Summary
تمكين بيوينديكيشنز في الموقع تحديد مدى ملاءمة بيئة للأنواع المهددة بالانقراض من بلح البحر. يصف لنا طريقتين استناداً إلى الأحداث تعرض بلح البحر لؤلؤة المياه العذبة في أقفاص للموائل نهر أوليجوتروفيك. وتنفذ كلا الأسلوبين في المتغيرات للمياه المفتوحة والبيئات المائية هيبورهيك.
Abstract
معرفة مدى ملاءمة الموئل بلح البحر في المياه العذبة خطوة هامة في الحفاظ على هذه المجموعة من الأنواع المهددة بالانقراض. يمكننا وصف بروتوكول لتنفيذ في الموقع اختبارات التعرض للأحداث ضمن مستجمعات نهر أوليجوتروفيك على مدى فترات مدتها شهر واحد وثلاثة أشهر. يتم عرض طريقتين (في كل التعديلات) لتقييم معدل النمو والبقاء على قيد الحياة قضاء الأحداث. تختلف الأساليب والتعديلات في قيمة بيوينديكيشن المكان ولكل منها فوائد، فضلا عن القيود. يعمل الأسلوب قفص الرملية مع مجموعة كبيرة من الأفراد، ولكن فقط لبعض الأفراد الذين يتم قياس ويتم تقييم النتائج بكميات كبيرة. في أسلوب القفص مش، أبقى الأفراد وقياسها بشكل منفصل، ولكن يتم تقييم عدد فردي منخفض. تعديل التعرض للمياه المفتوحة من السهل نسبيا على تطبيقها؛ يظهر نمو الأحداث المحتملة للمواقع، ويمكن أيضا أن تكون فعالة بالنسبة لاختبار السمية المائية. تعديل التعرض داخل سرير يحتاج ارتفاع عبء عمل ولكن هو أقرب إلى ظروف بيئة الأحداث الطبيعية وأنه من الأفضل للإبلاغ عن مدى ملاءمة الحقيقية للمحليات. من ناحية أخرى، يلزم تكرار أكثر في هذا التعديل بسبب قابليته البيئة عالية-هيبورهيك.
Introduction
التعرض للكائنات الحية التجريبية في الموقع مع التقييم اللاحق لحالتهم هو أحد السبل الممكنة للحصول على معلومات حول الجودة البيئية، ومدى ملاءمة الموقع (خاصة) لأنواع. ضمن الحيوانات، مثل بيوينديكيشن ينطبق أساسا على اللافقاريات الصغيرة التي قادرة على العيش في مساحة محدودة يحدها. مراحل الشباب من الأصداف (Bivalvia) هي واحد مثل هذا الكائن الحي مناسبة المجموعة1.
ذات الصدفتين أونيونيداي الأسرة عنصر هام جداً للنظم الإيكولوجية المائية2. ومع ذلك، هذه الأنواع هي غالباً خطيرة المهددة بالانقراض، لا سيما في الجداول والأنهار. البعض منهم تتسم بأنها 'مظلة الأنواع' الحفظ الذي يرتبط ارتباطاً وثيقا بالمحافظة تيار كامل [بيوتوب] والتي تتطلب نهج شامل3. هذه الحيوانات لديها دورة الحياة المرتبطة بالعديد من العناصر المتعلقة بالبيئة، من المياه الكيمياء4،5 إلى التغيرات في سكان الأسماك التي تكون بمثابة المضيفين يرقات بلح البحر6. لأن الأحداث بلح البحر كثيرا ما تمثل مرحلة حرجة من بلح البحر دورة الحياة، ومدى ملاءمة الموقع لتنميتها في هذه المرحلة أمر حاسم لتنمية السكانية أنواع ناجحة في منطقة محلية.
بلح البحر لؤلؤة المياه العذبة (فوبم، مارغاريتيفيرا مارغاريتيفيرا؛ أونيونيدا، بيفالفيا) حدوث ذات الصدفتين المهددة في تيارات الأوروبية أوليجوتروفيك. أعدادهم وقد انخفض بشكل كبير خلال 20 القرنالسادس عشر عبر منطقة التواجد. ويبدو أن الانخفاض الحالي في استنساخ الأنواع في أغلبية السكان في أوروبا الوسطى أساسا يسببه منخفض جداً لبقاء صفر من الأحداث خلال السنوات القليلة الأولى من حياتهم. ويفترض أن الأحداث فوبمس العيش لسنوات عديدة في هيبورهيك الضحلة المنطقة7، منها الظروف وتغيراتها لا تزال غير وصفاً جيدا. وعلاوة على ذلك، حتى السنة الثانية من العمر، الأحداث فقط بعد ليصل إلى حوالي 1 ملم، حيث أنهم من الصعب جداً العثور على كميات كبيرة من الرواسب تحت الظروف الطبيعية8. ولذلك، تجارب مع الأحداث الأسير ضرورية لدراسة تلك البيئة.
هناك آلاف الأحداث داخل "التشيكية خطة العمل" المتعلقة "المياه العذبة بيرل بلح"9، ارتفاع كل عام من برنامج تربية شبه طبيعية. ومع ذلك، هناك مسألة منها الموائل والمحليات مناسبة لدعم السكان ناجحة من هذه الأحداث، أو لإعادة إدخال الأنواع في نهاية المطاف. بيوينديكيشنز في الموقع الحالي وسيلة لإيجاد الجواب.
على الرغم من أن معدلات بقاء غير متناسقة من بلح البحر الأحداث في أقفاص التعرض لوحظت في بعض الأعمال السابقة التي تساءلت عن مدى ملاءمة الأحداث بلح البحر بيوينديكاتورس10، وقد أكدت عدة دراسات أجريت مؤخرا تطبيق أساليب الأحداث من التعرض لاختبار11،،من1213جودة المياه. بالإضافة إلى ذلك، وقد ثبت أن هناك عدة عوامل تحتاج إلى أخذها في الاعتبار عند تفسير نتائج هذه الدراسات خاصة، مثل الأسهم من أصل14 والآثار المستمرة لظروف اليرقات15.
تبرز المسألة كيفية تثبيت الأحداث التجريبية في المحليات المختبرة والأكثر فعالية تقييم حالتهم. ونشرت أول تطبيق صارم في الموقع طرق التعرض مع الأحداث فوبمس بودينسيك16. الأحداث فوبم الأفراد وأبقى في أقفاص ورقة، يتعرض في المياه التدفق الحر لتيارات، والبقاء والنمو فقد حددت كميتها بعد عدة أسابيع من التعرض. النهج الذي وضعت أصلاً كأسلوب تربية شبه الصناعية، ولكن أبرز صاحب البلاغ أيضا قابليته لتقييم متطلبات الموئل ونوعية المياه. على الرغم من بقاء الأحداث فوبم بطبيعة الحال منخفضة جداً على مقياس من أشهر/سنوات وإلا عدد قليل جداً من الحيوانات سوف البقاء على قيد الحياة، وأن معدل البقاء على قيد الحياة يمكن أن تكون علامة جيدة للتأثير البيئي على نطاق من عدة أسابيع16. على مدى سنوات بحوث، وطرق التعرض وضعت عملا بعقد بلح البحر الأحداث التجريبية في تيار الموائل، وتقييم معدلات النمو والبقاء على قيد الحياة؛ وتشمل هذه المربعات الرملية17، الصوامع بلح البحر على أساس مبدأ القاع18، وشتى أخرى التعرض أقفاص (تلخيص بالصمغ والزملاء)11. لأن الأحداث تحدث طبيعيا في المنطقة الضحلة هيبورهيك7، تطبيق أجهزة تجريبية داخل أسفل تيار من المرغوب فيه جداً.
