Summary
복 부의 단단한 장기 이식 중 췌 장 이식 가혹한 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 관련 된 이식 손상, 결국 초기 이식 손실에 지도 개발 하는 경향이 있다. 이 프로토콜 murine 췌 장 이식이 초기, 해로운 손해 분석 적합 비 봉합 팔목 기술을 사용 하 여 모델을 설명 합니다.
Abstract
마우스 모델 이식 연구, 취급이 용이, 다양 한 유전자 잘 정의 된 긴장, 및 분자 프로브 및에서 vivo에서 로 를 수행 하기 위해 시 약의 광범위의 가용성을 포함 하 여 몇 가지 장점이 있는 체 외 연구. 다양 한 murine 이식 모델 우리의 경험을 바탕으로, 우리 밑에 심한 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 관련 된 초기 이식 손상 메커니즘을 분석 하는 것으로 쥐에서 heterotopic 췌 장 이식 모델을 개발 했다. 달리 이전 설명된 기법 봉합 기술을 사용 하 여 여기 우리 기술 비 봉합 팔목 기술을 사용 하 여 새로운 절차.
최근 몇 년 동안, 우리가 마우스의 전반적인 성공율에 300 개 이상의 췌 장 이식 수행한 > 90% 성공률 결코 설명 하기 전에 마우스 췌 장 이식에서. 이 아닌 봉합 팔목 기술 이식 revascularization의 두 주요 단계로 구성 됩니다: (I) 폴 리 에틸렌/폴 리 갑을 통해 받는 사람 배 고 완곡 한 합자와 (II) 기증자 선박 배치 그것을 고치는 받는 사람 배 고 두 번째 원주 합자와 고정 나왔으며. 내 피 레이어 결과 높은 patency 속도 덜 thrombogenic 병 변에서의 결과 연속성 및, 마지막으로, 높은 성공률.
이 모델에서 동맥 문 합 받는 사람 동물의 나왔으며 일반적인 경 동맥을 통해 기증자 이식의 복 부 대동맥을 당겨서 이루어집니다. 정 맥 배수 장치는 이식의 받는의 나왔으며 외부 경 정 맥에 당기는 이식의 문맥으로 이루어집니다. 이 원고는 세부 사항 및 장기 복구 및 수 있도록 그들의 실험실에서 이식을 성공적으로 수행 하기 위해 microsurgical 기술 연구원 장기 이식 절차의 중요 한 단계를 제공 합니다.
Introduction
동시 신장-췌 장 이식 (SPK) 환자 당뇨병 mellitus 그리고 끝 단계 신장 질병에서 고통에 대 한 치료의 현재 표준을 나타냅니다. 성공적인 이식 장기 인슐린 독립 안정화 또는 당뇨병 microangiopathy와 더 나은 삶의 질1의 심지어 회귀와 관련 된 발생 합니다. 그러나, 신장과 간 이식 같은 다른 일반적인 고체 기관 이식, 달리 췌 장 이식 더 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 (IRI)을 따르게 됩니다. 최대 35%의 보고 한 부각 위태롭게 이식, 뿐만 아니라 심지어 환자, 생존2,3.
산화 스트레스, microcirculatory 장애 증가 식 프로 염증 성 cytokines 및 접착 분자의 결과로 마침내 내 피 활성화 및 그것의 무결성의 손실에는 모두에 기인이 아닌 수용자 이식 부상 4. 지금까지, IRI의 정확한 분자 메커니즘 크게 알 수 있으며 기관 기관에서 다를 수 있습니다.
