Summary
यहां हम ektacytometry द्वारा लाल कोशिका विकृति और सेलुलर विविधता को मापने के लिए तकनीक पेश करते हैं । इन तकनीकों में लाल कोशिका विकृति और रक्त परिसंचरण में दोनों कठोर और विकृत लाल कोशिकाओं की उपस्थिति के द्वारा विशेषता की विशिष्ट जांच के सामान्य जांच करने के लिए लागू कर रहे हैं, ऐसे सिकल सेल एनीमिया के रूप में ।
Abstract
कम लाल कोशिका विकृति कई विकारों की विशेषता है । कुछ मामलों में, दोषपूर्ण विकृति की हद तक रोग या गंभीर जटिलताओं की घटना की गंभीरता की भविष्यवाणी कर सकते हैं । Ektacytometry लेजर विवर्तन viscometry का उपयोग करता है लाल रक्त कोशिकाओं की विकृति को मापने के लिए या तो बढ़ती कतरनी तनाव या लागू कतरनी तनाव के एक निरंतर मूल्य पर एक परासरणी ढाल के अधीन । हालांकि, प्रत्यक्ष विकृति माप heterogenous रक्त है कि दोनों कठोर और विकृत लाल कोशिकाओं की उपस्थिति की विशेषता है को मापने जब व्याख्या करने के लिए मुश्किल हैं । यह कठोर कोशिकाओं की अक्षमता के कारण ठीक से कतरनी तनाव और एक विकृत विवर्तन स्पष्ट विकृति में एक अतिरंजित कमी द्वारा चिह्नित पैटर्न में परिणाम के जवाब में संरेखित करने के लिए है । विकृति की डिग्री की माप रक्त में एरिथ्रोसाइट्स के विविधता का एक संकेतक प्रदान करता है । सिकल सेल एनीमिया में, यह कठोर कोशिकाओं के प्रतिशत के साथ संबंधित है, जो एरिथ्रोसाइट्स की हीमोग्लोबिन एकाग्रता और हीमोग्लोबिन संरचना को दर्शाता है. विकृति को मापने के अलावा, परासरणी ढाल ektacytometry परासरणी कमजोरी और एरिथ्रोसाइट्स के जलयोजन स्थिति के बारे में जानकारी प्रदान करता है । ये पैरामीटर सिकल सेल रोगियों से लाल रक्त कोशिकाओं की हीमोग्लोबिन रचना को भी दर्शाते हैं । Ektacytometry उपाय लाल कोशिकाओं की आबादी में विकृति और नहीं है, इसलिए, विकृति या व्यक्तिगत एरिथ्रोसाइट्स के यांत्रिक गुणों के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं । बावजूद, यहां वर्णित तकनीकों का लक्ष्य रक्त की विकृति और सेलुलर विविधता को मापने के लिए एक सुविधाजनक और विश्वसनीय तरीका प्रदान करना है । इन तकनीकों लौकिक परिवर्तन की निगरानी के लिए उपयोगी हो सकता है, साथ ही रोग प्रगति और कई विकारों में चिकित्सीय हस्तक्षेप के जवाब । सिकल सेल एनीमिया एक अच्छी तरह से विशेषता उदाहरण है । अंय संभावित विकारों जहां लाल कोशिका विकृति और/या विविधता की माप ब्याज की है शामिल रक्त भंडारण, मधुमेह, प्लाज्मोडियम संक्रमण, आयरन की कमी, और रक्तलायी झिल्ली दोषों के कारण एनीमिया ।
Introduction
Ektacytometry कतरनी तनाव में परिवर्तन के जवाब में लाल कोशिका विकृति का एक सुविधाजनक उपाय प्रदान करता है (पास्कल (फिलीस्तीनी अथॉरिटी) में मापा) या मध्यम परासरणीयता सस्पैंड । लाल कोशिका विकृति के उचित मापदंडों अधिकतम बढ़ाव सूचकांक (ेि मैक्स), कतरनी तनाव को बढ़ाने के लिए प्रतिक्रिया में एक लाल कोशिका की अधिकतम विकृति का एक उपाय शामिल हैं, और कतरनी तनाव ½ (एसएस ½), कतरनी तनाव आधा अधिक से अधिक प्राप्त करने के लिए आवश्यक विकृति । 1 परासरणी ग्रैडिएंट ektacytometry में कई जानकारीपूर्ण पैरामीटर हैं । ये बढ़ाव सूचकांक न्यूनतम (ेि मिनट), सतह से माप अनुपात और परासरणीयता जिस पर यह (हे मिनट) होता है, जो परासरणी कमजोरी का एक उपाय है का एक उपाय शामिल हैं । ेि मैक्स और परासरणीयता जिस पर यह होता है (ओ (ेि मैक्स)) झिल्ली लचीलापन और कोशिका सतह क्षेत्र के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं । परासरणी ढाल के hypertonic हाथ में आधा अधिक से अधिक बढ़ाव ेि हाइपर द्वारा प्रतिनिधित्व किया है । ेि हाइपर और परासरणीयता जिस पर यह होता है, हे हाइपर, लाल कोशिका के intracellular चिपचिपाहट के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं जो हीमोग्लोबिन एकाग्रता से निर्धारित होता है. 2 , 3 heterogenous रक्त में विकृति को मापने तथ्य यह है कि इस तरह के सिकली लाल रक्त कोशिकाओं के रूप में कठोर कोशिकाओं, ठीक तरह से कतरनी तनाव बढ़ाने के लिए प्रतिक्रिया में विकृत कोशिकाओं के रूप में प्रवाह की दिशा के साथ संरेखित नहीं है द्वारा जटिल है । बल्कि एक विशेषता अंडाकार विवर्तन छवि का निर्माण, कठोर कोशिकाओं एक गोलाकार पैटर्न जो एक हीरे के आकार का विवर्तन पैटर्न में परिणाम जब विकृति कोशिकाओं द्वारा उत्पादित दीर्घवृत्त पर मढ़ा उत्पादन । 4 , 5 , 6 गोलाकार पैटर्न घनत्व केंद्रापसारक निंनलिखित कोशिकाओं के पृथक भागों पर ektacytometry प्रदर्शन से अचल सिकल्ड कोशिकाओं के अनुरूप दिखाया गया है । 6 बढ़ाव अनुक्रमणिका परिकलन में दीर्घवृत्त के दीर्घ और लघु अक्ष दोनों के उपाय शामिल हैं; एक हीरे की आकृति इसलिए कम धुरी की चौड़ाई में वृद्धि से बढ़ाव में एक स्पष्ट कमी पैदा करता है । 