Summary
ヒトにおける内皮機能の非侵襲的評価は、フロー媒介拡張技法によって決定することができます。研究の数千人がこの技術を使用しているが、何の研究では、ラットで非侵襲的にこのテクニックを行いませんでした。次の資料は、上腕のフロー依存性血管拡張およびラットの浅大腿動脈の非侵襲的測定を説明します。
Introduction
血管内皮は、ライン動脈の内腔の細胞単層であり、血管機能の重要な調節因子です。血管径の調節をもたらす内皮細胞から放出され、多数の分子が存在します。これらの分子、一酸化窒素（NO）の中で、刺激に応答（せん断応力で例えば、インスリン、アセチルコリン、または変更）1における血管内皮から放出された主要な血管拡張性分子であると思われます。血管内皮では、NOは、NOシンターゼ（eNOSの）を内皮ない酵素によって生成され、続いて、内皮細胞2から放出されます。 NOは、リラクゼーションと増加し、血管径3を引き起こす血管平滑筋に拡散します。
内皮機能不全は、フロー媒介性拡張（FMD）技術4,5を用いて、ヒトにおいて非侵襲的に評価することができます。 FMDは、内皮由来ための機能バイオアッセイを表現することが提案されていますヒトでのNO生物学的利用能は、典型的には約5分肢閉塞6次反応性充血に応じて、上腕や浅大腿動脈で評価されていません。反応性充血はNO 8のリリースをシグナリング、内皮細胞7に形質導入された層状剪断力を増大させます。近年では、NO放出によって開始血管拡張の割合は9,10議論してきたが、FMDは、内皮依存性拡張を示すものであると一貫して心血管イベント11-13を予測することが示されています。
現在までに、研究の数千人は、ヒトにおける内皮機能の非侵襲的測定のためのFMD技術を採用しています。トランスレーショナルリサーチへのフォーカスの最近のシフトを考慮すると、げっ歯類における口蹄疫の非侵襲的測定のためのガイドラインは非常に有益であろう。翻訳アプローチを踏まえ、このプロトコルは、上腕とsupeにFMDの測定のために設立されましたこれらのサイトのようなラットのrficial大腿動脈は、最も一般的にヒトで測定されます。ラットにおける堅牢かつ反復FMD応答におけるこのプロトコルの結果は、しかし、ラットでの口蹄疫の測定は技術的に厳しいですし、他の研究者は、デモビデオずに複製するのは難しいかもしれません。したがって、以下の記事では、上腕とラットの浅大腿動脈における口蹄疫の非侵襲的測定のための方法を紹介します。
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Protocol
すべての動物の手順は、実験動物の管理と使用14用のガイドに準拠し、ユタ大学、ソルトレイクシティ退役軍人医療センター動物実験によって承認されました。
1.動物の準備
- 100％の酸素中3％のイソフルランを含む麻酔導入室で動物を置きます。それは、外部刺激に応答しなくなるまで誘導室で動物を残します。
- 誘導チャンバーから動物を削除し、心電図（ECG）電極を備えた加熱された診察台の上に置きます。酸素100％の3％イソフルランで麻酔を維持します。上腕と浅大腿動脈FMDを同時に行うことはできません。したがって、各測定のための準備手順は以下のとおりです。
2.上腕動脈の準備
- 仰臥位動物を置き、左上肢とANの各下肢を拘束外科手術用テープで診察台にimal。
- 上肢の下部が若干プラットフォーム上に（〜0.2センチメートル）に上昇するように、動物の右上肢を抑制する。
- 髪を除去するために、動物の右上肢に脱毛剤（例えば、Nairさん）を適用します。
- 肘に右上肢遠位に位置閉塞カフ（直径標準血管閉塞器内腔10ミリメートル）。膨張/収縮が手足を動かし、超音波画像を乱すように、プラットフォームに閉塞器を休まないでください。
- 超音波のキーボードを使用して、Bモードに超音波マシンを設定します。
- 閉塞カフの近位に、動物の上肢に超音波ゲルの少量を適用します。
- 手動で上肢と定位ホルダーに取り付けられた超高周波リニアアレイトランスデューサを合わせます。上腕動脈は2〜3ミリメートルの深見えるはずです。
- 上腕動脈ではなく、上腕静脈は、されていることを確認するために、画像化され、超音波のキーボードを使用してPW-モードに切り替えます。連続血流を持つことになり、隣接する静脈とは対照的に、動脈は拍動の血流を持っています。
3.浅大腿動脈の準備
- 位置動物仰臥位とサージカルテープで検査テーブルに上肢と左下肢を拘束。
- パッド（例えば、折り畳まれた紙タオル）を使用してプラットフォーム上に高い位置（〜0.5〜1センチメートル）に動物の右下肢を拘束。
