Summary
여기, 우리는 독 소 루비의 신속한 retrobulbar 주입 하 여 129S1/SvImJ 마우스에 있는 실험적인 신 증후군의 유도 설명합니다. 우리는 또한 aprotinin 요도 떠들고 효소 활동을 억제 하 고 나트륨 보존 방지를 포함 하는 지속적인된 출시 펠 릿을 가진 신 쥐를 취급 합니다.
Abstract
신 증후군 proteinuric 신장 질환의 가장 극단적인 징후 이며 무거운 proteinuria, 저, 및 나트륨 보존 및 혈 종에 의해 특징. 이 증후군의 병 태 생리학 연구, 설치류 모델 개발 되었습니다 독 소 루비 podocyte 손상을 일으키는 독성 물질의 주입에 따라. 마우스에서 단지 몇 가지 변종이이 모델을 따르게 됩니다. Wildtype 129S1/SvImJ 마우스에서 retrobulbar 부 비 동에 급속 한 정 맥 주사 하 여 독 소 루비의 실험적인 신 증후군 기능 나트륨 보유, 부 종 등 인간의 질병의 모든 증상을 유도 한다. Proteinuria의 발병 후 쥐 전시 상피 나트륨 채널 (ENaC)과 나트륨 보존의 활성화를 이끌어 요 떠들고 효소 활동을 증가 했다. 약리학 지속적인된 출시 aprotinin와 치료에 의해 요도 떠들고 프로 테아 제 억제 ENaC 활성화 되어있는 나트륨 보유를 방지 한다. 이 모델은 proteasuria, 즉이상 공부 하기 적합., 그것의 γ 소 단위의 베이스에 의해 ENaC 활성화 시키는 활성 떠들고 프로 테아의 배설. 이 ENaC 활성화 및 proteinuric 장병에 나트륨 유지의 기본 메커니즘으로 간주 될 수 있다.
Introduction
신 증후군은 무거운 proteinuria, 저, 부 종 및 혈, 특징 그리고 proteinuric 신장 질환의 가장 극단적인 표현으로 간주 될 수 있다. 설치류에 실험적인 신 증후군 anthracyclines 또는 podocyte 피해를 연결 하 고 인간의 최소한의 변화 질병 및 초점 단편 glomerulosclerosis (FSGS)1유사한 puromycin의 단일 주사로 유도 수 있다. 후 Frenk 외에 의해 1955 년에 그것의 첫 번째 설명입니다. 2, 쥐에 puromycin nucleoside nephrosis (팬) 수많은 연구3,4,,56신 증후군의 병 태 생리학을 조사 하기 위해 표준 모델 되고있다. 마우스에 해당 모델 안트라사이클린 독 소 루비7에 의해 유도 될 수 있다. 그러나, 거기에 강한 유전자 두 개 이상 유전 loci8에 의해 결정 되는 스트레인-종속성입니다. 또한, proteinuric 응답 및 신 증후군9,10의 과정에서 차이가 있다. Retrobulbar 공동 통해 129S1/SvImJ 마우스 및 독 소 루비의 신속한 정 맥 주입을 사용 하 여, proteinuria 응답 증 증후군, 특히 볼륨 보존 특징의 일반적인 기능을 유도 하기에 충분 한 값에 도달 ascites 고 소변 거의 나트륨 무료7. 나트륨 보존 실험 증 증후군에는 plasmin의 γ 소 단위4의 베이스를 일으키는 등 프로 테아 aberrantly 필터링된 떠들고 원심 관에 상피 나트륨 채널 (ENaC)의 활성화의 결과로 추정 되었습니다. ,,1112. 최근,이 개념은 분해 ENaC 활성화 및 나트륨 보존에서 떠들고 protease 억제제 aprotinin ENaC 차단기 amiloride13으로 동등 하 게 효과적 이었던 치료에 의해 보호 되었다 신 생쥐에서 입증 되었다. 원심 관에 지속적인 배달 되도록 aprotinin 피하 이식된 지속적인된 출시 펠 릿을 통해 관리 되었다. 미래 연구는 병렬 인간의 상황을 생각 하는 신 증후군에서 분해 ENaC 활성화에 대 한 책임은 떠들고 프로 테아 제를 식별 해야 합니다. 이 위해 유도 하는 독 소 루비 신 증후군 야생-타입 마우스에 사용 하거나 유전자 조작된 생쥐를 확대 수 있는 귀중 한 모델입니다. 약의 낮은 비용, 낮은 복잡성 관리 및 좋은 재현성14는 그것의 장점이 있습니다.
