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Chemistry

Charakterisierung von synthetischen Polymeren Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation Zeit der Massenspektrometrie Flug (MALDI-TOF)

Published: June 10, 2018 doi: 10.3791/57174
Automatic Translation
1, 1
1Department of Chemistry, Tulane University

Summary

Ein Protokoll für die Matrix-assisted Laser Desorption ionisation Zeit des Fluges, die Massenspektrometrie (MALDI-TOF MS) Charakterisierung von synthetischen Polymeren beschrieben wird unter anderem die Optimierung der Probenvorbereitung, spektrale Beschaffung und Analyse von Daten.

Abstract

Es gibt viele Techniken, die in der Charakterisierung der synthetischen Homopolymere eingesetzt werden können, aber nur wenige bieten als nützliche Informationsquelle für Ende Gruppenanalyse als Matrix-assisted Laser Desorption ionisation Zeit des Fluges Massenspektrometrie (MALDI-TOF MS). Dieses Tutorial zeigt Methoden zur Optimierung der Probenvorbereitung, spektralen Erwerb und Datenanalyse von synthetischen Polymeren mit MALDI-TOF MS. kritische Parameter während der Probenvorbereitung gehören die Auswahl der matrix Kennung der eine entsprechende Cationization Salz und tuning die relativen Anteile der Matrix, kation und Analyt. Die Aufnahmeparameter wie Modus (linear oder Reflektor), Polarisation (positiv oder negativ), Beschleunigungsspannung und Delay-Zeit, sind ebenfalls wichtig. Da einige Kenntnisse der Chemie beteiligt, das Polymer und Optimierung der Daten Aufnahmeparameter und die Probe Herstellungsbedingungen zu synthetisieren, Spektren mit ausreichender Auflösung und Massengenauigkeit ermöglichen die eindeutige erhalten Sie Bestimmung der Endgruppen der meisten Homopolymere (Massen unter 10.000) zusätzlich zu den wiederholten Einheit Masse und die Gesamtverteilung Molekulargewicht. Obwohl auf einer begrenzten Anzahl von Polymeren nachgewiesen, gelten diese allgemeinen Techniken für eine viel breitere Palette von synthetischen Polymeren zur Bestimmung Massenverteilungen, obwohl Ende Gruppenentscheidung nur für Homopolymere mit schmalen Dispersität möglich ist.

Introduction

Mit Verbesserungen in der lebenden Polymerisation Techniken, Präzision Polymere mit quantitativ funktionalisierten Endgruppen sind immer verfügbar1. Die gleichzeitige Entwicklung von azid-Alkinen und Thiolene klicken Sie Chemikalien ermöglichte die nahezu quantitative Kopplung von Makromolekülen zu anderen Moieties, den Zugang zu einer Reihe von Hybriden Materialien2,3,4 . Präzise analytischen Techniken sind jedoch erforderlich, um sowohl die Ausgangs- und Produkte dieser Polymer Konjugation Reaktionen zu charakterisieren. Matrix-unterstützte Laser Desorption/Ionisierung Zeit des Fluges Massenspektrometrie (MALDI-TOF MS) ist ein wertvolle weiche Ionisierung analytische Verfahren zur Charakterisierung von Polymeren weil es Polymer-Ionen in einem einzigen Ladevorgang Zustand mit minimalen erzeugen kann Fragmentierung5,6. MALDI-TOF MS hat wesentliche Vorteile gegenüber anderen konventionellen Methoden der Polymer-Charakterisierung, weil es Massenspektren mit Auflösung des einzelnen n-Mers innerhalb der Massenverteilung Polymer zur Verfügung stellen kann. Infolgedessen können solche Massenspektren liefern präzise Informationen über das mittlere Molekulargewicht, wiederholen Masseeinheit und Molekulargewicht Dispersität7, die wiederum zu konkurrierenden Polymerisation Mechanismen wie Kette Transfer8 erhellen können . MALDI-TOF MS ist besonders kraftvoll auf die Bereitstellung von Informationen über Polymer Ende Gruppen9,10, die verwendet werden können, um Ende Gruppe Änderungen10,11 bestätigen und andere Transformationen12 wie Polymer Cyclizations11,13. Ebenso wichtig, die relativ kleine Menge Analyt (Sub-Mikrogramm) für erforderlich Masse spektrometrische Analyse macht diese Technik nützlich für die Charakterisierung, wenn nur Spur Mengen des Materials zur Verfügung stehen.

Die MALDI-TOF MS-Analyse von Polymeren kann vier verschiedene Schritte unterteilt werden: Vorbereitung, Kalibrierung, spektralen Erwerb und Datenanalyse zu probieren. Probenvorbereitung ist der wichtigste Schritt zur Erzeugung von MALDI-TOF Massenspektren optimiert und tritt ein, bevor die Probe in das Instrument14,15eingeführt wird. Die Auswahl einer geeigneten Matrix mit ähnlicher Löslichkeitsparameter als Polymer Analyten ist entscheidend für die hohe Qualität MALDI-TOF Massenspektren zu erhalten und Richtlinien für die Auswahl der Matrix wurden berichtet an anderer Stelle14,15, 16,17. Eine Datenbank mit Polymer MALDI "Rezepte" für die Probenvorbereitung wurde auch veröffentlicht online-18. Für neuartige Polymere kann Matrix Auswahl durch das erste Verständnis der Löslichkeit des Polymers und Auswahl einer Matrix mit ähnlichen Löslichkeit Parameter14,19angegangen werden. Polymere mit hohen Proton Affinität können protonierten durch die meisten Matrizen-14 (die häufig Carbonsäure-Gruppen enthalten), aber für andere Polymere ist ein Cationization-Agent benötigt14. Alkali-Ionen Addukt gut mit Sauerstoff enthaltenden Arten (zB. Polyestern und Polyether), während ungesättigte Kohlenwasserstoffe (zB. Polystyrol) Addukt mit Übergangsmetallen wie Silber- und Kupferionen14, 19. da die Polymerproben in diesem Experiment Sauerstoffatome im Backbone enthalten, Natrium oder Kalium Trifluoroacetate (TFA) wurden als der Cationization-Agent verwendet. Nachdem die Matrix und Cationization Agenten ausgewählt haben, müssen die relativen Anteile der Analyten, kation Agent und Matrix sorgfältig optimiert werden, dafür ein hohes Signal-Rausch. In diesem Verfahren die Parameter für die Probenvorbereitung sind bereits optimiert worden, aber eine empirische Beispielprozedur Optimierung (Schritt 1.4.1., Abbildung 1), die systematisch variiert die Konzentrationen der drei Komponenten (Analyt, Matrix und kation) ist wirksam zur Bestimmung schnell ihre optimale Verhältnisse.