- 髪を除去するために、動物の右下肢に脱毛剤（例えば、Nairさん）を適用します。脱毛後に大腿静脈は、上部太ももの内側にはっきりと見えるはずです。
- 右足首に閉塞カフ（直径標準血管閉塞器内腔10ミリメートル）近位の位置を決めます。膨張/収縮が下肢を動かし、超音波画像を乱すように、プラットフォームに閉塞器を休まないでください。
- に超音波マシンを設定しますBモード。
- 閉塞カフの近位に、動物の下肢に超音波ゲルの少量を適用します。
- 手動で皮膚を通して見える大腿静脈、と定位ホルダーに取り付けられた超高周波リニアアレイトランスデューサを合わせます。浅大腿動脈は、1ミリメートルの深<表示されるはずです。
- 浅大腿動脈ではなく、大腿静脈は、画像化されていることを確認するために、PW-モードに切り替えます。連続血流を持つことになり、隣接する静脈とは対照的に、動脈は拍動の血流を持っています。
4.ベースラインフェーズ
- それは人間の15で行われることになるのと同じようにBモード画像を、最適化します。両壁に可視化し、内膜 - メディアと容器の横、縦方向の画像が観察されていることを確認。少しできるだけ動脈の限りがキャプチャウィンドウに表示可能であることを保証するために、超音波プローブの配置を調整することにより、画像を最適化します。
- あるいは、明るさ/コントラスト、焦点域、周波数、ダイナミック・レンジ、及び線密度を変化させることで良好な画像を得るための超音波設定を調整します。そこに超音波画像を最適化するための他の方法があるが、それらの詳細な説明は、このプロトコルの範囲を超えています。
- 動脈画像の最適化の後、唯一の直径フレームが収集されることを保証するために、R波の間に撮影した画像のみを表示するには、ECGゲーティングをオンにする心周期の各拡張期部分の間にあります。
注：ECGゲーティングは、生理的な設定オプションの下にECGゲーティングを選択することで、このプロトコルで使用される超音波マシン上で利用可能である、しかし、この機能は、すべての超音波マシンで利用できない場合があります。画像が最適化された後、ECGゲーティングは、より低いフレームレートで画像を得ることが困難であるように、ターンオンされるべきである（すなわち、一度R波あたり）。 ECGゲーティング、ラットおよび高フレームの要求の高い心拍数の組み合わせなし心周期の拡張期部分だけ〜10-20秒のクリップを可能にしますキャプチャするレート。各クリップのデータの面倒な大きさと量は、実質的に分析負担を増大させます。 - 録音Bモードを使用したベースライン・データの60秒。
注：超音波クリップに記録することができるフレーム数に制限があるような超音波装置は常に記録され、ただし、すべての画像は、超音波装置に格納されています。クリップの長さ（すなわち、フレーム数）の設定を調整することができます。クリップあたりのフレーム数の最大値に設定されたことが示唆されています。記録は、クリップ（すなわち、到達したフレームの最大数）の末尾にある場合、記録は継続しますが、クリップは、最新のフレームをキャプチャするロールフォワード。この場合、最大フレームリミットの外で捕獲された以前のフレームはその後削除されます。記録中のこれらの複雑さは、マシン間で異なるが、記録長の調整が必要であり得ます。 - SWIPW-モードにTCH。内腔の中央にカーソルを置きます。サンプルゲートは、カーソルを参照して自動的に配置されるが、超音波のキーボードを使用して、幅のために調整することができます。 ≤60°の超音波照射角を維持します。
- ドップラービーム角度を変えることによって、超音波照射角度を調整します。超音波のキーボードを使用して角度を微調整してください。これらのいずれも測定に適した角度を提供する場合は、手動でより最適な角度に動脈を傾けることによって超音波プローブを調整します。超音波の角度の任意の調整が行われた場合、Bモード画像を取り戻します。
- 速度データの10秒を記録します。
5.オクルージョンフェーズ
- 空気で満たされた10ミリリットル注射器を用いて血管の閉塞器を膨らませます。血管の閉塞器内の空気の圧力を一定に保つために、自分自身にチューブを折ると、折り畳まれたチューブ上にバインダークリップを配置します。
- によって証明されるように、カフ閉塞を確認するために、PW-モードに切り替え血流速度の大幅な削減。
- 閉塞の午前4時45分分まで、60秒のクリップにBモードと記録データに切り替えます。
- PW-モードに切り替えます。心拍数および分析のための各超音波クリップの時間の記録を保管してください。
6.充血相
- PW-モードで録画中に折り畳まれた管からのバインダークリップを削除することによってカフを解放します。録音の前に5秒とカフリリース後5秒。
