Summary
Протокол для укрепления сигналов Ион углеводов в масс-спектрометрия MALDI путем реформирования кристаллических структур во время процессов подготовки образца показано.
Abstract
Подготовка образца — очень важный процесс в масс-спектрометрия (МС) анализ углеводов. Хотя при содействии матрицы лазерной десорбции/ионизации (MALDI) MS является методом выбора в анализе углеводов, плохой ионной сигнала и данных воспроизводимость углеводов образцов продолжают оставаться серьезными проблемами. Для количественного анализа углеводов необходим эффективный аналитический протокол, предусматривающий высшего качества. Это видео демонстрирует пример подготовка протоколов для повышения интенсивности сигнала и свести к минимуму изменения данных углеводов в MALDI-МС. После сушки и кристаллизации образца капель кристально-морфологии реформировать путем метанола перед масс-спектрометрических анализа. Повышение углеводного сигнала рассматривается с визуализации MALDI масс-спектрометрия (IMS). Экспериментальные результаты показывают, что кристалл Реформации регулирует кристаллических структур и перераспределяет аналитов углеводов. По сравнению с методом подготовки сушеные капелька в обычных MALDI-МС, реформирования морфологии кристалл углеводов с метанола показывает значительно лучше интенсивности сигнала, изображение распределения ионов и стабильность данных. Поскольку протоколы, продемонстрировали здесь не связаны изменения в состав образца, они обычно применимы различные углеводы и матриц.
Introduction
Анализ углеводов является важной и сложной темы. Углеводы и их производные играют важную роль в жизни организмов1,2,3. Эти молекулы сложные структуры и подвержены разлагаются. Многие из них не может быть охарактеризована ясно из-за трудности разделения и обнаружения. Хотя при содействии матрицы лазерной десорбции/ионизации (MALDI) масс-спектрометрия (МС) был применен к анализу широкого круга биомолекул, благодаря своей чувствительности и приемлемые результаты4, анализируя углеводы с помощью MALDI MS продолжается быть серьезной проблемой из-за низкой ионизации эффективность таких молекул5. Химические деривации является распространенным способом улучшить эффективность ионизации углеводов6,7, но такие процедуры являются время и использование образца. Кроме того эффективность ионизации дериватные углеводов по-прежнему ниже, чем белков. Таким образом необходима разработка методов для улучшения сигнала углеводов в MALDI MS без сложных процедур.
Еще одной сложной темой является применение MALDI MS для количественного анализа. Одной из основных проблем MALDI MS, что его чувствительность и данных воспроизводимость критически полагается на образец подготовки протоколов и экспериментальные параметры. Во многих случаях количественный анализ, MALDI MS ненадежной из-за разнородных образца морфологии и исследуемое вещество распределения. Хорошо известный пример-образцы, подготовленных с 2,5-dihydroxybenzoic кислоты (DHB) MALDI матрицей. Когда DHB кристаллизуется медленно под окружающей среды, степень включения аналита в матричные кристаллы непредсказуем, потому что полученные образцы показывают неправильные морфологии. Такие образцы обычно состоят из крупных кристаллов игольчатые и штраф. Когда DHB готовится с использованием летучих растворителей и/или тарелку с подогревом образца, быстрый процесс сушки приводит к более однородной тонкой кристаллов и лучше количественные результаты8,9,10. Этот метод известен как «перекристаллизации» MALDI образцов. Улучшение приписывается лучше включения аналитов в тонкой матричные кристаллы во время процесса быстрой кристаллизации. Мы также продемонстрировали, что настройка среды подготовки образца сократить неоднородность углеводов сигнала и улучшения количественных результатов11,12. В этих работах выводам, что образец морфология является критическим фактором, определяющим качество сигнала углеводов. Чтобы разработать общую стратегию для ежедневного анализа, метод эффективного образца Реформации, обеспечивая улучшение углеводного чувствительность не требуется.
Мы изучили систематически корреляции между образца морфологии и углеводов чувствительность в MALDI MS в последних доклада13. Результаты, полученные с помощью нескольких важных углеводов и матрицы показывают, что лучший повышение сигнала осуществляется recrystallizing сушеные MALDI образцы. Морфология образцов, подготовлен с использованием метода обычных сушеные капли (DD) реформировать путем быстрого перекристаллизации с метанолом (метанола). Здесь демонстрируются протоколы подготовки подробного образца. Протокол состоит из трех основных этапов, включая образца пластины литраж, образец осаждения и перекристаллизации и масс-спектрометрии анализа. Использовать углеводы включают sialyl Льюис (СКВA) и maltoheptaose (MH). DHB используется в качестве модели матрицы. Результаты показывают, что интенсивность сигнала углеводов и пространственного распределения заметно улучшилось после перекристаллизации. Такой метод может применяться для образцов с другими популярными матриц, включая 2,4,6-trihydroxyacetophenone (ТАП) и α- циано-4-Гидроксикоричная кислота. Этот метод служит общий подход, который может быть легко интегрирован в обычной лаборатории для анализа углеводов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. образец пластины Литраж
-
Очистка образца пластины
- Носите перчатки нитриловые, чтобы избежать загрязнения образца пластины во время очистки.
