على النحو عدد الوحدات المكونة للمستعمرة (كفو) في غرام من الأنسجة.
6. تحليل النسيجي
- إزالة عينات الأمعاء الصغيرة من كل الفئران من قبل الإجراء الجراحي (الخطوات 4،1-4،2). إصلاح العينات في تثبيتي بوان، تضمينها في البارافين،إعداد 6 ميكرون الأقسام والفروع وصمة عار مع الهيماتوكسيلين ويوزين باستخدام الإجراءات القياسية 23.
- استخدام نظام المجهر عالية الدقة لقياس ارتفاع الزغابات المعوية ومجموع سمك الغشاء المخاطي في كل عينة (التكبير 100X) 24. تحليل 4 عينات من كل الفئران وجعل لا يقل عن عشرين القياسات في كل عينة. التعبير عن النتائج في ميكرومتر.
7. خلوى الفحص
- استخدام مجموعات تجارية الفئران ELISA لIL-1β. IL-6؛ TNF-α؛ INF-جاما، وIL-10 لقياس مستويات السيتوكينات في المصل وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.
- توليد المنحنيات القياسية لكل مجموعة من عينات يعاير باستخدام معايير لعدة ذات الصلة. تحديد مستوى السيتوكينات في كل عينة بمقارنة البيانات التجريبية مع المنحنى القياسي المناسب.
8. lipopolysaccharide في الفحص
- تحليل مستوى LPS في مصل الدم باستخدام الفئران عدة LPS ELISA وفقا لبروتوكول الشركة الصانعة. تقدير تركيز LPS في عينات من خلال المقارنة بين القيم التي تم الحصول عليها مع قيم المنحنى القياسي.
9. عالية الدقة المجهر الضوئي من الدم
- استخدام نظام المجهر هو موضح سابقا 25،26. استخدام منصة عزل الاهتزاز كقاعدة لنظام المجهر والكاميرا والفيديو والكمبيوتر 25 لتسجيل الصور الحية. معايرة الصور اختبار باستخدام شريحة ريتشاردسون كما هو موضح سابقا (27).
- ضع 7 ميكرولتر من الدم المسحوبة الطازجة من كل فأر على شريحة زجاجية، ساترة، صورة وتسجيل عشرة إطارات صورة 72 × 53.3 ميكرون 2 في كل عينة (التكبير 1،700X).
- قياس تركيز الحويصلات باستخدام البرمجيات التي توفر عالية الدقة، عرض مباشر الصور الضوئية في الوقت الحقيقي. دراسة ما لا يقل عن 20 لقطة صورة لكل حالة تجريبية 28.
10. Statisالعرات
- التعبير عن كل القيم كما المتوسط والانحراف المعياري. إجراء تحليل إحصائي والتآمر الرسم البياني. تحليل النتائج مع اثنين من عينة اختبار t، تعيين مستوى أهمية في 0.05 لتحديد الدلالة الإحصائية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وكانت درجة حرارة الجسم يعني من الحيوانات قبل ومباشرة بعد الإجهاد الحراري 36.7 ± 0.07 درجة مئوية و40.3 ± 0.17 درجة مئوية على التوالي (P <0.05). أدى تعرض الفئران للحرارة (المجموعة 3) في إعاقة واضحة في ارتفاع الزغب ومجموع سمك الغشاء المخاطي (الشكلان 2 و 3). تناوله عن طريق الفم من سلالة BSB3 قبل الإجهاد حماية الأمعاء من الأثر الضار للحرارة.
تم تحديد النبات من البكتيريا من الأمعاء عن طريق التحليل البكتريولوجي من الغدد الليمفاوية المساريقي (مليون) والكبد والطحال من كل فأر. تم عزل الثقافات البكتيرية في تركيز 1.7 × 10 3 ± 4.6 × 10 2 كفو / ز الأنسجة (الشكل 4) فقط من MLN والكبد في الفئران قبل تعامل مع برنامج تلفزيوني ويتعرض للحرارة (المجموعة 3). جميع العينات التي تم فحصها من الفئران التحكم (المجموعات 1 و 2) ومن الحيوانات المجهدة حرارياتلقى سلالة BSB3 (المجموعة 4) كانت عقيمة. تم عزل أي بكتيريا من عينات الطحال.
