Summary
Vi uttrykte ectopically NR1 delenhet i NMDA reseptor merket med grønne fluorescerende protein i menneskelige embryonale celler (HEK293) som antigen å oppdage autoantistoffer mot NMDA reseptor i blodet av pasienter mistenkt med autoimmune encefalitt. Denne enkle metoden kan være passende for screening formål i klinisk innstillinger.
Abstract
Tilstedeværelsen av anti-NMDA reseptor autoantibody kan forårsake ulike nevropsykiatriske symptomer i berørte pasienter, kalt anti-NMDA reseptor autoimmune encefalitt. Påvisning av den spesifikke autoantibody mot NMDA reseptor i blodet eller cerebrospinalvæske (CSF) er avgjørende for nøyaktig diagnose av problemet. NMDA reseptor er en ion kanal protein kompleks som inneholder fire underenheter, inkludert to obligatoriske NMDA reseptor delenhet 1 (NR1) og en eller to NMDA reseptor delenhet 2A (NR2A), NMDA reseptor delenhet 2B (NR2B), NMDA reseptor delenhet 2C (NR2C), eller NMDA reseptor delenhet 2D (NR2D). Av anti-NMDA reseptor autoantibody ble rapportert å være til stede på ekstracellulære N-terminal domenet NR1 delenhet i NMDA reseptor. Målet med denne studien er å utvikle en enkel cellebasert immunofluorescence analysen som kan brukes som en screening test for å oppdage tilstedeværelsen av autoantistoffer mot NR1 delenhet i NMDA reseptor i blodet til rette klinisk og grunnleggende forskning anti-NMDA reseptor autoimmune encefalitt.
Introduction
Anti-NMDA reseptor autoimmune encefalitt er en nylig anerkjent sykdom enhet som kan oppstå hos pasienter i alle aldre, og påvirker hovedsakelig kvinnelige pasienter1,2. Det er en av de hyppigst diagnostisert encefalitt hos pasienter med første ukjent etiologi encefalitt3. Pasienter berørt med anti-NMDA reseptor encefalitt vanligvis har prodromalsymptomer en hodepine eller feber, etterfulgt av den raske utviklingen av bevissthet nivået endring og en rekke akutt nevropsykiatriske symptomer, inkludert agitasjon, irritabilitet , angst, søvnløshet, hallusinasjoner, vrangforestillinger, aggresjon, bisarr opptreden, bevegelse unormalt, autonome feilregulering og beslag angrep4,5. Tidlig anerkjennelse av denne tilstanden og rettidig behandling med immunterapi er viktig for et bedre resultat og med full gjenoppretting i pasientene påvirkes6. Derfor er det foreslått at anti-NMDA reseptor autoimmune encefalitt bør betraktes som et viktig differensialdiagnose av pasienter med akutt eller nye psykotiske funksjoner7,8.
Foruten kliniske funksjoner er oppdagelsen av autoantibody mot NMDA reseptor i blodet eller CSF avgjørende for korrekt diagnose av anti-NMDA reseptor autoimmune encefalitt9. De fleste av immunologiske tester oppdage anti-NMDA reseptor autoantibody er tilgjengelige i noen forskning laboratorier10,11, og det er bare en kommersielt tilgjengelig cellebasert immunofluorescence analysen for screening av anti-NMDA reseptor autoantistoffer12. Målet med denne studien er å utvikle en enkel in-house cellebasert immunofluorescence analysen som kan enkelt brukes i laboratoriet til skjermen tilstedeværelse av anti-NMDA reseptor autoantistoffer å lette klinisk forskning av anti-NMDA reseptor autoimmune encefalitt. NMDA reseptor er et heterotetramer ion kanal protein kompleks spesielt uttrykt i hjernen. Den er laget av to obligatoriske NR1 underenheter og kombinasjonen av en eller to underenheter av NR2A, NR2B, NR2C eller NR2D13. En tidligere studien rapporterte at den viktigste epitope målrettet av antistoffer var på N-terminal ekstracellulære domenet NR1 delenhet5. Derfor i denne protokollen, vi uttrykke menneskelige rekombinant NR1-delenhet protein av NMDA reseptor merket med grønne fluorescerende protein (GFP) i den menneskelige embryonale nyre epithelial celle linjen (HEK293) og utvikle en cellebasert immunofluorescence analysen å oppdage IgG klassen av anti-NMDA reseptor autoantistoffer i blodet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Studien ble godkjent av de institusjonelle gjennomgang styret av Chang Gung Memorial Hospital på Linkuo, Taoyuan, Taiwan (102-2577A3).
