Summary
procédures de coupe du cerveau organisés sont nécessaires pour corréler les phénomènes neuropsychiatriques spécifiques avec des diagnostics neuropathologiques définitives. boutures de cerveau sont effectuées différemment selon diverses éventualités clinico-académique. Ce protocole décrit une procédure de coupe du cerveau bihemispheric symétrique pour étudier les différences hémisphériques dans les pathologies du cerveau humain et de maximiser les techniques biomoléculaire / neuroimagerie actuelles et futures.
Abstract
Neuropathologistes, parfois, se sentent intimidés par la quantité de connaissances nécessaires pour produire des diagnostics définitifs des phénomènes neuropsychiatriques complexes décrits chez les patients pour lesquels une autopsie du cerveau a été demandée. Bien que les progrès des sciences biomédicales et neuroimagerie ont révolutionné le domaine neuropsychiatrique, ils ont également généré l'idée trompeuse que les autopsies du cerveau ont seulement une valeur de confirmation. Cette idée fausse a créé une réduction drastique des taux d'autopsie et, par conséquent, une possibilité réduite d'effectuer des enquêtes neuropathologiques plus détaillées et approfondies, qui sont nécessaires pour comprendre de nombreux aspects normaux et pathologiques encore inconnus du cerveau humain. La méthode déductive traditionnelle de corrélation entre les phénomènes neuropsychiatriques observés et correspondant localisation / caractérisation de leurs corrélats neurohistologiques possibles continue d'avoir une valeur indéniable. Dans le contexte de neuropsychimaladies triques, la méthode clinicopathologique traditionnelle est toujours la meilleure méthodologie possible (et souvent le seul disponible) pour relier les caractéristiques neuropsychiatriques uniques à leurs substrats neuropathologiques correspondants, puisqu'il repose précisément sur l'évaluation physique directe des tissus du cerveau. L'évaluation des cerveaux post mortem est basée sur le cerveau des procédures qui varient entre les différents centres de neuropathologie de coupe. boutures de cerveau sont effectuées d'une manière relativement extensive et systématique sur la base des diverses éventualités cliniques et universitaires présents dans chaque établissement. Une méthodologie de coupe du cerveau bi-hémisphérique plus anatomiquement inclusive et symétrique devrait au moins être utilisé à des fins de recherche en neuropathologie humaine pour étudier de manière cohérente, en profondeur, des conditions normales et pathologiques avec les particularités du cerveau humain (c. -à- spécialisation hémisphérique et latéralisation pour particulier les fonctions). Une telle méthode offrirait une colle plus complètection des cerveaux neuropathologique bien caractérisés disponibles pour les techniques de la biotechnologie et de neuroimagerie actuels et futurs. Nous décrivons une procédure de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique pour l'étude des différences hémisphériques dans les pathologies du cerveau humain et pour une utilisation avec le courant, ainsi que les futures techniques biomoléculaire / neuroimagerie.
Introduction
Neuropathologistes ont le privilège scientifique, l'honneur intellectuelle, et l'obligation de diagnostic pour évaluer les cerveaux humains. Pendant de nombreuses décennies, les descriptions cliniques détaillées des maladies du cerveau et des efforts importants pour individualisent leurs corrélats neurohistologiques possibles dans le cerveau post-mortem humains ont été entreprises. Historiquement, ces efforts représentent la modalité la plus productive par lequel les sciences médicales et la neurologie, en particulier, ont progressé dans l'ère moderne. Merci à neuropathologistes précédents éminents et leur dévouement, la détermination, la bourse, et étonnante capacité de discriminer entre les tissus cérébraux normaux et anormaux (en utilisant souvent des outils très rudimentaires), nous pouvons maintenant étudier et des maladies telles que la maladie d'Alzheimer-Perusini cibles (injustement seulement appelé la maladie d'Alzheimer maladie; APD / AD) 1, la maladie de Parkinson (PD) 2, la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) 3, la maladie de Lou Gehrig / sclérose latérale Sclerosis (ALS) 4, et Guam maladies 5, pour ne citer que quelques - uns.
Des techniques avancées de neuroimagerie, tels que la haute définition tomodensitométrie (c. -à- scan en spirale multisection CT; angiographie CT) (c. -à- IRMf, diffusion-IRM, tractographie-IRM, etc.) tomographie par émission, l' imagerie par résonance magnétique fonctionnelle et morphologique, Positron (TEP), l'imagerie par ultrasons à base, et d'autres, ont certainement modifié notre approche générale sur la façon de diagnostiquer et guérir les patients neurologiques et psychiatriques. Néanmoins, bien que les techniques de neuroimagerie sont capables de visualiser le cerveau d'une personne de son vivant, ils ne proposent pas la possibilité, pour le moment se produire, d'analyser directement les structures cellulaires et sous-cellulaires hautement complexes de cellules, telles que les neurones; ou de visualiser, d'une marque, et de quantifier des types spécifiques de lésions intracellulaires; ou pour indiquer avec précision leur localisation neuroanatomique ou sous-régional à circuital et sousniveaux anatomiques Circuital. Par exemple, les techniques de neuroimagerie ne peuvent pas identifier ou localiser corps de Lewy (LB) dans les neurones pigmentées de la substantia nigra (SN), une caractéristique pathologique commune associée à PD, ou les dégénérescences neurofibrillaires (NFT) dans le cortex entorhinal, une caractéristique classique de la MA et d'autres pathologies cérébrales. enquêtes neuropathologiques associées à la microscopie numérique de pointe sont encore unreplaceable des corrélations clinicopathologiques détaillées et, par conséquent, pour les diagnostics définitifs.