Die Datenerfassung erfordert auch die Optimierung der eine Reihe von Parametern. Die wichtigsten Parameter sind die positiven oder negativen Ionen-Modus des Spektrometers, der Instrument-Betriebsart (linear versus Reflektor), die Beschleunigungsspannung und die Extraktion-Delay-Zeit. Eine weitere Möglichkeit, dass die Auflösung erhöht werden kann ist durch die Nutzung von "reflektron" Modus20,21,22,23. Reflektron Modus verdoppelt im Wesentlichen die Flugbahn der Ionen zum Detektor durch reflektieren die Ionen am Ende des Rohres Flug zurück in Richtung eines Detektors in der Nähe der Quelle während Neuausrichtung Ionen mit unterschiedlichen Impulse und somit Erhöhung der Auflösung, obwohl abnehmender Signalstärke. Darüber hinaus erhalten höhere Auflösung Spektren durch eine Verringerung der Laserleistung, die das Signal-Rausch-Verhältnis minimiert durch Verringerung der Zahl und Energie der Kollisionen und somit Verringerung der Fragmentierung und kinetische Inhomogenitäten24. Durch all diese Parameter optimieren, können die Ionen konzentriert werden, um minimieren die Auswirkungen jeder Inhomogenität in die ursprüngliche Position oder Geschwindigkeit, die während der Laser Desorption Prozess auftritt. Wenn die Aufnahmeparameter optimiert sind, kann isotopischen Auflösung oft für Ionen mit einer Masse von mehr als 10.000 Da erreicht werden, obwohl dies auch abhängig von der Länge des Rohres Flug und das Instrumentendesign. Die meisten organische Verbindungen, die mindestens ein Heteroatom enthalten sind anfällig für Komplexbildner mit Alkali kationen wie Lithium, Natrium und Kalium. Viele der Alkalimetalle sind Monoisotopes oder begrenzte Isotope und daher nicht die Verteilung zu erweitern.

Während die Geräteparameter optimiert werden können, um die Datengenauigkeit zu optimieren, ist Genauigkeit der Daten nur mit einer entsprechenden Kalibrierung11erreicht. Proteine und Peptide dienten ursprünglich als Kalibrierstandards aufgrund ihrer Monodispersity und Verfügbarkeit, aber Variable Stabilität und der Prävalenz von Verunreinigungen25leiden. Kostengünstige und stabile Alternativen enthalten Anorganische Cluster und Polydisperse Polymere26,27,28,29. Leider, diese alternativen Feature verteilen Massen, die Masse Aufgaben sowie kleinere Massen insgesamt erschweren nur für Kalibrierungen unter 10.000 Da nützlich machen. Gegen diese Probleme, Grayson Et Al. 25 ein Dendrimer-basierte, Polyester MS Kalibrierung System entwickelt, das ist monodispers, und verfügt über breite Matrix und Lösungsmittel-Kompatibilität, Haltbarkeit Stabilität (> 8 Jahre) und geringere Produktionskosten. Basierend auf den Stärken dieses Systems, wurde es als Kalibrator für diese Experimente ausgewählt.

Es gibt zwei Haupttypen von Kalibrierung: interne und externe30. Wenn Extern kalibrieren, ein Standard mit Massen, die Halterung der Analyten liegen auf MALDI-Zieltafel in einer unterschiedlichen Position als Analyten zu generieren eine separate Massenspektrum, aus denen eine Kalibrierung Datei erzeugt werden kann. Auf der anderen Seite erhöhter Genauigkeit oft mit einer interne Kalibrierung lässt sich einhergehende Vermischung der Kalibrator mit den Analyten, ein Hybrid-Spektrum mit Kalibrator und Analyten Signale zu erhalten. Das unten beschriebene Verfahren wurde eine externe Kalibrierung umgesetzt. Nach der korrekten Kalibrierung der Massenskala können genaue Analyten Massendaten erworben werden. Um die genaueste Kalibrierung zu gewährleisten, ist es wichtig, dass die Datenerfassung bald nach der Kalibrierung erfolgt.

Schließlich sobald der optimierten kalibriert Datensätze erworben wurden und die Daten wurden analysiert, um strukturelle Informationen über die Polymerproben. Der Abstand zwischen den n-Mers in der Polymer-Distribution bieten genaue Messung der sich wiederholende Einheit Masse. Die Zahl mittlere Molmasse (Mn) und andere Masse Verteilung Berechnungen (z.B.Mw (Gewicht mittlere Molekulargewicht) und Đ (Dispersität)) auch von der Signalverteilung in den Massenspektren (ermittelt werden Schritt 4.2 für Berechnungen). Vielleicht kann die meisten einzigartig bei Homopolymere, die Summe der Massen Ende Gruppe bestätigt werden durch die Bestimmung des Offset der Polymer-Verteilung in Bezug auf die Masse der Wiederholungseinheiten allein. Die informationsreichen MALDI-TOF Massenspektren liefern wertvolle Charakterisierungsdaten, die traditionellere Polymer Charakterisierung Techniken wie Größe Ausgrenzung Chromatographie, Fourier-Transform-Infrarot-Spektroskopie, ergänzen und magnetischen Kernresonanz.

Protocol

Achtung: Alle Reaktionen wurden in einer Dampfhaube ausgeführt. Bitte lesen Sie alle Material Sicherheit Data Sheets (MSDS) für jede chemische verwendet und entsprechende Vorkehrungen zu treffen.

1. die Probenvorbereitung

  1. Herstellung von Stammlösungen der matrix
    1. Lösen Sie 20 mg α-Cyano-4-Hydroxycinnamic Säure (HCCA auf) in 1 mL Tetrahydrofuran-nicht stabilisierten (THF) und Vortex bis aufgelöst.
    2. Lösen Sie 20 mg 2,5-Dihydroxybenzoic Acid (DHB auf) in 1 mL THF und Vortex bis aufgelöst.
  2. Vorbereitung der Vorratslösung Alkali kation
    1. Lösen Sie 2 mg Natrium Trifluoroacetate (NaTFA) in 1 mL THF und Vortex bis aufgelöst.
    2. Lösen Sie 2 mg Kalium Trifluoroacetate (KTFA) in 1 mL THF und Vortex bis aufgelöst.
  3. Vorbereitung des Analyten Stammlösungen
    1. Beispiel 1: 2 mg von Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure auflösen (Mn = 5000) in 0,5 mL THF und Vortex bis aufgelöst.
    2. Beispiel 2: 2 mg Polyoxyethylen bis(azide) auflösen (Mn = 2000) in 0,5 mL THF und Vortex bis aufgelöst.
    3. Beispiel 3: Auflösen 2 mg poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) in 0,5 mL THF und Vortex bis aufgelöst.
  4. Vorbereitung der Probe Mischungen für die Analyse
    1. Bereiten Sie eine Reihe von Lösungen durch Mischen von Matrix, Analyt und kation Lösung während die relativen Anteile der Komponenten variieren, so dass neun einzigartige Samples Mischungen hergestellt werden. Beispielsweise die Höhe der zusätzlichen Matrix Stammlösung konstant zu halten (zB., 10 µL), variieren Sie die Menge des Analyten Lösung um den Faktor drei (zB., 45, 15 und 5 µL), während auch die Menge der kationen-Lösung um den Faktor drei unterschiedliche (z.B. ., 9, 3 und 1 µL). Diese Proben liefern effektiv ein 3 x 3-Raster von Proben mit den beiden unterschiedlichen Konzentration Variablen auf den x- und y Achsen (Abbildung 1).
    2. Kombinieren Sie für das repräsentative Beispiel 15 µL der poly(L-lactide) Lösung mit 15 µL der DHB-Lösung und 1 µL der NaTFA Lösung.
    3. Pipette 1 μL jeder Lösung Mischung auf eine einzelne Probe auf die MALDI-Zieltafel (Abbildung 2). Fügen Sie die Proben inkrementell in kleinen Portionen zu verhindern, dass die Probe fließt aus dem Probe-Brunnen, so dass jedes aliquoten zu Trockenheit verdunsten kann, bevor zusätzliche Probe hinzufügen.
      Hinweis: Für höhere Siedepunkt Lösungsmittel eine Druckluftpistole Lösungsmittel Verdunstung beschleunigen eventuell aber Vorsicht verwendet werden sollten, um zu vermeiden, die Probe Heizplatte, die Platte zu verwerfen verursachen könnten.
  5. Vorbereitung der Standardproben zur Kalibrierung
    1. Bereiten Sie die Kalibrierstandards über das vorgeschlagene Lieferanten-Protokoll.
      Hinweis: Dendrimer Kalibrierstandards wurden für diese Studie ausgewählt und stehen als die reine Dendrimere oder Mischfinanzierung mit Matrix, Kalibrator und kation bei optimalen Verhältnissen.

