Summary
Ce protocole décrit comment préparer des oligomères bêta-amyloïdes d’un peptide synthétique in vitro et d’évaluer les quantités relatives des oligomères bêta-amyloïdes par une dot blot analyse.
Abstract
Β-amyloïde (Aß) est un peptide hydrophobe avec une tendance intrinsèque de s’auto-assembler en agrégats. Parmi les divers agrégats, oligomères bêta-amyloïdes est largement reconnue comme la neurotoxine de premier plan dans la progression de la maladie d’Alzheimer (ma) et est considéré comme l’événement crucial dans la pathogenèse de la ma. Par conséquent, Aβ oligomère inhibiteurs pourraient empêcher la neurodégénérescence et ont le potentiel d’être développé comme modificateurs traitements d’AD. Cependant, protocoles différents formation d’oligomères bêta-amyloïdes pourraient conduire à des oligomères présentant des caractéristiques différentes. En outre, il n’y a pas beaucoup de méthodes pour efficacement écran Aβ1-42 oligomère inhibiteurs. Un anticorps A11 peut réagir avec un sous-ensemble de l’oligomère de1-42 Aß toxique avec des structures de feuillet β antiparallèle. Dans ce protocole, nous décrivons comment préparer un échantillon de riche en oligomères Aβ A11-positif1-42 d’un synthétique Aβ1-42 peptide de vitro et d’évaluer les quantités relatives de l’oligomère1-42 Aβ A11-positives dans les échantillons en une dot-blot analyse à l’aide de l’A11 et Aβ1-42-anticorps 6E10 spécifiques. Utilisant ce protocole, inhibiteurs de l’oligomère1-42 Aβ A11-positif peuvent également projetés de résultats expérimentaux semi-quantitative.
Introduction
La maladie d’Alzheimer (ma) est l’une des plus importantes maladies neurodégénératives touchant les personnes âgées dans le monde1. Il est largement admis que l’agrégation anormale de la protéine β-amyloïde (Aß) peut être le principal facteur pathologique d’AD. Agrégats de bêta-amyloïdes sont les principaux composants des plaques séniles, un des marqueurs biologiques dans le cerveau des patients atteints de ma. En outre, agrégats de bêta-amyloïdes, notamment les oligomères provoquent une neurotoxicité puissante, qui pourrait être la cause de la mort neuronale au fur et AD. Par conséquent, l’inhibition de la formation d’oligomères bêta-amyloïdes pourrait empêcher la neurodégénérescence et inhibiteurs d’oligomères bêta-amyloïdes pourraient être développés comme modificateurs traitements d’AD. De nombreuses études ont utilisé un peptide Aβ synthétique pour former des oligomères in vitro, explorer des morphologies et des structures artificielles oligomères bêta-amyloïdes et enquêter sur les inhibiteurs de l’oligomère Aβ utilisant in vitro modèles2,3 , 4. Toutefois, différentes en vitro protocoles de formation d’oligomères bêta-amyloïdes pourraient entraîner oligomère présentant des caractéristiques morphologiques différentes, qui peut entraîner des résultats incomparables entre les différents groupes de recherche. Par conséquent, un protocole standard de formation d’oligomères bêta-amyloïdes est absolument nécessaire.