이 문서에서는 retrobulbar 부 비 동을 독 소 루비의 급속 한 주사 및 주입 지속 출시 펠 릿 aprotinin 요도 떠들고 효소를 억제 하는 것을 포함 하 여 실험적인 신 증후군의 유도 시연 발 분석 결과와 측정 된 활동입니다.
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Protocol
모든 방법 치료 및 실험 동물의 사용 및 동물의 복지를 위한 독일 법률에 대 한 건강 가이드의 국가 학회에 따르면 실시 했다 그리고 그들은 지방 자치 단체 (Regierungspräsidium Tübingen)에 의해 승인 했다.
1. 유도 Retrobulbar 부 비 동을 독 소 루비 주입 실험 신 증후군의
- 피스톤의 정지 위치를 표시 하 여 탑재 된 30 G 정 맥으로 0.5 mL 주사기를 준비 합니다.
- 남성 (7.25 µ L/g 체중 (bw) 14.5 µ g/g bw 독 소 루비와 같은) 및 여성 쥐 (6.9 µ L/g bw 크거나 13.8 µ g/g bw 독 소 루비)는 아침부터 몸 무게에 따라 독 소 루비의 주입 량을 계산 합니다.
참고: 주어진된 복용량은 증 증후군의 유도 적합 합니다. 사 여과 속도 (12.6 µ g/g bw 독 소 루비)에 작은 변화 온화한 만성 신장 질환에서 심각한 신장 실패 (15.4 µ g/g bw 독 소 루비)7,에 도달 하는 신 장병의 중요 한 다른 과정 이어질 복용량에 사소한 변화 15. - 독 소 루비 솔루션 (2 µ g / µ L) 37 ° C 따뜻한 챔버에의 계산된 금액을 따뜻한.
주의: 독 소 루비는 유해 삼 킨 경우 암을 일으킬 수 있습니다. 항상 독 소 루비를 사용 하는 경우 장갑을 착용 하 고 어떤 피부 접촉을 피하십시오. - 마킹 포인트까지 독 소 루비 솔루션 주사기를 프리 필 고 0으로 균형을 설정 합니다. 주입 량과 주사기를 주사기 무게 볼륨을 확인 하십시오.
- 깊이와 5 vol %isoflurane 기화 기 및 2 L/min의 산소 흐름을 사용 하 여 마우스를 narcotize.
- 주입 전에 눈에 연 고를 사용 하지 마십시오. 연산자는 안전 하 고 성공적인 retrobulbar 주사를 수행 하기 위한 궤도 구멍의 명확한 보기를 필요로 한다.
- 페달 반사에 의해 마 취의 수준을 평가 하 고 주입을 시작 하기 전에 필요한 경우 마 취 납품을 조정 합니다.
- 운영자의 신체와 연산자의 주입 손에 직면 하 고 그것의 머리에 직면 하 고 그것의 뒤와 오른쪽 측면 recumbency에 마우스를 놓습니다.
참고: 절차는 설명 오른 손잡이 사람 왼손잡이 사람 왼손으로 주사를 수행 할 위치와 쉽습니다 바로 반전 주입 왼쪽. - 신중 하 게 지 고 눈에 복 부 피부에 부드러운 압력을 적용 하 여 마우스의 왼쪽된 눈알을 눈 소켓에서 내 다.
- 내부 눈 각도 (중간 종을 commissure)에서 왼쪽된 retrobulbar 공동을 찔린 합니다. Mouse´s 안구와 접촉을 하지 마십시오.
- 약간 기울기는 주사기와 주사 한 번에 전체 볼륨. 볼륨 및 exopthalmus 등 주사 사이트에서 누설 넘쳐 흐름의 어떤 표시 없이 어떤 저항 없이 주입은 다는 것을 확인 하십시오.
- 독 소 루비는 매우 독성 물질 이므로, 확인 잘 적어도 하루에 한 번 모 튼과 그리피스 그 외 여러분 에 따르면 점수 시트를 사용 하 여 사출 사이트에 특별 한 주의 16 및 지불 넘쳐 흐름의 어떤 표시 든 지 exopthalmus 좋아한다면 장애인된 눈 꺼 풀 폐쇄 또는 괴 사의 어떤 표시 든 지 붓기 또는 피부 병 변 occure 주입 후 또는 다음 일에 마우스를 안락사 해야 한다.