7 यह पहले से दिखाया गया है कि विवर्तन पैटर्न विकृति की डिग्री दोनों सिकल हीमोग्लोबिन का प्रतिशत (एचबीएस) और सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से रक्त में सिकलेड कोशिकाओं के प्रतिशत के साथ संबंधित है । 5 विवर्तन पैटर्न विरूपण की डिग्री जटिल गणितीय विश्लेषण द्वारा प्राप्त किया जा सकता है । 8 यह भी ektacytometer या फिटिंग सॉफ्टवेयर के ग्रे स्तर विवर्तन पैटर्न ऊंचाई को बदलने पर कैमरा एपर्चर के उद्घाटन का समायोजन करके प्राप्त किया जा सकता है । 5 तथापि, कैसे भूरे रंग के स्तर को समायोजित करने के बारे में जानकारी अच्छी तरह से परिभाषित नहीं कर रहे है और कैमरा एपर्चर व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ektacytometer की नवीनतम पीढ़ी पर आसानी से सुलभ नहीं है । इन मुद्दों को दरकिनार, आसानी से सुलभ कैमरा लाभ विवर्तन पैटर्न ऊंचाइयों को समायोजित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । 9 सेलुलर विविधता का अनुमान लगाने के लिए इस विधि का उपयोग करना, विवर्तन पैटर्न विकृति की डिग्री सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों के रक्त में भ्रूण हीमोग्लोबिन के प्रतिशत के साथ संबद्ध किया जा सकता है । 10 कई परासरणी ढाल ektacytometry मानकों इसी तरह सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से रक्त में भ्रूण या सिकल हीमोग्लोबिन के प्रतिशत के साथ संबंधित हैं । विवर्तन पैटर्न विरूपण सहसंबंध की संभावना कठोर, गैर विकृत कोशिकाओं के प्रतिशत के लिए हीमोग्लोबिन संरचना के योगदान को प्रतिबिंबित । अतिरिक्त ब्याज की, पूरे परासरणी ढाल ektacytometry प्रोफ़ाइल परिवर्तन है कि सिकल सेल संकट के दौरान संचलन में घने कोशिकाओं के प्रतिशत के अनुरूप biphasic । 11
Ektacytometry इसी तरह कई अंय विकारों के अध्ययन में उपयोगी है । परासरणी ग्रैडिएंट ektacytometry वंशानुगत spherocytosis, वंशानुगत elliptocytosis और वंशानुगत pyropoikilocytosis के रूप में इनहेरिट की गई लाल कोशिका झिल्ली विकारों, के लिए नैदानिक है । 3 , 12 , 13 , १४ घटी हुई विकृति लोहे की कमी में होती है. 15 रक्त के "भंडारण घाव" के लक्षण वर्णन ektacytometry और भविष्य घाव और हस्तक्षेप की दोनों प्रकृति की जांच के अध्ययन कार्यरत है बैंक रक्त के भंडारण के दौरान इसके गठन को रोकने के लिए से लाभ होने की संभावना है यहां प्रस्तुत तकनीक । 16 कम लाल कोशिका विकृति भी मधुमेह में microvascular रोग के साथ संबंधित किया गया है । 17 हाल ही में hyperglycemia जोड़ने के अध्ययन, लाल कोशिका ascorbate सांद्रता और परासरणी कमजोरी सुझाव है कि इन कारकों microvascular रोग के विकास में महत्वपूर्ण हो सकता है । इस परिकल्पना (Parrow और Levine, अप्रकाशित डाटा) की जांच के लिए 18 Ektacytometry अध्ययन अभी चल रहे हैं । रक्त चरण मलेरिया संक्रमण लाल कोशिका विकृति जांच का एक और दिलचस्प एवेंयू है । सेलुलर प्लाज्मोडियम फाल्सीपेरम संक्रमित लाल रक्त कोशिकाओं की विकृति नाटकीय रूप से schizont चरण के लिए अंगूठी चरण से परजीवी की intracellular परिपक्वता के ४८ घंटे के दौरान घट जाती है । सबूत यह कम विकृति परजीवी की परिपक्वता पर उलट है कि इंगित करता है । उलटा संचलन में संक्रमित लाल कोशिकाओं की रिहाई के साथ मेल खाता है । कमी विकृति के लिए प्लाज्मोडियम प्रोटीन है कि लाल सेल के ज़ब्ती को बढ़ावा देने के द्वारा मध्यस्थता माना जाता है । 19 ये अध्ययन नैदानिक रूप से महत्वपूर्ण स्थितियों के एक छोटे नमूने का प्रतिनिधित्व करते हैं, जहां एरिथ्रोसाइट विकृति और परासरणी ग्रैडिएंट पैरामीटर्स को मापने के लिए प्रासंगिक हैं । अध्ययन के कई अतिरिक्त क्षेत्र मौजूद हैं ।
लाल कोशिका विकृति को मापने के लिए वैकल्पिक तकनीकों ऑप्टिकल चिमटी (भी लेजर जाल के रूप में जाना जाता है) जो फोटॉनों के भौतिक गुणों का उपयोग एक या एक से अधिक दिशाओं में एकल लाल कोशिकाओं खिंचाव शामिल हैं । 20 इस तकनीक एकल एरिथ्रोसाइट्स की विकृति को मापने का लाभ है, लेकिन कुछ अनिश्चितता बल अंशांकन में काफी परिवर्तनशीलता का उत्पादन किया गया है 21 अध्ययन और डेटा विश्लेषण परिश्रम हो सकता है जब तक स्वचालित. 22 Micropipette आकांक्षा, जो एक Micropipette में एक एरिथ्रोसाइट महाप्राण करने के लिए नकारात्मक दबाव का उपयोग करता है, भी लाल कोशिकाओं की विकृति को मापने के लिए इस्तेमाल किया गया है । 7 , लाल कोशिका महाप्राण करने के लिए आवश्यक दबाव के रूप में 23 एकाधिक माप, लाल कोशिका के विभिन्न विशेषताओं को परिभाषित प्रत्येक उपाय के साथ संभव है. 23 परमाणु सेना माइक्रोस्कोपी एक उच्च संकल्प तकनीक है कि एक लाल कोशिका की सतह के साथ ब्रैकट विक्षेपन के एक संकेतक के रूप में लेजर बीम विक्षेपन को बढ़ाता द्वारा झिल्ली कठोरता उपाय है । 24 इन तकनीकों व्यक्तिगत एरिथ्रोसाइट्स के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं, आसानी से लाल रक्त कोशिकाओं की आबादी में परिवर्तन को मापने के लिए अनुकूलित नहीं कर रहे हैं, और, सामांय में, काफी तकनीकी विशेषज्ञता की आवश्यकता है ।