주요 진행 생체 외에서 모델을 활용 하 여에 불구 하 고 동물 모델의 개발은 췌 장 이식 다음 이식 IRI 관련 변경에 관련 된 분자 메커니즘의 지식을 심화 하 결정적 이다. 설치류의5,6, 여러 가지 췌 장 이식 모델 개발 되었습니다 하지만 단 하나 쥐7에 보고 됩니다. 이 매우 요구 microsurgical 절차는 46%의 낮은 생존 율의 약점이 다. 그러나, 마우스 모델을 다양 한 분자 분석 도구는 그들에 적용 될 수 있기 때문에 이식 관련 연구에 대 한 최고의 모델을 나타냅니다. 다른 장기 이식8,,910쥐에서 광범위 한 microsurgical 경험을 바탕으로, 우리 췌 heterotopic, 자 궁 경부에 대 한 새로운, 높게 재현 기술 개발 와 쥐에 이식 > 90% 성공률 갑 비 봉합 기술을 사용 하 여. 이 기술은 anastomoses 관련 합병증을 최소한 감소와 봉합 모델11에 비해 높은 성공률을 달성 될 수 있다. 지금까지 비슷한 성공률을 하나만 마우스 모델 류 외12에 의해 설명 하고있다. 그러나, 지금까지이 모델을 사용 하 여 게시 없음 연구 있다.
Protocol
Alloimmune 응답을 방지 하 고 엄격 하 게 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 관련 이식 피해 조사, syngeneic 기증 받는 쌍을 사용 해야 합니다. 이 프로토콜, 남성 C57BL6 (h 2b) 10-12 주 된 마우스 무게 26 ~ 28 g 크기 일치 기증자 받는 쌍으로 사용 되었다. 모든 장벽 병원 체 무료 시설에서 지 내게 했다 동물과 "교장의 실험실 동물 케어" 의료 연구와 "가이드에는 관리와 사용의 실험실 동물"에 대 한 국가 사회에 의해 공식화에 따라 인간의 치료를 받은 과학의 국가 아카데미에 의해 준비와 건강의 국가 학회 (NIH 간행물 번호 86-23, 1985 개정)에 의해 출판. 교육, 과학, 그리고 문화의 오스트리아 내각이이 원고 (BMWF-66.011/0056-II/3b/2011)에 설명 된 실험을 승인 했다.
1. 췌 장 조달
- Xylazine (5 mg/kg 체중)와 케 타 민 (100mg/kg 체중) 27-게이지 (G) 바늘을 사용 하 여의 복 (i.p.) 주입으로 기증자 동물 anesthetize
- 전기 면도기를 사용 하 여 복 부에 머리를 면도 하 고 테이프의 가닥으로 부정사 위치에 수술 필드에 마우스를 수정.
- 세 번을 액체에 젖은 gauzes 요원 필드를 제거 하십시오.
- 가 위를 사용 하 여 양자 subcostal 확장명이 중간 복 부 절 개를 수행 합니다. 부드럽게 exteriorize 메 마른 코 튼 스틱, 왼쪽에 내장 하 고 moistened 거 즈에서 그들을 포장. 다음 단계에 대 한 복 부 구멍의 최대 노출을 제공 하는 모기 클램프와 cranially는 xyphoid를 들어올립니다.
- 19 G 바늘을 사용 하 여, 주사는 살 균의 400 µ L 1:4 헤 파 린 나트륨 염화 물 솔루션 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)으로 heparinisation. 바늘을 제거한 후 exsanguination 대동맥의 transecting에 의해 동물을 안락사.
- 부드럽게 곡선된 팁 집게를 사용 하 여 섬유 조직 분리 하 여 우수한 mesenteric 동맥의 기원과 오른쪽 신장 동맥 사이 복 부 대동맥 해 부. 대동맥을 훼손 하 고 8/0 실크 합자와 넥타이.
- Postpyloric 십이지 장과 간 hilum 사이 hepatoduodenal 인 대를 식별 합니다. 원심 합자, 후 낭 성 덕트의 입구 아래 담 즙 덕트를 분할 부드럽게 해 부 하 고 받는 사람에는 문 합을 수행 하기 위한 충분 한 길이를 최대한 distally 포털 정 맥 transect.