(2) die Übernahme Datenoptimierung

  1. Initiierende Datenerfassung
    1. Datenerfassungs-Software "FlexControl" zu öffnen.
    2. Werfen Sie die Plattform, um das Laden von der Zieltafel aktivieren Sie durch Drücken der "Equation 1" Taste.
    3. Legen Sie vorsichtig die Zieltafel mit den geladenen Kalibrator und Analyten Proben auf der Plattform in der entsprechenden Ausrichtung.
    4. Verwenden die Software zur Datenerfassung um zu injizieren die Zieltafel auf der Plattform durch Drücken der "Equation 1"-Taste noch einmal.
    5. Wählen Sie eine geeignete Daten Erwerbsmethode (positiv Mode Erwerbsmethode) durch Drücken der Datei | Wählen Sie die Methode.
      Hinweis: Für die meisten Polymerproben, einschließlich unserer vertretenden Analyten Ionisation soll über Komplexierung mit einem kation und daher eine positive Modus Erwerbsmethode ist am besten geeignet. Je nach Instrument, für geringere Masse reicht (500-10.000 Da) oder wenn höherer Auflösung gewünscht ist wählen Sie eine Reflektor Modus Methode Datei. Für höheren Molekulargewicht Proben oder wenn höhere Signalempfindlichkeit brauchten, und niedriger Auflösung ist akzeptabel, linearmodus Methode Datei auswählen.
    6. Vor dem Importieren von Daten, stellen Sie sicher, eine geeignete Massenbereich für die Datenerhebung ist ausgewählt-im Idealfall Massenbereich Hälfte der niedrigsten Masse in der zu erwartenden Verteilung sowie doppelte der höchsten Masse in der zu erwartenden Verteilung enthalten wird. Überprüfen Sie dies durch Klicken auf die Registerkarte " Erkennung " und Masse Bereichanzeigen.
      Hinweis: Dadurch wird sichergestellt, dass Signal vom unteren Molekulargewicht Abbau Fragmente oder höheren Molekulargewicht Aggregate (Dimer), die möglicherweise in der Probe vorhanden sind in den Daten enthalten. Beachten Sie, dass Matrix Oligomere häufig mit hohen Signalintensitäten in den meisten MALDI-TOF-Massenspektren, Bereitstellung von hoher Intensität Lärm mit einer Masse bis zu 1.000 Da, erschwerende Analyse unterhalb dieser Masse wahrgenommen werden. Obwohl die Kalibrierung erforderlich sein wird, bevor eine endgültige DataSet zu erhalten, kann eine genaue Kalibrierung Datei nur erworben werden, wenn identische Aufnahmeparameter wie optimiert für den bestimmten Analyten eingesetzt werden. Daher ist eine vorläufige Optimierung der Analyten Massenspektrum vor der Kalibrierung, gefolgt von den hochschlag einer kalibrierten Analyten Massenspektrum erforderlich.
  2. Vorläufige Datenerfassung
    1. Die Software zur Datenerfassung wählen Sie die Position auf der Zielplatte, die den gewünschten Analyten entspricht.
    2. Erhebung von Daten während der Bewegung der Laser Ziel um die Probe um das Signal zu maximieren zu initiieren. Klicken Sie auf Start, um die Datensammlung zu starten.
      Hinweis: Der Laser kann Matrix an einer bestimmten Stelle nach der wiederholten Probenahme erschöpfen.
    3. Verwenden den Schieberegler auf der linken Seite des Kamerafensters, die Laserleistung passen Sie an, dass die minimale Leistung erforderlichen isotopischen Auflösung erreicht erreicht ist.
      Hinweis: Bei der Analyse der mehrfachen Proben bestätigen das optimale Verhältnis von Analyten, kation und Matrix verwenden Sie die gleichen Laserleistung auf jeder der Analyten Proben um zu bestimmen, welche Probe zeigt die besten Signal-/Rauschverhältnis für die Aufnahmeparameter. Weiter zukünftigen Erwerb Optimierung mit der Probe, die angezeigt wird, das beste Signal Rauschabstand auszustellen.
  3. Die Akquisition Datenoptimierung
    1. Zoomen auf eine einzelne Spitze in der Mitte der Massenbereich von Interesse, die Auflösung durch die Anpassung des Unterschied in der Beschleunigung Spannungen optimieren (für die Instrumente in dieser Studie, dies umfasst das Anpassen des Werts "IS2"), die in den Spektrometer ist Registerkarte ".
      Hinweis: Dies ist am schnellsten durch Variation den IS2 Wert in großen Schritten, Kenntnis nehmend von dem Wert die beste Auflösung erzeugt optimiert (i.e., die kleinste voll Spitze Breite am halben maximale Signalstärke), und dann weiter zu optimieren, in kleineren Schritten der Der IS2 Wert. In der Regel ist der optimale IS2 Wert höher (näher an IS1) für niedrige Masse Polymere und unteren für Hochpolymere Masse.
    2. Auf Wunsch erhöhen Sie Auflösung mit reflektron Modus.
      Hinweis: Reflektron Modus ermöglicht die Kompensation der Diskrepanzen in Anfangsgeschwindigkeit von Ionen der gleichen m/Z durch die höhere Geschwindigkeit-Ionen mit dem gleichen m/Z -Wert in einen längeren Weg zum Detektor zu zwingen. Dieser Anstieg der Weg zum Detektor kann langsamer Ionen der gleichen m/Z -Wert gleichzeitig, am Detektor ankommen effektiv Konzentration der Ionen für höhere Auflösung. Obwohl reflektron Modus in der Regel die Signal-Auflösung für Proben mit schwachen Signalintensität verbessert kann linearmodus erforderlich sein, um die Daten zu visualisieren.
    3. Schließlich optimieren die Laserleistung durch die Reduzierung der Laserleistung so gering wie möglich beim Generieren noch eine vernünftige Signal Rauschabstand (zB., Signal-Rauschabstand von etwa 10).
      Hinweis: Da in der Regel höhere Laserleistungen verringern Sie die Auflösung und Fragmentierung auslösen können, sind der Massenspektren mit bester Qualität erworben mit reduzierter Laserleistung, aber eine höhere Anzahl von Scans.
    4. Sobald die Aufnahmeparameter optimiert sind, sparen Sie unkalibrierten Massenspektren Auswahl Datei und dann Speichern Spektrum auf Speichern unter. Für externe Kalibrierung muss eine Neuanschaffung der Kalibrator unter diesen identisch, optimierten Parametern durchgeführt werden bevor eine Neuanschaffung initiiert wird, um die kalibrierten Massenspektrum des Analyten zu generieren.