दोनों व्यक्तिगत और कोशिकाओं की आबादी के नमूने की इच्छा एक साथ स्वचालन में प्रगति और microfluidics और सरणी आधारित तरीकों के विकास के लिए नेतृत्व किया गया है. ektacytometry की तरह, rheoscopy कतरनी तनाव के एक समारोह के रूप में विकृति लेकिन छवियों सीधे माइक्रोस्कोप के माध्यम से प्राप्त कर रहे हैं । 25 के लिए उच्च के माध्यम से डाल विश्लेषण, स्वचालित सेल इमेजिंग rheoscope का उपयोग कर विकृति वितरण का उत्पादन करने के लिए नियोजित किया गया है । 26 सेलुलर विविधता इस विधि से मात्रा जा सकता है अगर एक स्वस्थ नियंत्रण विषय से डेटा उपलब्ध हैं । 27 Microfluidics तकनीक भी उच्च के माध्यम से एकल कोशिकाओं के विश्लेषण डाल के लिए अनुमति देते हैं; एकाधिक निस्पंदन के रूपांतरों का उपयोग डिजाइन,28 सेल पारगमन विश्लेषक,29 जो एक micropore के माध्यम से एक एरिथ्रोसाइट प्रवाह के लिए आवश्यक समय उपाय, और विकल्प है कि एरिथ्रोसाइट पारगमन के लिए आवश्यक दबाव को मापने के बजाय समय से 30 का विकास किया गया है । व्यक्तिगत कोशिकाओं के उच्च के माध्यम से डाल विश्लेषण के लिए एक और मंच एकल कोशिका microchamber सरणी चिप है, जो अनुप्रवाह प्रतिदीप्ति के लिए अनुमति के अतिरिक्त लाभ-कोशिकाओं के लक्षण वर्णन आधारित है । 31 हालांकि इन तकनीकों में से प्रत्येक संभावित उपयोगी है और विशेष अनुप्रयोगों के लिए बेहतर हो सकता है, ektacytometry के तुलनात्मक लाभ संवेदनशीलता, उपयोग में आसानी, और परिशुद्धता भी शामिल है । ३२ व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ektacytometers की नवीनतम पीढ़ी भी परख की संख्या में काफी बहुमुखी प्रतिभा के अधिकारी है कि प्रदर्शन किया जा सकता है ।
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Protocol
इस अध्ययन में सभी विषयों हेलसिंकी की घोषणा और स्वास्थ्य संस्थागत समीक्षा बोर्ड के राष्ट्रीय संस्थानों को अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार लिखित सूचित सहमति दे दी.
1. ektacytometer पर टर्निंग
- कम और उच्च osmolar polyvinylpyrrolidone (PVP) समाधान के लिए सफाई समाधान से टयूबिंग कनेक्ट । सावधान रहो 0 osmolar ट्यूब कम osmolar समाधान करने के लिए और उच्च osmolar समाधान करने के लिए ५०० osmolar ट्यूब कनेक्ट करने के लिए ।
नोट: कम osmolar PVP समाधान ३५ और ५५ milliosmoles प्रति किलोग्राम के बीच एक परासरणीयता होना चाहिए (mOsm/kg), 7.25-7.45 पर 25 डिग्री सेल्सियस और २७.० और ३३.० centipoise (सीपी) के बीच एक चिपचिपापन ३७.० ± ०.५ डिग्री सेल्सियस पर एक पीएच । उच्च osmolar PVP समाधान ७६४ और ८०४ mOsm/kg के बीच एक परासरणीयता होना चाहिए, 7.25-7.45 पर 25 ° c और 27.0-33.0 cP का चिपचिपापन मापने पर ३७.० ° ०.५ ° c में एक पीएच । - सुनिश्चित करें कि बॉब कप में पूरी तरह से कम है । प्रक्षेपण सॉफ्टवेयर और प्रधानमंत्री मशीन (हार्डवेयर की जांच करें । साधन आयो) । साधन को भड़काने चक्र को पूरा करने की अनुमति दें । एक बार चक्र पूरा हो गया है, बॉब कप से बाहर उठा और पूरी तरह से बॉब और एक कम एक प्रकार का वृक्ष सफाई ऊतक के साथ कप सूखी ।
नोट: अवशिष्ट जल लाल कोशिकाओं लाइसे होगा, व्यवधान का निर्माण ।
2. कतरनी तनाव बढ़ाने के एक समारोह के रूप में विकृति को मापने
- रक्त प्राप्त (से कम 1 मिलीलीटर प्रतिकृति के साथ इन तकनीकों प्रदर्शन करने के लिए पर्याप्त है) एक उपयुक्त थक्कारोधी युक्त शीशी में ।
नोट: EDTA हेपरिन पर पसंद किया जाता है क्योंकि यह hemorheological मानकों पर कम प्रभाव पड़ता है । ३३ रक्त ड्रा के 6 घंटे के भीतर माप प्रदर्शन कर रहे हैं, तो कमरे के तापमान पर रक्त रखें । - धीरे से शीशी कई बार पलटने से परीक्षण से पहले पूरे रक्त का नमूना मिश्रण । pipetting द्वारा आईएसओ osmolar PVP समाधान के 5 मिलीलीटर के लिए पूरे रक्त की 25 µ एल जोड़ें, शीशी कैप और धीरे से कई बार पलटने से मिश्रण । आईएसओ-osmolar PVP समाधान २८४ और ३०४ mOsm/किग्रा के बीच एक परासरणीयता होना चाहिए, एक पीएच 7.3-7.4 में 25 ° c और 27.0-33.0 cP का चिपचिपापन ३७.० ± ०.५ डिग्री सेल्सियस पर ।
- सॉफ्टवेयर पर मुख्य मेनू से विकृति का चयन करें । एक नया विश्लेषण बनाएं और प्रयोगात्मक विवरण जोड़ें (विकृति । वांछित विवरण जोड़ें । ठीकहै) ।
- ektacytometer के लिए ढक्कन लिफ्ट, सत्यापित करें कि बॉब कप में पूरी तरह से कम है और कप बदल रहा है ।
- pipetting द्वारा कप और बॉब के बीच अंतरिक्ष में PVP रक्त समाधान के 1 मिलीलीटर जोड़ें ।
- नीचे नमूने लाने के लिए थोड़ा बॉब उठाएं । रुको जब तक सभी बुलबुले समाधान के बाहर ले जाया गया है, तो ektacytometer को ढक्कन बंद । यदि आवश्यक हो, बुलबुले को दूर करने में मदद करने के लिए आकांक्षा बटन दबाएँ.