1. utarbeidelse av NR1-GFP uttrykk plasmider
- Bland 10 ng av NR1-GFP plasmider med 100 µL Escherichia coli kompetent celler belaste DH5α i en bakteriefri 1.5 mL sentrifuge tube, Pipetter blandingen forsiktig opp og ned 4 - 6 ganger, og Inkuber røret på is 20 min.
- Inkuber røret på 42 ° C i 1 min i et vannbad, fjerne røret fra vannbad, legge 1 mL lysogeny kjøttkraft (LB) medium i røret og ruge røret på 37 ° C i en inkubator med skjelvende 1t.
- Spre 50 µL av blandingen på en LB agar plate inneholder ampicillin (0,1 mg/mL) og ruge LB agar platen på 37 ° C i en inkubator over natten.
- Velge en enkelt koloni fra overnatting LB agar platen bruker et sterilt tips, og virvel tipset i en i en bakteriell kultur rør som inneholder 5 mL av LB medium og ampicillin (0,1 mg/mL). Inkuber røret på 37 ° C i en inkubator med skjelvende over natten.
- Aliquot 3 mL overnatting bakteriell kultur i en 500 mL kolbe som inneholder 250 mL steril LB medium og ampicillin (0,1 mg/mL). Inkuber kolbe på 37 ° C med skjelvende. Sjekk regelmessig optisk tetthet (OD) av bakteriell kultur på bølgelengde 600 nm bruker et spektrometer til OD600 når 0.6-1.0.
Merk: Bland godt 800 µL av natten bakteriell kultur med 200 µL glycerol å forberede glyserol lager og lagre glyserol aksjen under-80 ° C for fremtidig bruk. - Forberede NR1-GFP uttrykk plasmider fra 250 mL bakteriell kultur
- Samle cellene med sentrifugering 6000 x g i 15 min på 4 ° C.
- Resuspend bakterier pellet 10 mL rørets buffer inneholder RNase A; Vortex grundig før ingen klump er sett.
- Legge 10 mL lyseringsbuffer til bakteriell suspensjon, forsiktig Inverter blandingen 4 - 6 ganger og ruge lysate ved romtemperatur (RT) for 5 min.
- Legge 10 mL pre kjølt nedbør buffer i lysate, forsiktig Inverter blandingen 4 - 6 ganger.
- Hell den lysate i tønne et filterelement med cap. Vent i 10 min på RT.
- Fjerne hetten fra kassetten stikkontakt munnstykket, en stempelet inn kassetten og trykk forsiktig stempelet. Samle den filtrerte lysate til en 50 mL tube.
- Legge til 2,5 mL proprietære buffer fra produsent til den filtrerte lysate, bland blandingen ved å snu røret ca 10 ganger og ruge blandingen på is 30 min.
- Bruke filtrerte lysate blandingen et filter kolonne som var pre equilibrated med 10 mL balanse buffer. Tillate kolonnen renne av tyngdekraften.
- Vask kolonnen med 30 mL vaskebuffer to ganger, deretter elute DNA fra kolonnen med 15 mL elueringsbufferen.
- Legge til 10,5 mL (0,7 volumer) isopropanol eluted DNA bufferen, bland godt og sentrifuge blandingen på 20.000 x g i 30 min på 4 ° C.
- Dekanter nedbryting nøye vask DNA pellets med 5 mL endotoxin gratis 70% etanol gang og sentrifuge 20.000 x g i 10 min.