- Ручная автомойка образца пластины с 100,0 мл стирального раствора (1,0 мг/мл).
- Ручная автомойка образца пластины с дистиллированной деионизированной водой (DDW).
- Промойте поверхность пластины образца с 30.0 мл метанола.
- Положите пластину образца в 600 мл стакан и залейте DDW до тех пор, пока пластины образца полностью погружен в воду.
- Поставьте стакан в ультразвуковой ванны (см. таблицу материалы) и sonicate пластину образец 15 мин (200 Вт, 40 кГц).
- Взять образец стекла и удар от капель воды, используя под давлением азота.
- Депозит 0.2 мкл метанола на табличке образца, чтобы проверить ли метанола распространяется в другие места.
Примечание: Если метанола сливается с других точек, повторите шаги 1.1.3-1.1.5; Если нет, переходите к следующему шагу.
-
Регулирование температуры камеры сушки
- Используйте сушильную камеру устойчивый условиях сухой капли, как описано ранее,11,12,13. В частности используйте подробную процедуру, описанную в шагах 2.1-2.5 Ou, ю.-М. и др. 201612. Кратко:
- Очистить сушильную камеру, комнатной температуре азота при постоянной скорости потока для поддержания низкой относительной влажности окружающей среды.
- Держите пластины образца температуры константа в регулярные - (25 ° C) или условий Быстросохнущий (50 ° C), регулируется температуры Медная шашка в сушильную камеру.
- Используйте сушильную камеру устойчивый условиях сухой капли, как описано ранее,11,12,13. В частности используйте подробную процедуру, описанную в шагах 2.1-2.5 Ou, ю.-М. и др. 201612. Кратко:
-
Подготовка матрицы и исследуемое вещество решений
-
Подготовка матрицы решений
- Распустить DHB в ацетонитриле (ACN) 50%: 50% DDW приготовить раствор 0,1 М.
-
Подготовка углеводов аналитов
- Растворите SLeA в DDW подготовить 10 раствора М-4 .
- Растворите MH в DDW приготовить раствор М 10-4 .
-
Подготовка матрицы решений
2. образец осаждения и рекристаллизация
Примечание: Оптимизированные процедуры для анализа малых и регулярные количество образцов описаны здесь. Убедитесь, что температура образца пластины стабилизируется на желаемую температуру до сдачи на хранение решения. Если образец распространяется на большой площади для покрытия других точек выборки в ходе перекристаллизации, подготовка нового образца или повторите шаг 1.1.
-
Для анализа небольшого количества образца (0.1 мкл)
Примечание: следующие шаги были разработаны для минимизации времени и образец потребления. Это подходит для количественного анализа реальных образцов с ограниченный объем или быстрый IMS для количественной оценки анализа.- Премикс 0,25 мкл раствора DHB и 0,25 мкл SLeA или MH раствора в пробки microcentrifuge.
- Вихревой смешанного решения с помощью вихревой смеситель для 3 s.
- Спин вниз смешанного решения в мини-центрифуга для 2 s (2000 x g).
- Использование пипетки вытянуть 0.1 мкл готовые решения и немедленно сдать его на плите образца.
Примечание: При сдаче небольшое количество образца, Не держать готовые решения в наконечник пипетки для более чем 10 s. - Ждать для образца высохнуть. Типичное время сушки, перечислены в таблице 1.
- Использование пипетки депозита 0.2 мкл метанола прямо на месте сушеные образца. Образец будет получить мокрой и сухой немедленно.
Примечание: Убедитесь, что осаждения процедура закончена в 3 s, чтобы избежать потери значительного испарения метанола. - Рассмотрим пример с помощью микроскопа. Если кристалл морфологии не как ожидается (см. Рисунок 1 например, желаемых результатов), повторите шаги 2.1.1-2.1.6 для подготовки нового образца.
- Надевайте перчатки из нитрила и осторожно вынуть пластину образца из сушильной камеры.