- सॉफ्टवेयर पर स्क्रॉल पट्टी के साथ तीर ले जाकर २०० को लाभ समायोजित करें (नोट देखें) । जब तापमान ३७ डिग्री सेल्सियस पर स्थिर है और विवर्तन छवि स्थिर है, प्रेस शुरू (प्रारंभ) ।
नोट: कई अध्ययनों के लिए, एक अच्छी विवर्तन छवि स्वस्थ रक्त से प्राप्त किया जा सकता है (हीमोग्लोबिन एकाग्रता > १२.० g/dl, मतलब कणिका की मात्रा 80-96 fL और 33-36 ग्राम/डीएल के कणिका हीमोग्लोबिन सांद्रता मतलब कैमरा लाभ २०० करने के लिए सेट के साथ) । सिकल सेल एनीमिया से रक्त के अध्ययन के लिए, कैमरा लाभ एक ४.५ सेमी विवर्तन छवि उत्पंन करने के लिए समायोजित करने के लिए अध्ययन और प्रयोगशालाओं में परिणामों की तुलना की अनुमति डिफ़ॉल्ट सेटिंग के रूप में सुझाव दिया गया है । 9 - अवलोकन विवर्तन पैटर्न के रूप में डेटा अधिग्रहण की प्रगति के लिए सुनिश्चित करें कि वे परिपत्र, अंडाकार या हीरे के आकार का रह । जब डेटा प्राप्ति पूर्ण हो जाए, तो रिपोर्ट को सहेजें या मुद्रित करें (फ़ाइल | सहेजें या फ़ाइल । प्रिंट). ेि मैक्स और एसएस ½ मूल्यों स्वचालित रूप से सूचित किया जाएगा, बढ़ाव सूचकांक के साथ उपयोगकर्ता के लिए इसी के साथ-निर्दिष्ट या डिफ़ॉल्ट कतरनी तनाव । डेटा भी सॉफ्टवेयर के द्वारा स्वचालित रूप से सहेजा जाएगा ।
- अंत में, कंप्यूटर मॉनीटर (क्लीन) पर संवाद बॉक्स पर क्लीन विकल्प दबाएं । नमूने के बाद aspirated है, अंतरिक्ष में पानी की फुहार के द्वारा कप और बॉब के बीच अंतरिक्ष कुल्ला जबकि साधन स्वच्छ चक्र में रहता है । एक बार स्वच्छ चक्र पूरा हो गया है, बॉब कप से बाहर उठा और पूरी तरह से बॉब और कप एक कम एक प्रकार का वृक्ष के साथ सफाई ऊतक सूखी (महत्वपूर्ण: अवशिष्ट जल लाल कोशिकाओं लाइसे होगा, हस्तक्षेप उत्पादन) ।
- मुख्य पृष्ठ पर लौटने के लिए सॉफ्टवेयर पर मुख्य मेनू बटन पर क्लिक करें (मुख्य मेनू) ।
3. सेलुलर विविधता को मापने
- धीरे से शीशी कई बार पलटने से परीक्षण से पहले पूरे रक्त का नमूना मिश्रण । प्लास्टिक 25 µ एल पूरे रक्त की एक नई 5 मिलीलीटर की शीशी आईएसओ-osmolar PVP समाधान के लिए, शीशी कैप और मिश्रण धीरे से पलटने से मिश्रण जब तक समरूप है ।
- मुख्य मेनू से विकृति का चयन करें । एक नया विश्लेषण बनाएं और प्रयोगात्मक विवरण जोड़ें (विकृति । वांछित विवरण जोड़ें । ठीकहै) ।
- ektacytometer के लिए ढक्कन लिफ्ट, सत्यापित करें कि बॉब कप में पूरी तरह से कम है और कप बदल रहा है ।
- प्लास्टिक कप और बॉब के बीच अंतरिक्ष में PVP रक्त समाधान के 1 मिलीलीटर ।
- रुको जब तक सभी बुलबुले समाधान के बाहर ले जाया गया है, तो ektacytometer को ढक्कन बंद ।
- सुनिश्चित करें कि एक स्थिर विवर्तन छवि स्क्रीन पर मौजूद है । यह एक ३.८ सेमी विवर्तन ऊंचाई का उत्पादन जब तक सॉफ्टवेयर पर स्क्रॉल पट्टी के साथ तीर ले जाकर कैमरे के लाभ को समायोजित करें । कंप्यूटर स्क्रीन पर छवि की ऊंचाई सत्यापित करने के लिए किसी मापनी का उपयोग करें ।
- जब तापमान ३७ डिग्री सेल्सियस पर स्थिर है और विवर्तन छवि स्थिर है, प्रेस शुरू (प्रारंभ) ।
- अवलोकन विवर्तन पैटर्न के रूप में डेटा अधिग्रहण की प्रगति के लिए सुनिश्चित करें कि वे परिपत्र, अंडाकार या हीरे के आकार का रहेगा । जब डेटा प्राप्ति पूर्ण हो जाए, तो रिपोर्ट को सहेजें या मुद्रित करें (फ़ाइल | सहेजें या फ़ाइल । प्रिंट).