Jusqu'à présent, pas beaucoup de méthodes ont été signalés à détecter directement les oligomères bêta-amyloïdes. Microscopie électronique à transmission (TEM), non-dénaturisation électrophorèse sur gel, immuno enzymatique (ELISA) et dot blot analyse permet d’examiner la quantité et/ou la morphologie des oligomères bêta-amyloïdes in vitro5, 6. par exemple, la morphologie et la structure de l’oligomère Aβ peuvent être observées en TEM. Les quantités relatives et la taille moléculaire des agrégations d’Aβ pouvaient être mesurés par électrophorèse sur gel non dénaturant. ELISA peut servir à déterminer des oligomères bêta-amyloïdes dans le sérum, le plasma et des extraits de tissus cérébraux. Enfin, dot blot analyse, une technique utilisée pour la détection, analyse et identification des protéines, pourrait servir à évaluer la concentration relative des oligomères bêta-amyloïdes dans différents échantillons à l’aide d’anticorps spécifiques Aβ et oligomère. En outre, une dot blot assay offre gain de temps considérable, comme l’électrophorèse sur gel et les procédures de transfert pour les gels ne sont pas nécessaires. Par conséquent, cette analyse permet normalement d’écran Aβ oligomère des inhibiteurs potentiels. L’objectif général du présent protocole est de décrire une méthode relativement simple, fiable et reproductible pour préparer un échantillon de la riche en oligomères bêta-amyloïdes1-42 , pour analyser les montants de l’oligomère1-42 Aβ par dot blot analyse et oligomère Aβ écran inhibiteurs à l’aide des résultats expérimentaux semi-quantitative.
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Protocol
1. préparation de la solution
Remarque : Consultez la Table des matières pour les sources de réactif.
- Préparer une solution de 5 % d’albumine sérique bovine (BSA) en ajoutant 5 g de BSA à 100 mL d’eau bidistillée. Mélangez-les complètement au vortex eux. Conserver la solution à 4 ° C pendant environ 1 mois.
- Préparer une solution de A11 des anticorps anti-oligomère (1:1, 000) en ajoutant 10 µL de solution d’anticorps à 10 mL de la solution de BSA de 5 %. Mélangez-les complètement au vortex eux. Conserver la solution à 4 ° C pendant environ 1 mois.
- Préparer une solution de 6E10 d’anticorps anti-bêta-amyloïdes (1:1, 000) en ajoutant 10 µL de solution d’anticorps à 10 mL de solution de BSA de 5 %. Mélangez-les complètement au vortex. Conserver la solution à 4 ° C pendant environ 1 mois.
- Préparer une solution OC d’anticorps anti-fibrillaire oligomère (1:1, 000) en ajoutant 10 µL de solution d’anticorps à 10 mL de solution de BSA de 5 %. Mélangez-les complètement au vortex. Conserver la solution à 4 ° C pendant environ 1 mois.
- Préparer une Tris-buffered saline (SCT) solution en ajoutant 24 g de base Tris et 88 g de NaCl à 1 000 mL d’eau bidistillée. Ajuster le pH à 7,4. Conserver la solution à 4 ° C pendant 3 mois.
- Préparer une solution de Tween-20 (TBST) et un tampon Tris salin en ajoutant 1 mL de Tween-20 à 100 mL du SCT stock solution et 900 mL d’eau bidistillée.
- Préparer une solution d’anticorps secondaire en ajoutant 10 µL de raifort peroxydase de raifort (HRP) chèvre anti-lapin IgG (H + L) à 10 mL de solution TBST. Mélangez-les complètement au vortex eux. Conserver la solution à 4 ° C pendant environ 1 mois.
- Dissoudre 3,68 g de curcumine dans 1 mL de diméthylsulfoxyde (DMSO) pour former une solution stock de curcumine de 10 mM.
- Dissoudre 5 mg de synthétique Aβ1-42 dans 2 mL de 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP) pour former une solution de monomère de bêta-amyloïdes de 2,5 mg/mL. Mettre à température ambiante (25 ° C) pendant 20 min. faire 100 µL d’extraits et conserver à-20 ° C jusqu'à 6 mois.
Remarque : Cette procédure doit être exécutée aussi vite que possible. Il faut couper les pointes de pipette pour s’assurer de pipetage précis. - Préparer le liquide par électrochimiluminescence (ECL) en mélangeant ECL fluide A et B avec un rapport de volume de 1:1. Cette solution doit être préparée juste avant utilisation.
2. préparation de l’échantillon
Remarque : Effectuez la préparation de l’échantillon 2 jours avant le dot blot analyse.
