Протокол для укрепления сигналов Ион углеводов в масс-спектрометрия MALDI путем реформирования кристаллических структур во время процессов подготовки образца показано.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Метод подготовки эффективного образца для повышения углеводов Ион сигналов в Matrix с помощью лазерной десорбции/ионизации масс-спектрометрии
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Подготовка образца — очень важный процесс в масс-спектрометрия (МС) анализ углеводов. Хотя при содействии матрицы лазерной десорбции/ионизации (MALDI) MS является методом выбора в анализе углеводов, плохой ионной сигнала и данных воспроизводимость углеводов образцов продолжают оставаться серьезными проблемами. Для количественного анализа углеводов необходим эффективный аналитический протокол, предусматривающий высшего качества. Это видео демонстрирует пример подготовка протоколов для повышения интенсивности сигнала и свести к минимуму изменения данных углеводов в MALDI-МС. После сушки и кристаллизации образца капель кристально-морфологии реформировать путем метанола перед масс-спектрометрических анализа. Повышение углеводного сигнала рассматривается с визуализации MALDI масс-спектрометрия (IMS). Экспериментальные результаты показывают, что кристалл Реформации регулирует кристаллических структур и перераспределяет аналитов углеводов. По сравнению с методом подготовки сушеные капелька в обычных MALDI-МС, реформирования морфологии кристалл углеводов с метанола показывает значительно лучше интенсивности сигнала, изображение распределения ионов и стабильность данных. Поскольку протоколы, продемонстрировали здесь не связаны изменения в состав образца, они обычно применимы различные углеводы и матриц.
Введение
Анализ углеводов является важной и сложной темы. Углеводы и их производные играют важную роль в жизни организмов1,2,3. Эти молекулы сложные структуры и подвержены разлагаются. Многие из них не может быть охарактеризована ясно из-за трудности разделения и обнаружения. Хотя при содействии матрицы лазерной десорбции/ионизации (MALDI) масс-спектрометрия (МС) был применен к анализу широкого круга биомолекул, благодаря своей чувствительности и приемлемые результаты4, анализируя углеводы с помощью MALDI MS продолжается быть серьезной проблемой из-за низкой ио....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. образец пластины Литраж
-
Очистка образца пластины
- Носите перчатки нитриловые, чтобы избежать загрязнения образца пластины во время очистки.
- Ручная автомойка образца пластины с 100,0 мл стирального раствора (1,0 мг/мл).
- Ручная автомойка образца пластины с дистиллированной деионизированной водой (DDW).
- Промойте поверхность пластины образца с 30.0 мл метанола.
- Положите пластину образца в 600 мл стакан и залейте DDW до тех пор, пока пластины образца полностью погружен в воду.
- Поставьте стакан в ультразвуковой ванны (см. таблицу материалы) и soni....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Представитель SEM изображения SLeA смешивается с DHB подготовлен с использованием DD и рекристаллизация методы показаны на рисунке 1. Типичный DHB морфологии, подготовленный метод DD является большой игольчатые кристаллы на обод и тонкой кристаллических структур в центре образца пятна. Типичная длина таких игольчатые кристаллы являются ~ 100 мкм. После перекристаллизации, метанола образец имеет большую поверхность равномерно покрыты тонкой древесно.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Неоднородность образца является одной из серьезнейших проблем в DD MALDI-г-жа наиболее часто используемый метод подготовки образца, но результирующая кристаллы являются весьма разнородными. Такие примеры показывают воспроизводимость плохой выстрел до снимка и образец для сигнала. Таким образом Поиск «лакомые» в образце районах во время сбора данных является процедурой в MALDI экспериментов. Такие разнородные образцы являются неподходящими для количественная оценка в рутинных анализов.
В текуще.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Авторы имеют без подтверждений.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| <сильно>Реагент | |||
| Моющий порошок | Alconox | 242985 | |
| метанол | Merck | 106009 | |
| ацетонитрил Merck | 100003 | ||
| 2,5-дигидроксибензойная кислота (DHB) | Alfa Aesar A11459 | ||
| сиалил-льюис А (SLeA) | Sigma-Aldrich | S1782 | |
| Maltoheptaose | Sigma-Aldrich | M7753 | |
| Наконечники для пипеток | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Микроцентрифужная трубка | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q система очистки воды | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Неопудренные нитриловые перчатки | Microflex | SU-690 | |
| 600 мл стакан | Duran | 2110648 | |
| Ультразвуковой очиститель | Delta | DC300H | |
| Гигрометр | Wisewind | 5330 | |
| Расходомер газообразного азота | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-типа термопары | Digitron | 311-1670 | |
| Вихревой смеситель | Scientific Industries | SI-0236 | |
| Мини-центрифуга | Select BioProducts | Force Mini | |
| Пипетка | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Стереомикроскоп | Olympus | SZX16 | |
| Терморегулируемая сушильная камера | Эта лаборатория | ||
| Масс-спектрометр Ultraflex II TOF/TOF | Bruker Daltonics | ||
| MTP 384 целевая пластина полированная сталь BC | Bruker Daltonics | 8280781 | |
| Flexcontrol Версия 3.4 | Программное обеспечение для управления | Bruker Daltonics | |
| Fleximaging Версия 2.1 | Программное обеспечение для визуализации | Bruker Daltonics | |
| Flexanalysis Версия 3.4 | Программное обеспечение для анализа | Bruker Daltonics |
Ссылки
- Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
- Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).
- Caroff, M., Karibian, D.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