(3) MALDI-Kalibrierung

  1. Erwerb der Kalibrierung Massenspektrum
    1. Erwerben Sie mit Hilfe der Aufnahmeparameter bereits für den Analyten optimiert, eine optimierte Massenspektrum der Stichprobe von massenormale.
      Hinweis: Im Idealfall sollte die Kalibrations-Set eine Norm über dem Bereich von Interesse, eine unten und mindestens im Bereich von Interesse enthalten. Die Genauigkeit der Kalibrierung ist am besten, wenn alle Aufnahmeparameter für beide Proben identisch sind.
  2. Erstellen Sie eine Kalibrierung Datei
    1. Stellen Sie sicher, dass vorhandene Kalibrierung ist ungültig oder tab in der Lage, durch Drücken der Kalibrierung ungültig unter dem Spektrometer überschrieben werden.
    2. Mit der gleichen Aufnahmeparameter (zB., Laserleistung, IS2 Spannung), bewegen Sie den Laser über zum Beispiel Brunnen mit den Kalibrator (zB., Dendrimer standard, Peptid) durch Auswahl der entsprechenden nun mit dem Cursor und erwerben ein Spektrum durch Drücken der Taste starten.
  3. Sobald genügendes Signal erfasst wurde, drücken Sie starten , beenden, Erfassung von Daten.
  4. Sobald ein Massenspektrum der Kalibrator erworben hat, wählen Sie das Mass Control List Dropdown-Menü in der Registerkarte " Kalibrierung ", die die Kalibrierung standard entspricht. Die entsprechenden Masse Kontrollliste wird Referenz Massen der Kalibrator mit dem entsprechenden kation ausgewählt haben.
    Hinweis: Diese sollte ab der Kalibrator Lieferant, und achten Sie darauf, die Monoisotopic Masse Werte bei Isotopen Auflösung erreicht ist (zB., Reflektor-Modus unter m/Z = 5000), und eine durchschnittliche Masse Werte bei Isotopen Auflösung nicht erreicht werden kann (z.B., linearen Modus oben m/Z = 5000),
  5. Vor dem Abgleich der entsprechenden Referenz-Gipfel zum jeweils ausgewählten Kalibrator-Gipfel, sicherzustellen, dass eine angemessene Spitze Kommissionierung Protokoll verwendet wird, wählen Sie die Registerkarte " Bearbeiten ".
    Hinweis: Peak Picking Protokolle von spektrale Auflösung abhängig. Für eine durchschnittliche Masse Berechnung dauert die Software den Masse Durchschnitt über die gesamte Reihe von Isotopen Gipfeln. Für eine Monoisotopic Masse Berechnung sollte die Software festgelegt werden, um die genauen Masse nur die erste isotopischen Spitze zu berechnen.
  6. Wenden Sie die Bezugsmasse aus der Massenkontrolle-Liste auf das entsprechende Signal für den Kalibrator Massenspektrum indem Sie den Bereich links von der Spitze des Interesses auswählen und klicken Sie dann auf die entsprechende Masse in der Liste anwenden an. Weiter den Vorgang für die restlichen Kalibrator-Gipfel.
    Hinweis: Für die genaue und präzise Kalibrierung, legen Sie die Analyten und Kalibrator Proben möglichst nah beieinander auf die Zieltafel, da subtile Variationen in Ziel Traufhöhe die Genauigkeit der Kalibrierung beeinflussen können.
  7. Zurückzukaufen Sie das Spektrum des Analyten, sobald der Massenskala für die optimierte Aufnahmeparameter kalibriert.

(4) Daten-Analyse und Interpretation

  1. Peak-Kommissionierung
    1. Öffnen Sie das Analyt-Spektrum in der Daten-Analyse-Software (FlexAnalysis).
    2. Vergrößern Sie auf einem Gipfel zu identifizieren, wenn isotopischen Auflösung erreicht worden ist, durch Klicken auf die Schaltfläche X-Bereich vergrößern .
    3. Drücken Sie Masse List | Finden Gipfel auswählen. Wenn der Monoisotopic Berg gelöst ist, wählen Sie dieses ersten Peak in der isotopischen Verteilung die Masse mit einem Monoisotopic Peak-Kommissionierung Protokoll bestimmen. Wenn Monoisotopic Gipfel nicht behoben wird, verwenden Sie eine durchschnittliche Masse Gipfel Kommissionierung Protokoll und bestimmen Sie die durchschnittliche Masse der gesamten isotopischen Verteilung.
    4. Dieser Prozess für jedes n-Mer in der Polymer-Distribution Kommissionierung Gipfel weiter.
  2. Polymer-Charakterisierung und Ende Gruppe-Analyse-Berechnungen
    Hinweis: Bei richtiger Anwendung bieten MALDI-TOF MS wertvolle, genaue Daten für Massenverteilung Berechnungen von Polymeren. Es sei darauf hingewiesen, dass Massenverteilung Daten nur korrekt ist, wenn die Dispersität der Polymer-Probe relativ niedrig ist (zB., etwa Đ= 1.3 oder unten).
    1. Berechnen Sie die Anzahl mittlere Molekulargewicht, die Masse Durchschnitt in Bezug auf die Anzahl der Mole jedes Massenanteil, mit Hilfe der Formel:
      Equation 2
      wo Nich = Anzahl der Moleküle einer bestimmten Molekulargewicht und Mich = spezifische Molekulargewicht von diesen Molekülen.
    2. Berechnen Sie das Gewicht mittlere Molekulargewicht, die Masse Durchschnitt in Bezug auf das Gewicht jedes Massenanteil, mit Hilfe der Formel:
      Equation 3
      wo N ich = Anzahl der Moleküle einer bestimmten Molekulargewicht und M ich = spezifische Molekulargewicht von diesen Molekülen.
    3. Nachdem die Mw und Mn ausgerechnet quantifizieren Sie die Breite der Molmassenverteilung mit dem Verhältnis Mw/mn die Dispersität, Đgenannt wird.
    4. Die einzigartige und leistungsstarke Funktion der MALDI-TOF MS-Datenanalyse ist die Fähigkeit zu bestimmen oder zu bestätigen die Endgruppen Homopolymere. Bestimmen der Endgruppe durch die folgende Formel für die beobachteten Masse von einem n-Mer im Massenspektrum (Mn-Mer) umstellen:
      Mn-Mer = n (MRU ) + MEG1 + MEG2 MIon
      wo n = Grad der Polymerisation,
      MEG1 = Masse des α-Endgruppe
      MEG2 = Masse des Arbeitskreises ω-Ende
      M-RU = Masse des Referats Wiederholung des Polymers,
      und MIon = Masse des Ions, dass komplexe mit dem Polymer.