- अंत में, कंप्यूटर मॉनीटर (क्लीन) पर संवाद बॉक्स पर क्लीन विकल्प दबाएँ. नमूना aspirated है के बाद, यह साधन स्वच्छ चक्र में रहता है, जबकि यह में एक धार बोतल से पानी की फुहार से जल फुहार द्वारा कप और बॉब के बीच अंतरिक्ष कुल्ला । एक बार स्वच्छ चक्र पूरा हो गया है, बॉब कप से बाहर उठा और पूरी तरह से बॉब और कप एक कम एक प्रकार का वृक्ष के साथ सफाई ऊतक सूखी (महत्वपूर्ण: अवशिष्ट जल लाल कोशिकाओं लाइसे होगा, हस्तक्षेप उत्पादन) ।
- दोहराएँ चरणों 2.1-2.5 और कैमरा लाभ समायोजित करने के लिए एक ४.५ सेमी विवर्तन पैटर्न ऊंचाई (चरण २.२) प्राप्त करने के लिए.
- दोहराएँ चरणों 2.1-2.5 और कैमरा लाभ समायोजित करने के लिए एक ५.४ सेमी विवर्तन पैटर्न ऊंचाई (चरण २.२) प्राप्त करने के लिए.
- अंत में, मुख्य मेनू बटन पर क्लिक करें सॉफ्टवेयर (मुख्य मेनू) के मुख्य पृष्ठ पर लौटने के लिए ।
- एक प्रतिशत के रूप में ेि मैक्स के आधार पर विवर्तन पैटर्न विरूपण की डिग्री का निर्धारण करने के लिए, निम्न समीकरण का उपयोग करें (एक ही समीकरण वांछित अगर ४.५ सेमी विवर्तन पैटर्न ऊंचाई से डेटा के साथ किया जा सकता है):
- इसी प्रकार, SS1/2 के आधार पर विवर्तन पैटर्न विरूपण की डिग्री निर्धारित करने के लिए रिपोर्ट SS1/2 मान के साथ एक ही समीकरण का उपयोग करें:
4. परासरणी ढाल ektacytometry
- १.१ में वर्णित के रूप में नमूना प्राप्त करें । धीरे से कई बार पलटने से परीक्षण से पहले पूरे रक्त का नमूना मिश्रण । 5 मिलीलीटर आईएसओ के लिए पूरे रक्त की २५० µ एल जोड़ें-osmolar PVP शीशी pipetting द्वारा, शीशी कैप और मिश्रण समरूप है जब तक पलटने से धीरे मिश्रण ।
- मुख्य मेनू (osmoscan) से osmoscan चुनें । जगह मशीन के बाईं ओर सुई के नीचे रक्त PVP समाधान युक्त शीशी । सुई कम जब तक यह शीशी के नीचे छूता है । सुनिश्चित करें कि टयूबिंग ठीक से ढाल उत्पादन के लिए कम और उच्च osmolar समाधान से जुड़ा हुआ है । ektacytometer करने के लिए ढक्कन बंद करो और निचले आधे पर दरवाजा खुला इतना है कि आप देख सकते हैं रक्त टयूबिंग दर्ज करें ।
- प्रेस नया विश्लेषण और प्रयोगात्मक विवरण में टाइप करें (Osmoscan | नई विश्लेषण । वांछित विवरण दर्ज करें | ठीकहै) । इस सॉफ्टवेयर पर नियंत्रण तीर चलती है और जब तक रक्त उपकरण के नीचे टयूबिंग से कप में प्रवेश देखा जाता है मशीन चलाने की अनुमति द्वारा २०० करने के लिए कैमरा लाभ समायोजित करें ।
- एक बार रक्त कप में प्रवेश किया है और एक स्थिर विवर्तन पैटर्न छवि कंप्यूटर स्क्रीन पर है, संवाद बॉक्स (अब शुरू) पर अब शुरू बटन दबाकर डेटा अधिग्रहण शुरू करते हैं ।
- ektacytometer लगभग ५०० mOsm/kg तक डेटा प्राप्त करने की अनुमति दें, फिर इंस्ट्रूमेंट बंद करें । रिपोर्ट सहेजें या मुद्रित करें (फ़ाइल | सहेजें या फ़ाइल । प्रिंट). डेटा भी स्वचालित रूप से सहेजा जाएगा ।
- पुराने PVP-रक्त की शीशी को हटा दें । यह एक साफ पानी युक्त शीशी के साथ बदलें । यह सुई के नीचे रखें, सुई नीचे लाने के लिए इतना है कि यह शीशी के नीचे छू और संवाद बॉक्स में कुल्ला बटन प्रेस ढाल प्रणाली कुल्ला (कुल्ला) ।
- एक बार कुल्ला पूरा हो जाने पर, कंप्यूटर मॉनीटर (क्लीन) पर संवाद बॉक्स पर क्लीन विकल्प दबाएं । एक बार स्वच्छ चक्र पूरा हो गया है, बॉब कप से बाहर उठा और पूरी तरह से बॉब और कप एक कम एक प्रकार का वृक्ष के साथ सफाई ऊतक सूखी (महत्वपूर्ण: अवशिष्ट जल लाल कोशिकाओं लाइसे होगा, हस्तक्षेप उत्पादन) ।
नोट: osmoscan रिपोर्ट परासरणी ग्रैडिएंट में बढ़ाव सूचकांक प्रदान करता है । ेि मिन, ओ (ेि न्यूनतम), ेि मैक्स, ओ (ेि मैक्स), ेि हाइपर और हे हाइपर स्वचालित रूप से उत्पन्न होते हैं और रिपोर्ट में शामिल होते हैं । परासरणी ढाल ektacytometry 9 स्वस्थ स्वयंसेवकों से रक्त से प्राप्त मापदंडों की सीमा है: ेि ंयूनतम 0.12-0.196 मनमानी इकाइयों (a.u.); O मिन 117-144 mOsm/ ेि मैक्स 0.551-0.573 a.u.; O (ेि मैक्स) 272-312 mOsm/ ेि हाइपर 0.278-0.286; हे हायपर 454-505 mOsm/
5. ektacytometer बंद टर्निंग
- साधन ठीक से पहले इसे बंद है साफ ।
- ऐसा करने के लिए, टयूबिंग से कनेक्ट करने के लिए निंन और उच्च osmolar समाधान करने के लिए y-एडाप्टर के लिए अग्रणी सफाई समाधान । एक शीशी मशीन के बाएं हाथ की ओर सुई के नीचे सफाई समाधान युक्त जगह और सुई कम जब तक यह शीशी के नीचे छूता है । सुनिश्चित करें कि बॉब कप में पूरी तरह से कम है ।