في المادة، يصف لنا استخدام جهازين التعرض فوبمس: أنا) تعديل بودينسيك ورقة أقفاص ("أقفاص مش") أيضا تمكين بيوينديكيشن الاختبار في ظروف هيبورهيل؛ وثانيا) مربعات Hruška الرملية ("أقفاص الرملية"). البروتوكول ويصف تطبيق كلا الأسلوبين في ظروف المياه وهيبورهيك المفتوحة (أيالمتغيرات الأربعة للتعرض هي وصف). الأساليب تعديل تدريجيا وتوسعت على مدى أكثر من 15 عاماً تطبيق ضمن "خطة العمل التشيكية" "المياه العذبة بيرل بلح"9 والتحقق من قبل مجموعة من التجارب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. مش القفص
ملاحظة: انظر الشكل 1.
- إعداد المواد
- إعداد المواد للجزء في المختبر من التجربة: ~ 1-2 لتر نهر المياه الواحدة مش القفص أقفاص مش (1 الجسم الرئيسي من البلاستيك، والأغطية البلاستيكية 2، 2 ورقة من ثقب سيتا التقنية الخاصة مع المسام ميكرومتر 340، 4 البراغي والمكسرات 4 في قفص)، كماشة , المفك، الماصات باستور، مصفاة، كاميرا رقمية، وترينوكولار تشريح مجهر التكبير ستيريو، شبكة معايرة (مجهر المعدات)، 5 أطباق بيتري قطرها 50 مم والأكواب والاطباق البلاستيكية 2 (~ 25 سم × 15 سم × 3-5 سم)، وعلبة بلاستيكية.
- لتنفيذ التثبيت هيبورهيل، إعداد شبكة 100-ميكرومتر-المسامية، خرطوم مطاط وزجاجة بخ. لتشييد الجهاز، راجع التكميلية ملف 1: ت-1. مش بناء أقفاص.
- تجميع السفلي والجزء المركزي من أقفاص مش. قم بتجميع الجزء من القفص الذي يحمل الأفراد. إدراج غطاء بلاستيكي واحد أولاً، ثم منخل ورقة واحدة من البلاستيك، وأخيراً الهيئة الرئيسية في الأعلى. استخدم البراغي الأربعة لضمان الحصول عليها.
- إعداد المواد البيولوجية
- وضع القفص مش الطبق البلاستيك التي تحتوي على مياه النهر. التأكد من وجود الدوائر نصف كامل. تأخذ الأحداث فوبم (انظر التكميلية ملف 1: S.6. المواد البيولوجية) للخروج من مربع معزول حرارياً ووضعها في طبق بتري.
ملاحظة: تأكد من أن التغيرات في درجات الحرارة المفاجئة لا يتجاوز ~ 2 درجة مئوية. - باستخدام زجاجة بخ ومصفاة، التدقيق من خلال الأحداث لمسح المخلفات.
- وضع القفص مش الطبق البلاستيك التي تحتوي على مياه النهر. التأكد من وجود الدوائر نصف كامل. تأخذ الأحداث فوبم (انظر التكميلية ملف 1: S.6. المواد البيولوجية) للخروج من مربع معزول حرارياً ووضعها في طبق بتري.
- قم بإعداد المجهر والكاميرا. إجراء معايرة للصكوك (انظر File1 التكميلية: س. 5- مجهر والتصوير الفوتوغرافي). ضع طبق بتري تحتوي على القليل من الماء تحت المجهر.
- وضع الأحداث في أقفاص (عمل مختبر تجريبي)
- استخدام ماصة باستور إزالة أحد الأفراد من طبق بيتري ووضعه بعناية في صحن بتري تحت المجهر.
- فحص اللياقة البدنية للفرد بالنظر إلى العدسة (~ 40 X التكبير).
ملاحظة: اللياقة البدنية "جيدة" يدل على أن الفرد يتحرك، بالتناوب من جانب إلى آخر، يدفع القدم من شل، إلخ إزالة اللياقة البدنية ميتة أو منخفضة للأفراد مع باستور "الماصة؛" ووضعها في طبق بتري منفصلة (فوبم الأحداث مع فتح شل، لا حركة، القدم هو عدم سحب، قذيفة مجزأة، والأحداث الذين تعدت حسيب في الماء، تحلل مرئية لشل، ديكالسيفيكاتيون الجزئية). - التقاط صور فوتوغرافية اثنين من فوبم الفردية عرض لياقة بدنية جيدة استخدام تكبير مستمر من ~ 80 X. انظر الملف التكميلي 1: S.5. مجهر والتصوير الفوتوغرافي. حفظ الصور الفوتوغرافية.
ملاحظة: لقياس الطول جيد، الحدث ويجب وضع الطول (طريقة العرض الأفقي). والهدف الرئيسي هو التقاط صورة عالية الجودة لشل أقصى الطول جيدة بما يكفي لتمكين إجراء تحليل صورة بعد ذلك. - إدراج الأحداث في الدائرة المناسبة في القفص حالما يتم التقاط الصور. سجل عدد الصور والدائرة.
- كرر هذه الخطوة مع كل فرد لجميع الدوائر المستخدمة في القفص مش.
ملاحظة: انظر التكميلية ملف 1: ت-1. مش بناء أقفاص. - وبمجرد جميع الدوائر المستخدمة بلح البحر اللؤلؤ، وضع غربال البلاستيك في القفص، ثم بلطف وضع الغطاء من البلاستيك على وتأمين جميع أجزاء جنبا إلى جنب مع المكسرات.
- في حالة تثبيت إلى منطقة هيبورهيك، تمرير أحد طرفي خرطوم من خلال إحدى الدوائر وإصلاحه في هذا الموقف، ثم تأخذ الشبكة المناهضة انسداد وربطه في نهاية الجزء السفلي (انظر التكميلية ملف 1: ت-1. مش بناء أقفاص).
- الأحداث مخزن
- وضع القفص في علبة بلاستيكية مع مياه النهر، حيث أن الأحداث هي مغمورة تماما، والاحتفاظ به في ثيرموبوكس. قبل التثبيت، السماح للأحداث تتكيف في الموقع نهر درجة حرارة الماء في مكان التثبيت (تدريجي التبريد، بحد أقصى 5 درجة مئوية في 24 ساعة).
- تثبيت الأقفاص مش
- إعداد مجال المواد بما في ذلك أقفاص مش مع الأحداث، والمسامير الصلب، مسامير وصواميل معدنية، المفك، وحقل داتالوجيرس درجة الحرارة (انظر الجدول للمواد و التكميلية ملف 1: S.4.2. المياه قياس)، سلسلة، وكاميرا، حقل البروتوكول، مطرقة، وأسمائها.
- نقل الأحداث فوبم إلى الموقع في ثيرموبوكس ميدانية (مربع معزول)، الحفاظ على درجة حرارة مياه مستقرة مع الاختلافات < ~ 2 درجة مئوية. وضع ثيرموبوكس مع أقفاص مش في النهر في الموقع للسماح للأحداث تتكيف مع الظروف البيئية المحلية (درجة الحموضة، الموصلية، إلخ).