En raison des propriétés particulières anatomo-fonctionnelle du cerveau humain, et en particulier à sa localisation anatomique (qui est, à l' intérieur du crâne, un système de protection naturelle qui ne permet pas l'examen direct de son contenu), l'introduction de techniques in vivo de neuroimagerie ont les cliniciens et les chercheurs extraordinairement aidé à trouver des réponses initiales à quelques-uns des mystères de ce tissu complexe. Cependant, il n'y a aucune preuve clinique ou neuroimagiméthodologie ng qui peut remplacer l'occasion unique d'analyser directement les tissus du cerveau lors d'une autopsie. Seule la collecte organisée, la préservation et la catégorisation des cerveaux humains peut permettre de diriger des enquêtes et systématiques des cellules neuronales et non neuronales, leurs constituants subcellulaires, intracellulaire et des lésions pathologiques extracellulaires, et tout type d'anomalie dans le cerveau pour confirmer, modifier ou redéfinir les diagnostics cliniques et de découvrir de nouvelles corrélations clinicopathologiques. Une des limitations apparentes concernant l'évaluation du cerveau à l'autopsie a été le fait que cette procédure est une méthode transversale. Il y aura toujours un délai entre un processus continu neuropathologique (manifeste ou non clinique) et la possibilité, le cas échéant, de le définir au niveau neurohistologique. Ceci est principalement dû à l'incapacité du cerveau humain à se régénérer. Il est actuellement impossible d'obtenir les tissus du cerveau in vivo sans créer de pedommages rmanent. Par conséquent, il est impossible d'évaluer longitudinalement et sur le plan neuropathologique le même cerveau / personnes. Toutefois, les procédures cerveau bancaires normalisées et une prise de conscience accrue pour le don du cerveau auprès du grand public pourrait grandement contribuer à la résolution des problèmes de synchronisation cerveau autopsie par augmentation constante du nombre de cas pour recueillir et analyser. De cette manière, un nombre plus adéquat de cerveaux post-mortem ont pu être obtenus pour définir des motifs constants d'origine pathologique et la progression de chaque type de lésion cérébrale associée à chaque maladie du cerveau humain. Cela nécessiterait le don et la collecte d'autant de cerveaux que possible de patients touchés par un trouble neuropsychiatrique, ainsi que des sujets témoins en bonne santé à tous les âges. Une méthode possible pourrait être la collecte autant de cerveaux post mortem que possible des centres médicaux généraux et spécialisés comme une routine standard. La nécessité pour les dons du cerveau a été récemment exprimépar ceux qui étudient la démence et vieillissement normal 6. La même nécessité doit être exprimée par le champ neuropsychiatrique dans son ensemble.
Pour ce qui précède et pour d'autres raisons, une mise à jour des procédures de coupe du cerveau en cours est nécessaire. En outre, le cerveau des procédures de coupe doit être universellement standardisée entre les différents centres de recherche de neuropathologie à travers le monde, en prenant également en compte la possibilité d'utiliser des techniques biotechnologiques actuelles et futures pour mieux enquêter et, espérons-le, de comprendre définitivement, les causes et les mécanismes des maladies du cerveau dans humains.
Ici, principalement à des fins de recherche, nous décrivons une méthode symétrique pour le cerveau post-mortem de coupe chez les humains. Cette procédure propose la collecte de régions plus cérébral que fait normalement et des deux hémisphères cérébraux et cérébelleux. Une procédure de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique conviendra beaucoup mieux avec nos connaissances actuelles de l'hommeneuroanatomie, neurochimie, et neurophysiologie. Cette méthode permet également la possibilité d'analyser les caractéristiques uniques neuropathologique du cerveau humain, tels que la spécialisation hémisphérique et la latéralisation qui sont associés à des fonctions cognitives et non cognitives supérieures typiquement ou exclusivement présente dans notre espèce. Qu'il y ait des relations pathogéniques spécifiques entre l'hémisphère spécialisation / latéralisation et des types spécifiques de lésions cérébrales, ou si un événement pathogénique neuropsychiatrique particulière est d'abord, prévalente, ou exclusivement associés à un hémisphère spécifique et la fonction ne sont pas actuellement connus. En décrivant cette procédure de coupe du cerveau symétrique, nous nous efforçons de proposer une méthode mise à jour de la dissection du cerveau humain qui pourrait aider à mieux comprendre les conditions normales et pathologiques dans un tissu hautement spécialisé, le cerveau. Cette méthode prend également en considération les aspects de l'hémisphère morpho-fonctionnelles qui existent seulement chez les humains.
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Protocol
Les procédures impliquant des tissus humains post-mortem ont été examinés par le comité d'examen institutionnel et exemptés en vertu de 45 CFR (Code of Federal Regulations).
NOTE: Le protocole décrit une procédure de coupe du cerveau bihemispheric symétrique pour l'évaluation du cerveau post-mortem finalisé pour les études neuropathologiques chez les humains. Des descriptions détaillées des appareils, instruments, matériaux et fournitures nécessaires pour effectuer la coupe du cerveau humain seront exclus. Matériaux et fournitures pour dissections du cerveau sont sélectionnés à la discrétion du chercheur unique et sont basés sur les outils d'autopsie autorisés ou approuvés à chaque institution de recherche. L'ensemble minimal d'outils et le matériel requis pour cette procédure est décrite dans le tableau Matériel / Equipement. Procédures et précautions pour les maladies du cerveau transmissibles suspects, tels que la MCJ humaine coupe spécifiques, sont en dehors des objectifs de ce manuscrit et sont disponibles à partir d' autres sources 7.
1. Symmetric Bihémisphérique coupe du cerveau
Remarque: Assurez -vous que le cerveau a reçu la fixation du tissu nécessaire ( en utilisant, par exemple, neutre tamponnée au formol à 10%) pendant une période de deux à trois semaines, selon le periagonal, métaboliques ( par exemple, le pH) et le tissu de conservation ( à savoir, température) conditions. Cependant, pour des études de corrélation imagerie-pathologie, une période de fixation plus longue (> 5,4 semaines) a été suggérée 8.
- Placer le cerveau sur une surface plane faisant face à l'enquêteur, avec les pôles frontales dirigées dans le sens opposé par rapport à l'enquêteur.
- Placez le cerveau de telle manière à permettre une visualisation claire et complète de toutes les circonvolutions corticales et sulci du cerveau entier (figure 1a).
- Premier coup d' oeil pour les anomalies méningées, asymétries hémisphériques macroscopiques (indicateurs possibles de focale, lobaire, ou des phénomènes hémisphériques généralisées d'atrophie), des lésions macroscopiques tissutal (ie, toumors ou hernies), des malformations congénitales, des anomalies des vaisseaux, et d'autres anomalies possibles ou des présentations inhabituelles de la surface cérébrale.
REMARQUE: Pour des descriptions détaillées sur la façon d'évaluer un cerveau humain, voir disponibles dans le commerce manuels de neuropathologie et manuels d' autopsie 9,10.
2. Protocole de séquence
- Face à poteaux frontaux loin de l'enquêteur, avec les aspects superficiels de l'hémisphère (télencéphale) face à l'enquêteur. Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter possibles macro-anomalies et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche prendre des photographies numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale (figure 1a - c).
