Summary
Aqui apresentamos uma combinação de perfusão de Doppler laser de imagem (LDPI) e do laser Doppler perfusão monitoramento (LDPM) para medir spinal cord fluxos de sangue local e saturação de oxigênio (SO2), bem como um procedimento padronizado para a introdução da medula espinhal trauma no rato.
Abstract
Laser Doppler flowmetry (LDF) é um método não invasivo para a medição de vazão (BF) de sangue, que o torna preferível para medir microcirculatory alterações da medula espinhal. Neste artigo, nosso objetivo era usar imagem Laser Doppler e monitoramento para analisar a mudança de BF após lesão medular. Tanto o scanner de imagem Doppler laser e o sonda/monitor foram sendo empregadas para obter cada leitura. Os dados de LDPI fornecido uma distribuição local de BF, que deu uma visão geral de perfusão em torno do local da lesão e acessível para a análise comparativa de BF entre diferentes locais. Medindo-se intensamente a área de sondagem durante um período de tempo, uma sonda combinada foi usada para medir simultaneamente a saturação BF e oxigênio da medula espinhal, mostrando a perfusão global da medula espinhal e o suprimento de oxigênio. LDF em si tem algumas limitações, tais como fluxo relativo, sensibilidade ao movimento e zero biológico do sinal. No entanto, a tecnologia foi aplicada no estudo clínico e experimental, devido à sua configuração simples e rápida medição de BF.
Introduction
O tecido da medula espinhal é altamente vascularizado e extremamente sensível à hipóxia induzida pela lesão da medula espinhal (SCI). Nossos estudos anteriores mostraram que o fluxo de sangue da medula espinhal foi diminuiu significativamente após a concussão lesão1,2, que pode estar relacionado com o défice de função motora. Estudos recentes têm mostrado que a integridade dos vasos sanguíneos, seguindo SCI é bem correlacionada com a melhoria da função motora sensorial3. Tem sido relatado que a vascularização melhorada pode resgatar matéria branca, indiretamente, levando à melhoria da função4. Portanto, a manutenção da perfusão pós-lesão medular parecia ser de primordial importância para a preservação da viabilidade e funcionalidade.
Os efeitos de diferentes tratamentos na perfusão após SCI foram examinados por numerosos investigadores usando uma variedade de técnicas em modelos experimentais de SCI5,6,7. Laser Doppler, como uma técnica bem estabelecida, foi sem dúvida um método útil para quantificar a perfusão em vários estudos animais e humanos8,9,10,11. A técnica baseia-se em medir o efeito Doppler12 induzida movendo glóbulos vermelhos para a luz esclarecedora. Desde a comercialização da técnica no início de 1980, grandes progressos em tecnologia laser, fibra ótica e processamento de sinais para perfusão de medição por laser Doppler instrumentos13, que tornou LDF uma tecnologia confiável.
No estudo atual, os dois métodos de medição Doppler a laser foram aplicados para avaliar o fluxo sanguíneo (BF) nos espinais de ratos concussiva. Devido à natureza não invasiva da tecnologia e sua configuração simples, o nosso protocolo fornece um método sensível, rápido e confiável para medições de BF da medula espinhal. Mais importante, esse método permite o estudo longitudinal de BF post concussiva SCI sem sacrifício de animais em cada ponto de tempo.
Devido a capacidade de avaliar o BF do tecido e rápidas mudanças de perfusão durante a estimulação, é possível aplicar este protocolo para avaliar cerebral BF14,15 , bem como medir outros tecidos como fígado16, 17,18,de pele19e intestino20. Em um modelo do rato de transitória oclusão da artéria cerebral média, as leituras de laser Doppler foram utilizadas para garantir a adequada redução da taxa para níveis que são esperados na penumbra isquêmica14BF. Em ratos que foram submetidos a indução de isquemia (CLI) membro crítico, varredura a laser Doppler foi aplicada para observar membros traseiros BF antes e após o procedimento CLI e durante diferentes períodos após tratamento21. Além disso, a biodisponibilidade e metabólico apuramento de algumas drogas dependiam BF hepática, que foi detectada por LDF16. Portanto, LDF pode ser amplamente utilizado na avaliação de modelo experimental, farmacodinâmicos e farmacocinéticos.