- Dekanter nedbryting, tørr pellet for 5-10 min i en kjemisk hette og oppløse pellet i 300-500 µL endotoxin-fri bufferen.
- Bestemme plasmider konsentrasjonen av måler absorpsjon av løsningen på UV 260/280 nm bruker et spektrofotometer.
Merk: Forberede uttrykk plasmider GFP bruke samme protokoll.
2. hva HEK293 celler med NR1-GFP uttrykk plasmider
- Aliquot 200 µL av 2% gelatin løsning til hver godt av en 48-brønnen plate og ruge platen på 37 ° C i minst 30 min.
- Sug opp gelatin løsningen fra godt, og frø 5 x 104 HEK293 cellene i 200 µL av celle kultur medium med 10% fosterets bovin serum (FBS) i hver brønn. Inkuber platen på 37 ° C i en fuktet inkubator leveres med 5% CO2 over natten.
Merk: Celler ble regnet med en hemocytometer. - På den neste dagen, erstatte brukt kultur medium med 200 µL av fersk kultur medium med 10% FBS per brønn.
- For hver enkelt Vel, forberede løsning A ved å blande 100 ng av NR1-tGFP plasmider med 20 µL kultur medium, og B-løsning ved å blande 0,8 µL transfection reagens med 20 µL kultur medium. Multiplisere antall brønner nødvendig for å forberede det totale volumet for hver eksperimentet.
- Forberede løsning C ved å blande løsning A og B-løsning, og ruge blandingen på RT i 20-30 min.
- Aliquot 40 µL av løsning C hver godt som inneholder de HEK293 cellene, snurr den forsiktig og ruge platen på 37 ° C i en fuktet inkubator leveres med 5% CO2 over natten.
- Når uttrykket NR1-GFP rekombinant protein i verten cellene under fluorescerende mikroskop med 40 X-200 X forstørrelse (eksitasjon/utslipp: 482/502 nm), og Fortsett til cellen-basert immunofluorescence analysen.
Merk: Transfect uttrykk plasmider GFP inn i HEK293 celler ved hjelp av samme protokollen.
3. cellebasert Immunofluorescence analysen
- Sug opp den brukte mediumet fra brønnene, deretter vaske hver brønn med 200 µL av fosfat bufret saltvann (PBS) tre ganger.
- Legge til 200 µL av 4% paraformaldehyde løsning i hver brønn; Inkuber platen på RT i 15 min.
- Sug opp den paraformaldehyde løsningen fra brønnene og vaskes hver godt med 200 µL av PBS tre ganger.
- Legge til 200 µL av 10% skummet melk i PBST (0,1% Tween-20 i PBS) løsning hver vel og ruge platen på RT 1t med mild risting.
- Sug opp 10% skummet melk i PBST løsning fra brønnen, og deretter vaske brønner med 200 µL PBST en gang.
- Inkuber brønnene med fortynnet plasma (1: 100 i PBST) som det primære antistoffet med mild rister på RT 1t.
Merk: Plasma hentes fra blod pasienter mistenkt for å ha autoimmune encefalitt. - Sug opp utvannet plasma fra brønnene og vaskes hver godt med 200 µL av PBST tre ganger.
- Legge til 200 µL av geit anti-menneskelige IgG konjugert med Alexa Fluor 594 (1:1, 000 fortynning i PBST) hver brønn og ruge kultur plate på RT med mild skjelvende 1t.
- Sug opp den geit anti-menneskelige IgG konjugert med Alexa Fluor 594 løsning og vaskes hver godt med 200 µL av PBST tre ganger.
- Legg 100 µL glyserol løsning (50% glyserol i PBS og 1:100,000 av 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)) i hver brønn.
- Observere og image cellene under fluorescerende mikroskop med en 10 X okular, og 4 X 10 X og 20 X mål.