- Mark pré et gyri corticales postcentral à l'encre ou des aiguilles de couleur avant de couper le cerveau (figure 1b NOTE: Cette procédure facilite une reconnaissance plus immédiate du moteur et corticales primaires somatosensoriel après la coupe.
- Tournez le cerveau de 180 degrés tout en gardant la même direction (ie, les pôles frontales opposées à l'enquêteur). Inspectez soigneusement la base du cerveau. Portez une attention particulière aux conditions des systèmes vasculaires cérébraux ( par exemple, les artères basilaires et vertébrales et le cercle de Willis) et les nerfs crâniens à leurs niveaux de sortie / d'entrée du tronc cérébral. Gérer les ampoules et les voies olfactives avec un soin particulier pour éviter la lacération tissutal, en raison de leur extrême fragilité.
- Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter possibles macro-anomalies et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer l'intégralité des surfaces corticales et du tronc cérébral.
- Face à la base du cerveau et en utilisant un scalpel, couper la transversale du tronc cérébral au niveau de la partie supérieure du pont (aussi près que possible à la base du cerveau). Inspectez soigneusement la SN (ie, pâleur) 11 et d' autres structures voisines 12. Prenez note, en utilisant éventuellement un dispositif d'enregistrement audio, de toute apparence inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal 13.
- Encore une fois tourner le cerveau de 180 degrés et, à l'aide d'un couteau bien aiguisé, séparer les deux hémisphères en coupant le corps calleux centralement à travers la fente longitudinale médiane et suivant une direction fronto-occipital. Inspectez chaque côté de chaque hémisphère pour d' éventuelles anomalies (par exemple, des agrandissements ventriculaires, malformations, adoucissement des tissus, tumeurs, etc.) 13. Voir la figure 2a.
- Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter macro-anomalies possibles etpour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale. Prenez note de toute caractéristique inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal.
- Placez les deux hémisphères plat, couchés sur leurs aspects médiaux, avec les lobes frontaux opposé à l'enquêteur, comme le montre la figure 2b. Placez-les de manière à ce que leurs centres touchent (également en cas d'asymétrie hémisphérique marquée).
- Avec un couteau bien aiguisé, couper manuellement à travers les deux hémisphères cérébraux, en commençant par les pôles frontaux et le déplacement vers les pôles occipitaux sur toute la longueur des hémisphères. Obtenir deux séries de 1 cm d'épaisseur des blocs de tissu cérébral (environ 18 plaques pour chaque hémisphère).
- Placer les plaques cérébrales dans un (sens fronto-occipitales) la séquence anatomiquement organisée sur une surface plane séparée. Utilisez un surfa blancCE avec une règle imprimée sur elle pour un meilleur contraste lorsque vous photographiez. Afficher les deux séries de plaques cérébrales d'une manière anatomique symétrique (direction fronto-occipitale), en veillant à ce que leurs surfaces coronales sont visibles pour l' inspection directe des yeux et de la photographie numérique (Figure 3a). Utiliser des surfaces de coupe avec des grilles millimétriques imprimées des deux côtés pour localiser les structures cérébrales, tailles et anomalies possibles d'une manière plus précise.
- Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter possibles macro-anomalies et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale. Prendre des notes (éventuellement en utilisant un dispositif d'enregistrement audio), d'un aspect inhabituel du cerveau par rapport à un cerveau normal.
- L'utilisation d'un scalpel, disséquer manuellement des blocs rectangulaires plus petits deles tissus du cerveau pour chaque région cérébrale établie. Suivez le système de collecte de la région cérébrale proposée décrite dans le tableau 1.
- Mettez chaque bloc de tissu dans histocassettes étiquetés séparément.
NOTE: Chaque bloc de tissu cérébral doit être coupé pour adapter, autant que possible, le volume maximal de histocassette standard (30 x 20 x 4 mm 3). - Etiqueter les histocassettes en utilisant un code de-identification pour chaque cas et en utilisant des identifiants neuroanatomiques spécifiques (ne pas utiliser des lettres ou des nombres aléatoires pour différents cerveaux, mais plutôt, utiliser toujours la même régionale noms anatomiques ou les numéros correspondants, comme indiqué dans le tableau 1). Créer des codes de-identifier, par exemple, en générant des nombres aléatoires ou semi-aléatoires pour chaque cas (c. -à- BRC 130, où B reste du cerveau, R reste pour Ressource, C reste pour le centre et 130 est une adhésion progressive ou AD160001, où AD signifie «l'étude de la maladie d'Alzheimer," 16 est leannée où l'autopsie a été réalisée (2016) et 0001 un numéro d'accès de l'échantillon progressif).
REMARQUE: Cette étape est très utile pour les futurs chercheurs; garder une légende, et spécifiez l'hémisphère (L = hémisphère gauche, R = hémisphère droit). Utilisez deux couleurs différentes de histocassettes, l'établissement d'une couleur spécifique pour chaque hémisphère. - Prenez autant de photos numériques que nécessaire dans chaque cas particulier pour documenter macroanomalies possibles et pour tenir compte des considérations clinico-neuroanatomique et post-coupe possibles. Avoir un assistant de recherche de prendre des photos numériques perpendiculairement au cerveau pour capturer la totalité de la surface corticale. Prenez note de toute caractéristique inhabituelle du cerveau par rapport à un cerveau normal.
- Mettez chaque bloc de tissu dans histocassettes étiquetés séparément.
- Prenez des photos numériques (autant que nécessaire ou souhaité) de l'ensemble du cerveau de coupe et les histocassettes associés.
- Punch (par exemple, par Accu-punch) de petits morceaux de tissu pour l' extraction de l' ADN et des analyses génétiques. Utilisationun coup de poing de 2 - 5 mm de diamètre.
NOTE: Pour sa teneur élevée en matière génomique, le cervelet est le choix préféré; cependant, toute autre région est très bien. - Réimmerger tous histocassettes contenant des blocs de tissu cérébral dans le même type de solution de fixation (par exemple 10% de formol tamponné neutre) comme précédemment utilisée jusqu'à l'étape suivante de traitement des tissus.
- Suivez les procédures standard pour le traitement des tissus fixés au formol 14 humain.
3. Une approche spéciale: Alternating Congelés et fixe coupe Symmetric Bihemispheric
NOTE: Le protocole de coupe du cerveau bihemispheric symétrique décrit dans la section 2 offre la possibilité de découper des dalles de tissus de cerveaux frais, non fixées (si disponible) de la même manière systématique et symétrique.