Representative Results

Beispiel 1: Eine Stichprobe von Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure (Mn = 5000) (Abbildung 3) wurde mit Kalium-Trifluoroacetate als Cationization Mittel mit HCCA als Matrix analysiert. Das Spektrum der erwarteten ausgestellt K+ Addukte ebenso wie die vom Rest Na+beobachtet.

MALDI-TOF MS bestätigt die enge Verteilung (Abbildung 3) Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure (Mn = 5000). Ein Pick peaking-Protokoll wird verwendet, weil der Monoisotopic Berg (bestehend aus ausschließlich die am häufigsten vorkommende elementare Isotope, nämlich 12C, 1H 16O und 14N) nicht ausreichend gelöst zu seiner Identifizierung zu ermöglichen ist, dass bestimmt die durchschnittliche Masse über die gesamte isotopischen Verteilung für jedes n-Mer-Peak. Ebenso werden alle theoretische Berechnungen mit durchschnittlich, eher als Monoisotopic, Massen für jedes Element bestimmt. Mit den Gleichungen aus Schritt 4, Analyse-Software wurde verwendet, um die folgenden Eigenschaften der Massenverteilung der Polymer berechnen: Mn: 4700, Mw: 4710, Đ: 1,00.

Um die Identität der Endgruppen zu bestätigen, wurde eine einzelne n-Mer (104) zur weiteren Analyse (Abbildung 4) gewählt. Als mit der Massenverteilung Berechnungen, weil die Monoisotopic Spitze nicht aufgelöst werden konnte, Masse Durchschnittswerte für spätere Berechnungen dienten. Der theoretische Massenwert der 104-Mer von Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure besteht aus der Masse der wiederholen-Einheiten (44.0530 × 104) plus die Masse der α-Ende Amingruppe (+ 16.02300) und die Masse der ω-Ende Carboxylgruppe (+ 59.0440) sowie die Masse der Kalium-kation (+ 39.09775) was eine insgesamt 104-Mer Masse von 4695.67675 ergibt. Der beobachteten Massenwert für 104-Mer + K+ ist 4695.5, der den theoretischen Wert, da die Genauigkeit des durchschnittlichen Massenberechnungen entspricht. Die Reihe von kleineren, Offset Peaks im Spektrum entspricht das Polymer ionisierende Strahlung mit Natrium, wo der theoretischen Masse Wert von 104-Mer aus der Masse der wiederholen-Einheiten (44.0530 × 104 besteht) plus die Masse der α-Ende Amingruppe (+ 16.02300) sowie die Masse der ω-Ende Carboxylgruppe (+ 59.0440) plus die Masse das Natrium-kation (+ 22.98922) geben eine insgesamt 104-Mer Masse von 4679.56822. Der beobachteten Massenwert für 104-Mer + Na+ ist 4679.4 die nur 0,2 Da anders als der theoretische Wert ist. Eine genauere Bestimmung der Ende Gruppe Masse ermittelt werden, durch die Messung des Durchschnitts über mehrere Gipfel, und wurde an anderer Stelle11erläutert.

Die Poly (Ethylenglycol)-2-Aminoethyl-Äther-Essigsäure (Mn = 5000) Probe gepflegt seine enge Verteilung wenn selektiv durch Reaktion (Abbildung 5) funktionalisiert mit 2,4-Dinitrofluorobenzene (DNFB) (Abbildung 6). Das Spektrum ausgestellt Natrium Addukte und HCCA als Matrix verwendet.

MALDI-TOF MS bestätigt die enge Verteilung (Abbildung 6) Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure (Mn = 5000) Wenn mit DNFB geändert. Mit den Gleichungen aus Schritt 4, Analyse-Software wurde verwendet, um die folgenden Eigenschaften der Massenverteilung der Polymer berechnen: Mn: 4940, Mw: 4950 Đ: 1,00.

Um festzustellen, wenn komplette Funktionalisierung von Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl-Äther-Essigsäure (Mn = 5000) mit DNFB, stattgefunden hätte, einen einzelnen n-Mer der Verteilung wurde ausgewählt für die Analyse (Abbildung 7). Der theoretische Masse der funktionalisierten 104-Mer von Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure reagiert mit 2,4-Dinitrofluorobenzene besteht aus 44.0530 × 104 (die Masse der wiederholten Einheiten) + 182.115 (Masse der α-Amin-Gruppe reagiert mit 2,4 - Dinitrofluorobenzene) + 59.044 (Masse von der Carboxylgruppe) + 22.98922 (Masse der Natrium-Kationen) = 4845.66022. Die beobachteten Masse Wert für n = 104 ist 4845.8 -0,1 ist Da anders als der theoretische Wert. Diese enge Abstimmung zwischen den theoretischen und beobachteten Werten ist bezeichnend für eine komplette Änderung des Ausgangsmaterials an Produkt, aber noch bedeutsamer ist, das Fehlen von Signalen das Ausgangsmaterial, 4811.72722 und 4855.78022 für das zugeordnete Massenbereich oder irgendwelche zusätzlichen Nebenprodukte bestätigt die quantitative selektive Funktionalisierung des Amins. Eine zweite Spitze wird beobachtet bei 4823.8, der das 103-Mer der funktionalisierten Polymer entspricht, aber mit dem Verlust des Protons auf die Carbonsäure Gruppe Ende dieser komplexe mit einem anderen Natrium-Ion mit einer theoretischen Masse von 4823.58899 die Differenz von -0,2 hat Da.

Beispiel 2: Eine Stichprobe von Polyoxyethylen-bis(azide) (Mn = 2000) (Abbildung 8) wurde mit Natrium Trifluoroacetate als Cationization-Agent und HCCA als Matrix analysiert und nur die erwarteten ausgestellt Na+ Addukte.

Durch die Auflösung in diesem unteren Massenbereich erreicht die Monoisotopic Gipfel für jede n-Mers einfach gelöst werden könnte, und so ein Monoisotopic Peak picking Protokoll gewählt wurde (im Durchschnitt nur die Masse Signal des ersten Peaks in der isotopischen Verteilung ) und alle entsprechenden Berechnungen verwendet die Monoisotopic Massen der einzelnen Elemente. MALDI-TOF MS bestätigt die enge Verteilung (Abbildung 8) von Polyoxyethylen bis(azide) (Mn = 2000). Mit den Gleichungen aus Schritt 4, Analyse-Software wurde verwendet, um die folgenden Eigenschaften der Massenverteilung der Polymer berechnen: Mn: 1940, Mw: 1950, Đ: 1,01.

Um Ende Gruppe Funktionalisierung zu bestätigen, wurde eine einzelne n-Mer (42) ausgewählt (Abbildung 9). Wie bei den oben ermittelten Massenverteilungen, waren Monoisotopic Masse verwendet, da die Monoisotopic Gipfel in jedem n-Mer isotopischen Verteilung gut gelöst wurden. Der theoretischen Masse Wert der 42-Mer von Polyoxyethylen bis(azide) entspricht 44.02621 × 42 (die Masse der wiederholen-Einheiten), 42.00922 (Masse des Arbeitskreises Azido-Ende), 70.04052 (Masse des Arbeitskreises Azidoethyl Ende) + 22.98922 (Masse der Natrium-Kationen) = 1984.13978. Die beobachteten Masse Wert für n = 42 ist 1983.95, die anders als der theoretische Wert 0,19 Da ist. Es sei darauf hingewiesen, dass vor allem bei höheren Laserleistungen azid Funktionalität metastabile Fragmente zeigen kann; Dies war jedoch nicht in diesem bestimmten Fall31beobachtet.