- 이전 합자에서 시작 하는 복 부 대동맥 해 부 퉁 명 스럽게 곡선된 팁 집게를 사용 하 여 (단계 1.6 참조). Periaortic 조직 곡선된 팁 집게를 사용 하 여 훼손, 그것 8/0 실크 합자와 고가 위로 transect.
- 바이 폴라 포 셉을 사용 하 여, 모든 허리 가지 응고 하 고, 횡 경 막에 최대한 가깝게 혈관 문 합에 대 한 충분 한 길이 제공 하기 위해 대동맥이 위 transect. 마지막으로, 왼쪽된 신장 동맥 위에 이미 묶인된 대동맥 transect.
- 문맥에서 오는 분명 유출 될 때까지 복 부 대동맥을 통해 antegrade 패션에서 4 ° C 히스티딘 트립토판 ketoglutarate 관류 솔루션의 5 mL와 함께 19 G 주사기 췌 장 perfuse. 부 종 형성을 방지 하기 위해 낮은 압력을 적용 합니다.
참고: 복구 된 이식의 따뜻한 허 혈 성 저하에 의해 어떤 편견을 피하기 위해 신속 하 고 표준화 된 방식에서 1.9를 단계 1.5를 수행 합니다. - 메 마른 면 지팡이 사용 하 여 복 막 구멍으로는 내장을 교체 합니다.
- 곡선된 팁 집게를 사용 하 여, stepwise Treitz의 인 대를 도달할 때까지 앞으로 이동 하 고 postpyloric 십이지에서 시작 췌를 구분 합니다. 이러한 단계에 대 한 췌 장 및 십이지 장 벽 사이 avascular 결합 조직 영역을 식별 합니다.
- 퉁 명 스럽게 췌 장 그리고 십이지 장 사이 브리징 혈관을 분리 곡선된 팁 집게를 사용 하 여이 분야를 해 부. 각 격리 된 혈관 구조 8/0 실크 합자를 통과 하 고 넥타이.
- 마지막으로,가 위 십이지 장 벽 쪽으로 혈관 구조 transect. 같은 패션에는 mesentery, 가로 장 및 위장 췌 구분 8/0 실크 봉합 사를 사용 합니다.
참고:이 절차 동안, choledocho 췌 장 덕트는 출혈 됩니다.
- Gastrosplenic 인 대 위, 및 짧은 위 가지 cranially 위장을 해제 하 고가 위로 절단 하 여 비장에서 실행을 식별 합니다. 복구 된 이식에 연결 된 비장을 둡니다.
참고: 지속적으로 얼음에 저장 된 차가운 히스티딘 트립토판 ketoglutarate 관류 솔루션 19 G 바늘 10 mL 주사기를를 사용 하 여 췌 장 이식 rewarming 최소화, 관개. - 마지막으로, 겸 자와 함께 비장을 파악 하 여 췌 기증자 사이트 (그림 1B)에서 제거 하 고 받는 사람에 전송.
- 또는, 가혹한 국 소 빈 혈 reperfusion 상해를 트리거하려면 받는 사람 동물에 이식 하기 전에 16 h에 대 한 살 균, 4 ° C 관류 솔루션에는 이식을 저장 합니다.
2. 받는 사람 준비
- Xylazine (5 mg/kg 체중)와 케 타 민 (100mg/kg 체중) 27g 바늘을 사용 하 여의 i.p. 주사와 받는 사람 동물 anesthetize
- 면도 전기 면도기를 사용 하 여 오른쪽 측면 자 궁 경부 지역 고 부정사 위치에 수술 필드에 마우스를 놓습니다. 수정 테이프의 가닥을 사용 하 여 마우스. 호흡을 손상 하는 피하기 위해 앞 다리를 잡아당기고 하지 마십시오.
- 액체에 젖은 gauzes를 사용 하 여 시간 요원 필드 3 스크럽.