-
Для анализа регулярных количество образцов (в 1 мкл)
Примечание: Для максимального повышения однородности углеводов образцов объемом выборки обычно используемых MALDI разрабатываются следующие шаги. Этот процесс подходит для рутинных и количественного анализа. Рекристаллизация процесс перераспределяет образцов и матриц равномерно для больших площадей.- Премикс 2,5 мкл раствора DHB и 2,5 мкл SLeA или MH раствора в пробки microcentrifuge.
- Вихревой готовые решения с вихревой смеситель для 5 s.
- Спин вниз смешанного решения в мини-центрифуга для 2 s (2000 x g).
- Использование пипетки вытянуть 1.0 мкл готовые решения и немедленно сдать его на плите образца.
Примечание: не использовать оставшиеся готовые решения снова после депонирования образцов. - Ждать для образца высохнуть. Типичное время сушки, перечислены в таблице 1.
- Использование пипетки депозита 1.5 мкл метанола прямо на месте высушенные образцы. Образец будет получить мокрой и сухой немедленно.
Примечание: В случаях с Температура плиты высокой пробы (50 ° C), перекристаллизации шаг должно быть сделано в течение 5 s к минимуму испарение метанола в наконечник пипетки. - Рассмотрим пример с помощью микроскопа. Если кристалл морфологии не как ожидается (см. Рисунок 1 например, желаемых результатов), повторите шаги 2.2.1-2.2.6 для подготовки нового образца.
- Надевайте перчатки из нитрила и осторожно вынуть пластину образца из сушильной камеры.
3. Массовое спектрометрирование данных сбора и анализа данных
Примечание: Анализ выполняется с использованием коммерческих время полета масс-спектрометр (Таблица материалов) оснащены источник ионов MALDI. Инструмент находится в ведении конкретного контроля программного обеспечения (Таблица материалов) с предварительно оптимизированные извлечения задержки и лазерной энергии. Спектры записываются в линейном режиме с массовых спектр m/z = 0 – 1500. Пластину образца потенциал является ±25 кэВ и каждый спектра в среднем 10 лазерных выстрелов. Пользователи должны проводить инструмент оптимизации и анализа проб с помощью совместимого программного обеспечения и следовать инструкциям завода-изготовителя прибора.
- Открыть инструмент контроля программного обеспечения (см. Таблицу материалы).
- Вставьте пластину образца в масс-спектрометр.
- Выберите метод приобретения предварительно оптимизированные данных в программном обеспечении.
- Зарегистрировать весь образец региона для IMS с использованием изображений программного обеспечения (см. Таблицу материалы).
Примечание: Пропустите этот шаг, если не делать IMS. - Начало сбора данных в пакетном режиме управления программного обеспечения.
- Участок Ион изображения с помощью изображений программного обеспечения после завершения сбора данных.
- Анализировать массового спектры с использованием программного обеспечения для анализа (см. Таблицу материалы) Если данные записываются без изображение Иона.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Представитель SEM изображения SLeA смешивается с DHB подготовлен с использованием DD и рекристаллизация методы показаны на рисунке 1. Типичный DHB морфологии, подготовленный метод DD является большой игольчатые кристаллы на обод и тонкой кристаллических структур в центре образца пятна. Типичная длина таких игольчатые кристаллы являются ~ 100 мкм. После перекристаллизации, метанола образец имеет большую поверхность равномерно покрыты тонкой древесно как кристаллы. «Чешуйчатого» кристаллы колея примерно 20-50 мкм Recrystallized образцы обеспечивают более эффективной площади поверхности чем обычных DD образцы.
IMS результаты показывают, что кристаллы древесно как обычно приводит к более высокой интенсивности сигнала углеводов и более однородной пространственного распределения. В обычных DD образцов углеводов Ион сигналы распространяются главным образом на периферии образца пятна. Рисунок 2 показывает результаты IMS SLeA и MH с и без метанола перекристаллизации. После перекристаллизации распределение SLeA и MH сигналы матч хорошо с изображением ярко поля Образец пятна. Кроме того все рекристаллизованном углеводов примеры показывают значительные улучшения в интенсивности сигнала на эти результаты, полученные от DD образцов. Из-за более высокой интенсивности сигнала и однородности перекристаллизации заметно улучшает качество данных в количественном анализе.