- सॉफ़्टवेयर बंद करें, और कंप्यूटर मॉनीटर (बंद करें पर दिन का अंत साफ़ करें संवाद बॉक्स पर प्रारंभ दबाएं। प्रारंभ करें) । साधन को पूरी तरह से सफाई के माध्यम से साइकिल की अनुमति दें ।
- अपशिष्ट बोतल करने के लिए टयूबिंग डिस्कनेक्ट और कचरे को छोड़ने के लिए साधन से इसे हटा दें । बॉब को पूरी तरह सुखाएं । मशीन बंद कर दें ।
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Representative Results
इस पांडुलिपि में वर्णित ektacytometry परिणाम किसी भी हालत में लाल कोशिका विकृति को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । किसी ektacytometer के सामांय सेट का योजनाबद्ध रूप से चित्र 1में दिखाया जाता है । एरिथ्रोसाइट्स की सजातीय आबादी एक अंडाकार विवर्तन पैटर्न बढ़ती कतरनी तनाव है कि बढ़ाव सूचकांक की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के रूप में चित्रा 2में दिखाया गया है के जवाब में उत्पादन होगा । विवर्तन पैटर्न विरूपण heterogenous रक्त के नमूनों में होता है क्योंकि कठोर लाल कोशिकाओं को ठीक से विकृत कोशिकाओं के साथ संरेखित नहीं है और एक गोलाकार पैटर्न है कि एक हीरे के आकार का विवर्तन पैटर्न में जिसके परिणामस्वरूप दीर्घवृत्त ओवरले का उत्पादन । कैमरा लाभ के रूप में चित्रा 3में दिखाया बड़ा विवर्तन पैटर्न आकार उत्पन्न करने के लिए समायोजित किया जाता है के रूप में इस विकृत पैटर्न तेजी से पता लगाने योग्य है. सजातीय रक्त आबादी, के रूप में स्वस्थ स्वयंसेवकों में पाया, अलग विकृति curves जब अलग विवर्तन आकार (चित्रा 4a) मापा जाता है का उत्पादन नहीं करते हैं । इसके विपरीत, heterogenous रक्त आबादी, सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से रक्त के रूप में, विवर्तन पैटर्न आकार के एक समारोह के रूप में विकृति उपायों में महत्वपूर्ण कमी दिखा (चित्रा 4). सिकल रक्त में, जब विवर्तन पैटर्न विरूपण की डिग्री ेि मैक्स के एक समारोह के रूप में मापा जाता है, यह एचबीएस (चित्रा 5) और वयस्क हीमोग्लोबिन संस्करण, बांधणी2 (चित्रा 5C) के साथ संबंधित है । आधान रक्त में सामान्य वयस्क हीमोग्लोबिन (बांधणी) के प्रतिशत (चित्रा 5d) के साथ अपने व्युत्क्रम संबंध द्वारा संकेत के रूप में विकृति को सही, । चाहे विवर्तन पैटर्न विरूपण की डिग्री कतरनी तनाव ½ के एक समारोह के रूप में मापा जाता है (चित्रा 5B) या ेि मैक्स (चित्रा 5E) के एक समारोह के रूप में, यह भ्रूण हीमोग्लोबिन के साथ संबंधित है. हालांकि, बाद के मुकाबले पूर्व में संबंध मजबूत है । कुंजी परासरणी ढाल ektacytometry पैरामीटर, जैसे ओ (ेि मैक्स), ेि मिन और ओ मिन सेलुलर जलयोजन के बारे में अतिरिक्त जानकारी प्रदान करते हैं, सतह से मात्रा अनुपात और परासरणी कमजोरी, क्रमशः. परासरणी ग्रैडिएंट curves सिकल रक्त से प्राप्त की विशिष्ट रूप से hypertonic क्षेत्र में तेजी से स्पष्ट हो गया के रूप में चित्रा 6में दिखाया गया है कि विकृति में चिह्नित घट जाती है के साथ बाएं स्थानांतरित कर रहे हैं ।
चित्र 1 . ektacytometer सेट अप की योजनाबद्ध । एक बाहरी कप एक स्थिर बॉब चारों ओर घूमता है परिभाषित चिपचिपापन कि उन दोनों के बीच रखा गया है की एक PVP समाधान में reसस्पैंड खून पर कतरनी तनाव उत्पंन करता है । एक विवर्तन पैटर्न समाधान के माध्यम से गुजरता है और विवर्तन पैटर्न एक प्रक्षेपण स्क्रीन पर प्रदर्शित किया जाता है कि एक लेजर द्वारा उत्पन्न होता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2 . विवर्तन पैटर्न और बढ़ाव सूचकांक के बीच संबंधों का सामान्य अवलोकन. विवर्तन पैटर्न बाल काटना तनाव के जवाब में स्वस्थ रक्त से प्राप्त की उंमीद की अंडाकार पैटर्न से पता चलता है । बढ़ाव सूचकांक (ेि) 7इंगित समीकरण का उपयोग कर परिकलित की जाती है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 3 . सेलुलर विविधता विवर्तन पैटर्न विकृति पैदा करता है । विवर्तन एक सिकल सेल एनीमिया रोगी से रक्त से प्राप्त पैटर्न जब कैमरा लाभ के लिए एक) ३.८ सेमी विवर्तन पैटर्न, ख) एक ४.५ सेमी विवर्तन पैटर्न और सी) एक ५.४ सेमी विवर्तन पैटर्न का उत्पादन करने के लिए समायोजित किया जाता है । विकृति स्पष्ट विकृति में एक प्रगतिशील कमी और स्पष्ट कतरनी तनाव ½ में इसी वृद्धि दिखा घटता है, लाइनों द्वारा संकेत दिया, एक ही खून से जब कैमरा लाभ के उत्पादन के लिए समायोजित है घ) ३.८ cm विवर्तन पैटर्न, ई) ४.५ सेमी विवर्तन पैटर्न और एफ) ५.४ सेमी विवर्तन पैटर्न । [Parrow एट अलसे अनुमति द्वारा पुनर्मुद्रित । 10]. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें ।