- 바로 paramedian, 오른쪽 mandible 각도 jugular 절 개에서 약간 비스듬한 피부 절 개를 확인 합니다.
- 퉁 명 스럽게 식별 하 고 오른쪽 외부 경 정 맥의 옆 분 지 동원. 바이 폴라 집게로 그들을 응고 하 고가 위로 transect.
- Submandibular 침 샘의 오른쪽 엽 cranially, 혈관 작은 꽃 자루를 식별 들어올린 바이 폴라 집게를 사용 하 여 그것을 부식. Cauterized 작은 꽃 자루가 위 transecting 여은 엽을 제거 합니다.
- 단계로 2.5 비유에서 외부 경 정 맥의 모든 중간 지점을 식별 하 고 바이 폴라 포 셉으로 부식 한가 위 transect.
3입니다. 주입
- 장소 머리와 핸들으로 비장을 사용 하 여 받는 사람의 목 지역으로 이식 지향 측면, medially, 비장을 포함 하 여 꼬리와 혈관 덩어리가 ventro-caudally. 위치는 이식 제대로 사용 코 튼 스틱
- 부드럽게 받는 사람 동물의 외부 경 정 맥, 하가 되어 이전 나왔으며, 췌 장 이식의 문맥을 세워 적절 한 팔목에 고정 (단계 2.10 참조). 원형 8/0 실크 합자와 그것을 해결.
- 받는 사람 동물의 나왔으며 일반적인 경 동맥에는 이식의 복 부 대동맥의 그 루터 기 세워. 원주 8/0 실크 합자 (그림 1C)와 그것을 해결.
- 비장, hilum 가까이 비장 혈관 고 곡선된 팁 집게와 함께 그들을 훼손 합니다. 8/0 실크 합자와 그들을 연결 하 고 비장을 제거 하는 비장 혈관 transect. 마지막으로, 관계를 단축.
- 셉을 적용 하는 클램프를 사용 하 여 먼저 정 맥 팔목에 클램프를 제거 합니다. 동맥 클램프를 제거 합니다.
참고: 이식에 성공 하면 췌 장 이식 됩니다 수 reperfused 즉시 균질 분홍 색상과 표시 동맥 맥 (그림 1D)를 보여주는. - Normothermic 염 분 솔루션과 접목 축
- 직선 겸 자 사용 하 여 정 맥 팔목의 핸들을 제거 합니다.
- 가까운 실행 중인 수술 상처 봉합 사 6/0.
4. 수술 후 관리 (끝점)
- 일반적인 염 분의 최대 0.5 mL을 피하 적용 절차, (사우스 캐롤라이나) 자가 유체 손실 19 G 바늘을 사용 하 여 교체.
- 마 취에서 완전 한 회복까지 생리대에 받는 동물을 계속.
- 일단, 반환 받는 사람 동물 주택 시설에 수 있는 음식 하 고 광고 libitum물.
- 수술 후 통증을 방지 하기 위해 관리 작업 (1) Buprenorphin (0.1 mg/kg 들어) 후 바로 모든 12 h 첫 번째 5 일 및 (2) carprofen 4 mg/kg 들어 모든 12 h는 첫 주에 대 한 사우스 캐롤라이나.
- 적절 한 영양 섭취를 예상 하려면 각 받는 사람 동물의 무게 (g)를 매일 모니터링 합니다. 수술 날, 무관심, 마비, 매우 구부러진된 뒤쪽으로 수술 측면 감염에서 체중에 비해 10-15% 이상의 체중 감소는 끝점을 나타냅니다.
- 이 경우에, 뿐 아니라 임상 끝점에 도달 하면 터미널 isoflurane 흡입을 사용 하 여 동물을 희생.
