Summary
Vi etablerede en roman kirurgisk protokol for to-foton billeddannelse af levende mus lever med minimal invasion. Med denne teknik identificeret vi den detaljerede struktur i leveren under LPS-induceret endotoxemia. Vi forventer, at denne metode kan bruges til at bestemme effektiviteten af forskellige reagenser behandling af hepatisk leukocyt migration.
Abstract
Sepsis er en type af svær infektion, som kan forårsage organsvigt og væv skader. Selvom dødelighed og sygelighed priser forbundet med sepsis er ekstremt høje, ingen direkte behandling eller Organrelaterede mekanisme er blevet undersøgt i detaljer i realtid. Leveren er det centrale organ, der administrerer toksiner og infektioner i den menneskelige krop. Heri, vi havde til formål at udføre intravital billeddannelse af mus lever efter induktion af endotoxemia spore motilitet af immunceller, såsom neutrofile og leveren kapsulær makrofager (LCMs). Derfor, vi har designet en roman kirurgisk metode til eksponering af leveren med minimalt invasiv kirurgi. Mus blev intraperitoneal injiceret med LPS (LPS), en fælles endotoxin. Ved hjælp af vores nye kirurgisk fremgangsmåde for eksponering og intravital billeddannelse af mus lever, fandt vi neutrofile rekruttering i LPS-behandlede LysM-grøn fluorescerende proteiner (NGL) var mus lever steget sammenlignet med det i fosfatbufferet saltvand-behandlede leveren. Efter LPS behandling, antallet af neutrofile steget betydeligt med tiden. Derudover visualiseret bruger CX3Cr1-NGL mus, vi med held lever fastboende makrofager kaldet LCMs. Derfor, for at undersøge effekten af nye reagenser til at styre immun mobilitet i vivo, fastlæggelsen af motilitet og morfologi af neutrofile og LCMs i leveren kan give os mulighed at identificere terapeutiske effekt i orgel bankerot og væv skader forårsaget af leukocytter aktivering i sepsis.
Introduction
Leveren er den store metaboliske orgel i pattedyr; det fungerer som et kontrol tårn for energi, hormoner og afgiftning1. På grund af dens betydning, har forskerne udført mange i in vitro og i vivo eksperimenter for at belyse forandringer i leveren under betændelse. Intravital mikroskopi er blevet brugt til at fange levende billeder fra leveren2 . Faktisk, forskellige leveren Billeddannende metoder har været indført2,3,4,5,6. Men for at udvikle en mere forenklet kirurgisk tilgang og opnå stabilisering af målorgan og immunceller, vi har designet en enkel protokol, der kan guide forskere for at minimere deres indsats for intravital billeddannelse.
I denne undersøgelse indførte vi en stabil og roman billeddiagnostiske afdeling og kirurgisk teknik, der kunne bruges til at minimere blødning og mulige infektioner. Vi bekræftede, at leveren forblev intakt i mere end 2 timer. Med denne metode identificeret vi med held morfologier LCMs7 og neutrofile septisk betingelse. Da denne metode minimerer fysiske og biologiske konfunderende faktorer som bævende og uventede betændelse under kirurgisk procedure, forventer vi, at denne metode kan bruges til at observere akutte reaktioner af immunceller i leveren som reaktion på reagenser som LP'ER.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer blev gennemført i overensstemmelse med retningslinjerne i den institutionelle Animal Care og brug Udvalget af Yonsei University College of Medicine, Korea. LysM-grøn fluorescerende proteiner (normal god landbrugspraksis; normal god landbrugspraksis / +) mus8 og CX3Cr1-normal god landbrugspraksis (NGL / +)9 mus på 8-12 ugens i alder blev brugt til intravital billeddannelse. Alle kirurgiske værktøjer blev autoklaveres og desinficeres med 70% alkohol.
1. speciel-designet mus lever imaging kammer med tilhørende værktøjer
- Mus lever imaging kammer design
- Gøre et kammer i den følgende størrelse for mus lever imaging (figur 1): indre kammer (120 mm længde × 160 mm bredde × 30 mm højde), ydre kammer (100 mm længde × 100 mm bredde × 24 mm højde), bolte (Ф 3 mm × 30 mm højde), nødder (Ф 4 mm) , og fløj-formet nødder (Ф 4 mm).
- Måle den hærdning agent og elastomer base i 1:9 forholdet til at gøre alt af 120 g af silikone.