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Protocol
Animais protocolos envolvendo animais experimentais seguiram as diretrizes estabelecidas pelo National Institutes of Health (NIH) e foram aprovados pelo Comitê de uso de Capital médica Universidade e cuidado Animal.
Os procedimentos de introdução de SCI e medição BF da medula espinhal, usando laser Doppler equipamentos descritos abaixo foram usados em um estudo publicado1.
1. preparação para a cirurgia
- Preparar o pentobarbital de sódio solução 3% (p/v) em solução salina e administrar a dose de 35 mg/kg.
Cuidado: pentobarbital de sódio é uma substância controlada. Devem ser mantidos registros detalhados e soluções armazenados em um local seguro, trancado. - Esterilizar equipamentos e preparar a área de cirurgia.
- Para limpar o aparelho de cirurgia com as etapas a seguir: 75% etanol de limpeza, em seguida, autoclave a 121 ° C por 30 min, depois seque em um forno de 60 ° C durante a noite. Esterilize a área de cirurgia com 75% de álcool.
2. preparação do rato para cirurgia
- Anestesia o rato com uma injeção intraperitoneal de sódio pentobarbital (35 mg/kg). Todo o procedimento deve levar de 30 a 40 min, incluindo cirurgia, medições de BF e suturas.
- Raspe a região dorsal do rato da parte inferior das costas para o pescoço. Os cabelos devem ser cortados mais curto possível. Coloque o rato sobre a 40 ° C Aquecimento pad para manter a temperatura corporal constante.
3. a laminectomia e o traumatismo da medula espinhal
Nota: Para executar laminectomia somente para o grupo farsa, siga os passos 3.1 a 3.6.
- Posicione o lado dorsal animal acima. Esterilize a parte raspada com iodo, seguido de álcool 75% usando bolas de algodão estéril. Fazer uma incisão na pele (4 cm) com o bisturi no local de laminectomia cobrindo torácicas vértebras T7 a T11.
- Corte os músculos anexados em ambos os lados de T8 T10 para expor os processos espinhosos, as lâminas e as articulações.
- Use o bisturi para fazer incisões que desconectar a junção entre T10 e T11. Ainda mais expor a junção por cuidadosamente, dissecando a camada muscular fora para expor o osso.
- Use a tesoura para limpar mais músculo longe da lâmina e próximo do pedículo com pequenos recortes. Isto irá abrir um pequeno espaço entre as vértebras em T10 e T11 (figura 1A). Lentamente e delicadamente inserir esta lacuna com uma pinça hemostática e quebrar o pedículo (figura 1B). Certifique-se que a curvatura da pinça está sempre posicionada lateralmente, longe da medula. Repita do outro lado.
- Expor a medula espinhal (Figura 1) e levante com cuidado e quebrar a lâmina. Não se esqueça de deixar quaisquer fragmentos de osso livre ou irregulares.
- Repita o processo para remover mais lâminas T9 e T8.
- Mover o animal para a tabela de equipamento do pêndulo e usar o par de pinça Adson anexada à tabela para estabilizar a coluna vertebral do animal, fixando-se sobre o processo espinhoso de T7 e T11 e, em seguida, ajustar a pinça para endireitar a coluna vertebral (Figura 1).
- Colocar o animal sob o pêndulo, Mire a vara de greve para o centro da medula espinhal exposta e abaixar a haste para dentro de 3 a 5 mm da superfície da medula espinhal.
- Definir os parâmetros de impacto, tais como a força de impacto (160 KD) e tempo de interrupção (1 s)
- Induzir o SCI clicando no botão "Iniciar o experimento" sobre a interface do software e, em seguida, clique em "Sim" na interface do seguinte para iniciar o impacto automaticamente. Após o impacto, o software irá exibir os dados reais do impacto junto os parâmetros definidos, verifique os dados para certificar-se que era perto do ponto de ajuste (Figura 1E).
Nota: Um sinal típico para o sucesso do experimento foi um curto período de movimento de balanço e membro de cauda involuntária após o impacto. Estímulos para a cauda para verificar se há reflexão membro também poderiam ser feitos. No entanto, avaliação motora como o Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) escala locomotora22,23 é necessária para determinar a eficácia da lesão induzida.