Merk: Bruk riktig filteret for hver farge: for NR1-GFP (eksitasjon/utslipp = 482/502 nm), for Alexa Fluor 594 (eksitasjon/utslipp = 561/594 nm), for DAPI (eksitasjon/utslipp = 358/461 nm). Utføre negative kontrollen med HEK celler uttrykke GFP på samme måte.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I gjennomsnitt kunne vi få 200-300 µg endotoxin-frie uttrykk plasmider NR1-GFP og GFP fra 250 mL bakteriell kultur følge fremgangsmåtene i del 1 av protokollen. Et beløp på 100 ng/godt av uttrykket plasmider ble brukt transfection HEK293 cellene kultivert i 48-og platen som beskrevet i del 2 av protokollen. 24-30 timer etter transfection, cellene uttrykte NR1-GFP, og GFP rekombinante proteinene ble oppdaget under fluorescerende mikroskop. Figur 1A viser bildet vert cellene som uttrykker NR1-GFP, mens figur 1 d viser celler uttrykke GFP. Grønne signalet kan brukes som en kvalitet kontroller av analysen: ca 30% av cellene hadde grønne signalene under fluorescerende mikroskop. Figur 1A og 1 D viser bildet vert cellene som uttrykker NR1-GFP. Grønne signalet kan brukes som en kvalitet kontroller av analysen: ca 30% av cellene hadde grønne signalene under fluorescerende mikroskop. Celler som uttrykker NR1-GFP ble brukt for screening tilstedeværelsen av anti-NMDA reseptor autoantistoffer i humant plasma utvalget.
I celle-baserte immunofluorescence analysen som beskrevet i del 3 av protokollen, positive kontrollere prøven (Hentet fra en kommersiell kilde, se Tabellen for materiale) ble lagt til grupperte plasma i 1:10 fortynning i henhold til den produsentens instruksjoner. Grupperte plasma var forberedt fra 5 voksne hanner og 5 voksne kvinner. Figur 1B er Alexa Fluor-594 bildet av positiv kontroll prøven etter inkubasjon med celler uttrykk NR1-GFP, mens finne 1E er Alexa Fluor-594 bildet av positiv kontroll prøven etter inkubasjon med celler uttrykket GFP. Figur 1 c er det sammenslåtte bildet figur 1A og figur 1B: det er betydelig overlapper grønne signaler og røde signaler i samme celle, den co lokaliseringen av NR1-GFP og antistoffer mot NR1 delenhet i NMDA reseptor (piler). En plasmaprøve som viser mer enn 30% overlapper med grønne og røde signaler tolkes som positive i dette tilfellet. Figur 1F er det sammenslåtte bildet fra figur 1 d og figur 1E som fungerer som kontrollen negative for figur 1 c. Den svake røde fargen er bakgrunnen fluorescens av Alexa Fluor-594 bildet. Det er lite overlapp av grønne og røde signaler, som angir ingen binding av anti-NMDA reseptor autoantibody mot rekombinant protein.
Under etableringen av eksperimentelle prosedyrer observerte vi en lav signal-til-støy-forhold av Alexa Fluor-594 bildet når plasma prøvene testet. Vi prøvde å optimalisere signal-til-støy forholdet ved å gjennomføre en seriell fortynning av plasma skjemaet 1:10, 1:50, 1: 100, og 1:200, og teste ulike konsentrasjoner av Alex Fluor-594 merket sekundære antistoff fra 1:500 til 1:2, 000. Vi fant at 1: 100 fortynning av plasma og 1:1,000 eller 1:2,000 fortynning av Alexa Fluor-594 var optimale forhold for tolkning av dataene.