- Ajouter 900 µL d’eau bidistillée à un tube de solution de monomère Aβ1-42 ; la concentration de bêta-amyloïdes1-42 soit 0,25 mg/mL. Placer le mélange à température ambiante pendant 20 min.
- Faire évaporer la solution à l’azote de haute pureté jusqu'à ce que son volume est d’environ 850 µL. La concentration de la solution de1-42 Aβ sera environ 0,29 mg/mL.
Remarque : La solution doit être secouée de temps en temps pour assurer que le HFIP est complètement évaporé. Normalement, après 30 min d’évaporation, le volume de la solution résiduelle est environ 850 µL. - Diluer la solution mère de curcumine à une solution de travail de curcumine (0,2 à 2 µM) avec de l’eau bidistillée. Mélanger la solution1-42Aβ et curcumine solution avec un rapport 1:1 volume de travail. Les concentrations finales de curcumine sera de 0,1 à 1 µM.
NOTE : Les inhibiteurs potentiels d’oligomère peuvent être mélangés avec la solution1-42 de bêta-amyloïdes dans n’importe quel rapport si nécessaire. - Agiter la solution en permanence dans un agitateur magnétique (voir Table des matières).
- Fixer un boîtier séparateur en plastique à l’agitateur magnétique. Place 2 magnétique remuer des barres à 2 coins de la boîte et placer les tubes à échantillon au centre de la boîte.
- Secouer la boîte à température ambiante (25 ° C) pendant 48 h.
Remarque : La vitesse de l’agitateur magnétique est environ 60 t/mn.
- Centrifuger les tubes pendant 15 min à 4 ° C et 18 000 x g. récupérer le surnageant.
3. dot blot Analysis
Remarque : Tous les incubations sont effectuées sur un agitateur horizontal.
- Couper une membrane de nitrocellulose en bandes larges de 1 cm.
NOTE : La largeur de la membrane de nitrocellulose peut être ajustée selon les besoins expérimentaux. - Placer 2 µL échantillons uniformément sur 2 bandes (bande 1 et 2) avec chaque intervalle de point à 0,5 cm.
- Placer les bandes à température ambiante pendant 5 min jusqu'à ce que la goutte sur la bande est sec.
- Incuber les bandes avec une solution de BSA de 5 % pendant 30 min à température ambiante.
- Rincer les bandes avec une solution TBST pendant 5 min à température ambiante.
- Aspirer la solution TBST. Pendant 1 h à température ambiante, incuber 1 la bande avec un anticorps anti-oligomère solution A11 et bande 2 avec une solution de 6E10 d’anticorps anti-bêta-amyloïdes.
- Rincer les bandes avec une solution TBST trois fois, chaque fois pendant 5 min à température ambiante.
- Aspirer la solution TBST. Incuber les bandes avec une solution d’anticorps secondaire pendant 40 min à température ambiante.
- Rincer les bandes avec une solution TBST trois fois, chaque fois pendant 5 min à température ambiante.
- Appliquer uniformément le fluide ECL mixte à la surface des bandes. Exposer les bandes dans une système d’imagerie de la chimiluminescence automatique (voir Table des matières).
Remarque : Normalement, 300 µL de liquide ECL est suffisant pour une des membranes. La membrane doit être maintenue humide pendant l’exposition. Le temps d’exposition est calculé automatiquement par le système d’imagerie. - Faites une analyse de niveaux de gris en utilisant ImageJ (National Institutes of Health) ou un autre logiciel de traitement d’image pour obtenir des résultats semi-quantitatifs.
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Representative Results
Afin de vérifier si un monomère1-42 de bêta-amyloïdes peut former un oligomère de1-42 Aβ après préparation, analyse TEM a été utilisée. Aucun agrégat visibles ont été observées dans l’échantillon de monomère Aβ HFIP-dissous1-42 (Figure 1A). En outre, les agrégats principalement globulaires avec un diamètre de près de 10 à 80 nm ont été observées dans l’échantillon de1-42 Aβ après 48 h de secouer, suggérant que Aβ1-42 formes oligomères après préparation (Figure 1B).