- 閉塞後3分まで、60秒のクリップにBモードと記録データに切り替えます。心拍数および分析のための各超音波クリップの時間の記録を保管してください。
- FMDの完了後診察台から動物を削除し、それが胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで監視します。
7.解析
- 分析のために、公平を可能にするエッジ検出ソフトウェアを搭載したオフラインコンピュータへのDICOMファイルとしてエクスポートする超音波を抑止します各フレームでの動脈直径のmination。それは非常に時間がかかり、研究者バイアスの対象となるように分析は、超音波マシン上で可能である、しかし、それは、お勧めできません。
- ベースラインと、閉塞段階の間に60秒のセグメントにおける動脈径データを分析し、充血相中に10秒のセグメントインチ
- 自動エッジ検出ソフトウェアのフロー解析機能を用いて血流速度データを分析します。ベースラインと、閉塞段階の間に均一な外観の5以上の連続した波形を測定することにより、平均血流速度を決定します。すぐにカフリリース後に血液速度のための反応性充血の間の平均血流速度を決定します。最高血流速度の波形は、ピーク血流速度と考えられています。
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Representative Results
フロー媒介拡張8 Wistarラットの上腕および浅大腿動脈で行いました。ラットの位置決めは、図1に示されています。
浅大腿動脈の代表的な超音波画像は、 図2に示されています。
図1. ラットおよび超音波ポジショニング。
上腕（A）の測定および浅大腿（B）動脈FMDのためのラットのポジショニング。上腕の測定（C）および浅大腿（D）動脈FMDのための超音波プローブと閉塞カフの位置決め。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
代表的超音波画像 2.図 。
直径（A）の決意するためにBモード画像を使用して、浅大腿動脈の超音波画像。血流速度は、PWモードを使用して決定しました。図中の血液ベースライン（B）における速度、閉塞相（C）中の血流速度の減少、および充血相（D）中にカフのリリースでは、血流速度の急激な増加も示されている。 表示するには、こちらをクリックしてください。この図の拡大版。
図3に示すように 、上腕および浅大腿動脈の間の類似の血管拡張反応があります。ベースラインのパーセントとして表現すると、FMDは、しかしときexpresse、動脈との間で同様でしたベースラインからの絶対変化としてdは、FMDは上腕動脈（P <0.05）で有意に高かったです。この違いは浅大腿動脈（498±28対397±11μmで、P <0.05）に比べて上腕動脈におけるより大きな血管の直径に可能性が高いです。人間16における口蹄疫の測定と同様に、上腕および浅大腿FMDに対する変動の学期間係数はそれぞれ、9±1及び10±4％でした。容器の大きさの違いにもかかわらず、ベースラインからのパーセントまたは絶対変化として表さ上腕と浅大腿動脈FMDの間には強い直線関係がありました。
図3. ラットで拡張をフロー媒介します。
上腕および下肢虚血の5分の間、次の表在femoralarteryの血管拡張は、パーセント（A）と絶対（Bのように表現しました）ベースラインからの変化。ベースラインのパーセント（C）のように表現するときFMDは動脈間で同様でした。ベースライン（D）からの絶対変化として発現した場合しかし、FMDは上腕動脈で有意に高かったです。パーセント（E）またはベースラインからの絶対（F）の変化として表現かどうかは、上腕と浅大腿動脈との間FMDのための強力な関係がありました。 * P <0.05対上腕動脈。値は平均±SEMである。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
表1に示すように 、心臓血管の変数は、ベースライン、閉塞、及び充血段階で測定しました。動脈の直径は、心周期の拡張期の一部の間に、内膜内膜、またはメディアにメディア距離を用いて決定しました。動脈径は基線で60秒間測定し、連続的にIましたnは〜閉塞および充血の段階を経て60秒間隔。血流速度は、一つの心臓サイクルの間腔内の血液の平均動脈速度を用いて測定しました。血流は、式に従って計算した血流量（μL/分）=（血流速度（μM/秒）・π・[血管径（μm）/ 2] 2・60）。ずり速度（S -1）=血流速度・8 /血管径：剪断速度は次式に従って計算しました。 FMDは、式に従って計算した：FMD =（ピーク血管径 - ベースライン血管直径）/ベースライン血管直径。