Representative Results
지난 10 년간 우리는 생쥐에서 300 개 이상의 췌 장 이식 수행. 프로토콜을 설정한 후의 전반적인 생존 했다 > 90%. 수술 후 출혈 이후 치명적인 괴 이식 췌 장 염으로 혈전 증 이식 다음 실패에 대 한 주요 원인 이었다. 두 경우 모두, 끝점은 24 시간 이내에 도달 하 고 동물을 희생 했다. 어떤 신경 장애, 부전 실어증, 그리고이 시리즈에서 외과 측면 감염 증상 없었다.
이식된 이식의 내 분 비 기능을 조사 하 고 따라서 patency 모델의 유효성을 검사, 혈당 intraperitoneally 적용된 streptozotocin (312.5 mg/kg 체중)의 단 하나의 복용량으로 전처리 하 여 받는 사람 마우스에서 유도 되었다 4 수술 전에 일. 마우스 경우 혈당 hyperglycemic 여겨졌다 > 300 mg/dL. 그림 2A 다른 그룹의 혈액 포도 당 수준을 보여줍니다. 16 h의 머리말 붙인된 찬 허 혈 시간 없이 이식 받는 마우스 normogylcemia 이식, 다음 24 시간 이내에 도달 하 고 전체 관찰 기간 동안이 대사 상태를 유지. 대조적으로, 비 이식 동물 hyperglycemic 남아 있었다. 때문에 우리는 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 관련 된 이식 손상 내 분 비 기능에 미치는 영향에 관심이 있었다, 우리 16 h 장기 찬 허 혈 시간 (CIT)와 따뜻한 허 혈 시간 (WIT)의 45 분에 이식 노출 했다 제 3의 그룹을 추가. 이러한 이식 받은 쥐 normoglycemia를 도달 하지 않았다 고이 모델13에 치명적인 것으로 표시 되었다 심각한 췌 장 염의 개발으로 인해 48 h 후 희생 되어야 했다.
이 모델은 국 소 빈 혈 reperfusion 상해 관련 된 초기 이식 피해를 조사 하기 위한 다양 한 프로젝트에 대 한 유용 합니다. 추가 조사 포함, 다른 가운데, 2 h 이식 다음을 수행 하는 microcirculatory으로 혼란의 정량화를 위한 공초점 intravital 형광 현미경 검사 법. 이식의 microvessels의 대비는 음 경 정 맥으로 0.4% fluorescein isothiocyanate 표시 된 dextran (150 000 MW)의 0.3 mL를 주입 하 여 향상 되었습니다. 그림 2B 순진한 murine 췌와 장기간된 CIT (그림 2C)에 노출 되지 했다는 이식된 췌 장 이식의 일반 모 세관 패턴을 표시 합니다. 그림 2D 췌 장 이식 장기. CIT 노출의 결과로 미세 혈관의 붕괴를 표시 하는 반면,
그림 1 : 자가 사진. (A) 받는 사람 혈관 문 합에 대 한 준비의 자가 보기. 외부 경 정 맥 (1) 되어 정 맥 폴 리 에틸렌 팔목에 나왔으며과 원형 8/0 실크 합자와 고정. 비유에서 일반적인 경 동맥 (2) 되어 나왔으며과 작은 동맥 폴 리아 미드 팔목에 고정. 스케일 바 m m. 1 (B) 라 전췌 장 이식 포털 정 맥 (1) 및 (2) 혈관 문 합에 필요한 복 부 대동맥의 그 루터 기. (3) 비장 췌 함께 검색 되 고 핸들로 사용 됩니다. 비장은 이식의 reperfusion 전에 제거 됩니다. 규모 1 cm. 바 (C) 자가 보기는 anastomoses의. 