Figure 1 . Analyse TEM Aβ1-42 monomère et échantillons de riche en oligomères bêta-amyloïdes1-42 . L’échantillon de monomère Aβ HFIP-dissous1-42 (10 µM) et l’échantillon de l’oligomère riches Aβ1-42 (10 µM) préparé selon ce protocole ont été examinés par TEM. La barre d’échelle = 200 nm. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
En outre, dot blot analyse a permis d’évaluer les quantités relatives de l’oligomère1-42 Aβ dans les échantillons. Un anticorps A11 peut réagir avec un sous-ensemble de l’oligomère de bêta-amyloïdes toxique avec des structures de feuillet β antiparallèle. Un anticorps OC réagit avec des agrégats fibrillaires avec des structures parallèles de feuillet β en registre. En utilisant ces anticorps, nous avons démontré que Aβ A11-positif1-42 oligomères, mais pas OC-positif Aβ1-42 fibrillaires agrégats, apparaît principalement dans les échantillons de riche en oligomères bêta-amyloïdes1-42 qui ont été préparés selon le protocole ( La figure 2). À l’aide de la 6E10 d’anticorps anti-bêta-amyloïdes, nous avons observé que le nombre de peptides1-42 Aß était similaire dans l’échantillon de monomère1-42 Aβ HFIP-dissous et l’échantillon de riche en oligomères bêta-amyloïdes1-42 (Figure 2).
Figure 2 . Dot blot analyse Aβ1-42 monomère et Aβ1-42 échantillons riche en oligomères. Échantillon de monomère (A) The HFIP-dissous Aβ1-42 (10 µM) et l’échantillon de l’oligomère riches Aβ1-42 (10 µM) préparé selon ce protocole ont été examinés par dot blot analyse à l’aide de l’anticorps anti-oligomère A11, anti-fibrillaire oligomère 6E10 d’anticorps anticorps OC et anti-bêta-amyloïdes. (B - D) l’analyse semi-quantitative des nuances de gris a été réalisée par ImageJ. Les données, exprimées en pourcentage de contrôle, ont été la moyenne ± SEM de 3 expériences indépendantes ; *** p < 0,001 vs le groupe de monomère Aβ1-42 (ANOVA et t-test). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Afin d’étudier si ce protocole pourrait servir aux inhibiteurs de l’écran d’oligomères Aβ1-42 , la curcumine, un inhibiteur bien connu des oligomères bêta-amyloïdes, a été utilisé. Nous avons constaté qu’une incubation de co avec la curcumine (0,1 - 1 µM) réduit de façon significative les quantités relatives de l’oligomère Aβ A11-positif de1-42 , comme en témoigne la coloration une diminution de la A11 dans l’échantillon ont incubé d’oligomère1-42 de curcumine Aβ que dans le normal Aβ1-42 riche en oligomères échantillon à incuber (Figure 3). À la même condition, curcumine (0,1 - 1 µM) n’a pas modifié le nombre de peptides bêta-amyloïdes1-42 comme la coloration des 6E10 était encore dans tous les échantillons (Figure 3).
Figure 3 . Dot blot analyse de curcumine co couvés Aβ1-42 échantillons riche en oligomères. (A) dissous HFIP Aβ1-42 monomères (10 µM) ont été préparés selon ce protocole et incubées avec ou sans la curcumine (0, 0,1, 1 µM) sous agitation pendant 48 h. Les échantillons ont été examinés par une dot blot analyse A11 et 6E10. Analyse semi-quantitative en niveaux de gris (B) a été réalisée par ImageJ. Les données, exprimées en pourcentage de contrôle, ont été la moyenne ± SEM de 3 expériences indépendantes ; *** p < 0,001 vs le groupe seulement1-42 du bêta-amyloïdes (test ANOVA et de Tukey). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Pour vérifier la formation d’oligomères, nous avons également utilisé un gel non dénaturant. Nous avons trouvé cet oligomère (> 4 KD) était présent dans l’échantillon de la riche en oligomères bêta-amyloïdes1-42 , tandis que la plupart de monomère (4 KD) a été trouvé dans l’échantillon de monomère Aβ1-42 (Figure S1).