- تثبيت القفص مش.
- إزالة القفص مش من ثيرموبوكس الميدانية. تزويده باثنين من المسامير الصلب وربط datalogger الميدانية. مرساة القفص إلى موئل مع شروط نموذجية فوبمس في منطقة الدراسة (مثلاً، عند الحافة من تدفق التيار الرئيسي، لا في تدفق المياه مباشرة، لا في المياه الراكدة، لا في ضوء الشمس المباشر).
- للمياه المفتوحة، باستخدام زوج من المسامير الصلب، إصلاح القفص إلى أسفل النهر؛ وضع على الجانب، ومستوى مع قاع النهر، المصب بزاوية مقدارها 45 درجة لتدفق النهر، نحو وسط النهر. يجب أن تكون الحافة الأفقية أقل بحوالي 10-15 سم فوق سطح قاع النهر. الحفاظ على الحد أدنى من مسافة 2 متر بين كل قفص في محله واحدة (انظر التكميلية ملف 1: المادة 4. أقفاص الصيانة).
- لمنطقة هيبورهيك، وحفر في الأقفاص في قاع النهر في وضع عمودي أفقي، عمودي لتيار المياه، حيث أن الحافة الأفقية العلوية من القفص موازية لسطح قاع النهر والدوائر وتقع في هيبورهيك العمق الذي ينبغي اختبار. تأخذ بها الحد الأعلى لخرطوم مطاطي فوق السطح السفلي لإمكانية أخذ عينات المياه أثناء التجربة (انظر التكميلية ملف 1: S.4.2. المياه قياس).
ملاحظة: من المستحسن القيام بعمليات تفتيش منتظمة وصيانة على الأقفاص (انظر التكميلية ملف 1: س. 4. أقفاص الصيانة).
- إزالة القفص مش من ثيرموبوكس الميدانية. تزويده باثنين من المسامير الصلب وربط datalogger الميدانية. مرساة القفص إلى موئل مع شروط نموذجية فوبمس في منطقة الدراسة (مثلاً، عند الحافة من تدفق التيار الرئيسي، لا في تدفق المياه مباشرة، لا في المياه الراكدة، لا في ضوء الشمس المباشر).
- إلغاء تثبيت الأقفاص ونقل الأحداث بعد التعرض. لذلك، سحب الأقفاص خارج الماء، واضحة لهم من الرواسب الدقيقة كذلك اعتبارا من المواد تنجرف ووضعها في ثيرموبوكس الحقل مملوءة بمياه النهر. نقل الأقفاص فورا إلى المختبر والبدء في تقييم معدل الوفيات والنمو.
ملاحظة: انظر الملف التكميلي 1: ت-3. مدة التعرض. في حالة فرق درجة حرارة أكثر من 5 درجة مئوية بين الأقفاص ومختبر البيئة، من الضرورة الأولى للسماح للحرارة مساواة. - تقييم التجربة عن طريق التحقق من الحياة/اللياقة البدنية لكل الأحداث (انظر الخطوات 1.5.2 و 1.5.3) والتقاط صور 2 لكل الأحداث الحية في طبق بتري استخدام تكبير مستمر من ~ 80 X. سجل اللياقة البدنية وإعداد الصور والدوائر.
- إكمال هذه التجربة (مشترك لجميع الأساليب)
- إجراء القياسات في برمجيات تحليل الصورة. استخدام برمجيات تحليل الصورة لتحديد حجم الجسم كل الأحداث المقيمة على كلا الصور الإدخال (الخطوة 1.5.3) وعلى إخراج الصور (الخطوة 1، 9). استخدام طول شل مجموع الحد الأقصى المسجلة في كل الصور كقيم حجم الجسم في كل من الإدخال والإخراج.
- إدراج القيم المقاسة في المعالج الجدول وحساب زيادة النمو (%) للباقين على قيد الحياة كل الأحداث.
- تقدير معدل البقاء على قيد الحياة (نسبة مئوية) كل القفص مش استخدام نسبة عدد الأفراد الباقين على قيد الحياة لجميع الأفراد التجريبية في القفص مش.
ملاحظة: بعد التجربة، عودة الباقين على قيد الحياة إلى برنامج تربية
(انظر التكميلية ملف 1: S.6. المواد البيولوجية).
2-ساندي القفص
ملاحظة: انظر الشكل 2.
- إعداد المواد
- إعداد المواد للجزء في المختبر من التجربة: أطباق بيتري 2 (قطر ~8.5 سم)، الماصات باستور، مصفاة، 25 لتر من مياه النهر، وعلبة بلاستيكية، ثقب سيتا (مش حجم 1 و 2 مم)، علبة بلاستيكية كبيرة (25 لتر)، وقفص رملية (انظر التكميلية ملف 1 : ت-2. ساندي أقفاص البناء)، كاميرا رقمية، ترينوكولار تشريح التكبير ستيريو المجهر، شبكة معايرة (مجهر المعدات)، فرز نهر الرمال من منطقة الدراسة (راجع الخطوة 2.1.3)، والبروتوكول. راجع الملف التكميلي جدول المواد و 1: س. 2. ساندي أقفاص البناء.
- إعداد المواد اللازمة لعملية العزل: جولة الحاويات (1 لكل قفص زائد 1 إضافية)، أطباق بيتري 2 (القطر ~ 14 سم)، ماصة باستور والنظارات المكبرة و 1 لتر من مياه النهر.
- غربلة الرمال نهر غربال 2 مم ثم الجاف للرمال من خلال غربال 1 ملم الحصول على حجم الحبوب من 1-2 مم. وحفظه في شكل جاف حتى المطلوبة.
- تأخذ الأحداث (انظر التكميلية ملف 1: S.6. المواد البيولوجية) للخروج من ثيرموبوكس ووضعها في طبق بتري. باستخدام زجاجة بخ ومصفاة، التدقيق من خلال الأحداث لمسح المخلفات.
- إعداد المجهر والكاميرا (انظر التكميلية ملف 1: S.5- مجهر والتصوير الفوتوغرافي).
- وضع الأحداث في أقفاص (عمل مختبر تجريبي)
- ضع القفص الرملية في علبة بلاستيكية. مبعثر الرمال تم فرزها (راجع الخطوة 2.1.3) يصل إلى ثلث ارتفاع القفص الرملية. صب الماء في المربع. تأكد من سطح الرمال حوالي 10 ملم تحت مستوى المياه. أدخل القفص الرملية في مربع 25 لتر من مياه النهر وتعريضها لنفس درجة الحرارة فوبمس الأحداث (انظر التكميلية ملف 1: S.6.2. تخزين المواد البيولوجية) 12 حاء لتجنب أي التعرض للرمل لأشعة الشمس.
- تأخذ طبق بيتري مع الأحداث فوبم المعدة.
- فحص اللياقة البدنية للأفراد بالنظر إلى العدسة (راجع الخطوة 1.5.2).
- تنفيذ الوثائق الفوتوغرافية كما يلي. التقاط صورة واحدة لجميع الأفراد اكتشف (راجع الخطوة 1.5.3) واختر 10 الأفراد أكبر. وبدلاً من ذلك، التقاط صور لجميع الأحداث جنبا إلى جنب مع التكبير المنخفض (~ 40 X) لتقييم السائبة واختيار الأفراد أكبر 10. حفظ كافة الصور الفوتوغرافية وتسجيل أرقامها.