Polyoxyethylen-bis(azide) (Mn = 2000) Probe gepflegt seine enge Verteilung wenn selektiv funktionalisiert Kupfer katalysierten azid-Alkinen Cycloaddition Reaktionen (Abbildung 10) mit 1-Ethynyl-4-Fluorobenzene(EFB) ()Abbildung 11), eine Gruppe von 4-Fluorophenyltriazolyl (FPT) ergeben. Die Spektren ausgestellt die erwarteten Na+ Addukte von mit Natrium Trifluoroacetate als Cationization-Agent und HCCA als Matrix.

MALDI-TOF MS bestätigt die enge Verteilung ()Abbildung 11( ) der Polyoxyethylen bis(azide) (Mn = 2000) nach Funktionalisierung mit EFB. Mit den Gleichungen aus Schritt 4, Analyse-Software wurde verwendet, um die folgenden Eigenschaften der Polymer berechnen: Mn: 2240 Mw: 2250, Đ: 1,00.

Um komplette Funktionalisierung der Probe zu bestätigen, wurden Monoisotopic Masse zum Analysieren der ausgewählten einzelnen n-Mer (42) (Abbildung 12). Der theoretische Massenwert der 42-Mer von Polyoxyethylen bis(azide) reagiert mit 1-Ethynyl-4-Fluorobenzene entspricht 44.02621 × 42 (die Masse der wiederholten Einheiten) + 162.04675 (Masse der FPT-Endgruppe) + 190.07805 (Masse der FPT Ethyl Endgruppe mit 1-Ethynyl-4-Fluorobenzene) + 22.98922 (Masse der Natrium-Kationen) = 2224.21484. Die beobachteten Masse Wert für n = 42 ist 2224.16 die 0,05 Da anders als der theoretische Wert ist.

Beispiel 3: Ein Beispiel für poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) (Abbildung 13) wurde mit Natrium Trifluoroacetate als ein Cationization-Agent analysiert und nur die erwarteten ausgestellt Na+ Addukte und DHB als Matrix.

MALDI-TOF MS bestätigt die enge Verteilung von poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) (Abbildung 13). Mit den Gleichungen aus Schritt 4, der Programm-Analyse wurde verwendet, um die folgenden Eigenschaften der Polymer berechnen: Mn: 2310, Mw: 2360, Đ: 1,02.

Um komplette Funktionalisierung der Probe zu bestätigen, wurden Monoisotopic Masse zur ausgewählten einzelnen n-Mer (26) (Abbildung 14) zu analysieren. Der theoretische Massenwert der 26-Mer von poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) entspricht 72.02113 × 26 (die Masse der wiederholen-Einheiten), 17.00274 (Masse der Hydroxylgruppe), 61.0112 (Masse des ω-Thiol-Endgruppe) + 22.98922 (Masse von Natrium kation) = 1973.55254. Die beobachteten Masse Wert für n = 26 ist 1973.62 die-0.07 ist Da anders als der theoretische Wert. Ein kleiner Signal wird beobachtet bei 2045.74, 72.02113 × 27 (die Masse der wiederholen-Einheiten), 17.00274 (Masse des Ende Hydroxylgruppe), 61.0112 (Masse des ω-Thiol-Endgruppe) + 22.98922 (Masse der Natrium-Kationen) entspricht. Die theoretische Masse ist 2045.57367, die eine 0,17 unterscheidet sich von der beobachteten Masse. Diese kleinen Intensität, ungeraden wiederholen Sie Einheit während den Ring öffnen Polymerisation von Milchsäure Umesterung bezeichnend ist. Ein Drittel ist sehr kleine Spitze bei 2057.73 beobachtet. Dies ist-0.14 Da unterscheidet sich von der theoretischen Masse ein poly(L-lactide) mit einer Carbonsäure Endgruppe (anstatt der Thiol-Endgruppe) mit einer theoretischen Masse von 72.02113 × 27 (die Masse der wiederholten Einheiten) + 17.00274 (Masse des Ende Hydroxylgruppe) + 73.02895 (Masse der Carbonsäure) + 22.98922 (Masse der Natrium-Kationen) = 2057.59142. Diese zusätzliche kleine Unreinheit ist wahrscheinlich die Folge der Einleitung von Wasser in den Ring öffnen Polymerisation von Lactid Monomer.

Poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) Probe gepflegt seine enge Verteilung wenn selektiv durch ein Thiol-ene Reaktion (Abbildung 15) mit Maleimide (Abbildung 16) funktionalisiert. Die Spektren ausgestellt die erwarteten Na+ Addukte von mit Natrium Trifluoroacetate als Cationization-Agent und DHB als Matrix.

MALDI-TOF MS bestätigt die enge Verteilung von poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) nach einer Thiol-ene Reaktion mit Maleimide (Abbildung 16),. Mit den Gleichungen aus Schritt 4, Analyse-Software wurde verwendet, um die folgenden Eigenschaften der Polymer berechnen: Mn: 2310, Mw: 2340, Đ: 1,01. Es sei darauf hingewiesen, dass die Abnahme des Mn und Mw im Vergleich zu das Ausgangsmaterial durch Ionisation Bias (einer der Schwachpunkte der MALDI-TOF-MS) ist. Wenn die Änderung an das Ausgangsmaterial ist relativ klein (~ 97 Da in dieser bestimmten Änderung) und die Dispersität sinkt nach Modifikation, MALDI-TOF MS Berechnungen der durchschnittlichen Molekulargewicht ungenauer werden können.

Um komplette Funktionalisierung der poly(L-lactide) bestätigen, Thiol beendet (Mn = 2500) mit Maleimide über eine Thiol-ene Reaktion, Monoisotopic Masse wurden verwendet, um einen ausgewählten einzelnen n-Mer (26) (Abbildung 17) zu analysieren. Der theoretischen Masse Wert von 26-Mer der poly(L-lactide) Thiol beendet entspricht 72.02113 × 26 (die Masse der wiederholen-Einheiten), 17.00274 (Masse des Ende Hydroxylgruppe), 158.02757 (Masse des ω-Thiol Ende Gruppe verbunden mit Maleimide) + 22.98922 (Masse der Natrium-kation) = 2070.56891. Die beobachteten Masse Wert für n = 26 ist 2070.54, die anders als der theoretische Wert 0,03 Da ist. Artgenossen mit Kalium ionisiert werden auch bei 2086.49, das entspricht 0,05 Da Unterschied Form der theoretische Masse beobachtet. Eine sehr kleine Spitze wird beobachtet bei 2167.58, 72.02113 × 28 (die Masse der wiederholten Einheiten) + 17.00274 (Masse des Ende Hydroxylgruppe) + 72.02168 (Masse des carboxylat-Anion) + 22.98922 (Masse der Natrium-Kationen) + 38.96371 (Masse der Kalium kationen) entspricht. Der theoretische Masse ist 2167.56844 ist ein -0,01 Unterschied aus der beobachteten Masse und ist bezeichnend für die gleiche Spur Verunreinigung von Wasser-Einweihung, die im Ausgangsmaterial beobachtet wurde. Dieses Polymer weist Ionisation mit einem Äquivalent von Natrium, eines Kalium und Verlust eines Protons. Der Verlust der Carbonsäure Proton und Komplexierung mit zwei kationen ist ein Gleichtakt der Ionisation für Monocarboxylic Säure funktionalisierten Polymere. Es ist wichtig zu beachten, dass die gleiche Verschiebung in der Masse, die für die Thiol-ene Reaktionsprodukte beobachtet wird nicht für diese Carbonsäure beendet Verbindung auftritt weiter gibt an, dass es der Thiol-Endgruppe fehlte um die Funktionalisierung Reaktion zu unterziehen.