| 上腕動脈 | 浅大腿動脈 | |
| ベースラインフェーズ | ||
| 心拍数、BPM | 367±12 | 368±16 |
| 直径、ミクロン | 498±28 | 397±11 * |
| 血流速度、ミクロン/秒 | 85±8 | 76±11 |
| 血流量、μL/分 | 1027±147 | 568±90 * |
| せん断速度、秒-1 | 1.4±0.1 | 1.5±0.2 |
| オクルージョンフェーズ | ||
| 心拍数、BPM | 362±12 | 359±14 |
| 直径、ミクロン | 499±32 | 390±11 *† |
| 血流速度、ミクロン/秒 | 63±9† | 38±8† |
| 血流量、μL/分 | 722±122† | 272±62 *† |
| せん断速度、秒-1 | 1.0±0.2† | 0.8±0.2† |
| 充血相 | ||
| 心拍数、BPM | 363±12 | 357±12 |
| ピーク直径、ミクロン | 586±22†‡ | 457±15 *†‡ |
| ピーク血流速度、ミクロン/秒 | 149±11†‡ | 205±12 *†‡ |
| ピーク血流量、μL/分 | 1778±229†‡ | 1495±127†‡ |
| ピーク剪断速度はS -1 | 2.5±0.3†‡ | 3.7±0.2 *†‡ |
| * P <0.05対上腕動脈。 </ TD> | ||
| †P <0.05対ベースラインフェーズ。 | ||
| ‡P <0.05対オクルージョンフェーズ。 | ||
| 値は平均±SEMです。 |
プロトコルの各フェーズを通して表1.心血管変数。
いずれかを通じてプロトコルだけでなく、動脈測定（P> 0.05）の間の心拍数に変化はなかったです。上腕動脈の直径は、浅大腿動脈（P <0.05）よりも有意に大きかったです。閉塞段階中に、血流速度、血流量、および剪断速度の有意な低下は、両方の動脈（P <0.05）で、ベースラインと比較していました。カフのリリースに続いて、ピーク血流速度、血流量、およびせん断速度両方の動脈のベースラインまたは閉塞相（P <0.05）よりも有意に高いすべてました。人間16における反応性充血の測定と同様に、上腕および浅大腿反応性充血に対する変動の学期間係数は、それぞれ、24±9および19±5％でした。血流速度、血流量、および動脈間の剪断速度の差は、動脈の直径の差に大部分起因して、ありました。
せん断速度をピークに正規化した後、血管拡張は、上腕動脈（ 図4）で高かったです。これは、口蹄疫は、ベースラインからの絶対変化として表さについても同様でした。しかし、大きさの違いにもかかわらず、そこパーセントに強い直線関係があったと絶対FMDは、上腕と浅大腿動脈間のせん断速度をピークに正常化しました。
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図4. ラットにおけるせん断速度をピークに正規化拡張をフロー媒介します。
せん断速度をピークに正規化した後、FMDはベースラインからのパーセント（A）または絶対変化（B）をexpressedas浅大腿動脈に比べ上腕動脈に高かったです。
せん断速度をピークに正規化した口蹄疫で動脈との間の違いにもかかわらず、FMDはベースラインからのパーセント（C）または絶対変化（D）として表した上腕と浅大腿動脈との間には強い関係がありました。 * P <0.05対上腕動脈。値は平均±SEMである。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
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Discussion
本研究では、FMDの非侵襲的測定は、上腕およびラットの浅大腿動脈に実証されました。ヒト6と同様に、5分間の閉塞期間の後、それによって動脈のその後の血管拡張をもたらし、動脈壁のせん断速度を増加させる血流速度（すなわち、反応性充血）の急激な増加がありました。 FMDは、上腕と浅大腿動脈の両方で観察されました。また、動脈の間FMDに強い関係がありました。ピーク剪断速度は、浅大腿動脈に高かったが、FMDは、せん断速度が動脈との間に強い関係を維持ピークに正常化しました。一緒に、これらの結果は、FMDの非侵襲的測定が正常ラットにおいて行うことができることを示しています。