- استخدام زجاجة بخ، نقل الأحداث فوبم في قفص الرملية المعدة.
- الأحداث مخزن
- وضع القفص في علبة بلاستيكية كبيرة مع مياه النهر حتى هي مغمورة تماما في القفص والاحتفاظ به في ثيرموبوكس. واسمحوا الأحداث تتكيف في الموقع نهر درجة حرارة الماء (تدريجي التبريد، بحد أقصى 5 درجة مئوية ح 24) قبل التثبيت.
- تثبيت الأقفاص رملي
- إعداد المواد اللازمة لتركيب الحقل: أقفاص الرملية، ثيرموبوكس ~ 25-L حقل، حجر مسطح (الحد الأدنى وزن 1 كغم)، صافي (مش حجم 10 × 10 مم)، زجاجة بخ، حقل درجة الحرارة داتالوجيرس (انظر الجدول للمواد و التكميلية ملف 1: قياس الماء S.4.2.)، بأسمائها، وفي حقل البروتوكول.
- النقل في الأقفاص مع الأحداث إلى الموقع في ثيرموبوكس الميدانية، الحفاظ على درجة حرارة مياه مستقرة (تغيير ~ 2 درجة مئوية). وضع ثيرموبوكس الميدانية مع أقفاص الرملية في النهر في موقع حقل للسماح للأحداث فوبم على التكيف مع الظروف البيئية المحلية (درجة الحموضة، الموصلية، إلخ).
- تثبيت الأقفاص الرملية في الموائل مع شروط نموذجية فوبمس (مثلاً، عند الحافة من تدفق التيار الرئيسي في تسكع، ليس في تدفق المياه مباشرة، وليس في المياه الراكدة، لا في ضوء الشمس المباشر).
- للمياه المفتوحة، ربط الأقفاص الرملية إلى حجر مسطح باستخدام الشباك ووضعه في قاع النهر. تأكد من أن الجانب الأكبر من القفص يشكل زاوية مقدارها 45 درجة مع التدفق.
- هيبورهيال، حفر في الأقفاص في قاع النهر عمودي لتدفق المياه حيث أن غطاء القفص مستوى مع سطح قاع النهر.
ملاحظة: من المستحسن القيام بعمليات تفتيش منتظمة وصيانة على الأقفاص (انظر التكميلية ملف 1: س. 4. 1-عمليات تفتيش للموقع).
- إلغاء تثبيت الأقفاص والأحداث النقل بعد التعرض
ملاحظة: انظر التكميلية ملف 1: ت-3. مدة التعرض.- سحب الأقفاص خارج الماء، وواضحة لهم المواد تنجرف ووضعها في ثيرموبوكس الحقل مملوءة بمياه النهر.
- نقل الأقفاص للمختبر والبدء في تقييم معدل الوفيات والنمو.
ملاحظة: في حالة فرق درجة حرارة أكثر من 5 درجة مئوية بين الأقفاص ومختبر البيئة، من الضروري السماح لتحقيق التكافؤ في درجات الحرارة.
- الأحداث فوبم منفصلة من الرمال
- تعد جولة حاوية مع عمق مياه من 50 مم (لكل قفص على حدة) وحاوية جولة إضافية واحدة. نقل الرمال من القفص إلى الحاوية جولة. تستخدم حركة دوامات لتغسل الجزيئات الأخف في حاوية إضافية.
- عينة المحتوى من هذه الحاوية تدريجيا والبحث عن الأحداث خطوة بخطوة باستخدام ماصة باستور وعدسة مكبرة. وضع الأحداث في طبق بتري استخدام ماصة باستور. كرر هذه الخطوة حتى تم العثور على الأحداث الأخيرة وآخر ثم x 10 بعد النتيجة السلبية الأولى. بعد كل خطوة الغسيل، إضافة مياه النهر النظيفة إلى الحاوية الأصلية مع الرمال.
ملاحظة: لا سيما بعد الغسيل الأولى، بشكل صحيح فحص المحتوى وتنظيفه من الصابورة مثل الرواسب الدقيقة والأخرى اللوفيا.
- تقييم التجربة
- فحص اللياقة البدنية لكل الأحداث (انظر الخطوات 2.4.3 و 1.5.2) وعدد من الناجين.
- التقاط صورة (راجع الخطوة 2.4.4.) لكل فرد على حدة، على الرغم من أن هذا يعني هناك لا هوية واضحة لكل فرد. وبدلاً من ذلك، التقاط صور السائبة واختيار مجموعة فرعية من 10 أفراد نمت أفضل من النتائج النهائية.
ملاحظة: كلا الاحتمالين يكون قيمة إبلاغ مماثلة. وقد 1 إمكانية حد عبء عمل أعلى ولكن أيضا الاستفادة من أعلى الصورة التكبير، وهكذا أيضا قدر أكبر من الدقة.
- إكمال التجربة
- إجراء القياسات في برمجيات تحليل الصورة. إكمال هذه التجربة كما فعل في أقفاص مش (راجع الخطوة 1، 10) مع الاستثناء التالي: عدم تقييم معدل النمو (%) لكل الأحداث ولكن تقييم المجموعة ككل في تجربة القفص الرملية.
ملاحظة: بعد التجربة، الباقين على قيد الحياة ينبغي أن تعاد إلى برنامج تربية
(انظر التكميلية الملف S.6.1. سراج الدينليكتيون مادة بيولوجية).
- إجراء القياسات في برمجيات تحليل الصورة. إكمال هذه التجربة كما فعل في أقفاص مش (راجع الخطوة 1، 10) مع الاستثناء التالي: عدم تقييم معدل النمو (%) لكل الأحداث ولكن تقييم المجموعة ككل في تجربة القفص الرملية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وطبقت الطرق بيوينديكيشن الأربعة (أقفاص المياه المفتوحة الرملية، أقفاص الرملية داخل سرير وفتح أقفاص شبكة المياه واقفاص مش داخل سرير) للتحقيق في مدى ملاءمة البيئة شرط فوبمس في "حوض نهر فلتافا" العلوي (غابة بوهيميا، التشيكية جمهورية). ويمثل هذا النهر فوبم منطقة المتبقية داخل أوروبا الوسطى19. وهنا، نقدم مجموعة مختارة خصيصا للنتائج التي توضح أهم جوانب الطرق الأربع. وترد تفاصيل أخرى في دراسة شاملة Černá et al. 13.
وكان درس بيئة النهر على مستويين:
(ط) تشكيل جانبي نهر طولي كان يمثله التيار الرئيسي المحليات (المواقع A-E) وروافد تلوث مختلف المراحل (مواقع البحث والتطوير، والخامس). تم اختبار المحليات من جانب أقفاص الرملية ومش أقفاص مثبتة في المياه التدفق الحر. وبالإضافة إلى ذلك، تم اختبار منطقة هيبورهيك الحصى بداخل السرير ساندي أقفاص في المحليات باء وجيم، ودال
(ثانيا) في بيئة هيبورهيك تم اختبارها في المكان المحدد جيم تم اختبار مدى ملاءمة مختلف ركائز (الرمل والحصى والحجارة) بداخل السرير مش أقفاص.