포털 정 맥 (1) 나왔으며 외부 경 정 맥의 팔목에 당겨 (2)와 원형 8/0 실크 넥타이 고정. 마찬가지로, 복 부 대동맥 (3)의 대동맥 유세 나왔으며 일반적인 경 동맥 (4)의 팔목 위에 당 겼 다. 1. 다음 5 분 reperfusion perfused 췌 장 이식의 보기 (D) 자가 바 규모: 정 맥, 동맥 클램프, 뒤의 제거 후 성공적으로 이식된 췌 장 이식 동종 분홍 색상을 표시 합니다. 비장의 reperfusion 전에 제거 되었습니다 (1: 합자 비장 혈관). 규모 1 cm. 바 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 내 분 비 기능과 췌 장 이식의 confocal vivo에서 형광 현미경 검사 법. 그림 2A CIT 없이 이식된 생쥐의 혈액 포도 당 수준으로 꺾은선형 차트를 보여 줍니다 (n = 10, CIT, 블루 라인 없이 PTX), 비-이식 마우스 (n = 11, 아니 PTX 레드 라인), 그리고 장기간된 CIT에 노출 하는 이식 받은 쥐 (PTX + 16 h CIT, n = 10, 녹색 선). 모든 받는 사람 312.5 mg/kg 들어 streptozotocin i.p.과 hyperglycemic 렌더링 이전 했다 CIT 없이 이식의 모든 받는 사람이 그대로 내 분 비 기능 (50 일) 전체 관측 기간을 살아날 수 있었다, 그러나 비 이식 마우스 전체 관찰 기간 동안 hyperglycemic 남아. 16 h CIT에 노출 하는 이식 받은 생쥐 혈당에서 재기 하지 않았다 고 이식 수술, 10-15% 이상의 체중 감소 후 48 h 희생 했다. 전체 관측 기간 살아남은 쥐 날 한 마지막 glycemia 측정을 다음 50에 희생 했다. 미세 이식된 이식에 confocal intravital 형광 현미경 이식 다음 2 h에 의해 평가 되었다. 순진한 췌 컨트롤로 제공 됩니다. 그림 2B 순진한 췌에 정기적으로 모 세관 패턴을 보여 줍니다. 일반 모 세관 메쉬 또한 장기간된 CIT (그림 2C) 대상이 되지 이식된 이식에서 볼 수 있다. 반면, 붕괴는 미세 이식된 이식 장기 CIT (그림 2D)에 노출에서 관찰 됩니다. 스케일 바 100 µ m. 데이터에서 그래프 ± 표준 편차로 표현 됩니다. PTX: 췌 장 이식; CIT: 찬 허 혈 시간; 승: 없이 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
Discussion
IRI 관련 이식 피해는 단단한 장기 이식에 고는 미세 혈관의 방해에 의해 특징입니다. 허 혈 성 단계에서 여러 가지 대사 산물의 축적과 염증의 개시 반응 산소 및 질소 종에 의해 주로 중재 폭포, 이식 reperfusion4조직 손상에서 결과. 이 캐스케이드 수 있습니다만 단기, 하지만 또한 장기적인 성공을 위태롭게 하 고, 따라서, 환자 생존14이 크게 영향을. 날짜 하려면, 결합 된 신장 췌 장 이식 형식에서 고통 끝 단계 신장 질병151 당뇨병 환자를 위한 선택의 치료를 나타냅니다. 몇몇 연구는 성공적인 결합된 신장 췌 장 이식만 복원 하지 않는 받는 사람의 당뇨병, 신장 이식 기능 보호 하지만 또한 안정화 및 심지어 신경 장 해를 포함 하 여 2 차 합병증을 회복 뿐만 아니라 마이크로 포커스 및 macroangiopathy16,,1718.