- Induzir o SCI clicando no botão "Iniciar o experimento" sobre a interface do software e, em seguida, clique em "Sim" na interface do seguinte para iniciar o impacto automaticamente. Após o impacto, o software irá exibir os dados reais do impacto junto os parâmetros definidos, verifique os dados para certificar-se que era perto do ponto de ajuste (Figura 1E).
4. laser Doppler digitalização
- Consulte a Tabela de materiais para os detalhes do scanner a laser Doppler utilizado neste estudo. Para digitalizar a medula exposta, coloque o lado dorsal do rato sobre um fundo preto, não-reflexiva.
- Configurar os parâmetros de digitalização: Abra o software de digitalização, clique em "Medida" para entrar na interface de usuário gráfica de medição e clique no botão "Configurar Scanner" para abrir a interface de instalação do scanner. Para digitalizar áreas pequenas como esta experiência, selecione "Alta resolução" sob o "Scan tamanho e opções de exibição" para um bom modo de digitalização com maior resolução (256 × 256 pontos cobrindo 4 × 10 cm2) (Figura 2A). Clique na opção "Varredura de imagem" para verificar os perímetros de varredura (Figura 2B).
- Clique na opção "Vídeo e distância" para verificar a imagem de vídeo ao vivo. Posicione o scanner 10-13 cm acima da janela cirúrgica e mover o fundo com o animal para o centro da medula espinhal exposta na janela de digitalização (Figura 2).
- Use a função "auto distante" bem ajustar a altura de digitalização, observe que a altura da digitalização deve ser mantida consistente em todas as medições no experimento Figura 2.
- Use uma tampa nonreflective com uma janela para expor apenas a área cirúrgica para mais minimizar o plano de fundo e marcar a direção do animal.
- Clique sobre o "Repita Scan", defina o número de exames (usamos 8 exames repetir neste caso) e clique em "Okey" para abrir a interface de verificação de repetição. Clique no botão Iniciar para iniciar a digitalização, e todo o processo levará aproximadamente 3-4 min (Figura 2D).
5. laser Doppler monitoramento
- Nós usamos um monitor de scanner com Blunt VP3 sonda de entrega final de agulha para monitor BF e SO2 ao longo do tempo. Anexe a sonda Laser Doppler perpendicular a um instrumento estereotáxica para configurar o equipamento de monitoração.
- Colocar o rato no lado dorsal aparelhos estereotáxica, underlay o animal com um pequeno pedaço de isopor quando necessário nivelar a medula exposta.
- Abaixe a sonda da medula espinhal para monitor BF.
Nota: Passo 5.3 é crucial para a reprodutibilidade da medição como as leituras de dados são sensíveis à pressão aplicada à sonda, portanto, cuidado extra é necessário para não over - ou under - position a sonda.- Examinar a incisão e remover qualquer líquido excessivo ou sangue usando uma almofada de algodão estéril.
- Use o eixo de X e Y do aparelho para localizar a sonda a 2 mm rostral ao ponto central da medula espinhal exposta ou lesão aponte e evitar a veia central.
- Use o eixo Z para abaixar lentamente a sonda ao nível apenas tocando a superfície da medula espinhal. A sonda deve apenas tocar a superfície da medula espinhal, mas não tão solto para permitir que qualquer luz brilhante escapar do lado do ponto de contacto.
-
Gravação de dados
- Abra o software de aquisição de dados, clique no botão "nova experiência" para abrir a interface de configuração. Sob a opção "General", verifique a configuração do sistema e clique em "Next" (Figura 3A), na configuração do Display, selecione o canal BF e SO2 e clique em "Next" (Figura 3B).
- Informações do arquivo de entrada e clique em "Next" (Figura 3) para entrar na interface de gravação de dados, clique no botão triângulo verde para iniciar a gravação de dados da sonda (Figura 3D).
- Uma vez que o sinal está estáveis, registros de dados durante 8 min consecutivos. Então levante a sonda e retire o animal do aparelho estereotáxica para suturar a incisão e colocar o animal em cuidados pós-operatórios.
6. suturas e cuidados pós-operação
- Suturar a incisão: inserir uma agulha de sutura do músculo em ambos os lados da incisão. Puxe o fio através de, puxando os tecidos juntos, cobrindo assim a medula espinhal exposta no local de lâminas removidos. Usando o suporte da agulha, puxe a linha inteira, através do formulário três nós de quadrado e corte a linha como perto de nós quanto possível.