- Placer l'ensemble du cerveau frais à l'envers (de préférence sur une surface en matière plastique en forme de bol hémisphérique) pendant 8 à 10 minutes dans un congélateur à -80 ° C pour durcir le tissu cérébral without provoquer des dommages biochimiques et pour faciliter la coupe manuelle.
- Avec un couteau bien aiguisé, couper les deux hémisphères dans une autre et de manière consécutive, en suivant le protocole de coupe du cerveau décrit dans la section 2, mais geler et fixer tous les autres dalle (des deux hémisphères et le long d'une direction anatomique fronto-occipitale).
- À ce stade, ne pas essayer de couper chaque région cérébrale, comme décrit dans le tableau 1. Couper des régions spécifiques du cerveau frais seulement si nécessaire pour l' ARN immédiat ou l' extraction des protéines ( par exemple, pour des études génomiques ou protéomiques) 15.
- Après la coupe, geler immédiatement, l'étiquette et le numéro de chaque tissu frais. Prenez des photos numériques de la série de la dalle entière; emballer chaque dalle dans un sac en plastique unique; recueillir les dalles en un cerveau uniquement récipient séparé,; et stocker le récipient dans un congélateur à -80 ° C dédié.
NOTE: Le congélateur doit être dédié aux tissus du cerveau humain seulement. Seulement plus tard, va chanterLe régions du cerveau congelé être coupées selon les besoins pour chaque expérience spécifique. - Immerger tout autre dalle de tissu choisi pour la fixation (10% de formaline tamponnée neutre ou une autre fixatif) dans des sacs séparés contenant un volume suffisant de fixatif (3/1 volume du rapport A / tissu bloc fixatif). Étiquetez chaque sac par consécutivement les numérotant suivant une séquence fronto-occipital. Sceller chaque sac, prendre des photos numériques, et les stocker dans un récipient en plastique.
- Ouvrez les sacs contenant fixateur-après 2 semaines de fixation du tissu et couper chaque région cérébrale comme décrit dans le tableau 1.
4. Histostain et immunohistochimie
NOTE: L'ensemble des régions cérébrales cut basée sur le schéma proposé (tableau 1) sont suffisantes pour satisfaire à des critères pathologiques basés sur le consensus la plupart, sinon tous, actuellement établi pour AD 16, PD 17, la démence à corps de Lewy (DCL) 18, La démence frontotemporale (DFT / MND)
- Pour chaque région du cerveau et pour les deux hémisphères, effectuer l'ensemble minimal de histostains suivant: hématoxyline et de l'éosine (H & E), le violet de crésyl (CV, si des études quantitatives morphométriques sont prévues, par exemple), et coloration à l'argent (si des analyses "exploratoires" sont nécessaire).
- Pour chaque région du cerveau et pour les deux hémisphères, effectuer l'ensemble minimal de protocoles d'immunohistochimie suivants: ß - amyloïde (β A),-Tau phosphorylée (pTau), phosphorylée α-synucléine (pα-syn), et phosphorylée-TDP43 (pTDP43) , tel que décrit 14.
NOTE: Le nombre total de coupes de tissus afin d'évaluer chaque cerveau à la suite de ce protocole est de 46 (si toutes les régions cérébrales des deux hémisphères sont disponibles).
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Representative Results
Protocole Longueur
Le temps passé pour une procédure de coupe unique symétrique bihemispheric fixe du cerveau est estimé à 1 h (hors temps passé la mise en place de la table de dissection, des outils et surfaces de coupe; étiquetage;. Etc). Le temps nécessaire à une seule alternance bi-hémisphérique symétrique gelé et le cerveau fixe la procédure de coupe est estimée à 2 h. Il peut prendre au moins entre 4-6 semaines pour obtenir des diagnostics histologiques définitives pour un seul cerveau humain / sujet. Après l'élimination du cerveau post-mortem du crâne, une période appropriée de fixation du tissu (2 - 3 semaines au moins) doit se produire. Ensuite, une série de protocoles, y compris la découpe symétrique bihemispheric cérébrale, le traitement des tissus, l'incorporation de tissu, le bloc de sectionnement, et la coloration immunohistochimique et doit être effectuée. Enfin, l'évaluation microscopique de chaque région par hémisphère, l'utilisation de consensus établi des critères et classifications pathologie, l'examen des dossiers cliniques, et peut-être la corrélation des clinicopathology, doit avoir lieu avant que des conclusions neuropathologiques. L'ensemble du calendrier pour une évaluation complète neuropathologique du cerveau humain doit être soigneusement pris en compte lors de la planification des études de recherche spécifiques. En outre, des collègues médicaux et les enquêteurs de la recherche, les familles des donateurs, et les autorités judiciaires doivent être informés de l'obligation globale de temps, la complexité et le temps de l'équipe / effort pour obtenir une évaluation neuropathologique moderne.
Bien que le protocole de coupe du cerveau proposé représente une procédure fastidieuse et difficile, il représente en fait une méthodologie scientifiquement enrichissante pour évaluer intensivement les cerveaux humains dans les deux conditions saines et pathologiques. Il est important de souligner que, bien souvent , au cours de l' autopsie, le cerveau reçus comme / sujets normaux de contrôle (c., Les sujets évalués comme cliniquement ou neurologiquement normaux avant la mort) peuvent effectivement être révélés positifs pour diverses pathologies du cerveau après une évaluation neuropathologique précise. Ces cas représentent les soi-disant sujets asymptomatiques et précliniques pour diverses maladies du cerveau, en particulier celles qui caractérisent les maladies neurodégénératives liées à l'âge. Cela souligne l'importance d'évaluer les cerveaux reçus comme «contrôle» d'une manière très large et méticuleux, notamment à des fins de recherche. Il devient de plus en plus évident que les cerveaux humains / sujets, symptomatiques ou non pour les troubles neurologiques / psychiatriques, peuvent accumuler de multiples pathologies cérébrales (soi-disant pathologies concomitants) au cours du vieillissement 23,24. Curieusement, ces lésions cérébrales concomitants sont biochimiquement identiques à ceux trouvés chez les patients atteints de maladies qui se manifestent cliniquement et sont localisées dans les mêmes régions anatomiques ainsi (PARS, ARTag, SRSAC) 25-27. Ces more découvertes récentes (possible uniquement grâce à des enquêtes d'autopsie) ont un intérêt extraordinaire pour l'étude des effets du vieillissement sur le cerveau humain.