चित्र 4 . विवर्तन पैटर्न विकृति सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से खून में कतरनी तनाव की एक सीमा के पार विकृति में एक स्पष्ट कमी का उत्पादन । एक से उत्पंन विकृति curves के तुलना स्वस्थ स्वयंसेवकों और ख) से रक्त सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से रक्त कैमरा लाभ का समायोजन करने के लिए एक ३.८ सेमी, ४.५ सेमी और ५.४ सेमी विवर्तन पैटर्न आकार उत्पंन करते हैं । विकृति को सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से रक्त के साथ उत्पंन घटता है, लेकिन स्वस्थ स्वयंसेवकों से नहीं, के रूप में छोटे रूप में 5 फिलीस्तीनी अथॉरिटी कतरनी तनाव के रूप में कम करने के लिए विवर्तन के एक समारोह के जवाब में स्पष्ट विकृति में प्रगतिशील और महत्वपूर्ण कमी दिखा पैटर्न आकार । [Renoux एट अलसे अनुमति द्वारा पुनर्मुद्रित । 9]. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें ।
चित्र 5 . विवर्तन पैटर्न विकृति की डिग्री सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से रक्त में हीमोग्लोबिन संरचना के साथ संबंधित है । रैखिक प्रतिगमन विश्लेषण ए) के बीच संबंध दिखाने के ेि अधिकतम-विरूपण में विकृति और एचबीएस के प्रतिशत के आधार पर, ख) एसएसी 1/2-विकृति और भ्रूण हीमोग्लोबिन का प्रतिशत (HbF), सी) में विरूपण आधारित संरूपण और बांधणी के प्रतिशत में एक प्रकार का अधिकतम आधारित विकृति2, डी) के प्रत्यक्ष तुलना के प्रयोजनों के लिए और बांधणी और ई) की प्रतिशतता में एक से अधिक के आधार पर ेि अधिकतम आधारित विरूपण, में ेि अधिकतम आधारित विकृति विकृति और सिकल सेल एनीमिया के साथ रोगियों से रक्त में HbF का प्रतिशत । पियरसन उत्पाद क्षण सहसंबंध गुणांक, r, और संगत p-मान इंगित किए जाते हैं । [Parrow एट अल.10] से अनुमति द्वारा पुनर्मुद्रित । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 6 . सिकल सेल एनीमिया के साथ एक रोगी से रक्त परासरणी ढाल ektacytometry द्वारा विश्लेषण किया जब एक स्वस्थ स्वयंसेवक से रक्त की तुलना में कम विकृति के साथ सहवर्ती एक विशेषता छोड़ दिया बदलाव से पता चलता है । एक स्वस्थ स्वयंसेवक (---) से रक्त एक प्रतिनिधि परासरणी ढाल ektacytometry वक्र महत्वपूर्ण मापदंडों के स्थान के साथ दिखाता है दर्शाता है । स्वस्थ स्वयंसेवक से परासरणी ढाल मान रहे है ०.१४३ a.u. के लिए ेि मिन, १४६.३ mOsm/kg फॉर ओ मिन, ०.५७६ a.u. फॉर ेि मैक्स और ४७३ mOsm/kg फॉर हे हाइपर. सिकल सेल एनीमिया के साथ एक रोगी से रक्त के साथ उत्पन्न एक प्रतिनिधि परासरणी ढाल ektacytometry वक्र मढ़ा (---) है. सिकल सेल रक्त से परासरणी ग्रैडिएंट मान हैं ०.२३७ a.u. के लिए ेि मिन, ११०.३ mOsm/केजी फॉर ओ मिन, ०.४२९ a.u. फॉर ेि मैक्स और ४०६ mOsm/kg फॉर हे हाइपर. [Parrow एट अलसे अनुमति के साथ अनुकूलित । 10]. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें ।
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Discussion
ektacytometry तकनीकों का वर्णन स्पष्ट और अच्छी तरह से स्वचालित कर रहे हैं, वैध और प्रतिलिपि परिणाम सुनिश्चित करने । इसके बावजूद कुछ अहम कदम मौजूद हैं. रक्त का उचित तापमान नियंत्रण महत्वपूर्ण है । आठ घंटे से अधिक के लिए कमरे के तापमान पर भंडारण SS ½ मूल्यों को प्रभावित कर सकते हैं । ३४ सुनिश्चित करना है कि मशीन का तापमान ३७ डिग्री सेल्सियस पर स्थिर है, के रूप में सस्पैंड मध्यम तापमान निर्भर है की चिपचिपाहट भी महत्वपूर्ण है । रक्त गैर oxygenated या आंशिक रूप से oxygenated नमूनों से उत्पन्न हुई विकृति से बचने के लिए पूरी तरह से oxygenated होना चाहिए, जब तक कि ये ब्याज के प्रायोगिक मापदंडों हैं । इंस्ट्रूमेंटेशन के दृष्टिकोण से ३५ , साधन की उचित सफाई यह सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है कि वहां कोई PVP टयूबिंग या बॉब के प्रवेश बिंदु में शेष के रूप में इसे सुखाने और साधन के माध्यम से द्रव प्रवाह को रोकने पर कठोर होगा । इन विवरणों को ध्यान सटीक परिणाम को बढ़ावा देने और अच्छी चल हालत में साधन रखने के लिए होगा ।