- Sutura da pele com 3-4 Praça nós da mesma forma como suturar a incisão e, em seguida, aparar a segmentos de aproximadamente 1 cm dos maçaricos.
- Coloque o rato em seu lado em sua jaula, evitando o contato entre a cirurgia e o fundo da gaiola. As gaiolas devem ser colocadas em almofadas de aquecimento.
- Monitore o animal até ele acorda da anestesia para não garantir que nenhum sangramento pós-operatório e que as suturas permanecem fechadas.
- Injecte por via subcutânea benzil penicilina de sódio em ratos durante 3 dias após a cirurgia, 120 mg/kg por dia. Intraperitonealmente injete buprenorfina (0,05 mg/kg) imediatamente após a cirurgia e todos os pós-cirurgia de 6 horas por 1 dia.
- Para certificar-se de que os animais têm acesso à comida e água suficientes, caber garrafas de água com bicos estendidas e coloque a comida perto do animal na gaiola.
Nota: Realizamos escala de classificação BBB para avaliar a função locomotora de membro posterior da pós-lesão animal 24h para excluir os animais com uma pontuação de BBB acima de 0, portanto, assegurar que o animal estava paralisado pela lesão induzida. - Pós-operatório, fornecer manual vazio da bexiga urinária, suavemente, aplicando pressão sobre o abdômen duas vezes por dia, se necessário.
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Representative Results
LDPI foi usado para medir o BF na medula espinhal, que foi quantificada no eixo rostral-caudal da medula espinhal, extraindo perfis lineares (Figura 4). Figura 5A e Figura 5B representam a imagem de fluxo da medula espinhal do grupo farsa e grupo SCI, respectivamente. Figura 5 e Figura 5 representam o BF alterando ao longo do eixo rostral-caudal da medula espinhal de Souza e grupo SCI, respectivamente. Uma comparação da Figura 5A e Figura 5B demonstrou que a SCI induziu redução de BF, e BF do epicentro foi menor do que o cabo rostral e caudal da medula.
LDPM mostrou sinal de LD o domínio do tempo e então2 e Figura 6 ilustrado a aquisição e processamento dos dados LDPM. Depois que os dados foram registrados, um trecho de 8 min de dados contínuos da região de interesse (ROI) foi selecionado, que foi então filtrada por um filtro incorporado para minimizar quaisquer sinais de não-biológico. Posteriormente, o ROI foi analisado estatisticamente e os resultados foram exportados em um formato de dados brutos. Figura 7 gravou a variação periódica da BF e SO2 ao longo do tempo no grupo sham e grupo SCI. Como mostrado na Figura 7A, a medula espinhal BF do grupo SCI diminuída significativamente em comparação com o grupo farsa. Simultaneamente, a SO2 da medula espinhal foi notavelmente menor após traumatismo da medula espinhal (Figura 7B), que era consistente com a mudança de BF após lesão. Para reduzir a perturbação, as medidas foram feitas várias vezes e os dados foram normalizados.
Figura 1. Laminectomia e a contusão na coluna. (A) desligue a junção entre T10 e T11. (B) inserir a pinça para quebrar o pedículo. (C) quebrar a lâmina e expor a medula espinhal. (desenho esquemático da anatomia) (D) estabilize a coluna na tabela de experiência. (E) de impacto de inicial usando o software e verificar os dados. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. Passo a passo de instalação para varredura a laser Doppler. (A) configuração geral para a digitalização. (B) instalação interface para parâmetros de digitalização de imagem. (C) a interface de configuração para vídeo e distância. (D) configuração de interface para a varredura de repetição. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3. Passo a passo de instalação para o monitoramento de laser Doppler. (A) inicie uma nova experiência. (B) selecione a exibição de canal. (C) introduzir detalhes do assunto. (D) para iniciar a gravação de dados. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4. Processo das imagens de perfusão Doppler laser. (A) 8 contínuo verifica derivada pela verificação de ratos no grupo de Souza. (B) a imagem média das varreduras contínuas. (C, D) Região de interesse (ROI) foi selecionada com base na imagem infravermelha para extrair o perfil de intensidade ao longo do eixo central da coluna vertebral. A caixa de baixo-relevo mostra o resultado de perfil do ROI. A barra de cores indicado unidades de perfusão medido pelo laser Doppler scanner onde azul representa o valor mais baixo e vermelho representa o valor mais alto. O instrumento detectado o valor relativo da perfusão, ou seja "fluxo". Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5. BF da medula espinhal foi detectado utilizando imagens de perfusão Doppler laser. (A, B) Um ROI de 5 mm foi extraída sobre o mapa de fluxo ao longo do eixo da coluna vertebral a rostral da medula caudal. (C, D) O perfil de intensidade de cada ROI ao longo de uma linha centralizada no eixo da medula espinhal foi extraído para quantificação.
