Introduction
अल्जाइमर रोग एक neurodegenerative विकार है कि प्रभाव के 35 लाख से अधिक लोगों को दुनिया भर में है। 1 शुरुआत और रोग के विकास में दृढ़ता से फंसा, अत्यधिक एकत्रीकरण का खतरा, हाइड्रोफोबिक पेप्टाइड amyloid बीटा (Aβ) है। 2 Aβ लंबाई में 36 से 43 अमीनो एसिड से चलता है, हालांकि, यह माना जाता है कि 42 अमीनो एसिड संस्करण बीटा amyloid 42 (Aβ42), प्रोटीन के सबसे जहरीले रूप है। 3 यह Aβ42 की क्षमता आसानी से प्रसारण, oligomeric प्रजाति है कि विशेष रूप से न्यूरोटोक्सिक संस्थाओं माना जाता है के रूप में करने के लिए सबसे अधिक भाग में कारण है। 4 क्रम Aβ पेप्टाइड की हमारी समझ को आगे करने के लिए, यह नियमित रूप से उच्च शुद्धता सामग्री प्राप्त करने के लिए आवश्यक है। ट्रेस अशुद्धियों की उपस्थिति में नाटकीय रूप पेप्टाइड का एकत्रीकरण प्रवृत्ति गुणों को बदलने के लिए दिखाया गया है। 5
टीraditionally, उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) ऐसे Aβ के रूप में हाइड्रोफोबिक पेप्टाइड्स की जुदाई सी 4 या 8 सी सिलिका आधारित स्थिर चरणों और एक अम्लीय मोबाइल चरण का एक संयोजन के उपयोग के माध्यम से किया गया है। 6 हालांकि, इस तरह की स्थितियों पेप्टाइड की शुद्धि के लिए एक चुनौती पेश कर सकते हैं। Aβ पेप्टाइड की कम समविद्युतविभव बिंदु (पीआई लगभग 5.5) 7 मतलब है कि अम्लीय परिस्थितियों में, पेप्टाइड एकत्रीकरण में वृद्धि हुई है और एक परिणाम के रूप में व्यापक, गैर सुलझाया एचपीएलसी चोटियों है कि अक्सर अलग करने के लिए मुश्किल हो जाता है (चित्रा 2A) का उत्पादन किया जाता है। इसके अलावा, इस तरह के व्यापक चोटियों अक्सर दोष जो पेप्टाइड का एकत्रीकरण प्रोफ़ाइल प्रभाव हो सकता है, और आमतौर पर शुद्धि के बाद के दौर जो नाटकीय रूप से उत्पादित पेप्टाइड की राशि को प्रभावित कर सकते हैं की आवश्यकता होती है।
पाली (styrene / divinylbenzene) स्थिर चरण, PLRP एस, purif के वैकल्पिक साधन का प्रतिनिधित्व करता हैयिंग हाइड्रोफोबिक पेप्टाइड्स। स्थिर चरण अलग प्रोटीन और दूत ribonucleic एसिड (mRNA) के एक नंबर की शुद्धि में नियोजित किया गया है। 8, 9 PLRP-एस स्थिर चरण रिवर्स चरण जुदाई के लिए कोई अतिरिक्त alkyl ligand की आवश्यकता है, और अधिक महत्वपूर्ण बात उच्च पीएच जो पेप्टाइड का deaggregation की ओर जाता है पर रासायनिक स्थिर है। 7 के साथ साथ, हम एक सिलवाया एचपीएलसी शुद्धि प्रोटोकॉल है कि उच्च शुद्धता amyloid बीटा 42 (Aβ42) और बीटा amyloid 40 (Aβ40) पेप्टाइड्स पैदावार की रिपोर्ट।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Agilent 1260 Infinity II quarternary pump | Agilent | G7111B | http://www.agilent.com/en-us/products/liquid-chromatography/lc-pumps-vacuum-degassers/1260-infinity-ii-quaternary-pump |
| Agilent 1260 Infinity II Dual variable wavelength detector | Agilent | G7114A | http://www.agilent.com/en-us/products/liquid-chromatography/lc-detectors/1260-infinity-ii-variable-wavelength-detector |
| Agilent 1260 Infinity II Manual Injector fitted with 10 mL stainless steel sample loop | Agilent | 0101-1232 | http://www.agilent.com/en-us/products/liquid-chromatography/lc-injection-systems/1260-infinity-ii-manual-injector |
| Agilent 1260 Infinity II Manual Injector fitted with 20 µL stainless steel sample loop | Agilent | G1328C | http://www.agilent.com/en-us/products/liquid-chromatography/lc-injection-systems/1260-infinity-ii-manual-injector |
| Ring Stand Mounting Bracket | Agilent | 1400-3166 | |
| Agilent PLRP-S 300 Å 5 µm 4.6 x 250 mm (Analytical) | Agilent | PL1512-5501 | http://www.agilent.com/en-us/products/liquid-chromatography/lc-columns/biomolecule-separations/plrp-s-for-biomolecules#features |
| Aβ42 or Aβ40 peptide | Synthesized in-house using a CEM liberty automated peptide synthesizer. | ||
| Ammonium Hydroxide (NH4OH, 28% solution) | Fisher Scientific | A669-500 | |
| Acetonitrile | Fisher Scientific | A998-4 | |
| HPLC grade water | Fisher Scientific | W5-4 | |
| Falcon 50 mL conical centrifuge tube | Fisher Scientific | 14-954-49A | |
| Supelco PEEK Fitting One-piece fingertight, pkg of 5 ea | Sigma-Aldrich | Z227250 | |
| Normject 5 cc sterile syringe | Fisher Scientific | 1481729 | |
| 16 Gauge SS Needle | Rheodyne | 3725-086 |
References
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