2. 주입 Aprotinin를 포함 하는 지속적인 릴리스 펠 릿의
- 하루 및 릴리스 기간 미리 당 원하는 복용량으로 펠 릿을 주문. Aprotinin, 경우 10 일 이상 나올 하루에 1 밀리 그램의 복용량을 선택 합니다.
참고:이 연구에 aprotinin 펠 릿 10 밀리 그램의 복용량을 포함 되어 있습니다.- 건조 조건 하에서 펠 릿 저장 고 습도에 대 한 노출을 피하십시오.
- 헤어가 위, 피부 준비가 위, 메스, 수술 핀셋, 조직 핀셋의 2 개 쌍, 바늘 홀더, 및 15 cm monofile 봉합 비 resorbable를 포함 하 여 수술에 대 한 필요 서류를 준비 합니다.
- 열 소독 기를 사용 하 여 240 ° c.에 5 분 동안 악기를 소독 악기를 사용 하기 전에 실내 온도 도달할 때까지 5 분을 기다립니다.
- Nonsterile 표면에 소독된 악기 팁의 어떤 접촉을 든 지 하지 마십시오.
- 뜨거운 악기에 의해 피부 화상을 하지 마십시오.
- 열 소독 기를 사용 하 여 240 ° c.에 5 분 동안 악기를 소독 악기를 사용 하기 전에 실내 온도 도달할 때까지 5 분을 기다립니다.
- Isoflurane 5 vol %1.5 vol %2 L/min 기화 기 및 산소 흐름을 사용 하 여 다음 마우스를 narcotize.
- 마우스에 열 상해를 피하기 위해 거 즈의 층으로 덮여 온난화 장치에 발생 하기 쉬운 위치에 마우스를 놓습니다. 표면 온도 약 37 ° C 이다.
- 연 고와 눈을 보호 합니다.
- 가 위 또는 트리머를 머리를 사용 하 여 0.5 c m2 에 대 한 영역에서 다시 중간에 머리를 제거 하 고 피부 소독에 대 한 적합 한 살 균 제 털이 없는 피부를 소독. 체온을 유지 하 고 그래서 더 어려운 상처를 도달 하는 마우스에 대 한 유지 및 스레드 종료 후 가능한 덜 머리 제거.
- 무딘 준비를 사용 하 여 피하 결합 조직에 약 1 cm 깊이의 길이 약 5 m m. 준비 왼쪽된 측면 주머니 cranio 꼬리 방향에 메스와 털이 없는 피부 incise
- 페달 반사에 의해 마 취의 수준을 평가 하 고 수술을 시작 하기 전에 마 취 납품을 필요한 경우 조정.
- 펠 릿을 10 일 출시 한 무 균 조직 핀셋을 사용 하 여 준비 왼쪽된 측면 주머니에 넣습니다. 주머니의 하단에 펠 릿 평면 위치에 둡니다.
- 준비 된 주머니에 액체 및 습도까지 펠 릿의 어떤 접촉을 든 지 하지 마십시오.
- 2-3 봉합 피부를 닫습니다. 만 더 어렵게 좀 먹는 여는 봉합을 열고 마우스를 매우 짧은 실 끝을 남겨 주세요.
- 개별적으로 수술 후 조 난을 줄이고 무기는 봉합의 개통을 방지 하기 위해 마우스를 놓습니다. 그것은 마 취 법 후 충분 한 의식이 회복 될 때까지 마우스를 보기에 유지.
참고: 있다 수술 후 통증 관리에 대 한 필요가 없습니다 있기 때문에이 개입 불편 이나 통증의 어떤 표시 없이 잘 용납입니다. 또는 권장 국 소 진통제, 진통의 8 h까지 제공 하는 것을 폐쇄 하기 전에 절 개에 bupivacaine의 예: 드롭 합니다.
3. 모델 유도, 신 증후군의 징후 및 웰빙에 대 한 평가
- 수집 아침 소변 (오전 08시) 반응 컵 (1.5 mL)에 주입 날부터 매일 방광을 마사지 하 여.