Figura 6. Processo de monitorização de perfusão Doppler laser. (A) a gravação de dados brutos, onde o marcador de tempo indicado o ponto de partida. (B) seleção de um ROI de 8 min. (C) os dados selecionados foram, então, filtrados por um filtro incorporado. (D) análise estatística de ROI. (E) exportação dos dados brutos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 7. Medula espinhal perfusão foi avaliada pelo laser Doppler perfusão monitoramento. (A) A 15 s amostra da saída do fluxo de sangue cru do grupo farsa e grupo SCI. (B) A 15 s amostra da saída de saturação de oxigênio cru do grupo farsa e grupo SCI. A sonda Doppler laser foi posicionada 2 mm rostral ao ponto médio a nível apenas acima da superfície da medula espinhal para o lado direito da veia central. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Alguns detalhes devem ser notados ao realizar este protocolo. Em primeiro lugar, o processo de anestesia e cirurgia deve ser realizado tão rapidamente e elegantemente quanto possível para minimizar o stress introduzido ao animal. Para reduzir os resultados de perturbações, manter o animal em um Estado relativamente Pacífico e estável. Em segundo lugar, deveria prestar mais atenção ao sangramento durante a medição usando laser Doppler equipamentos, desde que o sangue poderia potencialmente interferir com a leitura. Finalmente, durante a gravação de dados, os animais devem ser mantidos em um ambiente de temperatura controlada para evitar resultados inconsistentes causados pela variação de temperatura.
Há vários fatores importantes pesquisadores devem considerar quando usando a varredura a laser Doppler. Como mencionado no protocolo, a distância da verificação deve ser mantida consistente durante todo o experimento para obter resultados comparáveis. Para áreas pequenas, sugerimos de alta resolução com várias digitalizações para produzir dados confiáveis do BF. Além disso, recomendamos colocar uma gaze estéril com direção marcada do animal cobrindo a área cirúrgica com uma pequena janela apenas expondo a espinha para minimizar ainda mais fundo.
Posicionamento da sonda é a consideração crítica na adaptação e implementação do protocolo de monitoramento. A sonda deve ser perpendicular à superfície de medição e pressão excessiva deve ser evitada. Para atingir este objetivo, a espinha do rato deve ser endireitada e nivelada pelo Português o animal com isopor, se necessário e a sonda deve ser posicionada utilizando o aparelho e as coordenadas para fazer medições de certeza são retiradas aproximadamente a mesma área.
Conforme discutido em nosso artigo anterior1, existem algumas limitações para esta tecnologia, tais como a deficiência de calibração com fluxo absoluto e sensibilidade ao movimento artefato24. Outra limitação bem notada é o biológico, o sinal zero – isto é, a presença de sinal sem BF25,26. Para minimizar a influência destas limitações para os resultados, as medidas devem ser tomadas várias vezes e normalização é recomendada para reduzir o distúrbio.
Desenvolveram-se outras técnicas tais como técnica de microesfera radioativo e técnica de ultra-som Doppler para medição de BF. No entanto, o antigo não é em tempo real desde que uma substância radioativa deve ser injectada no sangue e o tecido precisa ser extirpado para a medição de27. Quanto a tecnologia de contraste aprimorado ultra-sonografia, embora seja invasivo como LDF, agente de contraste (microbolhas) deve ser injetado por via intravenosa e cateterização da jugular ou femoral é necessária para a infusão de microbolhas consistente 28. em comparação com estas técnicas, LDF é capaz de forma não-invasiva, medir o fluxo microcirculatory do tecido.