لا تغيير IL-1β. IL-6، TNF-α، سجلت INF-Γ مستويات السيتوكينات في الفئران المجهدة حراريا. في مصل الحيوانات تعامل مع برنامج تلفزيوني قبل التعرض للحرارة ارتفاع كبير في مستويات IL-10 و LPS تم العثور على (مجموعة 3) - (أرقام 5، 6). ما قبل المعالجة مع B. الرقيقة BSB3 (المجموعة 4) حالت دون صعود IL-10 و LPS في مصل الدم من الحيوانات المجهدة حراريا.
تم العثور على زيادة كبيرة في تركيز الحويصلات مجانا من (1.4 ± 0.2) × 10 6 إلى (3.8 ± 0.3) × 10 6 الحويصلات ميكرولتر -1 (ع <0.001) في دم الفئران التي حصلت على برنامج تلفزيوني قبل الإجهاد الحراري (أرقام 7 ، 8). في مجموعة من الحيوانات سابقة التجهيز مع BSB3 تم العثور على أي تغيير في عدد الحويصلات حرة الخلفإيه التعرض للحرارة (الشكل 7).
الشكل 1. تصميم الدراسة. مجموعتين من الفئران (16 الفئران في كل مجموعة) عولجوا بواسطة أنبوب تغذية عن طريق الفم مع B. الرقيقة BSB3 (B. مجموعة الرقيقة) أو مع برنامج تلفزيوني (مجموعة PBS) مرتين في اليوم. في يوم 3 تم تقسيم كل مجموعة من 8 الفئران في كل مجموعة. وضعت الفئران من المجموعة 3 و 4 في 45 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة. تم الاحتفاظ بها الحيوانات التحكم (مجموعة 1 و 2) في درجة حرارة الغرفة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. قياس المعوية الزوائد الطول (A) والأغشية المخاطية سمك (ب) في الجرذان. الجرذان قبل تعامل مع برنامج تلفزيوني أوتعرضت B. الرقيقة BSB3 إلى 45 درجة مئوية (الإجهاد) أو إلى درجة حرارة الغرفة (التحكم). تتألف كل مجموعة من 8 الفئران. أخذت عشرين القياسات من كل معلمة في كل عينة. يتم عرض القيم كما المتوسط والانحراف المعياري. وقد تم تحليل النتائج مع اثنين من عينة اختبار t عند مستوى دلالة 0.05 لتحديد الدلالة الإحصائية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. الصور النسيجية من الأمعاء الغشاء المخاطي الملون مع هيماتوكسيلين والجرذان يوزين. وقبل تعامل مع برنامج تلفزيوني أو B. الرقيقة BSB3 ويتعرض إلى 45 درجة مئوية (الإجهاد) أو إلى درجة حرارة الغرفة (التحكم) A. PBS / لا الإجهاد؛ B. برنامج تلفزيوني الإجهاد / الحرارة؛ ج. ب. الرقيقة / لا الإجهاد؛ دال B. الرقيقة الإجهاد / الحرارة. يشار إلى ارتفاع الزغابات التي كتبها السهام. منع 200 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4. إجمالي عدد البكتيريا في أنسجة الفئران. الجرذان قبل تعامل مع برنامج تلفزيوني أو B. تعرضت الرقيقة BSB3 إلى 45 درجة مئوية (الإجهاد) أو إلى درجة حرارة الغرفة (التحكم). تتألف كل مجموعة من 8 الفئران. تم إزالة الغدد الليمفاوية المساريقي، والكبد، والطحال جو معقم و مطهر من كل فأر، المتجانس ومطلي على وسائط أجار لاستعادة البكتيريا الهوائية واللاهوائية. وقدم عدد الكلي للبكتيريا translocated (الهوائية واللاهوائية) وحدات تشكيل مستعمرة (كفو) في كل غرام من الأنسجة. يتم عرض القيم كما المتوسط والانحراف المعياري. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5. مستوى IL-10 في المصل من الفئران. الجرذان قبل تعامل مع برنامج تلفزيوني أو B. تعرضت الرقيقة BSB3 إلى 45 درجة مئوية (الإجهاد) أو إلى درجة حرارة الغرفة (التحكم). تتألف كل مجموعة من 8 الفئران. تم الحصول على مصل الدم من كل فأر وتحليلها مع الفئران التجاري عدة ELISA. يتم عرض القيم كما المتوسط والانحراف المعياري. وقد تم تحليل النتائج مع اثنين من عينة اختبار t عند مستوى دلالة 0.05 لتحديد الدلالة الإحصائية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6. LPS التركيز في المصل من الفئران. الجرذان قبل تعامل مع برنامج تلفزيوني