Figur 1: representant bilder av cellen-basert immunofluorescence analysen å oppdage anti-NMDA reseptor autoantibody. (A) bilde av HEK293 celler som uttrykker NR1-GFP. (B) The Alexa Fluor-594 bilde tatt fra feltet a etter inkubasjon med positiv kontroll prøven. Røde signalet indikerer binding av anti-NMDA reseptor autoantistoffer til NR1 uttrykt i HEK293 celler. (C) det sammenslåtte bildet av A og B. Gul farge angir den co lokaliseringen av NR1 (grønt signal) og anti-NMDA reseptor autoantistoffer (rød signal). Pilene angir eksempler på noen fremtredende celler viser co lokalisering av NR1-GFP og anti-NMDA reseptor autoantistoffer. (D) bilde av HEK293 celler uttrykke NR1-GFP. (E) The Alexa Fluor-594 bilde tatt fra feltet d etter inkubasjon med positiv kontroll prøven. Svake røde signalet angir bakgrunnsstøy fra Alexa Fluor-594 bilde. (F) det sammenslåtte bildet av D og E. Dette bildet tjener som en negativ kontroll, som liten gul signal observert. Negativ kontroll bildet viser bestemte binding av anti-NMDA reseptor antistoffer mot NR1-GFP i analysen. Alle bildene ble tatt under 10 X eye linse og 20 X linse mål. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det er flere cellebasert immunologiske analyser til skjermen tilstedeværelse av autoantistoffer mot NMDA reseptor rapportert i litteraturen, inkludert live cellebasert immunofluorescence analysen11, fast cellebasert immunofluorescence analysen9 , og flyt cytometri-baserte analysen14. Live cellebasert immunofluorescence analysen bør utføres etter utarbeidelse av celler ectopically uttrykke NR1 protein, mens flyt cytometri-baserte analysen krever opplært personale og spesialutstyr. En fast cellebasert immunofluorescence analysen er en enklere analyse som kan utføres for klinisk innstillinger. Derfor brukt mange studier kommersielle indirekte fast cellebasert immunofluorescence analysen til skjermen anti-NMDA reseptor autoantibody i serum og CSF prøver12,15. Den kit brukte (se tabellen materialer) inneholder fast HEK293 cellene som ectopically uttrykker den rekombinante NR1 delenhet i NMDA reseptor. Analysen er evaluert har utmerket ytelse oppdage anti-NMDA reseptor IgG antistoffer i serum og CSF prøver12. I vår protokollen brukte vi samme fremgangsmåte som anbefalt av utstyr produsenten, bortsett fra at vi bruker NR1-GFP uttrykk plasmider. NR1-GFP protein kan brukes til å overvåke hva effektivitet og distribusjon av NR1 protein i hvert eksperiment. Derfor kan det brukes som en kvalitetssikring av analysen.
Hva effektiviteten av NR1-GFP uttrykk plasmider inn i HEK293 celler er ca 30% i protokollen presenteres her, som er tilstrekkelig for immunofluorescence analysen. Men fant vi at intensiteten av den grønne fluorescensen ikke blir jevnt fordelt mellom de transfekterte cellene, tyder forskjeller i effektiviteten av transfection eller uttrykk enkeltceller. De varierende uttrykk nivåene av rekombinant NR1-GFP i forskjellige celler forårsake heterogene intensitet når grønne bildet ble slått sammen med det røde bildet av Alexa Fluor 594. Geit anti-menneskelige IgG konjugert med Alexa Fluor 594 ble brukt som sekundær antistoffer for å oppdage tilstedeværelsen av menneskelig autoantibody IgG klasse. Vi fant at lysstyrken på Alexa Fluor 594 er relativt svakere enn grønne fluorescerende protein. Vi prøvde å optimalisere signal intensiteten av øker konsentrasjonen av den anti-menneskelige IgG konjugert med Alex Fluor 594, men bakgrunnen økt også. Derfor er optimal konsentrasjon for det anti-humant IgG konjugert med Alex Fluor 594 1:1,000 i dette laboratoriet. Også, noen plasmaprøver hadde en betydelig høy bakgrunn signal i Alexa Fluor 594 bildet. Forskjellige fortynninger av plasma ble testet, og det ble funnet at en minimal fortynning av 1: 100 er nødvendig for å oppnå bakgrunnen for det meste av prøvene. Derfor anbefaler vi 1: 100 fortynning av plasma som standard trinn i denne protokollen. Sammenlignet med de andre cellen-basert analyser som kan oppdage serum prøven i 1:10 og 1:20 fortynning av blodet eksempel11,16, har denne gjeldende protokollen ikke nok følsomheten å oppdage lav titer anti-NMDA reseptor autoantistoffer, som er en begrensning av protokollen.