LDF sinais consistem de diferentes características de tempo e frequência. Para capturar esses recursos, métodos de análise de wavelets e análise de fourier foram aplicados para revelar a frequência periódica flutuações29,30. Essas oscilações se manifesta a influência de coração cansado, respiração, atividade miogênico intrínseca do músculo liso vascular, neurogênica atividade na parede do vaso e atividade metabólica relacionada endotelial31,32. Em aplicações clínicas e investigação fundamental, LDF não só pode obter os sinais de BF, mas também a avaliação da BF microvascular pode fornecer uma plataforma de partida para investigar o comprometimento microvascular e, mais genericamente, a patogênese da doença microvascular.
No estudo atual, os dois métodos de LDF foram aplicados para avaliar BF na medula espinhal. Os dados de LDPI fornecido uma distribuição geográfica de BF, que deu uma visão geral de perfusão ao redor da área e tornou possível realizar a análise comparativa de BF em locais diferentes. Medindo-se intensamente a área de sondagem ao longo do tempo, os dados derivados de LD monitoramento forneceram uma descrição mais detalhada do fluxo sanguíneo local, permitindo análises aprofundadas, tais como o espectro e a análise de wavelet, para ganhar uma compreensão mais profunda do BF na área , que é um tópico de investigação futuro promissor.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Os autores têm sem agradecimentos.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Laser Doppler Line Scanner | Moor Instruments | moorLDLS2 | |
| Laser Doppler Monitor | Moor Instruments | moorVMS-LDF | |
| Probe for Monitor | Moor Instruments | VP3 | Blunt needle end delivery probe |
| Impactor | Precision Systems and Instrumentation | IH-0400 | |
| Phenobarbital sodium | Sigma-Aldrich | P3761 | |
| Buprenorphine | Sigma-Aldrich | B-908 | |
| Syringe | Becton Dickinson Medica (s) Pte.Ltd | 300841 | |
| Surgical suture needles with thread | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | 18T0329 (batch number) /4-0 | |
| Scalpel | Operation instrument factory of Shanghai Medical Instrument Co., Ltd. | J11030 4# | |
| Scalpel blade | Operation instrument factory of Shanghai Medical Instrument Co., Ltd. | J12130 20# | |
| Ophthalmic forceps | Operation instrument factory of Shanghai Medical Instrument Co., Ltd. | JD1040 | |
| Hemostatic forceps | Operation instrument factory of Shanghai Medical Instrument Co., Ltd. | J31050 | |
| Benzyl penicillin sodium | North China Pharmaceutical Co., Ltd | F6072116 (batch number) | |
| 75% alcohol | Dezhou Anjie Gaoke disinfection products Co., Ltd | 150421R (batch number) | |
| Iodine | Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd | 20170102 (batch number) | |
| Rat | Laboratory Animal Center, The Academy of Millitery Medical Sciences | Sprague-Dawly (rat strain) |
References
- Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. Meliorating microcirculatory with melatonin in rat model of spinal cord injury using laser Doppler flowmetry. Neuroreport. 27 (17), 1248-1255 (2016).
- Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. Melatonin prevents blood vessel loss and neurological impairment induced by spinal cord injury in rats. J Spinal Cord Med. , 1-8 (2016).
- Han, S., et al. Rescuing vasculature with intravenous angiopoietin-1 and alpha v beta 3 integrin peptide is protective after spinal cord injury. Brain. 133 (Pt 4), 1026-1042 (2010).
- Gerzanich, V., et al. De novo expression of Trpm4 initiates secondary hemorrhage in spinal cord injury. Nat Med. 15 (2), 185-191 (2009).
- Phillips, J. P., Cibert-Goton, V., Langford, R. M., Shortland, P. J. Perfusion assessment in rat spinal cord tissue using photoplethysmography and laser Doppler flux measurements. Journal of Biomedical Optics. 18 (3), 037005 (2013).
- Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously. Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).
- Brown, A., Nabel, A., Oh, W., Etlinger, J. D., Zeman, R. J. Perfusion imaging of spinal cord contusion: injury-induced blockade and partial reversal by β2-agonist treatment in rats. Journal of Neurosurgery-Spine. 20 (2), 164-171 (2014).
- Olive, J. L., McCully, K. K., Dudley, G. A. Blood flow response in individuals with incomplete spinal cord injuries. Spinal Cord. 40 (12), 639-645 (2002).