بمعدل النمو ومعدل البقاء على قيد الحياة > الأحداث عمرها 1 سنة (انظر التكميلية ملف 1: S.6. المواد البيولوجية) تم اختبارها. التجربة أجريت على نطاق كامل في صيف عام 2014، وتكررت بدرجة أقل في بعض المحليات في صيف عام 2015. ضمن المستوى (ط)، 2-6 ساندي أقفاص مع الحد ني الأحداث 100 و 6 (2014) أو 4 (2015) مش أقفاص مع الأحداث 6 طبقت في كل منطقة محلية اختبارها بالأسلوب المناسب. ضمن المستوى (الثاني)، تم تركيب 7 أقفاص مش مع الأحداث 6 في كل بيئة اختبار. وكان وقت التعرض شهر واحد لاقفاص مش وثلاثة أشهر لاقفاص الرملية.
أجرى التحليل الإحصائي في البحث والتطوير، الإصدار 3.1.020. وقد استخدمت اختبارات كروسكال-واليس وكروسكال-نيمينيي الرتبي-مان-ويتني. للبيانات مع توزيع العادي، نفذ الانحدار الخطي أو الدرجة الثانية.
المحليات التي يمكن التمييز بوضوح بين استناداً إلى معدل النمو في أقفاص شبكة المياه المفتوحة على الرغم من تباين عال داخل القفص، حتى في فترات النمو مواتية مختلفة (الشكل 3). في التعرض أكثر إيجابية في النمو في عام 2015 (نمو معدل 19.3-41.8 في المائة)، تم اكتشاف اتجاه ملحوظ في التشكيل الجانبي الطولي حيث زاد معدل النمو في المصب (اختبار كروسكال-واليس، ف < 0.001). الأهم من ذلك، كان معدل البقاء على قيد الحياة مرتفعة مكافئ في كل الفصول (من 83%) (الشكل 4 أ).
من ناحية أخرى، أظهرت أقفاص المياه المفتوحة الرملية اتجاها مختلفاً بين المحليات التيار الرئيسي في عام 2014: معدل النمو زاد من منطقة المصب (52 ٪) من خلال الموقع الأوسط ج (153%)، وانخفضت بعد ذلك مرة أخرى حتى محله ه (46%) (انحدار التربيعية قيم النمو المطلق: r2الصفة = 0.77، و2,13 = 25.66، ومكسيكو = 16، ف < 0.001). وأكدت هذا الاتجاه أيضا في عام 2015 عندما سجلت معدل نمو أكبر في محله الأوسط ج مرة أخرى. كما أن قيم معدل النمو المطلق لم تختلف كثيرا بين عامي 2014 و 2015. من ناحية أخرى، أن معدل البقاء على قيد الحياة تختلف بين السنوات، يجري أعلى بكثير بحلول عام 2015 (من 48% إلى 72 في المائة) من عام 2014 (حوالي 25%) (الشكل 4 باء).
أثر أسلوبين من أساليب مختلفة التعرض أيضا واضحة للعيان في الرافد الملوثة (الموقع الخامس). وأظهرت الأقفاص الرملية تتعرض هنا خلال الأشهر الثلاثة 0 ٪ البقاء على قيد الحياة، بينما سجلت معدل بقاء 83% مع بعض النمو بالمياه المفتوحة مش أقفاص التعرض هنا خلال ال 30 يوما.
النتائج من داخل السرير أقفاص الرملية توضيح ظروف مختلفة في بيئة هيبورهيك بالمقارنة مع المياه المفتوحة في المواقع ذات الصلة. أن معدل النمو كان دائماً أقل في مواقع هيبورهيل مما في المياه المفتوحة، ومعدل البقاء على قيد الحياة وكان متغير أكثر بكثير (من تقريبا 50% إلى 0%، الشكل 4B).
أظهرت دراسة ميكروهابيتاتس هيبورهيك باستخدام الأقفاص مش داخل سرير أثر كبير في تكوين الركيزة في بقاء الأحداث. وسجلت أفضل الظروف من أسفل الحجرية المشبعة الأوكسجين (بمعدل بقاء ما يقرب من 100 ٪) بينما كانت أشارت إلى الأسوأ (معدل البقاء على قيد الحياة < 40 ٪) في الرمال اﻷوكسيجين سيئة حيث تم أيضا اكتشاف تقلب عالية جداً في البقاء على قيد الحياة. هيبورهيك المياه الأوكسجين، الذي تم قياسه مرارا وتكرارا خلال التجربة، يفسر هذا الاتجاه (الشكل 5).
رقم 1. بيوينديكيشن مش القفص مع الدوائر الفردية- انظر التكميلية الملف 1 للحصول على مزيد من التفاصيل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2. قفص بيوينديكيشن الرملية. انظر التكميلية الملف 1 لمزيد من التفاصيل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3. تقلب الفردية في معدل نمو الأحداث التي سجلتها أقفاص شبكة المياه المفتوحة في المحليات ب ه خلال الموسمين. ويرد وصف الوسائل والانحراف المعياري لكل قفص مش. تستند القيم بقياس الأحداث 6 (أو الأحداث 4-5 إذا كان معدل الوفيات > 0 ٪) في قفص مش كل.
الشكل 4. نتائج المثال من بيوينديكيشن ميدان التجربة مع أقفاص مش وساندي. (أ) هذا الفريق يظهر المثال النتائج من تجربة بيوينديكيشن ميدانية مع أقفاص مش. تم اختبار مجموعة من 6 مناطق (ب، ج، د، ه، R، والخامس) ضمن مستجمعات المياه نهر فلتافا في 2 مناسبات منفصلة (في 2014 و 2015). وكان وقت التعرض 30 يوما أثناء فصل الصيف. تمثل المحليات ب-ه (بالترتيب) الطولي تمتد حوالي 20 كيلومترا من المجرى الرئيسي للنهر. مواقع البحث والتطوير والخامس تمثل ملامح روافد 2. العواصم علامة المكان نفسه في الفريق (أ) و (ب). تم اختبار كافة المحليات مع أقفاص شبكة المياه المفتوحة. وباﻹضافة إلى ذلك، محله ج تم اختباره أيضا استخدام الأقفاص مش داخل سرير مثبت في 3 أنواع مختلفة من قاع النهر (Cs = الرمل، Cg = الحصى، لجنة العلم والتكنولوجيا = الحجارة) في عام 2014. وركبت في الأقفاص في تكرار 4-7 في كل موقع. 6 الأحداث بلح البحر لؤلؤة المياه العذبة من 1 + السنة القديمة استخدمت الواحدة مش قفص. يتم وضع علامة متوسط معدلات النمو للأفراد أكبر 3 (الحد الأقصى 3) من كل قفص مش المختبرة (الأعمدة، والمحور الأيسر) ومعدل متوسط البقاء على قيد الحياة في قفص مش (النقاط الزرقاء، محور الحق). (ب) هذا المثال يظهر لوحة النتائج من بيوينديكيشن ميدانية التجربة مع أقفاص الرملية. تم اختبار of7 مجموع المحليات (A، ب، ج، د، ه، R، والخامس) ضمن مستجمعات المياه نهر فلتافا أكثر في 2 مناسبات منفصلة (في 2014 و 2015). وكان وقت التعرض 3 أشهر خلال موسم الصيف. تمثل