- Sæt flydende silikone blandingen i en 250 mL Erlenmeyerkolbe og bland det godt. Derefter sætte kolben i en ekssikkator og fjerne luftbobler for omkring 1 h under vakuum gennem pumpen.
- Hæld den flydende silikone mix i en specialdesignet mus kammer så højt som 10 mm højde og lad det kur for et par dage (figur 1A).
- Forberedelse af cover dias og leveren fastsættelse bed
- Fastgør dækslet glas ved hjælp af silikone lim på metalramme. Lad det tørre i 1 dag (figur 1B).
- For at effektivt holde destilleret vand til vand fordybelse linse, er en semipermanent vand-blokerende struktur vigtigt. Gøre 1 mm oprunding silikone lim og hærde det natten over.
- Bland hærdning agent og elastomer base og derefter hælde det i en 6-godt plade i en højde af omkring 8-10 mm. Udfør hærdning som beskrevet i 1.1.2-1.1.4.
2. forberedelse af LP'ER
- Forberede sterile 1 × fosfatbufferet saltopløsning (PBS) til at fortynde LP'ER pulver fra Salmonella enterica serotype enteritidis. (1 × PBS: 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1,8 mM KH2PO4).
- Pre heat PBS i vandbad ved 37 ° C, og åbne LP'ER pulver flaske (25 mg) omhyggeligt.
- Ved hjælp af en pipette støtte, hæld den steril PBS (5 mL) i LPS pulver flaske og blidt røre eller suspendere løsning for at forberede stamopløsningen.
Bemærk: Efter LPS pulver er flydende, barske vortexing kan forårsage bobler. Undgå at komme bobler til at minimere tab, når du foretager delprøver i 1,5 mL rør. - Gemme LP'ER stamopløsning −20 ° C, og fortynd det ind i en 1 mg/mL LP'ER injektionsvæske.
- Indsprøjte 1 mg/mL LP'ER løsning (20 mg/kg) i bughinden ikke bedøvede musen ved hjælp af en 1-mL sprøjte. Dyret kontrol indsprøjtes den samme mængde af PBS.
- Vente i 2 timer for tilstrækkelig inflammatorisk respons.
3. forberedelse af Texas-rød Dextran at pletten blodårerne
- Forbered to 15 mL koniske rør og 10 mL steril PBS.
- Fortynd Texas-rød Dextran pulver (25 mg) i 3 mL PBS og bland det godt. Overfør blandingen til en tom 15 mL konisk tube.
- Overføre de resterende PBS (7 mL) til 15 mL konisk rør indeholdende dextran blanding (3 mL).
- Tilslut et 0,45 µm sprøjte filter til spidsen af en 10-mL sprøjte. Filteret sprøjte bør erstatte nål.
- Filtrer dextran blanding (10 mL). Tryk på sprøjten jævnt for at undgå at spilde.
- Undvære 500 µL af 2,5 mg/mL dextran løsning i 1,5 mL tube lys-blokeret og gemme det på −20 ° C. Når optøet, opbevares ved 4° C.
4. kirurgisk proces
- Desinficere tabellen kirurgi og alle instrumenter bruger 70% alkohol før operationen. Derefter, sæt værktøjer til leveren kirurgi og justere den varme plade til 37 ° C (figur 2A, B).
- For anæstesi, intraperitoneal injicere musene med 30 mg/kg af Tiletamin/zolazepam og 10 mg/kg af xylazin. Disse løsninger kan blandes og fortyndes i PBS for samtidige injektion. Bekræft anesthetization ved forsigtigt at trykke på tåen af musen. Fortsætte næste skridt, når der ingen refleks.
- Anvende lille mængde af øjet salve til at forhindre tørhed af musens nethinden.
- Fjerne kropsbehåring omkring maven område ved hjælp af hårfjerning fløde (figur 2 c).
- Injicér 200 µL af Texas-rød Dextran løsning (koncentration af 2,5 mg/mL) via hale vene eller retro-orbital injektion ved hjælp af en insulin sprøjte (figur 2D).
- Markere området lige subcostal med en markør. Linjen bør drages formet som et sværd proces til slutningen af ribben. Skære epidermis med pincet og saks (figur 2E, F).
- Åbn bughulen ved hjælp af mikro-saks og pincet, og udsætte leveren omhyggeligt. Den venstre laterale lap bør være sammenrullet ud ved hjælp af bomuld svaberprøver (figur 2 g, H).