FMDの測定は、二つの異なる動脈で行ったが、ベースラインからのパーセント変化として発現される場合、FMDの大きさは同様でした。 Howeveベースラインからの絶対変化として発現された場合、その動脈が浅大腿動脈より〜25％、より大きな静止直径を有していたように、R、FMDは、上腕動脈に高かったです。これらの結果は、FMDは、上腕で測定したヒトの研究と同じ被験者17,18における浅大腿動脈のものと同様です。動脈の直径の違いにもかかわらず、FMDの関係は、ベースラインからのパーセントまたは絶対変化として表さ動脈との間で非常に強かったです。
血管拡張が増加したせん断速度1,3に応答して、内皮からのNO放出を介して起こるようフロー依存性血管拡張は、人間6における内皮由来NO生物学的利用能のための機能的バイオアッセイを表現するために提案されています。このように、せん断速度をピークに正規化し、より高いFMDは、感度を剪断速度で与えられた増加を増加している内皮細胞を表します。せん断速度をピークにFMDを正規化した後、FMDはBrachの中で高かったですIAL動脈に関係なく、それはパーセントまたはベースラインからの絶対変化として表されているかどうかの。 FMDの大きさの違いは、上腕と浅大腿動脈との間のせん断速度をピークに正規化したにも関わらず、そこパーセントに強い直線関係があったと絶対FMDは動脈との間のせん断速度をピークに正常化しました。
本研究では、FMDの非侵襲的測定は、上腕と、超音波プローブの遠位カフ閉塞と浅大腿動脈に記載されています。このカフの配置は、動脈の直径の測定は閉塞部位9に近接する場合FMDに対するNOの寄与が大きいことが示されている）は、ヒトにおいて、このFMD、2を測定するために最も一般的に使用される方法である）1、いくつかの理由のために選択しました、および3）測定部位は、閉塞の遠位にあったときにカフ膨張後の超音波画像を維持することは困難でした。この手順では、FMDの非侵襲的測定を示しているが、他の人は、大腿動脈19に閉塞を超音波測定遠位で総腸骨動脈の外科的閉塞を使用して生きているラットでFMDを行いました。 FMDは、まずハイスらによって記載されたプロトコルを使用して応答します。 eNOSの阻害剤の注入によって阻害されました。確かに、この手順は、細胞内のNOの薬理学的増加は、2つのラットの内皮機能不全と高血圧20のモデル、およびラット21,22における口蹄疫の減損における間接喫煙の結果への暴露にFMDを向上させることを実証するために使用されています。これらの研究は、ラットで口蹄疫と心臓血管の健康へのFMDの関係を確立するために、NOの寄与を示しています。この技術は侵襲的であるしかし、それは年に数週間の期間にわたって同じラットで縦方向にFMDを測定する能力を制限する可能性があります。本研究と同様の方法を用いて、2つの最近の研究は、マウス23,24の後肢にFMDの非侵襲的測定を行いましたしかし研究（すなわち、測定時間の経過と超音波プローブと閉塞カフの配置）との間にいくつかの技術的なバリエーションがありました。ラットは、一般的にトランスレーショナルリサーチに使用されるが、マウスよりも大きい体と血管径を有しているとして、これらの研究とこれらの結果を複製することが困難との間の不一致に起因して、ラットにおける口蹄疫の非侵襲的測定は、代わりにしようとしました。げっ歯類の大腿動脈における口蹄疫の測定は、一般的小説ではありませんが、何の研究では、任意の生物げっ歯類の上腕動脈にFMDの測定を行っていません。本研究で手足間の口蹄疫の強い関係は、内皮機能の体系的性質を説明するだけでなく、非侵襲的に後肢（例えば、大腿動静脈瘻）内の血流を混乱させた動物にFMDを測定する方法を提供することができます。
最適化と高品質の超音波画像の維持は、この。手順のために必要な重要な技術であります再と豊富な練習が必要。例えば、ヒトでのFMDの測定のために、少なくとも100監視スキャンは、独立して、5スキャンの前に実行されることが示唆されます。時には、画像はカフ閉塞時にシフトし、超音波プローブの微調整が必要な場合があります。このプロトコルにおける重要なステップは、特定の時点でBモード及びPWモードの切り替えれます。同時BモードとPWモード撮像は、このプロトコルで使用される超音波マシン上不可能です。したがって、迅速に特定の時間セグメントの間に速度及び直径の測定値を捕捉するために、超音波モードを切り替えるために必要とされます。書き出さプロトコルを有し、非常に超音波モードの切り替えの効率を向上させるプロトコルを実行する練習。このプロトコル中の超音波録音の時間に敏感な性質を考慮すると、エラーが発生するので、このような超音波クリップをキャプチャするのを忘れるなど、任意のプロトコルの異常を書き留めために準備されます。記録は、少なくとも30分は、25を通過した後、再度手順を実行することが提案されている反応性充血相の間に失われた場合、閉塞段階の間に超音波クリップをつけるのを忘れると、しかし、重要ではありません。