동물 연구에서 감소, 대체, 및 교양 (3 R의) 지속적인 노력에도 불구 하 고 IRI 같은 복잡 한 병 태 생리 과정의 재생산 불가능 단순히 생체 외에서 설정에서 합니다. 따라서, 동물 모델은 여전히 변환 연구19,20이상적인 도구가 될 수 간주 됩니다. 여기에 설명 된 것 처럼 마우스 모델 쥐 또는 다른 동물에 비해 몇 가지 장점을 모델. 이들은 유전자 잘 정의 된 타고 난된 마우스 긴장 (예: 유전자 변형 및 노크 아웃 긴장)의 광대 한 수량, 분자 분석 도구의 과다로는 쉽고 저렴 한21처리의 가용성을 포함 한다. 설명된 모델의 주요 장점은 비 봉합 팔목 기술에 있다. 여기 제시 기법, 성공의 속도 사용 하 여 > 90%는 달성, 더 이전에 비해 설명된 모델22입니다 극적으로. 이 아닌 봉합 기술을 사용 하 여, 우리는 크게 hypovolemic 충격, 혈전 증, 및 anastomoses12의 협 같은 일반적인 합병증을 감소. 관련 받는 사람의 빠른 수술 후 회복 된 이식의 여분의 복 부 위치가이 방법의 추가 장점에 의하여 이루어져 있다. 또한, 자 궁 경부 위치를을 vivo에서 분석, 어떤 긴장22없이 exterioration에 의해 이식의 라이브 영상 등 완벽 하 게 적합.
이 모델의 주요 단점은 임상 현실 유사 하지 않는 췌 장 덕트의 폐색입니다. 이 모델에 exocrine 배수 choledocho 췌 장 덕트 매 관리 됩니다. 긴 기간에 결과 표시 섬유 증 및 동맥의 위축 이식 췌 장 염22에 지도 없이. 우리가 일찍 관찰 외 분 비 조직의이 저하 때문으로 이식 후 하루 30, 우리는이 모델에 적합 하지 긴 기간 관찰 믿습니다. 반면, 손상 되지 않은 내 분 비 기능에 게 받는 이식13,,2324의 기능의 일일 평가 위한 쉬운 도구의 gylcemic 컨트롤.
이러한 특성이 초기 이식 부상과 연관 된 긴 보존 기간 다른 보존 솔루션 및 기술 분석에 대 한 이상적인 모델을 만듭니다. 이 모델 최적의 성공을 달성 하기 위해 몇 가지 중요 한 단계 고려 되어야 한다. 췌 장 자체는 조작에 매우 취약입니다. 따라서, 부드러운 처리 기관 복구 그리고 이식 면 막대기를 사용 하 여 기계적 외상을 최소화 합니다. 집게와 동맥을 직접 파악 피해 야 한다, 이후 그것은 필연적으로 하지 심한 이식 손상 될 것 이다. 같은 이유로 비장 췌, 함께 복구 되 고 핸들로 사용 됩니다. 이것은 또한 임상 연습에 설립. 추가 함정 4 ° C 히스티딘 트립토판 ketoglutarate 관류 솔루션을 사용 하 여 대동맥 유세 통해 관류에 의해 달성 된다 감기 관류를 포함 한다. 이로써, 동맥의 과도 한 팽창 부드럽게 perfusing에 이식 하 여 피할 수 있습니다. 나머지 관류 솔루션 기관 복구 하는 동안 그것의 온도 낮게 유지 하기 위해서는 이식, 보습을 위해 사용 되어야 한다.
받는 사람 준비 관련 외부 경 정 맥 뿐만 아니라 일반적인 경 동맥의 조심 해 부 성공적인 revascularisation에 대 한 기본을 설정합니다. 모든 지류, 뿐만 아니라 주변의 지방 조직을 제거 하 여 정 맥의 특히, 완전 노출, 나머지 지방 조직에 의해 외부 압축 및 협 착 증을 방지 하기 위해 필요 하다. 적절 한 갑 직경의 선택은 중요 합니다. 25 ~ 28 g, 사이 무게 마우스 공유 경험을 바탕 0.57 m m 동맥 갑와 0.75 사이의 정 맥 커 0.8 m m의 내부 직경은 적합 하다. 정확한, 깨끗 한 수 갑의 가장자리의 절단은 필수 배 그 루터 기를 찢는 피하기 위해입니다. 특히, 동맥의 혈관의 팽창 최고의 좋은 팁 배 dilatators를 사용 하 여 이루어집니다. 엄지손가락의 규칙으로 서 배 갑의 두 번 루멘을 넓혀 수 있어야 합니다. 이상 배 everting 및 팔목에 고정 과정으로이 질이 중요 한 단계 때 피부 플랩 아래에 그들을 배치 하 여 혈관 클램프를 안정화 하는 것이 좋습니다.