- Hæld 500 µL sterilt PBS på bughulen at forhindre tørhed af leveren.
- Placere musen i ret-decubitus positionen i en specialdesignet kammer, og anvende en lille mængde af væv lim til silicium sengen. Derefter vedhæfte omhyggeligt leveren ved hjælp af bomuld svaberprøver (figur 2I).
Bemærk: Fordi levervævet er ekstremt letsmuldrende, ikke mekanisk trække ud af leveren. Forsigtigt rulle det ud med bomuld svaberprøver. - Et par sekunder senere, våd leveren igen med 500 µL af steril PBS til at undgå udtørring af leveren. Placer den metalramme på leveren og ordne det fast med nødder (figur 2J).
5. intravital billeddannelse af leveren med to-foton mikroskopi
- Køre ZEN software (Carl Zeiss) til at aktivere laser, bølgelængden 880 nm, og sæt grøn, og rød kanaler. Justere laser power ifølge fluorescens intensitet (figur 3A). Emission filteroplysninger er som følger: grøn/Alexa488, 500-550 nm og rød/Alexa 555, 575-610 nm.
- Sted i salen på imaging scenen og placere 20 X vand-fordybelse mål linse tæt på dækslet glas.
- Fix silikone gummi varmer under mus kroppen til at opretholde sin kropstemperatur (figur 3B).
- Drop 500 µL af destilleret vand på en metalramme, og derefter trække mål linse tæt på leveren (figur 3 c).
- Justere fokus og afgøre, dybde og tid af det billeddiagnostiske område.
- Adfærd billeddannelse.
- For langsigtet imaging, injicere halv dosis af Tiletamin/zolazepam og xylazin blanding hver time under imaging. Opretholde kropstemperaturen på mus ved 37 ° C er afgørende i denne fase. Altid holde på øjet mus, da anesthetization tid adskiller sig fra alle de mus.
Bemærk: Denne metode er ikke egnet til genopretning efter kirurgi og billedbehandling. Vi ofrer etisk musen umiddelbart efter operationen. - Tjek de pedal reflekser for hvert 30 min for stabile anesthetization.
6. dataanalyse
- Åbne data analyse software Volocity og derefter importere de rå data i biblioteket i softwaren.
- Fjern støj fra billedet, der passer til situationen og tage et snapshot.
Bemærk: For at få glatte billeder, bruge filteret 'Fine' eller 'Median'. Derudover brug funktionen 'Kontrast enhancement' for at gøre mørke eller slørede billeder klarere. - Passe de redigerede elementer til 100% og eksport som JPEG eller TIFF filer til billeder, snapshot og AVI filer til film.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En enkel og meget stabil billeddiagnostiske afdeling blev udtænkt. Bunden af kammeret var dækket med silikone, som forhindrede glider musen kroppen og organer. Derudover fordi silicium har den rette mængde af elasticitet, kunne det forhindre forventede skader induceret af presset af diasset cover (figur 1A, C). Andet, væv-safe lim (Vet bond) blev anvendt for at fastsætte den udpakkede leveren på cirkel-formede silikone seng. Denne metode gjorde det muligt at undgå skælvende forårsaget af hjerteslag eller respirational bevægelse. Endelig, et metal dække dias var placeret og fastsættes af bolte og møtrikker baseret på kropsstørrelse af mus og placeringen af den fremspringende leveren (figur 1B-D). Når anæstesi blev udført korrekt, kan disse indstillinger vare længere end 6 h.
Før du starter kirurgi, blev kropstemperaturen hos musene kontrolleret ved at anbringe dyret på en varme-kammer, der var pre-sæt til 37 ° C (figur 2A). Næste, for at undgå sekundær infektion, alle nødvendige værktøjer til musen kirurgi og imaging blev steriliseret med 70% alkohol og/eller autoklaveres at forhindre sekundær infektion (figur 2B). Derefter blev musen kropsbehåring fjernet, især fra den abdominale område, med en hårfjerning fløde (figur 2 c). Før du foretager indsnittet, blev huden steriliseret med povidon-jod. Blodgennemstrømningen var mærket med Texas-rød Dextran via vene injektion (figur 2D). En linje, der begyndte på formet som et sværd proces og endte på de rigtige ribben blev trukket. Lige subcostal incision linjen hjalp minimere blødning. Med en skalpel eller mikro-saks, var dissektion begyndt; maven blev ikke åbnet for meget for at undgå udvisning af tarmene fra bughulen (figur 2E, F). Fedt og væv lag blev fjernet med mikro-dissektion saks og pincet, og området indsnit blev renset med steriliseret PBS og bomuld svaberprøver (fig. 2 g). Venstre laterale lap, den største af de fire lever fliger, var taget ud med bomuld svaberprøver og derefter fastgjort til silicium sengen ved hjælp af en væv bond (Vet bond). Levervævet var meget smuldrende, var leveren flyttet ved hjælp af bomuld svaberprøver (figur 2 H, jeg). Efter anvender metal dække glas, blev leveren udsat for billeddannelse. For at undgå tørhed, blev steriliseret PBS anvendt til mellemrummet mellem lever og dække glas (figur 2J). Højden af dækslet glas blev justeret med nødder efter behov.