いずれの研究と同様に実験プロトコルに制限があります。この研究では、麻酔は100％酸素下でラットに投与し、従って、FMDの測定は、酸素過剰の血管反応性を反映するかもしれません。例えば、ナトリウムペントバルビタールのような麻酔の他の形態は、ヒトへのより代表的な血液ガスプロファイルを作成し、この懸念を排除するために使用することができます。血圧は、このプロトコルの任意の時点でモニターしていませんでした。血圧は、ヒトにおける急性カフ閉塞に応じて変化しないが、血圧の過渡変化は、ラットにおいて生じる場合、それは不明です。また、圧縮空気は、血管閉塞を充填するために使用されたが、水で充填するより強固な閉塞をもたらしたかもしれません水のような血流のそれは空気のように圧縮可能ではありません。 eNOSのが阻害される条件下でFMDの最後に、非侵襲的な測定（すなわち、L-NMMAの輸液）が行われていません。それは、このプロトコルで実行されるようにこのように、FMDに対するNOの寄与は、決定されていません。
結論として、この記事では、上腕とラットの浅大腿動脈における口蹄疫の非侵襲的測定のためのプロトコルを実証してきました。トランスレーショナルリサーチへのフォーカスの最近のシフトに関連して、ラットにおける口蹄疫の評価は、ラットにヒトでの結果を変換するための貴重なツールを提供するだけでなく、ラットの長手方向の研究でいくつかの時点で血管内皮機能を評価する能力を提供することができます別の治療を受け。実際、FMDの削減は、アプリを示している慢性腎不全（未発表の所見）のラットモデルにおける腎臓損傷後に観察された大動脈動脈硬化を伴っています縦動物実験で血管機能のマーカーとしての非侵襲的FMDのlication。ラットでFMDのメカニズムを調査するため、将来の研究が保証され、ヒトでの非侵襲的なFMD測定さらなる洞察を提供するであろう。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vevo 2100 High Resolution Micro-Ultrasound Imaging System | VisualSonics, Toronto, ON, CAN | ||
| MicroScan Ultra-High Frequency Linear Array Transducer - MS-700 30-70 MHz | VisualSonics, Toronto, ON, CAN | ||
| Vevo Imaging Station | VisualSonics, Toronto, ON, CAN | ||
| Thermasonic gel warmer | Parker Laboratories, Fairfield, NJ, USA | 82-03 | Optional |
| Signacreme electrode cream | Parker Laboratories, Fairfield, NJ, USA | 17-05 | |
| Transpore surgical tape | 3M, Maplewood, MN, USA | 1527-1 | |
| Depilatory cream (e.g., Nair) | General supply | ||
| Cotton swabs | General supply | ||
| Ultrasound gel | General supply | ||
| Standard vascular occluder, 10 mm lumen diameter | Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA | 62-0115 | |
| 10 ml syringe with Luer-Lok tip | General Supply | Used for occlusion cuff apparatus | |
| Paperclip | General Supply | Used for occlusion cuff apparatus | |
| Hypodermic needle – 18 gauge | General Supply | Used for occlusion cuff apparatus | |
| Medium binder clip | General Supply | Used for occlusion cuff apparatus |
References
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