Figure 1
Abbildung 1:3 x 3 Raster zur Stichprobenermittlung Verhältnis. Mit einem 3 x 3-Raster der Proben, können die relativen Konzentrationen von Cationization Agenten-Analyten-Matrix systematisch empirisch ermitteln, eine optimierte Probenvorbereitung variiert werden. Dies geschieht in der Regel durch eine der drei Variablen Konstanten (15 µL des Analyten Lösung) und erhöht die Menge an die anderen beiden (Cationization-Agent (y-Achse) und Matrix (x-Achse)) halten Komponenten um ein Vielfaches Set (3-fold im Beispiel dargestellt). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 2
Abbildung 2: MALDI-TOF MS Zieltafel. Der MALDI-TOF MS Zieltafel ist eine Metallplatte, die die MALD-TOF MS-Proben in einzelnen Vertiefungen für die Analyse hält. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 3
Abbildung 3: MALDI-TOF Massenspektrum von Probe 1. Dieses gesamte Spektrum zeigt die Gesamtverteilung der Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure (Mn= 5000) mit Na+ und K+ionisiert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 4
Abbildung 4: MALDI-TOF Massenspektrum einer einzelnen Wiederholung Einheit von Probe 1. Dieses Spektrum zeigt eine einzelne Wiederholung Einheit von Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure (Mn = 5000) für Ende Gruppenanalyse. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 5
Abbildung 5: Reaktionsschema für Probe 1 Modifikation. Um die Endgruppen des Ausgangsmaterials zu bestätigen, war Poly(ethylene glycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure mit 2,4-Dinitrofluorobenzene (auch bekannt als Sanger Reagenz) reagiert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 6
Abbildung 6: MALDI-TOF Massenspektrum von Probe 1 Modifikation. Dieses gesamte Spektrum zeigt die Gesamtverteilung der Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure (Mn = 5000) mit 2,4-Dinitrofluorobenzene funktionalisiert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 7
Abbildung 7: MALDI-TOF Massenspektrum einer einzelnen Wiederholung Einheit der Probe 1modification. Um Ende Gruppe Funktionalisierung zu bestätigen, dieses Spektrum zeigt eine einzelne Wiederholung Einheit von Poly (Ethylenglycol) 2-Aminoethyl Äther Essigsäure (Mn = 5000) nach Reaktion mit 2,4-Dinitrofluorobenzene. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 8
Abbildung 8: MALDI-TOF Massenspektrum von Sample 2. Dieses gesamte Spektrum zeigt die Gesamtverteilung der Polyoxyethylen-bis(azide) (Mn = 2000) ionisiert mit Na+ Addukte. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 9
Abbildung 9: MALDI-TOF Massenspektrum einer einzelnen Wiederholung Einheit der Probe 2. Dieses Spektrum zeigt eine Wiederholung Maßeinheit Polyoxyethylen-BIZ-azid (Mn = 2000) um Endgruppen bestätigen Klicken Sie bitte hier, um eine größere Version dieser Figur.

Figure 10
Abbildung 10: Reaktionsschema für Sample 2 Modifikation. Die Endgruppen der Ausgangspunkt Material, Polyoxyethylen-BIZ-azid bestätigen (Mn = 2000) war mit 1-Ethynyl-4-Fluorobenzene über eine Kupfer-katalysierte azid-Alkinen Cycloaddition (CuAAC) reagiert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 11
Abbildung 11: MALDI-TOF Massenspektrum von Beispiel 2 Modifikation. Dieses gesamte Spektrum zeigt die Gesamtverteilung der Polyoxyethylen-bis(azide) (Mn = 2000) funktionalisiert mit 1-Ethynyl-4-Fluorobenzene. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 12
Abbildung 12: MALDI-TOF Massenspektrum einer einzelnen Wiederholung Einheit der Probe 2 Modifikation. Dieses Spektrum zeigt eine einzelne Wiederholung Einheit Polyoxyethylen-bis(azide) (Mn = 2000) reagierte mit 1-Ethynyl-4-Fluorobenzene über Kupfer katalysierten azid-Alkinen Cycloaddition Ende Gruppe Funktionalisierung zu bestätigen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 13
Abbildung 13: MALDI-TOF Massenspektrum von Beispiel 3. Dieses gesamte Spektrum zeigt die Gesamtverteilung der poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 14
Abbildung 14: MALDI-TOF Massenspektrum einer einzelnen Wiederholung Einheit der Probe 3. Das Spektrum zeigt eine einzelne Wiederholung Einheit von poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) Endgruppen zu bestätigen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 15
Abbildung 15: Reaktionsschema für Probe 3 Modifikation. Zur Bestätigung der Endgruppen der Ausgangssubstanz, poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) wurde mit Maleimide über eine Thiol-ene Kupplung reagiert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 16
Abbildung 16: MALDI-TOF Massenspektrum von Beispiel 3 Modifikation. Dieses gesamte Spektrum zeigt die Gesamtverteilung des Produktes der Reaktion zwischen poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) und Maleimide. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 17
Abbildung 17: MALDI-TOF Massenspektrum einer einzelnen Wiederholung Einheit der Probe 3 Modifikation. Um Ende Gruppe Funktionalisierung zu bestätigen, dieses Spektrum zeigt eine einzelne Wiederholung Einheit von poly(L-lactide), Thiol beendet (Mn = 2500) nach der Thiol-ene Reaktion mit Maleimide. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Discussion

MALDI-TOF-Massenspektrometrie ist ein unschätzbares analytisches Werkzeug für Polymer Charakterisierung wegen seiner Fähigkeit, Polymer-Ionen in die einzeln geladenen Zustand und mit minimalen Fragmentierung zu generieren. Diese weiche Ionisierung-Technik nutzt kurze Laserpulse um desorbieren Solid-State-Proben des Polymer Analyten eingebettet in einer Matrix zusammengesetzten Polymer-Ionen in der Gasphase zu generieren. Die Makromoleküle sind in der Regel durch Komplexierung mit Kationen ionisiert, die Matrix zu ermöglichen, ihre Analyse durch Massenspektrometrie hinzugefügt werden. Diese makromolekularen Ionen werden dann durch eine Extraktion Spannung zu bringen in den Feldfreien Bereich des Flug-Rohr die ihre m/Z zu bestimmenden ermöglichen können anhand ihrer Flugzeit zwischen der Ionenquelle und der Detektor5 beschleunigt , 32.