Le tableau 2 et la figure 4 décrivent des données semi - quantitatives préliminaires obtenus en utilisant un cerveau de coupe procédure bi-hémisphérique symétrique réalisée sur une série de cerveaux humains recueillies dans notre banque de cerveaux. Ces données préliminaires montrent que la plupart des cerveaux reçus comme «normal» ou «contrôle» des sujets plus âgés étaient en fait non seulement positif pour ß plaques A-séniles et des enchevêtrements tau-neurofibrillaire (tau-NFT), comme déjà connu 28-32, mais aussi que les charges des plaques de ß-A neuritique insolubles étaient plus élevés dans le cortex entorhinal gauche et de l' hippocampe par rapport au cortex entorhinal et de l' hippocampe droit du même cerveau. Les cerveaux ont été évalués à l' aide CERAD 33 et Braak mise en scène 34 systems, qui évaluent respectivement ß plaques A-neuritique et tau-NFT. La prédilection hémisphère gauche observée pour insoluble β Une pathologie était également présent, mais seulement comme une tendance, dans la plupart des autres régions de l'hémisphère gauche par rapport à l'hémisphère droit. La pertinence de ces conclusions préliminaires bi-hémisphérique est que les cerveaux analysés étaient tous d'une cohorte d'autopsie général population. Tous les sujets ont été hospitalisés, en fait, pour des causes non neurologiques / psychiatriques et sont morts dans différents hôpitaux généraux communautaires pour des raisons non neurologiques. Le fait que les cerveaux étaient analysés à partir d'un grand-population cohorte autopsie biais de sélection minimisée éventuellement présents lors de l'analyse seulement les cerveaux des centres neurologiques / démence spécialisés. Voir aussi la recommandation de NINDS 6. Nos résultats sont préliminaires (disponibles cerveaux 4 sur 46 «contrôle») et ont besoin de confirmation à une échelle beaucoup plus grande. Cependant, ces nouvelle découvertes, si elle est confirmée, suggèrent un phénomène possible d'une prédilection hémisphérique pour l'accumulation et la progression de la pathologie AD ou ß Une pathologie au moins. types similaires de prédilections hémisphériques pathologiques pourraient très probablement être associés à chaque type spécifique de trouble neuropsychiatrique ou neurodégénérative. En outre, en combinant les procédures de cerveau de coupe bi-hémisphérique symétriques par des méthodes de quantification cellulaires et lésions précises (c. -à- stéréologie non biaisé), il pourrait être possible de mesurer le rapport de la normale à des états pathologiques, ainsi que le rapport de la perte neuronale au réparatrice / phénomènes de neuroplasticité qui pourraient être présents chez l'homme par rapport à un hémisphère et la fonction spécifique. Curieusement, bien que la prédilection de l' hémisphère pour chaque grand type de pathologie cérébrale (β - amyloïde, tau, LB, TDP43, FUS, etc.) Reste à établir, la neuroimagerie fonctionnelle 34, 36 neuropsychologique p>, et anatomique microstructure analyses 37,38 semblent être en ligne avec nos résultats préliminaires. Cela renforce l'hypothèse d'une éventuelle prédilection hémisphérique pour chaque type de pathologie cérébrale et de maladies connexes différente.
Figure 1. Évaluation préliminaire du cerveau avant de couper Bihemispheric cerveau. Cette figure montre les différents aspects superficiels d'un cerveau humain après 2 semaines de fixation à 10% de formaline neutre tamponnée. Dans une séquence dans le sens horaire, les aspects supérieurs du cerveau (a, b) sont suivies par les observations faites à la base du cerveau, qui comprend l' inspection du cervelet (c), du tronc cérébral et des nerfs crâniens (d), et des bulbes olfactifs et tracts (e).02 / 54602fig1large.jpg "target =" _ blank "> S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 2. Coupe Bihemispheric cerveau humain. Fixés à la formaline cerveau humain posé sur une surface plane pour une inspection oculaire (a). La ligne rouge indique la fissure longitudinale médiale. Placement des deux hémisphères cérébraux après une coupe centrale à travers la fissure longitudinale médiale (b). S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 3. Procédures de coupe Bihemispheric cerveau. Cette figure montre quelques-unes des étapes de le protocole de coupe de cerveau humain bihemispheric. Après l' élimination de toutes les dalles du cerveau (pour les deux hémisphères) et suivant une direction fronto-occipitale (a), chaque région du cerveau mis en place pour recueillir (tableau 1) sera coupé en blocs de tissus dimensions histocassette standards de montage (b - e). Blocs de tissus Cervelet nécessiteront de plus grandes histocassettes (voir le vert [hémisphère cérébelleux droit] et bleu [hémisphère cérébelleux gauche]; e et f). Cassettes blanches sont des structures médianes, comme le bulbe rachidien, la moelle épinière, etc. (E - g). Les histocassettes finales obtenues après le protocole de coupe du cerveau humain bihemispheric et contenant des blocs de tissus du cerveau de chaque région neuroanatomique énumérés dans le tableau 1 sont à nouveau plongés dans le même type initial de la solution de fixateur (10% de formaline neutre tamponnée) (f - g).tp_upload / 54602 / 54602fig3large.jpg "target =" _ blank "> S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 4. Sections de tissus de chaque hémisphère cérébral Stained pour différents antigènes par immunohistochimie. (A) Cette figure montre une série de sections de tissus provenant des deux hémisphères du même cerveau humain. Chaque série de sections bi-hémisphériques ont été immunocolorée pour β - amyloïde, phosphorylée-tau, et phosphorylée α-synucléine (α-syn), dont la positivité est associée à des maladies neurodégénératives liées à l' âge courantes telles que la maladie d' Alzheimer et de Parkinson. L'image montre un exemple représentatif de la quantité totale possible des sections à analyser en utilisant le protocole bi-hémisphérique symétrique proposé coupe du cerveau. LH = Hémisphère gauche, RH = hémisphère droit. ( B) Ces images montrent des échantillons de lésions courantes liées au vieillissement du cerveau, comme on l' observe au microscope après l' utilisation de protocoles d'immunohistochimie spécifiques pour les plaques ß amyloides bêta séniles, les enchevêtrements tau-neurofibrillaire et d' α-synucléine (α-syn) -positif corps de Lewy. Dans le coin inférieur droit de chaque image est le type d'objectif utilisé (5X, 20X et 40X) pour agrandir et précisément identifier chaque type de lésion. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Tableau 1. Bihemispheric de coupe Scheme. Ce tableau montre la zone anatomique unique de disséquer dans les deux hémisphères gauche et droit de chaque cerveau. Le découpage symétrique bihemispheric peut être fait sur des cerveaux frais et fixes.rce.jove.com/files/ftp_upload/54602/54602table1.xlsx">Please~~MD~~aux cliquez ici pour télécharger ce fichier.