Nous avons étudié les agrégats de bêta-amyloïdes dans le surnageant et le culot de l’échantillon1-42 de bêta-amyloïdes. Après 48 h d’incubation, oligomère1-42 Aβ mais pas Aβ1-42 fibrillaires agrégats ont été trouvés dans le surnageant de l’échantillon telle que déterminée par l’A11, OC et des anticorps 6E10 (Figure S2). À la même condition, Aβ1-42 fibrillaires agrégats mais pas des oligomères de1-42 de bêta-amyloïdes trouvées dans le culot de l’échantillon (Figure S2).
Nous avons aussi examiné la morphologie de l’échantillon de1-42 Aβ curcumine-traités à l’aide de TEM. L’échantillon imprégnées de curcumine contient quelques taches sphériques, ce qui suggère que la curcumine pourrait réduire la quantité de l’oligomère1-42 de bêta-amyloïdes (Figure S3).
Figure S1 . Analyse de l’électrophorèse de gel non dénaturants de monomère Aβ1-42 et échantillons riche en oligomères Aβ1-42. L’échantillon de monomère dissous HFIP Aβ1-42 (10 µM) et l’échantillon de riche en oligomères Aβ1-42 (5 µM, faible ; 10 µM, élevé) préparé selon ce protocole ont été examinés par électrophorèse sur gel non dénaturant à l’aide de la 6E10 d’anticorps anti-bêta-amyloïdes. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure S2 . Le surnageant de Aβ1-42 solution contient principalement oligomère, mais non fibrillaires agrégats. Une solution Aβ1-42 (50 µL), après avoir secoué pendant 48 h, a été centrifugée à 18 000 x g pendant 10 min. Le surnageant a été collecté et le culot a été re-dissous dans 850 µL d’eau bidistillée. Le surnageant et le culot ont été examinées par une dot blot utilisant des anticorps OC, A11 et 6E10. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure S3 . Analyse TEM de curcumine incubés co Aβ1-42 échantillons de riche en oligomères. HFIP-dissous Aβ1-42 monomères (10 µM) ont été préparés selon ce protocole et incubées en présence de 1 µM curcumine sous agitation pendant 48 h. Les échantillons ont été examinés par TEM. Echelle = 100 nm. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
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Discussion
Dans ce protocole, nous avons rapporté une méthode pour préparer les échantillons contenant des oligomères Aβ1-42 et analyser les montants de l’oligomère1-42 Aβ A11-positif par une dot blot analyse. Bien que nos méthodes pour la préparation des échantillons de riche en oligomères bêta-amyloïdes1-42 sont assez simples, fiables et reproductibles, il y a encore quelques points pour être remarqué. Tout d’abord, HFIP est utilisée pour dissoudre synthétique peptide Aβ1-42 . Un peptide de1-42 Aβ agrégé peut démonter en monomère dans la solution HFIP. Cependant, HFIP est facile à se volatiliser, et la viscosité du HFIP est très faible. Par conséquent, peptide Aβ1-42 doit être dissous dans HFIP et la solution HFIP doit être aliquotée aussi vite que possible pour réduire la perte potentielle de HFIP pendant l’opération. En outre, les pointes de pipette devraient être coupés afin de pipetage précis dans cette procédure. Deuxièmement, haute pureté azote gazeux est utilisée pour évaporer le HFIP de la solution. Au cours de cette procédure, la solution de1-42 Aβ doit être secouée de temps à autre pour s’assurer que le HFIP peut être entièrement évaporée. À la fin de cette procédure, l’odeur de la HPIF ne doit pas être détectable dans la solution. Normalement, 30 min d’évaporation réduit la concentration de HFIP à moins de 0,1 %. À cette concentration, HFIP est signalé ne pas de modifier la transition de la conformation de l’Aß1-427. Troisièmement, lors de la préparation des échantillons contenant des oligomères Aβ1-42 , le volume minimal du liquide doit être supérieur à 50 µL. dans le cas contraire, les échantillons sont susceptibles de se disperser en petites gouttelettes, fixer à la paroi des tubes. En outre, monomère1-42 Aβ ne peuvent pas former oligomère sans un mélange intime.