To-foton mikroskopi var udstyret med X, Y, og Z aksen mikrometer controller og skærmet med sort gardin (figur 3A). Laseren var stabilt mode-låst på Zen software. For at opnå stabil imaging, skulle drivende af målorgan være forhindret. Derfor, ud over billeddiagnostiske afdeling og kirurgisk metode, ledningerne til den elektroniske varmepude var sikret fra stadiet billedbehandling og velorganiseret af selvklæbende bånd (figur 3B). Endelig, en tilstrækkelig mængde destilleret vand blev føjet til toppen af dækslet glas til vand fordybelse linse (figur 3 c).
Blodgennemstrømningen var tydeligt angivet på skærmen efter intravenøs injektion af Texas-rød Dextran. For at fange både røde og grønne samtidig, vi udførte imaging med en bølgelængde på 880 nm. Ifølge intravital imaging analyse, et passende antal neutrofile altid cirkulerende blod i PBS tilstand. Mens antallet af neutrofiler i LPS behandlede mus var steget betydeligt. Bemærk, at en masse af neutrofiler cirkulerer inde i blodbanen, men de ikke vandrer uden for fartøjet i inflammatorisk tilstand. (Figur 4A, supplerende Movie 1). Neutrofiler i LPS-behandlede mus blev mere fast levet op til den luminale overflade af det fartøj, der foretages hyppigere påvisning af neutrofiler i beholderen (figur 4A, supplerende Movie 1). Bortset fra motilitet af neutrofiler blev LCMs i CX3Cr1-NGL mus observeret på overfladen af levervævet og ikke dybt inde i vævet (figur 4B). LCMs viste lidt bevægelse eller aktivering i leveren selv i LPS-behandlede mus.
Figur 1 . Design af leveren kammer og subsidiær værktøjer. (A) hælde silikone blandingen ind i custom-designet mus kammeret. B dimensioner af diasset metal dække (1 tomme = 25,4 mm, Ф = diameter). C billede viser plast specialdesignede lever kammer fyldt med silikoneelastomer. (D) andre dele blev brugt til at samle de lever kammer. Fastsættelse af bolte og møtrikker var lavet af jern. Pile angivet bolte og møtrikker, henholdsvis i (C) og (D). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 . Kirurgiske skridt for leveren kirurgi. A Metal og gummi varme plader ved 37° C og DC temperatur controller før operationen. (B) samlede kirurgi og understøttende værktøjer til leveren kirurgi (a. bomuld svaber og container, b. 70% alkohol, c. papir væv, d. razor, e. Hårfjerningscreme, f. specialdesignede kammer, g. kirurgisk tape, h. hjemmelavede lever piedestal, i. Vingemøtrikker og nødder, j. metal dække dias, k. mikro-dissektion saks, l. pincet, m. saks, n. 3 mL sprøjte, o. markør, p. 0,3 mL insulin sprøjte, q. 1-mL sprøjte). Procedure for leveren kirurgi (C-J). C anvendelse hårfjerning fløde på webstedet abdominal. (D) retro-orbital injektion af mus med Texas-rød Dextran. (E) markerer webstedet snit med en markør. (F) skære epidermis med saks og pincet. (G) at gøre et snit ind i bughulen. (H) trække den venstre laterale lap forsigtigt. (I) at fastgøre lap til leveren piedestalen ved hjælp af vet bond. (J) billede af det endelige sæt op. Nødder var fastgjort til diasset metal dække, og derefter dække dias var fastgjort med sommerfugl nødder. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 . Indstillinger for to-foton mikroskopi og billedbehandling fase. A view to-foton mikroskopi (LSM 7 MP) og den billeddiagnostiske fase, som kan flytte i x og y retninger. (B) en lever imaging kammer med en gummi, varme pad var fastgjort ved hjælp af tape til at dække mus. C droppe destilleret vand med en pipette mellem objektive linse og dækslet glas. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4 . Visualisering af neutrofile og leveren kapsulær makrofager i leveren af levende mus. (A) udvidet fokus øjebliksbillede af neutrofiler i leveren af LysM-NGL mus. Kontrol billede var fra PBS-behandlede mus. LP'ER billedet var fra LP'ER-behandlede mus. Billeder blev erhvervet ved hjælp af en 20 X / 1,0 NA vand-fordybelse linse (synsfelt [FOV] = 424.3 µm × 424.3 µm, dybde = 40 µm, Skive Interval = 1 µm, tidsintervallet = 60 s, cycle = 31). Skalalinjen = 50 µm. (B) indre og overflade område øjebliksbillede af LCMs i leveren af CX3Cr1-NGL mus. Billeder blev erhvervet ved hjælp af en 20 × / 1,0 NA vand-fordybelse linse (FOV = 424.3 µm × 424.3 µm, dybde = 40 µm (indre) / 10 µm (overflade), Skive interval = 1 µm, tidsintervallet = 60 s (indre) / 20 s (overflade), cycle = 31). Skalalinjen = 50 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Supplerende Movie 1. Sammenligning af PBS behandlet leveren versus LPS behandlede leveren. Tydelig forskel i to forskellige betingelser er godt observeret. I LPS behandlede leveren, antallet af neutrofile er betydeligt forhøjet og motilitet er faldet. Stabiliteten af filmen i begge betingelser overholdes. Blodgennemstrømningen er mærket med Texas rød dextran. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Leveren har været aktivt studeret af mange grupper3,10, på grund af betydningen af dens funktion. For eksempel, foreslået Heymann et al. et delikat metode ved hjælp af agarosegelelektroforese. Selvom denne metode fandtes for at være meget præcis, tager indstillingen Agarosen tid. Dog med vores metode, alle procedurer kan gennemføres inden for 30 min, minimere andre forstyrrende faktorer. Andet, stabilisere leveren er ekstremt vigtigt, fordi hjerteslag kan forstyrre videoen. For at fjerne dette fænomen, vi har justeret mus i den rette decubitus holdning.
En anden afgørende skridt i denne protokol var produktion af metal cover ramme og dens placering på den metal bar. Den vigtigste hindring, som vi står over for var at afgøre, hvordan man kan overvinde skørhed af leveren efter lever fiksering ved hjælp af en passende mængde pres. I første omgang, når kun butterfly nødder blev anvendt til at holde det dække dias, blodcirkulationen var hæmmede, og leveren var ude af stand til at udholde vægten af diasset dækning. I stedet, vi udtænkt en metode til at rulle ned bolte før markedsføring diasset dække langs linjen. Da dække dias blev støttet af bolte, gav plads for leveren tykkelsen og hermed det, trykke ikke hårdt ned i leveren og endnu fastholdt den balance og fiksering. Bruger LysM-NGL mus6, bekræftede vi, at dette design kan tillade visualisering af neutrofiler i sinusoids og centrale vener. CX3Cr1-NGL mus5 blev også brugt i denne model for at observere LCMs. LCMs var ofte findes på overfladen af leveren.
Højden af den lever piedestal eller silicium seng, var også væsentligt. Hvis det var for højt, vil blodcirkulationen i leveren blive afbrudt. Når højden af leveren piedestalen var for lavt, var det svært at opretholde stabil fiksation af leveren. Fordi alle mus havde forskellige kroppen størrelser, produceret vi silicium senge, der havde forskellige højder ved hjælp af en 6-godt plade, magen til, bruges til cellekultur. På denne måde har vi kunnet tilpasse kammer efter størrelsen af hver mus. I sammendrag, vi har designet en roman og enkel protokol for intravital billeddannelse af musen leveren til at undersøge morfologi og motilitet af immunceller i leveren under betændelsestilstande.