المواقع A-E (بالترتيب) صورة طولية تمتد طويلاً حوالي 30 كم من المجرى الرئيسي للنهر. مواقع البحث والتطوير والخامس تمثل ملامح روافد 2. العواصم علامة المكان نفسه في هذا وفي الفريق السابق. تم اختبار كافة المحليات مع أقفاص المياه المفتوحة الرملية. وباﻹضافة إلى ذلك، المحليات ب وج ود خضعت أيضا لاستخدام داخل سرير رملي أقفاص مثبتة في الركيزة سرير النهر المطرقة (حرس الحدود، والفريق الاستشاري، والمديرية العامة) في عام 2014. وركبت في الأقفاص في تكرار 2-4 في كل موقع. على الأقل 100 بلح البحر لؤلؤة المياه العذبة الأحداث كانوا حاضرين في كل قفص الرملية. يتم وضع علامة متوسط معدل النمو للأفراد أكبر 10 (بحد أقصى 10) من كل قفص الرملية المختبرة (الأعمدة، والمحور الأيسر) ومعدل متوسط البقاء على قيد الحياة في قفص الرملية (النقاط الزرقاء، محور الحق). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5. تشبع الأكسجين. هذا الفريق يوضح العلاقة بين قيم الحد الأدنى من تشبع الأكسجين أكثر من 30 يوما تعرض أقفاص مش ومعدل الباقين على قيد الحياة في قفص في أقفاص داخل سرير مش مكشوف في سرير مختلفة ميكروهابيتاتس في عام 2014. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| 2014 | عام 2015 | |||
| المكان | 3-شهر تعرض الأقفاص رملي | 1-شهر تعرض الأقفاص مش | 3-شهر تعرض الأقفاص رملي | 1-شهر تعرض الأقفاص مش |
| A | 13.9 | - | - | - |
| ب | 14.4 | 13.4 | 13.9 | 17.5 |
| ج | 15 | 13.8 | 14.4 | 18.3 |
| د | 15 | 13.8 | 14.3 | 18.3 |
| ه | 15.5 | 14 | - | 18.7 |
| R | 13.5 | 12.8 | - | - |
| V | 14 | 13.2 | - | - |
الجدول 1. المياه السطحية في متوسط درجة الحرارة (درجة مئوية) في المحليات خلال التعرض في 2014 و 2015.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقت التعرض:
شهر واحد حتى مكشوف مش أقفاص إظهار نمو مرئية تعكس الاختلافات بين المحليات (الشكل 3)، حيث تكون صالحة للاستعمال جداً لكشف سريعة وسهلة لتوصيف المكان. ومع ذلك، أهمية النتائج تعتمد على حالة قصيرة الأجل من الشروط، التي يمكن أن يتذبذب. على وجه الخصوص، أحداث الأمطار القصير يمكن أن تلعب دوراً. وفي المقابل، التلوث العرضي لا يمكن التنبؤ بها قد لا تكون تسجل دائماً. في الموقع الخامس (الشكل 4A)، كشف تحليل كيمياء المياه موجه قصيرة من الأمونيوم قوية زيادة13. هذا ربما المسؤولة عن الوفيات في أقفاص الرملية المكشوفة ثلاثة أشهر، لكن لم يؤثر على الأقفاص مش مكشوفة 30 يوما.
التقلبات في درجات الحرارة يمكن أن يؤثر على النتائج التعرض على المدى القصير. شهر متوسط درجة الحرارة خلال التعرض القفص مش يختلف بين السنوات (الجدول 1). يختلف معدل النمو أيضا حيث رافق ارتفاع درجات الحرارة أعلى من معدلات النمو (اختبار كروسكال-واليس ف < 0.001). من ناحية أخرى، درجة حرارة الماء متوسط في المحليات نفسها خلال التعرض قفص الرملية ثلاثة أشهر كانت مشابهة جداً في كل السنوات (الجدول 1) ومعدل النمو لم تختلف إلى حد كبير (الشكل 4 باء).
المزايا وأوجه القصور في الأساليب المذكورة:
ومن السهل نسبيا لأداء تعرض مياه مفتوحة لكن ذات قيمة محدودة للموئل بيوينديكيشن. طريقة الأقفاص شبكة المياه المفتوحة هي قديمة نسبيا16 وقد استخدمت مرارا وتكرارا مع تعديلات طفيفة10،11،،من1213،،من2122 , 23-ومع ذلك، لا تقتصر هذه الأقفاص بالأكسجين، والذي نقص مسؤولة عن وفاة العديد من الأحداث في ظروف هيبورهيك ربما. وهكذا، أقفاص شبكة المياه المفتوحة يمكن أن تظهر التنمية الجيدة حتى في المحليات مع زيادة معدل الوفيات وانخفاض معدل نمو في أقفاص المياه المفتوحة الرملية (الموقع الإلكتروني) أو نسبة وفاة 100% في إطار سرير الرملية أقفاص، في محله د في عام 2014 (الشكل 4 باء). على ما يبدو، أقفاص شبكة المياه المفتوحة تظهر محله النمو المحتملة، ولكن هذا قد لا تكون واقعية كما أنها تعتمد على توافر ميكروهابيتاتس هيبورهيك ضمن منطقة محلية حقيقية. لاقفاص شبكة المياه المفتوحة لديهم القدرة لبقاء عالية (الشكل 4A)، حتى يصل إلى معدل بقاء 100%13، يمكن أن تخدمها جيدا بالنسبة بيوينديكيشن السمية المزمنة (أو السمية الحادة إذا كان من المتوقع في وقت معين). أيضا، يمكن أن تكون وجود مصدر غذاء مفيد اختبار إلى حد ما.
كأسلوب جديد وغير مألوف، محاكاة أقفاص المياه المفتوحة الرملية أفضل شروط الموئل هيبورهيك. حركة الأحداث بين الحبوب الرمال من الممكن في هذا الجهاز، مما يساعد على الحد من نمو بيوفيلم على شل الأحداث. يمكن أن يكون سبب نقص الأوكسجين هيبورهيك نشاط الميكروبات استعمار الحبوب الرمال؛ يمكن أن يحدث هذا التأثير أيضا جزئيا في أقفاص وضعت فوق قاع نهر. على الرغم من ذلك، سبب اللازمة الدورية تنظيف انسداد المواد المنجرفة من قفص، يتم أيضا إزالة الرواسب الدقيقة وهكذا تتغير الظروف بالمقارنة مع الموئل الطبيعي هيبورهيك. لذا، معدل نمو يمكن أيضا اعتبار النمو محله المحتملة في أقفاص المياه المفتوحة الرملية. ومع ذلك، وهذا أقرب إلى ملاءمة المكان الحقيقي مما في المياه المفتوحة مش أقفاص. ولذلك، يبدو التدرجات معدل النمو الطولي سجلتها أقفاص الرملية (الشكل 4) أيضا تكون أكثر قبولا وتشير إلى امتداد نهر أكثر ملاءمة. وعلاوة على ذلك، هو إمكانية الأحداث وسوبادولتس تربية تصل إلى مرحلة النضج الجنسي في أقفاص الرملية، التحقق من9، حيث أقفاص الرملية يمكن أن تخدم كأسلوب تربية والرصد البيولوجي آمنة في نفس الوقت.