Tableau 2. Résultats préliminaires obtenus à l' aide de coupe Bihemispheric cerveau humain. Ce tableau présente les résultats préliminaires obtenus par le biais d'une procédure de coupe du cerveau humain symétrique bihemispheric réalisée sur quatre cerveaux humains de sujets plus âgés, cliniquement normaux. Les données montrent que deux régions cérébrales (le cortex entorhinal et l' hippocampe) sont constamment et début impliqués dans l'accumulation de plaques séniles amyloides bêta ß et tau-NFT. Ce type de lésion est considérée comme la plus probable processus pathogénique provoquant AD. f = féminin; m = masculin. Les chiffres entre parenthèses représentent l'âge au décès (en années) de chaque sujet autopsiés. Un code colorimétrique semi-quantitative pour la visualisation rapide de hemis possiblesdifférences riques entre les types de lésions, les niveaux de gravité, et localisations anatomiques entre les différents sujets âgés a été utilisé. Neg = négatif (vert); Sparse = 1 - 2 lésions (jaune); Modéré = 3 - 6 lésions (orange); Frequent => 6 lésions (rouge). S'il vous plaît cliquer ici pour télécharger ce fichier.
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Discussion
Cette méthode de cerveau de coupe peut être adaptée aux besoins spécifiques de chaque laboratoire de neuropathologie (par exemple, en réduisant le nombre de régions cérébrales pour évaluer pour chaque hémisphère), tout en conservant la procédure de coupe symétrique bihemispheric comme l'une de ses principales caractéristiques. Ce protocole proposé pourrait être utilisé pour des procédures de routine (centres neuropathologiques orientés vers la recherche) ou seulement lorsque cela est nécessaire (études spécifiques axées sur le plan clinique). Il peut être utilisé de manière sélective uniquement pour des types spécifiques d'enquêtes (c. -à- immunohistochimie) ou des analyses moléculaires (analyses c. -à- génomique ou protéomique). D'un point de vue technique, il est utile de mentionner que quelques différences pathologiques (surtout en immunohistochimie) pourraient être dues à des variations possibles artefactuels dans les intensités de immunohistostaining. Ceux-ci peuvent être réduits au minimum en utilisant des machines automatiques de coloration, ce qui réduit considérablement les risques d'effets de coloration d'un artefactuellevariations nd. Il est actuellement possible, en effet, de réduire au minimum technologiquement la plupart des facteurs de confusion due à des artefacts techniques fiables en utilisant des machines de coloration robotiques. Ainsi, des résultats comparables peuvent être obtenus lors de l'évaluation, par exemple, deux hémisphères cérébraux d'un même sujet, ou plusieurs ensembles de deux hémisphères de nombreux sujets.
En outre, au cours des dernières années, le nombre de lésions cérébrales reconnues dans le cerveau humain a été énormément augmenté 39. Ces nouveaux types de lésions cérébrales ont créé un risque accru que les cerveaux précédents classés comme normale ou le contrôle ne sont pas réellement. L'amélioration des techniques d'immunohistochimie et de nouvelles découvertes neuropathologiques suggère une réévaluation sage et périodique de tous les cerveaux précédemment en banque comme «contrôle» , puisque les cas de «pseudo-contrôle» ou «faux-contrôle" cerveaux sont toujours possibles 40.
La principale limitation decette méthode consiste à la quantité de temps et d'expertise (connaissance anatomique et pathologique) nécessaire pour l'exécuter. En outre, des études visant à analyser les aspects génomiques et protéomiques du cerveau humain nécessitent une équipe de banque de cerveaux prêt à gérer, d'une manière rapide, toutes les procédures de don du cerveau, des arrangements juridiques de consentement, le cerveau déménagements et coupe immédiate des procédures de gel ou de fixation. Normalement, ces installations et le personnel ne sont disponibles que dans les centres universitaires ou de recherche spécialisés. En outre, alors que les procédures de coupe détaillées peuvent certainement aider à mieux comprendre les origines anatomiques possibles et les voies d'étalement de chaque maladie du cerveau, ils seront également toujours compter à la quantité de renseignements cliniques détaillés disponibles pour chaque cas afin d'effectuer des études de corrélation clinico précises. Une des meilleures utilisations pour ce protocole, alors, sera dans le cadre d'études longitudinales clinicopathologiques, qui sont souvent le meilleur type de investigation de recueillir plus de détails cliniques, d'imagerie, génétiques, environnementaux, et d'autres types de données à corréler, au microscope, les résultats d'autopsie et immunohistochimie avec des données cliniques recueillies précédemment.