이미 언급 했 듯이, 비 봉합 팔목-기술 혈관 문 합 하는 쉬운 방법 나타내고 5 분 내에서 수행할 수 있습니다. 그러나, 받는 사람의 목 지역에 이식의 올바른 위치 올바른 revascularization 위한 매우 중요입니다. 이로써, 정 맥과 동맥의 안전, 직선, 그리고 긴장 없는 문 합 할 수 있도록 예상 되는 목 지역에 이식의 최종 정확한 위치 한다. 너무 긴 혈관이 유출 방해 비틀면 때문에 발생할 수 있습니다 때문에, 피할 수 있다. 같은 이유로 정 맥 문 합에 갑 핸들 또한 제거 되어야 한다 reperfusion 다음. 췌 장 이식에서 지역화 된 bleedings의 경우, 성공적인 hemostasis 부드럽게 면 지팡이 사용 하 여 5 분 동안 출혈 측면을 압축 하 여 얻을 수 있습니다. 이 합병증의이 종류를 관리 하는 유일한 성공적인 방법입니다.열화, 비록 매우 선택적, 괴 사 성 췌 장 염으로 인해 거의 모든 경우에서 이식 손실 귀착되는.
요약 하자면, 우리는 및 microsurgically 가능한 기술적 이며 뛰어난 성공 속도 비 봉합 팔목 기술을 사용 하 여 마우스의 췌 장 이식 하는 방법을 개발 했다. 췌 장 덕트 폐색 때문에의 progredient 섬유 증을 감안할 때,이 모델은 초기 이식 손해에 초점을 맞추고 연구 분야에 대 한 가장 적합 합니다. 이 원고는 안전 하 게 그들의 실험실에서이 모델을 확립 하는 연구를 허용 하는 위한 것입니다.
Disclosures
저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.
Acknowledgments
이 작품은 의료 대학 인스브루크의 #2008-1-596 보조금과 #UNI-0404/1956의는 "Tiroler Wissenschaftsfonds (TWF)" (https://www.tirol.gv.at/en/), 그리고 부여 #2013-042018 "MUI 시작 Förderungsprogramm"의 의해 지원 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Adventitia Scissors | S&T | S-00102 | Straight |
| Dumont # 7 Forceps | FST | 11271- 30 | Curved Tip 0.17 x 0.1 mm |
| Yasargil Clip Mini Permanent 7mm | Aesculap | FE720K | |
| Micro vessel clip | S&T | B1 00396 V | |
| Vessel dilatator | S&T | D-5a.2, 00125 | |
| Clip applier | S & T | CAF-4 00072 | for venous cuff |
| Clip applier | Aesculap | FE572K | for the arterial cuff |
| Polyethylene tube | Portex Ltd | Inner diameter 0.75 mm for venous cuff | |
| Polymide tubing | Vention Medical | 141-0051 | Inner diameter 0.8 mm (Alternative for polyethylene tube from Portex Ltd) |
| Polymide tubing | Vention Medical | 141-0033 | Inner diameter 0.57 mm for arteriail cuff |
| Bipolar forceps | Micromed | 140-100-015 | |
| 8/0 silk ligatures | Catgut GmbH, Merkuramed | 17209008 | |
| Custodiol HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie | 59997 | |
| Ketamin Graeub | aniMedica GmbH | 32554 | |
| Xylasol Graeub | aniMedica GmbH | 50855 |
References
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