Le protocole pour préparer un échantillon de riche en oligomères bêta-amyloïdes1-42 , telle que décrite ici est légèrement différent de certains protocoles utilisés dans les autres groupes. Par exemple, dans certaines études, HFIP était évaporé avant d’ajouter de l’eau bidistillée dans la solution8,9. Toutefois, dans une telle condition, peptide Aβ1-42 peut-être former de petites feuilles, qui sont difficiles à se dissoudre dans la solution. Par conséquent, nous avons choisi d’ajouter de l’eau bidistillée tout d’abord et ensuite s’évaporer le HFIP en azote gazeux. Plus important encore, les formes oligomères d’agrégats établis par le présent protocole sont confirmées par le TEM. En outre, oligomère de1-42 Aβ formé par ce protocole pourrait induire la neurotoxicité chez les cellules SH-SY5Y et les neurones de l’hippocampe primaires et réduire les performances cognitives après injection dans la région de l’hippocampe de souris, ce qui suggère que l' Aβ1-42 oligomère préparé est très toxique5,,10. Ces résultats sont compatibles avec les précédentes études11.
Ce protocole pour évaluer oligomère1-42 Aβ A11-positif par l’analyse dot blot a encore quelques lacunes. Tout d’abord, à l’aide d’échantillonnage manuel, il n’est pas facile de garder les gouttelettes de taille uniforme. Deuxièmement, une dot blot analyse est un semi quantitative mais méthode pas quantitative pour mesurer les quantités de l’oligomère1-42 Aβ A11-positives, suggérant que d’autres méthodes, comme ELISA, sont nécessaires si l’évaluation précise des quantités de bêta-amyloïdes1-42 oligomère est nécessaire. Troisièmement, certains médicaments peuvent réagir aux anticorps, conduisant à des résultats faussement positifs.
En général, nous avons fourni un protocole fiable pour préparer les échantillons contenant oligomère1-42 Aβ A11-positif et analyser les montants de l’oligomère1-42 Aβ A11-positif en utilisant une dot blot assay. En utilisant ce protocole, les potentiel oligomère de1-42 Aβ inhibiteurs susceptibles de traiter AD pourraient effectivement projetés.