Im Vergleich zu anderen Polymer Charakterisierung, hängt MALDI-TOF MS Spektren Qualität stark von Daten Aufnahmeparameter und Probenvorbereitung. Zwar gibt es keine festgelegten Formel für die Probenvorbereitung, ermöglicht Verständnis der Funktion der einzelnen Komponenten der Probenvorbereitung für eine schnellere empirische Optimierung. Der wichtigste Faktor bei der MALDI-Probenvorbereitung ist Auswahl der Matrix, weil Kompatibilität der Matrix mit der Polymer-Analyt entscheidend ist dafür, dass aufgeregt Matrix, single, bierten Makromoleküle in einen ionisierten Zustand5zu generieren, 15,17,19. Sobald entsprechende Matrix und Cationization Agenten ausgewählt wurden, muss das richtige Verhältnis von Analyten, Matrix und Cationization Agent bestimmt werden. Dies kann erreicht werden, indem man empirisch ein zweidimensionales Raster von Proben (Abbildung 1) auf die MALDI-TOF MS Zieltafel (Abbildung 2) mit steigender Konzentration der Matrix auf einer Achse und zunehmende Cationization Agent Konzentration auf die andere.

Ähnlich wie bei MALDI Probenvorbereitung, gibt es keine festgelegten Formel zur Bestimmung der Aufnahmeparameter Daten; Allerdings sollten bestimmte Trends anzusehen spektrale Optimierung beschleunigen. Reflektron Modus, die Auflösung erhöht, sondern verringert sich insgesamt Signal, wird in der Regel für geringere Masse reicht (in diesen Beispielen unter 4.000 Da) gewählt, wo isotopischen Auflösung erreicht werden kann. In diesen Fällen wurden Monoisotopic Massenberechnungen und Peak picking Methoden verwendet. Für Polymerproben mit Massen über 4.000 Da wurde linearmodus mit durchschnittlichen Massenberechnungen und peaking Kommissionierung Methoden verwendet. Um Signal Auflösung zu verbessern, sollte die Ion-Source-Spannungen in kleinen Schritten mit dem allgemeinen Trend der größeren Masse Polymere mit einer größeren Spannung differenzielle angepasst werden (IS1 versus IS2).

Weile optimierte Probenvorbereitung und Erwerb Parameter bieten Präzision, Massengenauigkeit kann nur durch wirksame Kalibrierung erreicht werden. Die Flugzeit für eine gegebene Masse kann subtil in Bezug auf die Variable Aufnahmeparameter und sogar Platte Positionen variieren, daher eine Kalibrierung sollte durchgeführt werden für jeden Satz der optimierten Aufnahmeparameter um genaue Masse zu erzielen Bestimmungen5,30. Sobald die Aufnahmeparameter und Probenvorbereitung optimiert wurden, sollten die Spektren mit diesen genauen Bedingungen kalibriert werden.

Aufgrund der außergewöhnlichen Auflösung und Massengenauigkeit verzeichneten die optimierte MALDI-TOF-Massenspektren von Polymeren ist diese Technik ein wertvolles kostenloses Werkzeug zur Bestimmung Polymer Massenverteilung Daten geworden. Doch seine Fähigkeit, einzelne Wiederholung Einheiten innerhalb der Massenverteilung Polymer zu lösen bietet einen besonderen Vorteil für Ende Gruppenanalyse im Vergleich zu anderen Polymer Charakterisierung Techniken wie Gel Permeation Chromatographie (GPC) und nukleare Kernspinresonanz (NMR). Dies ist besonders nützlich für die Bestimmung der Treue Ende Gruppe Funktionalisierung Reaktionen und quantitativer Art Ende Gruppe Konjugationen Reaktionen. Diese Handschrift zeigte die Fähigkeit, die Masse der einzelnen Polymer wiederholen Einheiten mit bis zu zwei Dezimalstellen Massengenauigkeit ermöglicht die Bestätigung der Ende Gruppe Änderungen mit einem hohen Maß an Vertrauen zu lösen. Mit der erheblichen Fortschritte, die kürzlich im Bereich der Präzision Polymersynthese vorgenommen wurden, MALDI-TOF-MS wird ein zunehmend wichtiges Werkzeug für Makromolekulare Struktur und Funktionalität zu bestimmen.

Disclosures

Die Autoren haben finanzielle Interessen im Zusammenhang mit der kugelförmigen Kalibrierstandards, die in dieser Studie verwendet.

Acknowledgments

Die Autoren erkennen, dass das intelligente Materialien Design, Analyse und Verarbeitung Consortium (SMATDAP) von der National Science Foundation unter Kooperationsvertrag IIA-1430280 und das LA-Board of Regents für ein graduate Fellowship (MEP) finanziert. Polymerproben für diese Experimente wurden durch MilliporeSigma (Sigma-Aldrich) zur Verfügung gestellt.  Open-Access-Publikation dieses Artikels wird von MilliporeSigma gesponsert.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
polyoxyethylene bis(azide) (Mn=2000) MilliporeSigma (Aldrich) 689696 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/689696?lang=en&region=US
poly(ethylene glycol) 2-amino-ethyl ether acetic acid (Mn= 5000) MilliporeSigma (Aldrich) 757918 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/757918?lang=en&region=US
poly(L-lactide), thiol terminated (Mn=2500) MilliporeSigma (Aldrich) 747386 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/747386?lang=en&region=US
SpheriCal®  peptide low MilliporeSigma (Sigma-Aldrich) PFS20 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/pfs20?lang=en&region=US
SpheriCal®  peptide medium MilliporeSigma (Sigma-Aldrich) PFS21 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/pfs21?lang=en&region=US
SpheriCal®  peptide high MilliporeSigma (Sigma-Aldrich) PFS22 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/pfs22?lang=en&region=US
2,4 dinitrofluorobenzene TCI A5512
maleimide MilliporeSigma (Aldrich) 129585 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/129585?lang=en&region=US
1-ethynylfluorobenzene  Fisher Scientific 766-98-3
triethylamine MilliporeSigma (Sigma-Aldrich) 471283 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/471283?lang=en&region=US
N,N,N',N",N"-pentamethyldiethylenetriamine MilliporeSigma (Aldrich) 369497 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/369497?lang=en&region=US
Copper(I)Bromide MilliporeSigma (Aldrich) 254185 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/254185?lang=en&region=US
glacial acetic acid Fisher Scientific A38212
sodium metabisulfite MilliporeSigma (Sigma-Aldrich) 13459 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigald/13459?lang=en&region=US
potassium trifluoroacetate MilliporeSigma (Aldrich) 281883 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/281883?lang=en&region=US
trans-2-[3-(tert-butylphenyl)-2-methyl-2-properylidene]malononitrile MilliporeSigma (Aldrich) 727881 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/727881?lang=en&region=US
a-cyano-4-hydroxycinnamic acid MilliporeSigma (Sigma) C8982 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/c8982?lang=en&region=US
tetrahydrofuran Fisher Scientific T425-1
dichloromethane VWR Analytical BDH1113-4LG

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