Denne nye protokol kunne være meget nyttigt for forskere i feltet, der ønsker at observere akut immunresponset af leveren. Men med denne metode, forskere kan ikke gennemføre langsigtede billeddannelse længere end 6 h på grund af leveren fiksering med væv lim. Denne protokol er en engangs eneste metode, og derfor, mus straks må ofres efter billeddannelse. Når leveren er løsrevet fra silicon seng, vil leveren til sidst være strippet fra sengen, hvilket resulterer i overdreven blødning. Genindførelse og suturering af abdominale område er derfor umuligt for fremtidige observation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ikke konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Denne undersøgelse blev støttet af tilskud fra National Research Foundation af Korea (NRF) finansieret af Korea regeringen (MSIP; grant no. 2016R1A2B4008199 til Y-M. H.), og sundhedsministerium & velfærd, Republikken Korea (giver nummer: HI14C1324).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Custom designed chamber | Live Cell Instruments | Custom-designed size | |
| Metal cover slide | Live Cell Instruments | Custom-designed size | |
| Cover glass | Electron Microscopy Sciences | #72204-03 | |
| Sylgard 184 Silicone elastomer kit | Dow Corning | ||
| Erlenmeyer flask | DURAN | 21 216 36 | |
| Cell culture plate (Flat type) | HYUNDAI Micro Co. | H31006 | |
| Desiccator | ADARSH | 55204 | |
| High Q BOND SE 5 mL | BJM LAB | To make semi-permanent dam | |
| Flexible Silicone Rubber Heaters | Omega | SRFR/SRFG SERIES, M1250/0800 | |
| DC power supply | Toyotech | DP30-03A | |
| Phosphate-buffered saline | Home-made | ||
| Lipopolysaccharides (LPS) from Salmonella enteria serotype enteritidis | Sigma-Aldrich | L6011 | |
| Texas Red Dextran | Thermo Fisher Scientific | D1830 | |
| 15 mL High-clarity polypropylene conical tube |
FALCON | 14-959-49B | |
| 0.45 μm filter (Minisart Syringe Filter) | Sartorius | 16555k | |
| 1.5ml Micro Tube, Amber | Axygen | MCT-150-X | For light-blocking |
| 1 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S01 | |
| 3 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S03 | |
| 10 mL syringe | Korea Vaccine | KV-S10 | |
| 0.3 mL insulin syringe | Becton Dickinson | 324900 | |
| Hair removal cream 100 mL | Body natur | ||
| Cotton swab | ABDI | ||
| Zoletil 50 5 mL | Virbac | ||
| Rompun 10 mL | Bayer | ||
| Heating plate | Live Cell Instruments | PH-S-10 | Custom-designed size |
| DC controller | Live Cell Instruments | CU-301 | |
| Microdessection Scissors | Harvard Apparatus | 72-5418 | |
| Scissors | Roboz | RS-5882 | |
| Forceps | Roboz | RS-5137 | |
| Vet bond | 3M | 1469SB | |
| ZEN software (Black Edition) | Carl Zeiss | Program for LSM 7 MP | |
| LSM 7 MP | Carl Zeiss | ||
| Volocity | PerkinElmer | Analysis program |
References
- Girard, J. R., et al. Fuels, hormones, and liver metabolism at term and during the early postnatal period in the rat. J Clin Invest. 52 (12), 3190-3200 (1973).
- Marques, P. E., et al. Imaging liver biology in vivo using conventional confocal microscopy. Nat Protoc. 10 (2), 258-268 (2015).
- Dasari, S., Weber, P., Makhloufi, C., Lopez, E., Forestier, C. L. Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics. J Vis Exp. (101), e52303 (2015).
- Honda, M., et al. Intravital imaging of neutrophil recruitment in hepatic ischemia-reperfusion injury in mice. Transplantation. 95 (4), 551-558 (2013).
- Jenne, C. N., Wong, C. H., Petri, B., Kubes, P. The use of spinning-disk confocal microscopy for the intravital analysis of platelet dynamics in response to systemic and local inflammation. PLoS One. 6 (9), e25109 (2011).
- Ritsma, L., et al. Intravital microscopy through an abdominal imaging window reveals a pre-micrometastasis stage during liver metastasis. Sci Transl Med. 4 (158), 158ra145 (2012).
- Sierro, F., et al. A Liver Capsular Network of Monocyte-Derived Macrophages Restricts Hepatic Dissemination of Intraperitoneal Bacteria by Neutrophil Recruitment. Immunity. 47 (2), 374-388 (2017).
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96 (2), 719-726 (2000).
- Jung, S., et al. Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion. Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).
- Heymann, F., et al. Long term intravital multiphoton microscopy imaging of immune cells in healthy and diseased liver using CXCR6.Gfp reporter mice. J Vis Exp. (97), (2015).