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Disclosures
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Acknowledgments
Ce travail a été soutenu par des subventions de la Natural Science Fondation nationale de Chine (U1503223, 81673407, 21475131), le projet de recherche appliquée sur la technologie sans but lucratif de la Province de Zhejiang (2016C 37110), Ningbo International des sciences et technologie Projet de coopération (2014D 10019), l’équipe d’Innovation municipale de Ningbo de sciences de la vie et de la santé (2015C 110026), Ningbo Sci & Tech Project for Common Wealth (2017C 50042), la somme de Li Dak Yip Yio Chin Kenneth Li Marine fonds de développement de la biopharmaceutique, et le Fonds de K. C. Wong Magna à l’Université de Ningbo.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A11 (ab126892 Rb pAb to Amyloid Oligomers) | Abcam | GR91739-58 | |
| 6E10 (beta-Amyloid Rabbit Ab) | Cell Signalling Technology | 2454S | |
| OC (Anti-Amyloid Fibrils OC Antibody) | Millipore | AB2286 | |
| Horseradish Peroxidase (HRP) Marker Goat anti rabbit IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Aβ1-42 | GL Biochem | 52487 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafiuoro-2-propanol | Aladdin | I1523078 | |
| Curcumin | Sigma | C1386 | |
| Albumin Bovine V | Solarbio | A8020 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | D920BA0003 | |
| Sodium dodecyl sulfate | SCR | 30166428 | |
| TRIS | Solarbio | T8060 | |
| Glycine | Solarbio | G8200 | |
| Dimethyl sulfoxide | Solarbio | D8370 | |
| 5×nondenaturing gel PAGE Protein Marker | Beyotime | P0016 | |
| Genshare CFAS anyKD PAGE | Genshare | JC-PE022 | |
| Pure Nitrocellulose Blotting Membrane | Pall Corporation | T50189 | |
| Methanol | SCR | 10014118 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Super low range protein Marker | Solarbio | PR1300 | |
| Transfer Membranes | Immobilon-PSQ | ISEQ00010 | |
| BeyoECL Star | Beyotime | P0018A | |
| Commassie Blue Fast staining solution | Beyotime | P0017 | |
| All - automatic chemiluminescence imaging system | Tanon | Tanon 5200 | |
| Image J | National Institutes of Health | ||
| Image processing software | Adobe | Photoshop CS6 | |
| Magnetic agitator | Shanghai Huxi |
References
- Lauren, J. Cellular prion protein as a therapeutic target in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease. 38 (2), 227-244 (2014).
- De Maio, A., Rivera, I., Cauvi, D. M., Arispe, N. Modulation of amyloid peptide oligomerization and toxicity by extracellular Hsp70. Biophysical Journal. 112 (3), 444 (2017).
- Di Scala, C., Chahinian, H., Yahi, N., Garmy, N., Fantini, J. Interaction of Alzheimer's beta-amyloid peptides with cholesterol: mechanistic insights into amyloid pore formation. Biochemistry. 53 (28), 4489-4502 (2014).
- Xiang, S. Y., et al. Fucoxanthin inhibits beta-amyloid assembly and attenuates beta-amyloid oligomer-induced cognitive impairments. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (20), 4092-4102 (2017).
- Chang, L., et al. Protection against beta-amyloid-induced synaptic and memory impairments via altering beta-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin. Scientific Reports. 5, 10256 (2015).
- Yam, G. H. F., et al. In vitro amyloid aggregate forming ability of TGFBI mutants that cause corneal dystrophies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (9), 5890-5898 (2012).
- Tomaselli, S., et al. The alpha-to-beta conformational transition of Alzheimer's A beta-(1-42) peptide in aqueous media is reversible: A step by step conformational analysis suggests the location of beta conformation seeding. ChemBioChem. 7 (2), 257-267 (2006).
- Shigemitsu, Y., et al. Nuclear magnetic resonance evidence for the dimer formation of beta amyloid peptide 1-42 in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol. Analytical Biochemistry. 498, 59-67 (2016).
- Khan, M. V., Rabbani, G., Ahmad, E., Khan, R. H. Fluoroalcohols-induced modulation and amyloid formation in conalbumin. International Journal of Biological Macromolecules. 70, 606-614 (2014).
- Fang, F., et al. 5-hydroxycyclopenicillone, a new beta-amyloid fibrillization inhibitor from a sponge-derived fungus trichoderma sp HPQJ-34. Marine Drugs. 15 (8), 260 (2017).
- Shiao, Y. J., Su, M. H., Lin, H. C., Wu, C. R. Echinacoside ameliorates the memory impairment and cholinergic deficit induced by amyloid beta peptides via the inhibition of amyloid deposition and toxicology. Food & Function. 8 (6), 2283-2294 (2017).