- Proteinuria Bradford 단백질 분석 실험을 사용 하 여 측정 하 고 크를 정상화.
참고: 신 증후군의 유도, proteinuria 해야 독 소 루비 주입 후에 있는 하루 7과 10 사이 120 mg/mg 크의 임계값 도달.
- Proteinuria Bradford 단백질 분석 실험을 사용 하 여 측정 하 고 크를 정상화.
- Ascites의 개발에 대 한 보세요. 복 부 둘레 또는 돌출 된 측면의 증가를 확인 합니다.
- 무게는 마우스, 음식 펠 릿 및 마시는 병 (오전 08시) 아침에 매일.
- 확인 잘 적어도 하루에 한 번 모 튼과 그리피스 외 알에 따라 점수 시트를 사용 하 여. 16
4. 비 분석 결과와 요도 떠들고 효소의 측정
- Lyophilised 발 기판 S-2251, 저조한 2 m m의 농도의 25 mg의 병 15 mL의 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)를 추가 하 여 기판 작업 솔루션을 준비 합니다. 2 mg/mL의 농도로 aprotinin 솔루션을 얻기 위해 PBS에 aprotinin를 분해.
- -20 ° c.에 준비 솔루션 저장 이 크게 자동-S-2251의 저하 속도가 느려집니다. 노란색의 강한 그늘과 오래 된 솔루션을 사용 하지 마십시오.
- 갓 준비 나 해 동 기판 작업 솔루션을 사용 하 고 37 ° C 열 챔버에 따뜻한.
- 소변 샘플을 실 온에서 녹여
- 반복 해빙과 동결을 피하 여 효소 저하를 방지 합니다. -20 ° c.에서 소변 샘플을 저장
- 광도 측정에 적합 한 96 microwell 접시를 사용 합니다. 각각 2 개의 우물의 undiluted 소변의 3 µ L을 추가 하 고 우물에 PBS 또는 aprotinin 솔루션의 3 µ L와 기판 작업 솔루션의 50 µ L를 추가. 커버 플레이트 플레이트 마감재와.
- 37 ° C 열 약 실에서 60 분 적용된 microwell 접시를 품 어.
- 각 잘 450에서 광학 밀도 측정 nm microplate 리더를 사용 하 여.
- OD aprotinin 고 요도 aprotinin 민감한 떠들고 효소 활동으로 aprotinin 사이의 차이 가져가 라.
참고: aprotinin 없이 짝된 샘플의 측정 기판은 또한 병 태 생리 역할을 재생 하지 않는 다른 프로 테아 제에 의해 죽 습 수 이후 분석 결과의 특이성을 증가 시킵니다.
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Representative Results
Isoflurane 마 취 법의 유도 후 독 소 루비 빠르게 왼쪽된 retrobulbar 공동 통해 주입 했다. 전체 볼륨 7.25 µ L/g의 저항 및 증명 넘쳐 흐름은 정 맥의 정 맥 위치 수정 없이 bw 주입 했다. 마우스 마 취 법에서 빠르게 회복 하 고 그 날에 그리고 그 후 아무 손상 했다. 특히, 왼쪽된 눈에 손상의 아무 표시도 없었다. 후에 독 소 루비 주입, 음식과 액체 접수 독 소 루비의 일반 독성 효과 첫 3 일 동안 삭제 하 고 그 후 복구 (그림 1a). 주입 후 처음 3 일 동안 마우스의 몸 무게 때문에 inappetence (그림 1b)의 3.4%를 잃었다. 5일 하루에 시작, 마우스 개발 (그림 1a, b) 적절 한 음식 섭취 량에도 불구 하 고 오 줌 나트륨 배설의 거 대 한 쇠퇴에 선행 되었다 표시 proteinuria (그림 1c). 이 나트륨 보유와 몸 무게의 거 대 한 이득 22.2%로 10 일까지 3 일에서 이어질 ascites 동행 했다. Proteinuria, 결과로 마우스 개발 저 (그림 1c). 10 일에 찍은 플라즈마 샘플에서는 혈 표시 했다. 이러한 데이터에 신속 하 고 인상적인 retrobulbar 부 비 동에 의해 주어진 독 소 루비 wildtype 129S1/SvImJ 마우스에 본격적인 신 증후군 유도 표시.