Étonnamment, les enquêtes neuropathologiques analyse, le classement ou la quantification du large éventail de lésions neuropathologiques par rapport à la fonction de l' hémisphère ou de la localisation sont extrêmement rares 41-44. Cependant, il semble que les temps et les technologies sont prêtes à des défis sans précédent dans les études de neuropathologie humaines. La principale raison de proposer une procédure de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique était de respecter les asymétries fonctionnelles particulières (anatomiques ou pathologiques) du cerveau humain. Trop souvent, plus de la tradition accepté aveuglément que prouvé de la raison scientifique, un seul hémisphère (souvent stochastiquement choisi) a été fixée pour l'évaluation neuropathologique ou immunohistochimique, tandis que l'autre a été congelé pour une éventuelle moléculaireou des analyses biochimiques. Surtout lorsque l'on étudie le cerveau humain, la sélection occasionnel de l'hémisphère et la coupe du cerveau conséquente contiennent des risques potentiels en termes anatomiques et peut causer des possibles biais de sélection physiopathologiques. Bien que pour des raisons pratiques, la fixation d'un hémisphère et de congélation le contraire qui est raisonnable dans un environnement non-recherche, il est pas tenable plus longtemps dans le contexte de la recherche neuropathologique pour les troubles neuropsychiatriques. Surtout à l'heure actuelle, lorsque des quantités constantes de "in vivo" neuroimagerie et l' information génétique sont potentiellement disponibles à l' autopsie, une procédure de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique par une évaluation neuropathologique étendue correspondante doit être effectuée régulièrement. La spécialisation hémisphérique du cerveau humain a été démontrée dans de nombreuses fonctions cognitives, comme la langue, la dextérité, et les émotions (ie, l' activation différentielle dans l'amygdale gauche et à droite), au nom afew. Cette spécialisation hémisphérique et la latéralisation des fonctions cognitives et non cognitives supérieures, qui différencient généralement et de caractériser les humains des autres espèces de mammifères et non mammifères, doivent être examinées avec soin en termes de neuropathologie. Qu'il y ait, chez les humains, une prédilection hémisphérique pour les processus pathologiques spécifiques en termes de neurodégénérescence, la réponse neuroinflammatoire, et les capacités neuroreparative est pas encore connue, et il a été très rarement étudié 40-43. Bien que l'imagerie prend en charge bien connu physiologiquement et les caractéristiques de l'hémisphère spécifique cliniquement, il est surprenant de voir combien beaucoup moins connu en termes de différences neuropathologiques possibles. En proposant un cerveau bi-hémisphérique symétrique procédure de coupe, ou l'alternance plus sophistiqué gelé et fixe le protocole de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique, nous avons cherché à décrire une méthode qui pourrait aider à découvrir des aspects particuliers du cerveau humain au cours sain et pathologiconditions cal, comme basé sur sa spécialisation et latéralisation hémisphérique caractéristiques uniques.
L'une des étapes les plus critiques de ce protocole consiste à la nécessité d'avoir le cerveau de coupe paramètre, les matériaux et les outils immédiatement disponibles à tout moment, car il est très rare de pouvoir prévoir quand un cerveau, en particulier un spécimen frais, est en arrivant. Une autre étape importante de ce protocole consiste à la dextérité manuelle requise pour la coupe de cerveau frais et fixe. Bien que le traitement avec un tissu identique, les deux conditions physico-chimiques (frais et tissu fixe) font l'acquisition de savoir-faire pour le cerveau coupant une composante essentielle et critique du protocole. En outre, la connaissance neuroanatomique (en particulier pour les procédures de cerveau frais) suppose des périodes spécifiques de formation académique. Pour les procédures de cerveau frais, d'ailleurs, il est impératif et essentiel de se déplacer aussi rapidement que possible et de maintenir la précision et l'intégrité du tissue. Cela permettra de préserver toutes les informations biologiques contenues dans le tissu, ainsi que la possibilité d'effectuer des enquêtes futures nécessitant du matériel frais congelé (ARN, protéines, etc.).
La méthode du cerveau à double congelé et fixe symétrique coupe représente le meilleur compromis possible pour obtenir à la fois frais congelé (utile pour génétique, moléculaire et analyses microdissection) et fixe (utile pour neuroanatomie, immunohistochimie et PCR in situ analyse) des coupes de tissus du cerveau de zones contiguës de régions cérébrales spécifiques et des deux hémisphères. Cette méthodologie représente une source d'analyses comparatives obtenues par des techniques moléculaires et d' imagerie différentes en utilisant exactement la même région du cerveau / zone (région sous-anatomique, matière noyaux gris, groupes de cellules, dendritiques / épines, etc.). Une procédure de double congelé et fixe symétrique coupe du cerveau permettrait d'obtenir une des coupes de tissu cérébral contigus de la même nezone uroanatomical. Cela permettrait de leur analyse en utilisant la lumière vive, la fluorescence et la microscopie électronique (en utilisant des procédures différentes pour chaque type de microscopie). Les techniques d'extraction d' ARN / ADN / protéine peuvent également être appliqués, par l' intermédiaire laser microdissections de capture, par exemple, à la même région ou à un groupe précis des neurones, des cellules, des navires, etc. Cette alternance gelé et fixe technique de coupe du cerveau bihemispheric symétrique, conjointement avec les systèmes informatiques pour le suivi des échantillons et la réfrigération, semble offrir un potentiel énorme pour l'application de futures études biomoléculaires en cours et potentiels.
Une approche alternative à la procédure de coupe du cerveau décrit pourrait être la coupe transversale de chaque surface de l'hémisphère entier. Cependant, cette méthode nécessite des outils plus spécialisés et coûteux ( par exemple, un microtome plus grand, diapositives plus grandes, etc.) Que ceux normalement utilisés dans la plupart des laboratoires de neuropathologie. Au lieu de cela, notre méthode propose une collection plus étendue des régions cérébrales des deux hémisphères, coupant ces régions cérébrales uniques à l'aide des outils normalement disponibles (et abordables) dans la plupart des laboratoires de neuropathologie de recherche.
La coupe du cerveau proposé peut être combiné avec des méthodes précises de histologiques, cellulaires et subcellulaire quantification (ie, pour stéréologie impartiale) 45-47. Les études neuropathologiques quantitatives sont de première importance, et la nécessité, puisque les données quantitatives sur les circuits, les noyaux, les neurones, les cellules non-neuronales, des anomalies du système vasculaire, et la perte neuronale liés à des lésions pathologiques spécifiques manquent le plus souvent chez l'homme. Récemment, quantifications précises des lésions neuropathologiques spécifiques obtenues en utilisant des protocoles de stéréologie impartiales ont commencé à faire la lumière sur d' éventuelles nouvelles relations entre l'accumulation d'une lésion intraneuronal spécifique (c. -à- corps de Lewy), la perte neuronale (perte du locus niger),et les manifestations cliniques (symptômes parkinsoniens) lors de l' analyse des cerveaux humains 48. La détermination des quantités relatives des neurones de fonctionnement résiduels ou réaction des cellules gliales nécessaire, par exemple, de contraste, de retarder ou de compenser les processus neuropathologiques spécifiques, pourrait aider à mieux comprendre les capacités sensibles et d'adaptation du cerveau humain adulte, en particulier au cours du vieillissement. changements volumétriques neuronales, neurites, charges de lésions, des longueurs de fibres, l'épaisseur corticale, rapports d'épaisseur de la couche corticale, et d'autres aspects possibles morphométriques sont d'un intérêt particulier, étant donné que leur pertinence physiopathologique probable au niveau cellulaire et subcellulaire dans le contexte des maladies neuropsychiatriques ou processus neurodégénératifs n'a pas encore été complètement élucidée 49. Nombre, la taille, la longueur des fibres ou neurites, les volumes de matière grise et blanche et des rapports, des analyses couche corticale, etc. sont autant de paramètres mesurables précisément grâcela combinaison des formules statistiques spécifiques et des algorithmes géométriques 50. équations géométriques et des formules statistiques ont été élégamment intégré à haute sensibilité, systèmes informatisés micrométriques de coordination tridimensional motorisés (systèmes de stéréologie motorisés) pour la quantification histologique de presque tout type de mesure de bio-tissutal.