أو B. تعرضت الرقيقة BSB3 إلى 45 درجة مئوية (الإجهاد) أو إلى درجة حرارة الغرفة (التحكم). تتألف كل مجموعة من 8 الفئران. تم الحصول على مصل الدم من كل فأر وتحليلها مع الفئران التجاري عدة ELISA. يتم عرض القيم كما المتوسط والانحراف المعياري. وقد تم تحليل النتائج مع اثنين من عينة اختبار t عند مستوى دلالة 0.05 لتحديد الدلالة الإحصائية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 7. عدد الحويصلات في دم الفئران. الجرذان مسبقا تعاملمع برنامج تلفزيوني أو B. تعرضت الرقيقة BSB3 إلى 45 درجة مئوية (الإجهاد) أو إلى درجة حرارة الغرفة (التحكم). وضعت قطرات صغيرة (7 ميكرولتر) من الدم المسحوبة طازجة على شريحة زجاجية، coverslipped وتصويرها وتسجيلها عشرة إطارات الصور في كل عينة (التكبير 1،700X). وقد تم قياس تركيز الحويصلات باستخدام البرمجيات التي توفر عالية الدقة، عرض مباشر الصور الضوئية في الوقت الحقيقي. تم فحص عشرين إطارات الصور لكل حالة تجريبية. يتم عرض القيم كما المتوسط والانحراف المعياري. وقد تم تحليل النتائج مع اثنين من عينة اختبار t عند مستوى دلالة 0.05 لتحديد الدلالة الإحصائية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 8. زيادة من هاءتركيز sicles في الدم بعد الإجهاد الحراري. صورة فيديو من دماء الفئران سابقة التجهيز مع برنامج تلفزيوني قبل التعرض لدرجة حرارة الغرفة (A) أو إلى 45 درجة مئوية (B). وضعت قطرات صغيرة (7 ميكرولتر) من الدم المسحوبة طازجة على شريحة زجاجية، coverslipped وتصويرها وتسجيلها عشرة إطارات الصور في كل عينة (التكبير 1،700X). يشار إلى حويصلة كما خامسا بار 6 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يؤدي التعرض إلى ارتفاع درجة الحرارة في ظروف صحية خطيرة 29. الوقاية والكشف المبكر عن المضاعفات المتصلة بالإجهاد الحراري هي ذات أهمية حيوية 30. بروتوكول المعروضة يمكن استخدامها لتقييم فعالية من الطرق المختلفة للوقاية من الإجهاد الحراري الآثار السلبية.
خطوات حاسمة في هذا البروتوكول ما يلي: إجراء المعالجة الحرارية (45 درجة مئوية و 25 دقيقة)؛ استخدام المواد apyrogenic خلال جمع ومعالجة الدم لمنع التلوث مع المعوية. حفظ قسامات المصل عند -20 درجة مئوية لتجنب التجميد والذوبان المتكررة. وبعد إجراء عقيم خلال تحليل النبات البكتيرية. تم تعيين بروتوكول يصل لعلاج عن طريق الفم للجرذان مع البكتيريا للوقاية من الآثار الجانبية الإجهاد الحراري. عن طرق أخرى للإدارة وغيرها من المركبات، وهذا البروتوكول يمكن تعديلها. على سبيل المثال، وقت طن تبريدeatment قبل الإجهاد الحراري ويمكن تمديد. يمكن تغيير تناوله عن طريق الفم لإدارة المستقيم. واستخدمت البكتيريا العصوية الرقيقة للوقاية من مضاعفات الإجهاد الحراري عن طريق العلاج عن طريق الفم للحيوانات قبل التعرض لدرجة حرارة مرتفعة. من أجل علاج مضاعفات الإجهاد الحراري، وهذا البروتوكول يمكن تعديلها عن طريق استخدام البكتيريا لعلاج الحيوانات بعد التعرض للحرارة.
وقد تبين أن ارتفاع درجة حرارة الجسم تسبب بزيادة قدرها تحوصل كرات الدم الحمراء، وهذا تم منعه تماما لما قبل العلاج مع B. البكتيريا الرقيقة. وهكذا، فإن زيادة تركيز الحويصلات في الدم أثناء التعرض للحرارة قد يشير إلى مستوى الإجهاد الحراري ودليلا التشخيص لاستقرار كرات الدم الحمراء ومقاومته للحرارة. بل هو أيضا اختبارا مفيدا للغاية وسريع لتقييم فعالية العلاج الوقائي ضد مضاعفات الإجهاد الحراري. تحريض سو بروتينات الصدمة الحرارية كعلامة من الإجهاد الحراري نوقش سابقا 30، ولكن هذا النهج هو مضيعة للوقت، ولا يمكن أن تستخدم لتشخيص في الوقت الحقيقي من الاستجابة للإجهاد الحراري.