나트륨 보존 실험 신 증후군에서 떠들고 프로 테아 제 plasmin11,12등의 탈 선 여과 의해 ENaC의 활성화로 연결 되었다. 이 개념 사실인, aprotinin에 의해 요도 떠들고 프로 테아 제 억제 ENaC 활성화 및 나트륨 보유에서 보호 해야 합니다. ENaC 활성화에 aprotinin의 효력을 공부, 우리 aprotinin와 신 마우스 취급. Aprotinin 급속 사 여과 의해 지워집니다, 우리 약국 10 일 동안 원심 관에 aprotinin의 지속적인 가용성을 보장 하는 지속 출시 펠 릿을 사용을 선택 하 고. 독 소 루비 주입 후 제 3 일에 한 마우스 aprotinin 포함 된 펠 릿으로 이식 했다 고 컨트롤 마우스 받은 isoflurane 마 취 법 아래 위약 펠 릿. 동물 형태 마 취 법 신속 하 게 복구 하 고 아무 문제 없이 상처 치유. 날부터 5, proteinuria (그림 2a) 비슷한 정도로 두 생쥐에서 개발. 그러나,만 위약 치료 신 쥐 나트륨 보존 (그림 2b)와 몸 체중 증가 (그림 2c) ENaC 활성화를 나타내는 경험. 반면, aprotinin 취급 마우스 나트륨 보존에서 보호 하 고 체중 증가 (그림 2b, c). 이것은 명확 하 게 요도 떠들고 효소 활동 증 증후군에 나트륨 보존의 원인 인지 보여줍니다.
소변에 플라즈마 달성 aprotinin 농도 ELISA로 측정 되었다. 그림 3a같이 오 줌 aprotinin 농도 주입 후 곧 만족 하 고 이후 일정 했다. 반면 플라즈마 aprotinin 집중 치료의 10 일 후 13 µ g/mL (2 µ M), 즉 aprotinin 치료 환자17달성 플라즈마 농도에 비해 평균 요도 aprotinin 농도 207 ± 29 µ g/mL (± 4 32 µ M) 이었다. 오 줌 떠들고 효소 활동에 aprotinin의 효과 실험 신 증후군의 과정에서 소변 샘플을 사용 하 여 비 분석 결과 함께 측정 했다. 이 분석 결과 p-450에 광도 의해 쉽게 검출 될 수 있는 nitroaniline를 발표 하는 기판에 펩 티 드 결합의 가수분해에 따라 nm. 그림 3b같이 떠들고 효소 활동 proteinuria의 발병을 병렬로 위약 치료 증 마우스에서 소변에서 급속 하 게 증가 했다. 반면, 요 떠들고 효소 활동은 ENaC 활성화 및 그림 2b, c에서처럼 나트륨 보존의 방지와 동시 aprotinin 치료 증 마우스에 완전히 저해 된다.
그림 1: 음식과 액체 섭취 량 (a)의 과정, 오 줌 나트륨 배설물과 몸 무게 (b), 그리고 proteinuria와 플라스마 알 부 민 농도 (c) 전후 실험 신 증후군의 유도. 독 소 루비 후 처음 3 일 동안 음식과 액체 섭취 량 감소, 후 마우스는 거의 일정 섭취 량 표시. 5 일 후, proteinuria의 개발 시작 하 고 하루 7 및 10, 본격적인 신 증후군 부 종 형성, 나트륨 보유와 저로 이어지는 사이 신 임계값에 도달. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: proteinuria (a), 오 줌 나트륨 배설 (b)와 (c) 마우스에에서 몸 무게의 과정 독 소 루비 주입 후 3 일에 각각 aprotinin 또는 위약 펠 릿을 취급. 비슷한 정도에 proteinuria의 개발에도 불구 하 고 aprotinin 증 증후군 중 ENaC 활성화로 인 한 나트륨 보유 및 부 종 형성을 보호 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: aprotinin의 플라스마 농도와 펠 릿의 주입 후 요도 aprotinin 농도의 과정. 