L'ensemble des neuroanalyses sont maintenant disponibles pour étudier les tissus du cerveau humain n'a pas été imaginable il y a quelques années, et il est fort probable qu'il y aura d'autres progrès dans un avenir proche. La caractérisation détaillée du cerveau d'aujourd'hui de patients, des sujets cliniquement asymptomatiques, et les individus normaux sera incroyablement accélérer les découvertes de demain et l'individuation des thérapies pour la plupart des maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives. Dans le contexte de maladies complexes, telles que les maladies neuropsychiatriques, même les techniques actuelles de neuroimagerie sophistiquées ne peuvent pasoffrir les plus hauts niveaux de définition cellulaire et des informations biologiques que les techniques modernes neuropathologiques peuvent. En outre, seules les images des tissus du cerveau statiques offrent la possibilité d'effectuer des études quantitatives impartiales sur un seul groupe de cellules ou des lésions neuronales ou la possibilité de couper des neurones isolés (ie, microdissection laser) pour extraire le matériel génétique ou de protéines pour les analyses par spectroscopie de masse, pour exemple 51 .La méthode du cerveau coupe bihemispheric symétrique pourrait être appliquée, entre autres, à des études spéciales, telles que celles de l' enquête cerveaux jumeaux identiques. Dans cette situation unique experimentum naturae, le potentiel de mieux comprendre les relations possibles existant entre l' hémisphère spécialisation / latéralisation et de la cognition / pathologie est impressionnante. Les différents niveaux de l'hémisphère liées pathologique symétrie / asymétrie pourraient être plus faciles à expliquer en termes d'un dilemme nature / culture. Par exemple, une symétrieprocédure de coupe cerveau bi-hémisphérique pourrait être effectuée sur le cerveau des jumeaux identiques par rapport aux jumeaux fraternels 52-56.
Une technique de coupe du cerveau bihemispheric symétrique devrait également être appliquée aux études neurodéveloppementaux humaines 57. Hautement données informatives pourraient être collectées pour des aspects spécifiques de neurones liés à l'hémisphère et le calendrier de maturation gliale, phénomènes de neuroplasticité de développement, et les capacités neuroreparative du système nerveux central pendant la petite enfance et de l'enfance. Une procédure de coupe du cerveau bi-hémisphérique symétrique pourrait grandement contribuer à mieux définir la nature / culture dilemme pour la formation de la personnalité de trait et des changements de comportement au cours du développement normal, le vieillissement normal, et dans le cadre de manifestations cliniques initiales de neurodégénérative "sporadique" processus 58.
L'approche clinicopathologique classique interprétée par des procédures de coupe du cerveau structuré est pas untechnique historique, mais il est encore un outil valable et utile du diagnostic et de la recherche. Surtout à l'heure actuelle, lorsque des quantités impressionnantes de données cliniques et biologiques sont potentiellement disponibles à l'autopsie, la combinaison des cas cliniques bien caractérisés, les données de neuroimagerie et l'information génétique / moléculaire avec des analyses détaillées modernes neuropathologiques / quantitatives pourrait représenter une somme sans précédent "droit -Match "dans l'histoire des neurosciences. antemortem combiné et les enquêtes post-mortem peuvent énormément clarifier les bases tissutal / fonctionnelles et neuronales des maladies neuropsychiatriques et faire la lumière sur les mécanismes etiopathogenetic exactes de ces troubles, en prenant également en compte les facteurs possibles de l'hémisphère qui ne sont pas spécifiquement pris en compte avant. Les auteurs sont conscients que la technique symétrique de coupe du cerveau bihemispheric proposé est temps et le financement fastidieux, mais des efforts similaires à ceux effectués pour l'avancement de la neuroimagerie devraitêtre fait dans le domaine de la recherche en neuropathologie ainsi. Plus harmonisées et activités cerveau bancaires structurés ne seront pas plus cher que la construction ou l'achat d'appareils d'IRM, avec des résultats scientifiques potentiels qui ne seraient pas moins gratifiant que ceux obtenus par les études de neuroimagerie.
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Disclosures
Les auteurs n'ont rien à dévoiler.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use. | |||
| Detailed clinical history of the subject which should include a detailed description of any neurologic and psychiatric symptoms and signs. | |||
| Medical or nonmedical video-recordings when available (especially useful in movement disorders field). Next-of-kin’s consent required. | |||
| Neuroimaging, neurophysiology, neuropsychiatric and assessment or clinicometric scales. | |||
| Genetic and family history data. Genetic reports review, if neurogenetic diseases were diagnosed. | |||
| Histology Container | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 64233-24 | |
| Histology Cassettes | VWR | 18000-142 (orange) | |
| Histology Cassettes | VWR | 18000-132 (navy) | |
| Knife Handles and Disposable Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 62560-04 | |
| Long Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 62561-20 | |
| Disposable Blade Knife Handles | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72040-08 | |
| Scalpel Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72049-22 | |
| Accu-Punch 2 mm | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 69038-02 | |
| Polystyrene Containers – Sterile | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 64240-12 | |
| Dissecting Board | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 63307-30 | |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 SIGMA | |
| Hematoxylin Solution, Gill No. 2 | Sigma-Aldrich | GHS280 SIGMA | |
| Eosin Y solution, aqueous | Sigma-Aldrich | HT1102128 SIGMA | |
| anti-beta-amyloid | Covance, Princeton, NJ | SIG-39220 | 1:500 |
| anti-tau | Thermo Fisher Scientific | MN1020 | 1:500 |
| anti-alpha-synuclein | Abcam | ab27766 | 1:500 |
| anti-phospho-TDP43 | Cosmo Bio Co. | TIP-PTD-P02 | 1:2000 |
| Digital Camera | Any | ||
| Head Impulse Sealing machine | Grainger | 5ZZ35 |
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