- Yamada, T., et al. Spinal cord blood flow and pathophysiological changes after transient spinal cord ischemia in cats. Neurosurgery. 42 (3), 626-634 (1998).
- Gordeeva, A. E., et al. Vascular Pathology of Ischemia/Reperfusion Injury of Rat Small Intestine. Cells Tissues Organs. , (2017).
- Liu, M., et al. Insulin treatment restores islet microvascular vasomotion function in diabetic mice. J Diabetes. , (2016).
- Drain, L. The laser Doppler technique. , Wiley, USA. (1980).
- Rajan, V., Varghese, B., van Leeuwen, T. G., Steenbergen, W. Review of methodological developments in laser Doppler flowmetry. Lasers Med Sci. 24 (2), 269-283 (2009).
- Dohare, P., et al. The neuroprotective properties of the superoxide dismutase mimetic tempol correlate with its ability to reduce pathological glutamate release in a rodent model of stroke. Free Radic Biol Med. 77, 168-182 (2014).
- Bai, H. Y., et al. Pre-treatment with LCZ696, an orally active angiotensin receptor neprilysin inhibitor, prevents ischemic brain damage. Eur J Pharmacol. 762, 293-298 (2015).
- Vertiz-Hernandez, A., et al. L-arginine reverses alterations in drug disposition induced by spinal cord injury by increasing hepatic blood flow. J Neurotrauma. 24 (12), 1855-1862 (2007).
- Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously. Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).
- Li, Z., et al. Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury. Microvasc Res. 78 (1), 20-24 (2009).
- Boyle, N. H., et al. Scanning laser Doppler is a useful technique to assess foot cutaneous perfusion during femoral artery cannulation. Critical Care. 3 (4), 95-100 (1999).
- Emmanuel, A. V., Chung, E. A. L., Kamm, M. A., Middleton, F. Relationship between gut-specific autonomic testing and bowel dysfunction in spinal cord injury patients. Spinal Cord. 47 (8), 623-627 (2009).
- Sheu, J. J., et al. Combination of cilostazol and clopidogrel attenuates rat critical limb ischemia. J Transl Med. 10, 164 (2012).
- Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection. Experimental Neurology. 139 (2), 244-256 (1996).
- Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. A Sensitive and Reliable Locomotor Rating-Scale for Open-Field Testing in Rats. Journal of Neurotrauma. 12 (1), 1-21 (1995).
- Oberg, P. A. Tissue motion--a disturbance in the laser-Doppler blood flow signal? Technol Health Care. 7 (2-3), 185-192 (1999).
- Tenland, T., Salerud, E. G., Nilsson, G. E., Oberg, P. A. Spatial and temporal variations in human skin blood flow. Int J Microcirc Clin Exp. 2 (2), 81-90 (1983).
- Kernick, D. P., Tooke, J. E., Shore, A. C. The biological zero signal in laser Doppler fluximetry - origins and practical implications. Pflugers Arch. 437 (4), 624-631 (1999).
- Rudolph, A. M., Heymann, M. A. The circulation of the fetus in utero. Methods for studying distribution of blood flow, cardiac output and organ blood flow. Circ Res. 21 (2), 163-184 (1967).
- Dubory, A., et al. Contrast Enhanced Ultrasound Imaging for Assessment of Spinal Cord Blood Flow in Experimental Spinal Cord Injury. Jove-Journal of Visualized Experiments. (99), e52536 (2015).
- Kuliga, K. Z., et al. Dynamics of Microvascular Blood Flow and Oxygenation Measured Simultaneously in Human Skin. Microcirculation. 21 (6), 562-573 (2014).
- Li, Z. Y., et al. Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury. Microvascular Research. 78 (1), 20-24 (2009).
- Muck-Weymann, M. E., et al. Respiratory-dependent laser-Doppler flux motion in different skin areas and its meaning to autonomic nervous control of the vessels of the skin. Microvasc Res. 52 (1), 69-78 (1996).
- Stefanovska, A., Bracic, M., Kvernmo, H. D. Wavelet analysis of oscillations in the peripheral blood circulation measured by laser Doppler technique. Ieee Transactions on Biomedical Engineering. 46 (10), 1230-1239 (1999).