오 줌 떠들고 효소 활동의 과정 4 단계에서 설명한 비 분석 결과와 측정. 오 줌 aprotinin 농도 주입 후 곧 봉우리 고 이후 상수 이다. 떠들고 효소 활동 증 증후군, proteinuria의 발병을 병렬로 연결 하는 동안 소변에서 급속 하 게 증가 한다. 비보에 Aprotinin 요도 떠들고 효소 활동에 있는 증가 대 한 방지합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
여기, retrobulbar 공동 주입을 통해 독 소 루비 주입 실험 증 증후군 혈, hypoalbumenia, 나트륨 보유, proteinuria와 129S1/SvImJ 쥐 유도 설명 합니다. 그러나,이 모델을 사용할 때 고려 되어야 하는 두 가지 중요 한 문제가 있다. 첫째, 모델 유도 복용량 의존은 엄격 하 게 하 고 독 소 루비 복용량 작은 0.3 µ g/g의 편차 쥐15의 응답에 영향을. 14 µ g/g 처럼 낮은 복용량과 함께 주입 하면 bw 또는 아래, 독 소 루비만 비 증 proteinuria 명백한 나트륨 보유, ascites, 혈와 연결 되지 않은 원인. 대조적으로, 더 높은 복용량의 주입 급성 신부전과 급성 사망률 높은 리드. 복용량과 쥐의 응답, 독 소 루비 원인 닮은 인간의 급성 신장 손상 (AKI) 과정, 만성 신장 질병 보존 사 여과 속도 (CKD 단계 g 1-3) 또는 진보적인 만성 신장 질병 감소 사 여과 속도 (CKD g 4-5) 요 독 증7,15선도.
둘째,이 모델 특정 마우스 계통에 제한 되며 널리 C57Bl/6 변형 저항8입니다. 또한, 유전 오염 그들은 backcross 동안 수도 이어질 수 있습니다 훨씬 낮은 응답 속도. 이 독 소 루비 복용량을 증가 하 여 어느 정도 피할 수 있습니다. 그러나, 독 소 루비의 복용량 모델 유도 대 한 사용 (14.5 µ g/g bw)은 이미 15-17 µ g/g 사이 설명된 LD50 가까이 bw 스트레인7,18.
이 마우스 모델의 사용 endocrinological dysregulations 및 신장 혈15proteinuria와 부 종 형성에서 도달 증 증후군에 관한 다른 매우 혁신적인 질문을 공부 하는 가능성을 엽니다. 이러한 의미에서 유도 하는 독 소 루비 신 장병 인간의 CKD의 넓은 스펙트럼을 커버 하 고 장학에 활용 하는 현재의 모델에 대 한 좋은 대안 연구 등 5/6 신19,20 또는 일방적인 ureter 결 찰21입니다. 또한, 그것은 모델을 적용 하는 동안 혈 청 glucocorticoid 키 1 (SGK1)의 부족과 같은 모델의 특정 유전자의 역할을 연구 하기 유전자 조작 쥐 수7 또는 많은 다른 사람.
제시 모델의 특징은 proteasuria, 즉발생., 베이스의 γ 소 단위의 의해 ENaC 활성화 시키는 활성 떠들고 프로 테아의 배설. 거의 나트륨 없는 소변과 볼륨 보존 빠른 몸 체중 증가 및 proteasuria의 발병 후 ascites의 개발 특징의 배설을이 끈다. 그러나,이 현상은 이다 과도, 그리고 15 일 후 마우스 저절로 ascites 느슨한 proteinuria 지속 비록 무게. 그러나 이유는,, 애매 남아 있습니다. 이 역설적인 행동 또한 신 쥐4 연구에서 관찰 되었다 그리고 설치류의 실험 신 증후군의 일반적인 기능을 나타내는 것 같다.