النهج قدمت للوقاية من الإجهاد الحراري الآثار السلبية غير بسيطة، فعالة من حيث التكلفة ولا تحتاج إلى معدات إضافية أو تسهيلات خاصة. سوف تطبيقها في المستقبل من هذا العمل يساعد على فهم آليات حماية ضد مضاعفات الإجهاد الحراري وتميز الإجراءات الجديدة لهذه الحماية. هذا الأسلوب هو من أهمية للعمال الطرق والعسكريين والرياضيين - مجموعة من الناس التي هي في خطر لضربة شمس خلال الشديد النشاط البدني في الهواء الطلق (29). يسمح النهج المقترح واحدة لفحص مستوى الإجهاد الحراري وتقييم طرق مختلفة لحماية صحة الناس الذين يعملون في ظروف قاسية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| Ethyl Alcohol | Pharmco products Inc. Brookfield, CT, USA | 64-17-5 | |
| Agar | VWR | 97064-334 | |
| MacConkey agar plates | VWR | 470180-742 | |
| 5% blood agar plates | VWR | 89405-024 | |
| Brucella blood agar plate with Hemin, and Vitamin K | VWR | 89405-032 | |
| Bouin’s Fixative | Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA | 15990 | |
| IL-10 Rat ELISA kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0101 | |
| IL-1beta Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0011 | |
| IL-6 Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0061 | |
| INF-gamma Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC4021 | |
| TNF-alpha Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC3011 | |
| Rat LPS ELISA Kit | NeoBioLab, MA, USA | RL0275 | |
| Environmental Chamber 6020-1 | Caron, Marietta, OH, USA | 6020-1 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter, Indianapolis, IN, USA | Optima L-90K | |
| Ultra Centrifuge | |||
| Light microscope optical system | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Colony counter | Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, USA | RE-3325 | |
| Freezer | Haier, Brooklyn, NY, USA | HCMO50LA | |
| Ultra microplate reader | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx 808 | |
| Auto Strip Washer | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx50 | |
| Pipettes | Gilson, Pipetman, France | P100, P200, P1000 | |
| C24 Incubator Shaker | New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA | Classic C24 | |
| Rocking Shaker | Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA | 55 | |
| Petri dishes | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, USA | SG403 | |
| Culture Growing Flasks | Corning Incorporated, Corning, NY, USA | 4995 | PYREX 250 ml Erlenmeyer flasks |
| Optical Spectrometer Genesys 20 | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA. | 4001 | |
| Sony DXC-33 Video camera | Sony | ||
| Richardson test slide | Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA | 80303 | |
| Millipore water purification system | Millipore | Direct-Q | |
| Image-Pro Plus software | Media Cybernetics, MD, USA | ||
| Triple Beam Balance | OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, USA | ||
| Tissue Homogenizer, Dounce | VWR | 71000-518 |
References
- Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J.
- Lambert, G. P. Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke. Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).
- Yu, J., et al. Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study. Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).
- Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. New Frontiers in Thermoregulation and Exercise. Sports Med. 16, 163-167 (1993).
- Lambert, G. P. Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects. J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).
- Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance. Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).
- Khan, M. W., et al. Microbes, intestinal inflammation and probiotics. Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).
- Quigley, E. M. M. Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults. Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).
- Gore, C., et al. Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years. Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).
- Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. Gut microbiota, probiotics and diabetes. Nutr. J. 13, (2014).
- Eutamene, H., et al. Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats. J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).
- Ait-Belgnaoui, A., et al. Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats. Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).
- Fujiya, M., et al. The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter. Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).
- Cutting, S. M.
- Pinchuk, I. V., et al. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics. Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).
- Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V.
- Gracheva, N. M., et al. The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).
- Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. JMM Case Report. 1, (2014).
- Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores. Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).
- Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. eds H.G. Vogel & W.H. Vogel. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).
- Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice. J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).
- Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 118, 229-241 (2004).
- Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery. J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).
- Ribeiro, S. R., et al. Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet. Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).
- Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser. Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).
- Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats. J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).
- Richardson, T. M. Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at. Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).
- Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures. J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).
- Leon, L. R., Helwig, B. G. Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response. J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).
- Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit. Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).