ساندي الأقفاص واقفاص مش في وضع إطار السرير الأقرب إلى الأوضاع الحقيقية في هيبورهيل ضحلة. بالسماح للحركة الأحداث، أقفاص الرملية، على وجه الخصوص، نقدم لهم على حد سواء تدرج الرأسي والأفقي لعدة سنتيمترات في الحجم. يمكن أن تكون هذه القدرة على نقل مهمة جداً للهروب من مؤقتة تفتقر إلى الأكسجين الجزئي-مناطق. هذه الإمكانية غير موجودة في داخل السرير مش أقفاص. ولذلك، عدد مرتفع نسبيا من الوحدات بيوينديكيشن اللازمة، نظراً للظروف هيبورهيك متغير جداً13،24 (الشكل 5) والخسائر الناجمة عن موقع غير مناسب شائعة.
وباختصار، بيوينديكيشن الأساليب المستخدمة في هذه البحوث تتوافق مع افتراض الظروف الطبيعية الأحداث بالترتيب التالي:
1. افتح أقفاص شبكة المياه،
2-فتح أقفاص المياه الرملية،
3-داخل سرير مش أقفاص،
4-داخل قاع الأقفاص الرملية.
يزيد من عبء العمل في كل وحدة بنفس الترتيب. وعلاوة على ذلك، عدد الأحداث المطلوب لاختبار الإحصائية للنتائج الحصول على زيادات في حالات التعرض داخل سرير جداً. ويبدو أنه يمثل أقفاص الرملية داخل السرير أكثر تكلفة ولكن الأسلوب بيوينديكيشن دقيقة. هذا الأسلوب الجديد يحتاج إلى المزيد من التجارب في المستقبل، ومقارنة مع أنواع أخرى من الدراسات هيبورهيك استناداً إلى قياسات بيزوميتير،من2526. على وجه الخصوص، هناك حاجة إلى دراسة درجة التشابه باستخدام مجس مباشرة قياس الظروف الفيزيائية في الأقفاص وفي البيئة المحيطة هيبورهيك.
تقاس عدد الأفراد في قفص واحد:
بالمقارنة مع مش أقفاص، لا يمكن قياس زيادة النمو من الأحداث المحددة في أقفاص الرملية كما لا توجد معلومات عن أي فرد من مجموعة الإدخال هو واحد في الإخراج. من الضروري العمل مع قيمة متوسطة. إذا عد لجميع الأفراد، يمكن أن تكون هذه القيمة منخفضة جداً بسبب عدد من العينات المتزايد ببطء شديد؛ ومع ذلك، اثنين من الأفراد يمكن أن تنمو بسرعة كبيرة (لاعبا النمو). هذا النمو غير المتكافئ نموذجي بلح البحر27. تباين النمو بين الأحداث يرتفع مع زيادة زمن التعرض للضوء ويمكن أن تحدث اختلافات كبيرة، لا سيما في مواسم النمو مواتية. أيضا، يؤدي تعرض طويل لمعدلات الوفيات الرئيسية في أقفاص مش (لاستعراض انظر لافيكتويري، موركينس، رمزي، سنكلير وسويتينغ28)، حتى نتمكن من العمل مع عدد أقل بكثير من الأفراد في النهاية التجربة مقارنة إدخال مجموعة الأحداث. قياس فقط عدد من الأحداث أفضل المتزايد أسلوب ممكن.
وتدل تجربة تربية فوبم ضمن "خطة العمل التشيكية" "المياه العذبة بيرل بلح"9،29، فضلا عن نتائج التجارب التي أجريت على البحر ذات الصدفتين30،31، تلك الأحداث التي تفتقر إلى النمو ذات الصدفتين ارتفاع معدل وفيات، وهناك سوى فرصة ضئيلة لمعيشتهم إلى النضج. وفي المقابل، لاعبا النمو لديها معدل أعلى للبقاء على قيد الحياة وهم أمرا حاسما لانتعاش سكان. المعلمة 10 ماكس (10 معظم بسرعة متزايدة الأفراد) ووصلات نمو يراعي، ويمكن أن تزيد قيمة مفيدة للتجربة، حتى لو كان يحدث ارتفاع معدل الوفيات (الشكل 4 باء، موسم 2014). تجدر الإشارة إلى أن تقديرات النمو التي تم الحصول عليها بهذه الطريقة لا يمكن أن تكون إيجابية كاذبة. إلا أنه قد قليلاً التقليل لأن العديد من الأحداث أكبر في نهاية التجربة قد نما أكثر قليلاً في هذه الحالة. أيضا، عبء العمل أقل إلا إذا كان يتم تقييم الأفراد 10. وبالمثل، أثبتت مقياسا للأفراد المتزايدة بشكل أقصى ثلاثة (3 كحد أقصى) لتكون ملائمة في أقفاص مش، القضاء على نفوذ الأفراد المتزايدة ببطء، وغير المنظور، الذي يمكن إزاحة الصورة الحقيقية لإمكانات نمو الموقع.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
وأيد Bílý ميكال وسيمون Ondřej ص المنح من "الجامعات التشيكية لعلوم الحياة" [الداخلية منحة الوكالة من كلية العلوم البيئية، براغ كولس (42110 1312 3175 (20164236))]. وجاء الدعم للدودة كاريل من "مؤسسة العلوم التشيكية" (13-05872S). وجمعت بيانات عن بيوينديكيشن والتواجد الحالي من بلح البحر اللؤلؤ أثناء تنفيذ "خطة العمل التشيكية" "المياه العذبة بيرل بلح" تديره وكالة المحافظة على الطبيعة من الجمهورية التشيكية، الذي تموله الحكومة الجمهورية التشيكية، وهو متاح في
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| biological material maintenance and care | |||
| Freshwater pearl mussel juveniles | any | NA | from a FWPM breeding programme |
| plastic boxes | any | NA | |
| thermobox | MERCI | 212,070,600,030 | There are many possibilities. This is one example only. |
| field thermobox (ca25 l) | any | NA | cold box (insulated box) commonly used for food transport |
| river water | any | NA | |
| Petri dishes | any | NA | |
| plastic Pasteur pipettes with balloon bulb (droppers) | any | NA | hole diameter 1 mm |
| hydrogen peroxide | any | NA | |
| plastic container (ca 50 l) for river water | any | NA | |
| plastic tea strainer | any | NA | commonly used in kitchen |
| mesh cages construction | |||
| main plastic bodies | any | NA | |
| plactic covers | any | NA | |
| special technical sieves 340 µm | Silk &Progress | UHELON 20 T | |
| special technical sieves 100 µm | Silk &Progress | UHELON 67 M | |
| rubber hose (diameter 5.5 mm) | any | NA | |
| steel bolts | any | NA | |
| steel nuts | any | NA | |
| spanner | any | NA | |
| steel spikes | any | NA | |
| pliers | any | NA | |
| beakers | any | NA | |
| plastic dishes (ca. 25x15x3-5cm) | any | NA | |
| squirt bottle | any | NA | |
| field protocols | any | NA | |
| stationery | any | NA | |
| plastic container | any | NA | |
| string | any | NA | |
| hammer | any | NA | |
| sandy cages construction and use | |||
| sieve 1 mm | any | NA | |
| sieve 2 mm | any | NA | |
| special technical sieves 340 µm | Silk &Progress | UHELON 20 T | |
| plastic boxes with tight-fitting lid | any | NA | |
| hot melt adhesive | any | NA | |
| plastic box (ca 250 x 150 x 100 cm) | |||
| big plastic box (ca 25 l) | any | NA | |
| flat stone | any | NA | |
| net | any | NA | |
| river sand | any | NA | |
| round containers | any | NA | |
| magnifying glasses | Carson | Carson CP 60 | There ar many possibilities. This is one example only |
| cages installation and maintenance | |||
| field temperature dataloggers | ONSET | UA-001-64 | http://www.onsetcomp.com/products/data-loggers/ua-001-64 |
| spade | any | NA | |
| toothbrush | any | NA | |
| experiment evaluation | |||
| trinocular dissecting zoom stereo microscope | Bresser optic | ICD 10x-160x | There are many possibilities. This is one example only. |
| digital camera/ electronic eyepiece | Bresser optic | MikroCamLab 5M | There are many possibilities. This is one example only. |
| Calibration gird | Am Scope | SKU: MR100 | There are many possibilities. This is one example only. |
| external power source with two movable light guides | Arsenal | K1309010150021 | There are many possibilities. This is one example only. |
| Image software | ImageJ software | There are many possibilities. This is one example only. | |
| table processor | MS excel | There are many possibilities. This is one example only. |
References
- Goldberg, E. D. The mussel watch-a first step in global marine monitoring. Marine Pollution Bulletin. 6 (7), 111-114 (1975).