오 줌 떠들고 효소 활동은 간단 하 고 빠른 발 분석 결과 함께 측정 했다. 그것은 p-nitroaniline 4 아미노산 길이 다른 프로 테아 제에 의해 죽 습 수의 펩 티 드에 연결의 아 미드 유대의 가수분해에 기반. 일반적으로, 비 기판은 특정 효소에 대 한 특정 고 특정 기판 다니엘 프로 테아의 상당한 오버랩이 있다. 여기 사용 된 기판 트립 신 처럼 떠들고 프로 테아 제 plasmin 또는 플라즈마 kallikrein22등의 기본 기판이입니다. 특이성을 증가, 효소 활동은 항상 억제제23,24없이 짝된 샘플에서 결정 되어야 합니다. 이 연구에 aprotinin의 트립 신 처럼 떠들고 프로 테아 제 활동을 정의 하 사용 되었다. Aprotinin 민감한 활동에서 차이 계산 하 여 다른 프로 테아 제 활동은 밖으로 취소 됩니다. Aprotinin vivo에서, 치료 증 마우스에 요 떠들고 효소 활동 하지 증가 되었고 나트륨 보존의 폐지와 동시에 가장 중요 한 것은. 따라서, 오 줌 떠들고 효소 활동 뿐만 아니라 나트륨 보존에 대 한 인과 증 증후군, 하지만 또한 간주 될 수 있다 치료로 새로운 될 수도 신 증후군에서 떠들고 protease 억제제의 효능 예측 바이오 마커 접근 신 증후군의 치료입니다. Bohnert 외에의해 연구. 13, 떠들고 protease 억제제 camostat 및 플라스 미노 겐 전환 억제제 유입 산 나트륨 보존 요도 떠들고 효소 활동을 정상화 실패와 동시 방지에 효과가 되지 않았습니다.
독 소 루비는 매우 독성 물질, 비록 retrobulbar 인젝션은 안전 하 고 동물의 복지를 손상 하는 어떤 해 든 지에 연결 되어 있지. 하나는 꼬리 정 맥 주입 동물 조 난을 줄이고 더 적당 한 접근을 될 것 이라고 주장할 수 있습니다. 비교 연구에서 우리가 발견 밖으로 독 소 루비의 꼬리 정 맥 주입을 통해 유도 retrobulbar 경로 retrobulbar 경로 (에 의해 유도 된 그에 비해 신 증후군 (응답 34% 비)을 개발 하지 않았다 쥐의 높은 비율 때문에 열 등 했다 0-15% 비 응답). 또한, proteinuria 꼬리 정 맥 주입에 의해 낮은 감쇠 나트륨 보존을 선도 했다. 이 약 동학 및 높은 피크 농도 독 소 루비 모델 유도 대 한 필수적인 빠른 retrobulbar 주입 후 podocyte 손상에 의해 달성의 차이 의해 설명 될 수 있습니다. 그러나, 그것은 retrobulbar 주입도 분 양의 독 소 루비의 넘쳐 흐름에 관련 된 합병증을 피하기 위해 매우 유능 하 고 경험이 풍부한 연산자 필요 강조 되어야 한다.
결론적으로, 독 소 루비에 의해 실험 신 증후군은 높은 현재 과학적인 질문, 가장 중요 한 것은 proteasuria를 조사 하도록 허용 하는 129S1/SvImJ 마우스에 proteinuric 신장 질환의 다양 한 모델입니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 연구는 독일 연구 재단 (DFG, 아칸소 1092/2-1)에서 교부 금에 의해 지원 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| supplies | |||
| BD Micro FINE + U-40 (0.30 mm x 8 mm) | BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Germany | PZN: 07468060 | syring |
| ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm) | Johnson&Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany) | EH7823H | suture |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| reagents | |||
| aprotinin (6000 KIU/mg) | LOXO, Heidelberg, Germany | CAS 9087-70-1 | |
| Bepanthen, Augen- und Nasensalbe | Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany | PZN: 1578681 | ointment |
| Chromogenix S-2251 | HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Germany | 82 0332 39 | chromogenic substrate |
| doxorubicin (2.0 µg/µL) | Cell Pharm, Bad Vilbel, Germany | CAS 25316-40-9 | doxorubicin |
| isofluran CP (1 mL/mL) | CP-Pharma, Burgdorf, Germany | CAS 26675-46-7 | isofluran |
| pellets with matrix-driven sustained release (custom-made) | Innovative Research of America, Sarasota, FL | X-999 | pellet |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| equipment | |||
| ELx808 Absorbance Mikroplate Reader | BioTek, Bad Friedrichshall, Germany | ELx808 | microplate reader |
| MICROSTERIL - 436 | B.M.S., Trescore Balneario, Italy | GAL/436 | sterilizer |
| Hybridization oven/shaker | GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, UK | RPN 2511 | heat chamber |
| Thermo MAT Pro 10 W, 15x25 cm, Lucky Reptile | Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Germany | 61201 | mouse warming device |
References
- Lee, V. W., Harris, D. C. Adriamycin nephropathy: a model of focal segmental glomerulosclerosis. Nephrology (Carlton). 16 (1), 30-38 (2011).
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