Gjeldende protokollen er en fast cellebasert immunofluorescence analysen. Kultur plate kan lagres i 4 ° C kjøleskap etter fiksering for senere bruk i opptil 1 måned, i forhold til levende cellebasert analysen som ikke kan lagres lenge. Men NR1 protein vil denaturert og mister sin naturlige konformasjon under fiksering prosedyren, som kan påvirke konformasjon av epitope som binder til anti-NMDA reseptor autoantistoffer. Derfor, noen studier vedtatt live cellebasert immunofluorescene11,17. Våre protokollen kan også endres for å bli en levende celle-baserte immunofluorescence analysen å bevare den naturlige konformasjon av NR1 protein, hvis vi ruge plasmaprøve med levende celler først, og fikse cellene senere. Dermed er det fleksibilitet i protokollen for å møte behovet av eksperimentet.
NMDA reseptor er et heterotetramer kompleks protein bestående av NR1, NR2A, NR2B, NR2C og NR2D. Gjeldende protokollen ble utviklet for å oppdage IgG klasse autoantibody mot NR1 delenhet i NMDA reseptor. Protokollen kan også endres for å oppdage ulike isotypes av autoantistoffer, som anti-IgG sekundære antistoffer er erstattet av den andre spesifikke klassen av sekundær antistoffer. Videre kan gjeldende protokollen endres for å oppdage tilstedeværelsen av autoantistoffer mot NR2A, NR2B, NR2C og NR2D, hvis NR1-GFP uttrykk plasmider er erstattet med den tilsvarende uttrykk plasmider, henholdsvis.
I denne protokollen brukte vi en plasma prøve i stedet for serum, fordi vi rutinemessig samler blodprøve med anti-koagulere for ulike øyemed, men protokollen kan bruke serum- eller CSF prøver. Titer av autoantistoffer i plasma kan kvantifiseres av føljetong fortynning av prøven. I laboratoriet testet vi også afrikanske grønn ape nyre fibroblast-lignende celle linje (COS1) som vert cellene bruke samme protokoll. Resultatene er de samme som bruker HEK293 cellene, bortsett fra at COS1 cellene har en noe lavere transfection effektivitet enn HEK293 cellene.
For å fastslå tilstedeværelsen av anti-NMDA reseptor autoantistoffer, er det foreslått at flere eksperimenter som immunohistochemistry analysen bruker gnager hjernen vev og immunocytochemistry bruke primære kulturperler gnager nerveceller være utført5 ,9. Derfor kan nåværende protokollen bare anses som en screening analysen. Selv om Gyldighetstiden eksperimentelle ble bekreftet med positiv kontroll prøven i denne studien, følsomhet og spesifisitet av denne analysen i klinisk innstillinger må etableres i fremtiden studere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av Chang Gung medisinsk Foundation (bevilgning nummer CMRPG3C1771, CMRPG3C1772, CMRPG3E0631, CMRPG3E0632 og CMRPG3E0633).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| GRIN1 (GFP-tagged) - Human glutamate receptor, ionotropic, N-methyl D-aspartate 1 (GRIN1), transcript variant NR1-1 | Origene (Rockville, MD, USA) | RG219368 | NR1-cDNA clone tagged with C-terminal tGFP sequences |
| pCMV6-AC-GFP | Origene (Rockville, MD, USA) | PS100010 | mammalian vector with C-terminal tGFP tag |
| EndoFree Plasmid Maxi Kit | Qiagen (Hilden Germany) | 12362 | |
| Lipofectamine 2000 Transfection Reagent | Invitrogen (Carlsbad, CA, USA) | 11668-019 | |
| Opti-MEM I Reduced Serum Medium | Thermo Fisher | 31985-070 | |
| DMEM, High Glucose, Pyruvate | Thermo Fisher | 11995-065 | |
| Characterized Fetal Bovine Serum, US Origin | GE Healthcare Life Sciences | SH30071.01 | |
| Goat anti-Human IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 594 conjugate | Thermo Fisher | A-11014 | |
| Positive control: anti-glutamate receptor (type NMDA) | Euroimmun AG, Lübeck, Germany | CA 112d-0101 | |
| Euroimmun Assay Kit |
References
- Linnoila, J. J., Rosenfeld, M. R., Dalmau, J. Neuronal surface antibody-mediated autoimmune encephalitis. Semin Neurol. 34 (4), 458-466 (2014).