- Vaughn, C. C. Ecosystem services provided by freshwater mussels. Hydrobiologia. , In Press (2017).
- Lopes-Lima, M., et al. Conservation status of freshwater mussels in Europe: state of the art and future challenges. Biological Reviews. 92 (1), 572-607 (2017).
- Strayer, D. L., Malcom, H. M. Causes of recruitment failure in freshwater mussel populations in southeastern New York. Ecological Applications. 22 (6), 1780-1790 (2012).
- Douda, K. Effects of nitrate nitrogen pollution on Central European unionid bivalves revealed by distributional data and acute toxicity testing. Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 20 (2), 189-197 (2010).
- Modesto, V., et al. Fish and mussels: importance of fish for freshwater mussel conservation. Fish and Fisheries. , In Press (2017).
- Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. Bauer, G., Wächtler, K. 145, Ecological Studies. 1-394 (2001).
- Neves, R. J., Widlak, J. C. Habitat ecology of juvenile fresh-water mussels (Bivalvia, Unionidae) in a headwater stream in Virginia. American Malacological Bulletin. 5, 1-7 (1987).
- Švanyga, J., Simon, O. P., Mináriková, T., Spisar, O., Bílý, M. Záchranný program pro perlorodku říční v ČR (Action plan for the endangered freshwater pearl mussel in the Czech Republic). , NCA CR. Prague, Czech Republic. (2013).
- Schmidt, C., Vandré, R. Ten years of experience in the rearing of young freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera). Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 20 (7), 735-747 (2010).
- Gum, B., Lange, M., Geist, J. A critical reflection on the success of rearing and culturing juvenile freshwater mussels with a focus on the endangered freshwater pearl mussel (Margaritifera margaritifera L.). Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 21 (7), 743-751 (2011).
- Denic, M., Taeubert, J. E., Lange, M., Thielen, F., Scheder, C., Gumpinger, C., Geist, J. Influence of stock origin and environmental conditions on the survival and growth of juvenile freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera) in a cross-exposure experiment. Limnologica. 50, 67-74 (2015).
- Černá, M., Simon, O. P., Bílý, M., Douda, K., Dort, B., Galová, M., Volfová, M. Within-river variation in growth and survival of juvenile freshwater pearl mussels assessed by in situ exposure methods. Hydrobiologia. , In Press (2017).
- Denic, M., Taeubert, J. E. Trophic relationships between the larvae of two freshwater mussels and their fish hosts. Invertebrate Biology. 134 (2), 129-135 (2015).
- Douda, K. Host-dependent vitality of juvenile freshwater mussels: implications for breeding programs and host evaluation. Aquaculture. 445, 5-10 (2015).
- Buddensiek, V. The culture of juvenile freshwater pearl mussels Margaritifera margaritifera L. in cages: a contribution to conservation programmes and the knowledge of habitat requirements. Biological Conservation. 74 (1), 33-40 (1995).
- Hruška, J. Experience of semi-natural breeding program of freshwater pearl mussel in the Czech Republic. Die Flussperlmuschel in Europa: Bestandssituation und Schutzmaßnahmen. , Albert-Ludwigs Universität: Freiburg. Kongressband. WWA Hof 69-75 (2001).
- Barnhart, M. C. Buckets of muckets: a compact system for rearing juvenile freshwater mussels. Aquaculture. 254 (1), 227-233 (2006).
- Simon, O. P., Vaníčková, I., Bílý, M., Douda, K., Patzenhauerová, H., Hruška, J., Peltánová, A. The status of freshwater pearl mussel in the Czech Republic: several successfully rejuvenated populations but the absence of natural reproduction. Limnologica. 50, 11-20 (2015).
- R Core Team. A language and environment for statistical computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. Available from: https://www.r-project.org/ (2013).
- Hastie, L. C., Yang, M. R. Conservation of the freshwater pearl mussel I: captive breeding techniques. 2, Natural England. Peterborough, UK. Conserving Natura 2000 Rivers Conservation Techniques Series No. 2 (2003).
- Hruška, J. Nahrungsansprüche der Flußperlmuschel und deren halbnatürliche Aufzucht in der Tschechischen Republik. Heldia. 4 (6), 69-79 (1999).
- Scheder, C., Lerchegger, B., Jung, M., Csar, D., Gumpinger, C. Practical experience in the rearing of freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera): advantages of a work-saving infection approach, survival, and growth of early life stages. Hydrobiologia. 735 (1), 203-212 (2014).
- Braun, A., Auerswald, K., Geist, J. Drivers and spatio-temporal extent of hyporheic patch variation: implications for sampling. PLoS ONE. 7 (7), e42046 (2012).
- Franken, R. J. M., Storey, R. G., Williams, D. D. Biological, chemical and physical characteristics of downwelling and upwelling zones in the hyporheic zone of a north-temperate stream. Hydrobiologia. , 183-195 (2001).
- Roley, S. S., Tank, J. L. Pore water physicochemical constraints on the endangered clubshell mussel (Pleurobema clava). Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 73 (12), 1712-1722 (2016).
- Larson, J. H., Eckert, N. L., Bartsch, M. R. Intrinsic variability in shell and soft tissue growth of the freshwater mussel Lampsilis siliquoidea. PLoS ONE. 9 (11), e112252 (2014).
- Lavictoire, L., Moorkens, E., Ramsey, A. D., Sinclair, W., Sweeting, R. A. Effects of substrate size and cleaning regime on growth and survival of captive-bred juvenile freshwater pearl mussels, Margaritifera (Linnaeus, 1758). Hydrobiologia. 766 (1), 89-102 (2015).
- Hruška, J. Experience of semi-natural breeding programme of freshwater pearl mussel in the Czech Republic. Die Flussperlmuschel in Europa: Bestandssituation und Schutzmassnahmen. , 69-75 (2000).
- Bayne, B. L. Physiological components of growth differences between individual oysters (Crassostrea gigas) and a comparison with Saccostrea commercialis. Physiological and Biochemical Zoology. 72 (6), 705-713 (1999).
- Tamayo, D., Azpeitia, K., Markaide, P., Navarro, E., Ibarrola, I. Food regime modulates physiological processes underlying size differentiation in juvenile intertidal mussels Mytilus galloprovincialis. Marine Biology. 163 (6), (2016).