सेलुलर विविधता के ठहराव संशोधन की आवश्यकता हो सकती है । ३.८ सेमी विवर्तन पैटर्न में, कुछ नमूने उच्चतम कतरनी तनाव पर बढ़ाव सूचकांक में एक तेज़ ड्रॉप दिखा सकते हैं । यह कभी भी एक ताजा नमूना के साथ माप दोहरा द्वारा दूर किया जा सकता है । अंयथा, विवर्तन पैटर्न विरूपण की डिग्री एक कम कतरनी तनाव या ४.५ सेमी विवर्तन पैटर्न से एक बढ़ाव सूचकांक मूल्य का उपयोग कर मापा जा सकता है इस्तेमाल किया जा सकता है । 9 यह भी स्वस्थ रक्त से एक ३.८ सेमी विवर्तन पैटर्न प्राप्त करने के लिए मुश्किल हो सकता है क्योंकि दीर्घवृत्त की लंबी धुरी भी सबसे कम कैमरा लाभ में लंबा है । फिर, ४.५ सेमी विवर्तन पैटर्न डेटा इस समस्या को दरकिनार किया जा सकता है । मान को चुना जाना चाहिए, ज़ाहिर है, प्रयोग के दौरान निरंतर रखा जाना चाहिए क्योंकि तुलना केवल एक ही डेटा पॉइंट और विवर्तन पैटर्न आकार का उपयोग करके डेटा की गणना से ही संभव है । के रूप में सेलुलर विविधता उपाय स्थापित साधन पर निर्भर हैं, आंतरिक सत्यापन पृथक कोशिका भिन्न पर विवर्तन पैटर्न विकृतियों को मापने के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है, या भागों के ठीक परिभाषित मिश्रण, घनत्व निम्नलिखित केंद्रापसारक के रूप में पहले वर्णित है । ६
यह ध्यान दें कि कई ektacytometry पैरामीटर रोगी विशेषताओं के प्रति संवेदनशील है महत्वपूर्ण है । सिकल सेल एनीमिया में उदाहरण अल्फा ग्लोबिन स्थिति,३६ MCV ३७ और चढ़ाए शामिल हैं । 10 इसलिए, नैदानिक अध्ययन के लिए ध्यान से डिजाइन की जरूरत है और इन संबंधों को जब ektacytometry डेटा की व्याख्या के लिए जवाबदेह होने की जरूरत है ।
एक अंय महत्वपूर्ण चेतावनी है कि वहां कम ektacytometry उपायों और लाल सेल अस्तित्व में कमी के बीच एक सीधा सामांय संबंध नहीं है । गंभीर रूप से घटी हुई विकृति, जैसे दक्षिणपूर्व एशियाई ovalocytosis के साथ स्पर्शोन्मुख स्थितियां मौजूद हैं । ३८ हालांकि, किसी भी तकनीक द्वारा विकृति माप जटिल और कोशिका सतह क्षेत्र पर निर्भर मात्रा अनुपात (sphericity), cytoplasmic चिपचिपापन (सेलुलर हीमोग्लोबिन एकाग्रता) और झिल्ली कठोरता है । लाल सेल rheology इसी तरह जटिल है, और वहां एक उपलब्ध तकनीक है कि विभिंन संवहनी बिस्तरों में शारीरिक रक्त प्रवाह की जटिलता उत्पंन कर सकते है नहीं है । Ektacytometry फिर भी बदल लाल कोशिका विकृति और rheology में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करता है ।
ektacytometry की प्राथमिक सीमा व्यक्तिगत कोशिकाओं में विकृति को मापने के लिए अक्षमता है । इस प्रकार, सिकल सेल एनीमिया में, भ्रूण हीमोग्लोबिन के योगदान को निर्धारित करने के लिए कोई तरीका नहीं है, जो एक heterocellular वितरण है, एक विशेष एरिथ्रोसाइट की विकृति पर. 10 इसी तरह, एक रोगी से संक्रमित रक्त प्लाज्मोडियम के एक पूल में एक विशिष्ट लाल रक्त कोशिका के भीतर परजीवी परिपक्वता के प्रभाव का निर्धारण करने के लिए कोई तरीका नहीं है । 19 भविष्य व्यक्तिगत कोशिकाओं के लिए उपयुक्त तरीकों का उपयोग कर प्राप्त उन लोगों के साथ ektacytometery परिणामों की तुलना में अध्ययन मूल्यवान होगा । इस सीमा की परवाह किए बिना, ektacytometry एरिथ्रोसाइट्स के rheological गुणों और रक्त आबादी के विविधता के एक सुविधाजनक और संवेदनशील उपाय प्रदान करता है । इन आंकड़ों कई विकारों के अध्ययन में महत्वपूर्ण है और नैदानिक प्रासंगिकता के अक्सर हैं ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस कार्य में मधुमेह, पाचन और गुर्दे की बीमारियों के राष्ट्रीय संस्थानों और राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के रक्त संस्थान के अंदर अनुसंधान कार्यक्रम का समर्थन किया गया. इस के साथ साथ व्यक्त राय लेखकों की एकमात्र जिंमेदारी है और जरूरी नहीं कि स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के सरकारी विचारों का प्रतिनिधित्व करते हैं ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| LoRRca MaxSis standard version | Mechatronics | LORC109000 | |
| LoRRca MaxSis Osmoscan | Mechatronics | LORC109001 | |
| Polyvinylpyrrolidone solution (PVP) 0mOsm | Mechatronics | QRR030910 | |
| Polyvinylpyrrolidone solution (PVP) 500mOsm | Mechatronics | QRR030930 | |
| Polyvinylpyrrolidone solution (PVP) 5mL vials | Mechatronics | QRR030901 | |
| X clean | Mechatronics | QRR010946 | |
| P1000 | MilliporeSigma | Z646555 | |
| P200 | MilliporeSigma | Z646547 | |
| P200 filter tips | MidSci | AV200-H | |
| P1250 filter tips | MidSci | AV1250-H | |
| Kimwipes | MidSci | 8091 | |
| 1.5 mL eppendorf tubes | MidSci | AVSS1700 | |
| 15 mL conical vial | MidSci | C15R |
References
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