- Lancaster, E. The diagnosis and treatment of autoimmune Encephalitis. J Clin Neurol. 12 (1), 1-13 (2016).
- Pruss, H., et al. Retrospective analysis of NMDA receptor antibodies in encephalitis of unknown origin. Neurology. 75 (19), 1735-1739 (2010).
- Leypoldt, F., Armangue, T., Dalmau, J.
- Dalmau, J., et al. Anti-NMDA-receptor encephalitis: case series and analysis of the effects of antibodies. Lancet Neurol. 7 (12), 1091-1098 (2008).
- Titulaer, M. J., et al. Treatment and prognostic factors for long-term outcome in patients with anti-NMDA receptor encephalitis: an observational cohort study. Lancet Neurol. 12 (2), 157-165 (2013).
- Chapman, M. R., Vause, H. E. Anti-NMDA receptor encephalitis: diagnosis, psychiatric presentation, and treatment. Am J Psychiatry. 168 (3), 245-251 (2011).
- Gable, M., Glaser, C. Anti-n-methyl-d-aspartate receptor encephalitis appearing as a new-onset psychosis: disease course in children and adolescents within the california encephalitis project. Pediatr Neurol. 72, 25-30 (2017).
- Dalmau, J., Lancaster, E., Martinez-Hernandez, E., Rosenfeld, M. R., Balice-Gordon, R. Clinical experience and laboratory investigations in patients with anti-NMDAR encephalitis. Lancet Neurol. 10 (1), 63-74 (2011).
- Dalmau, J., et al. Paraneoplastic anti-N-methyl-D-aspartate receptor encephalitis associated with ovarian teratoma. Ann Neurol. 61 (1), 25-36 (2007).
- Irani, S. R., et al. N-methyl-D-aspartate antibody encephalitis: temporal progression of clinical and paraclinical observations in a predominantly non-paraneoplastic disorder of both sexes. Brain. 133 (Pt 6), 1655-1667 (2010).
- Suh-Lailam, B. B., Haven, T. R., Copple, S. S., Knapp, D., Jaskowski, T. D., Tebo, A. E. Anti-NMDA-receptor antibody encephalitis: performance evaluation and laboratory experience with the anti-NMDA-receptor IgG assay. Clin Chim Acta. 421, 1-6 (2013).
- Mayer, M. L. Structural biology of glutamate receptor ion channel complexes. Curr Opin Struct Biol. 41, 119-127 (2016).
- Ramberger, M., et al. Comparison of diagnostic accuracy of microscopy and flow cytometry in evaluating n-methyl-d-aspartate receptor antibodies in serum using a live cell-based assay. PLoS One. 10 (3), e0122037 (2015).
- Wandinger, K. P., Saschenbrecker, S., Stoecker, W., Dalmau, J. Anti-NMDA-receptor encephalitis: a severe, multistage, treatable disorder presenting with psychosis. J Neuroimmunol. 231 (1-2), 86-91 (2011).
- Dahm, L., et al. Seroprevalence of autoantibodies against brain antigens in health and disease. Ann Neurol. 76 (1), 82-94 (2014).
- Jézéquel, J., et al. Cell- and single molecule-based methods to detect anti-n-methyl-d-aspartate receptor autoantibodies in patients with first-episode psychosis from the OPTiMiSE project. Biol Psychiatry. , (2017).