Повышение интенсивности сигнала углеводов путем перекристаллизации эффективна для обоих режимов положительных и отрицательных ионов. Рисунок 3 сравнивает интенсивности сигнала sodiated (положительный ион режим) и депротонированная (отрицательный ион режим) углеводов рекристаллизованном образцов в отношении что DD образцов. В среднем перекристаллизации MH образцов и СКВA увеличивает sodiated сигналы на коэффициенты 3.9 и 3.3, соответственно. Для депротонированная СКВAИон сигнала обычно дополняется фактор примерно 4,7 после перекристаллизации.
Рисунок 1. SEM изображения SLeA приготовленные DHB матрицы. Образцы подготавливаются с сухой капли и рекристаллизация методы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. Представитель результаты изображения масс-спектрометрия SLeA и MH приготовленные сушеные методы капли и перекристаллизации. Ион изображения представляют дистрибутивов аналитов sodiated или депротонированная. Все ярко поле и Ион изображения отображаются в том же масштабе. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3. Интенсивность сигнала углеводов полученные с методами подготовки образцов. Чёрные полосы: sodiated СКВA (m/z: 843); красные полосы: депротонированная СКВA (m/z: 819); синие полосы: sodiated MH (m/z: 1175). Планки погрешностей представляют стандартных отклонений. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
| Пример | Образец пластина Температура (° C) |
Количество образцов (МКЛ) |
Пример сушки время (ов) |
Сушка метанола время (ов) |
Надлежащего образца расширение после Рекристаллизация (%) |
| СКВA | 25 | 0.1 | 100-150 | < 5 | 0-200 |
| 1 | 300-350 | < 10 | |||
| MH | 0.1 | 100-150 | < 5 | ||
| 1 | 200-350 | < 10 | |||
| СКВA | 50 | 0.1 | < 5 | < 5 | |
| 1 | < 10 | < 10 | |||
| MH | 0.1 | < 5 | < 5 | ||
| 1 | < 10 | < 10 |
Таблица 1. Экспериментальные параметры и сушки условиях различных образца пластины temperatures.x
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Неоднородность образца является одной из серьезнейших проблем в DD MALDI-г-жа наиболее часто используемый метод подготовки образца, но результирующая кристаллы являются весьма разнородными. Такие примеры показывают воспроизводимость плохой выстрел до снимка и образец для сигнала. Таким образом Поиск «лакомые» в образце районах во время сбора данных является процедурой в MALDI экспериментов. Такие разнородные образцы являются неподходящими для количественная оценка в рутинных анализов.
В текущем исследовании морфологии образца MALDI оптимизирована путем перекристаллизации. Повышение интенсивности сигнала углеводов и стабильность данных путем перекристаллизации приписывается улучшение включения между углеводами и матриц. Из-за гидрофильные свойства большинства углеводов и матриц метанола может эффективно дезинтегрируют MALDI кристаллы и углеводов. Наблюдение показывает, что осаждения и быстрое испарение метанола реформ крупные игольчатые кристаллы DHB в небольших древесно как кристаллические структуры. Этот процесс также минимизирует образца сегрегации и увеличивает площадь поверхности. По данным МСМ реформированной кристаллы предоставляют лучше микроокружение для ионизации углеводов. В частности использования сушильной камеры – предоставить условие ссылки точно контролируемых экспериментальных параметров. Для обычного анализа общие MS пользователи могут следить за протоколов в рамках окружающей среды для достижения аналогичных результатов повышения.
Сигнала повышение путем перекристаллизации также может быть вызвано увеличение эффективной площади поверхности, поскольку MALDI доминируют поверхности химических реакций14,15. Корреляция между интенсивности сигнала и эффективной площади поверхности кристаллов MALDI изучено путем подготовки образцов различных образца пластины температуры11,12. По сравнению с большого изменения в размер кристалла, с помощью метода перекристаллизации плавная регулировка размер кристалла может быть достиган регулирования температуры образца пластины во время процесса сушки капли. При использовании THAP как матрица, средний размер игольчатые кристаллы THAP уменьшает 10 раз когда температура образца пластина уменьшает на 40 ° C. Наблюдения показывают, что интенсивность сигнала углеводов увеличивается размер кристалла уменьшается13. Однако снижение температуры образца пластины непригодна для обычного анализа потому, что он не может изменить морфологию DHB эффективно и требует длительного приготовления раза.
Для обеспечения наилучшего результата перекристаллизации, процессы подготовки должны проводиться с осторожностью. Во-первых свежий образец смеси обеспечивают лучший сигнал повышения с помощью метода перекристаллизации. После того как готовые решения подвергаются воздействию окружающей среды, предварительной кристаллизации происходит в решении, которое изменяет размер окончательного кристалла и морфологии. Такие изменения морфологии, вероятно, из-за изменения в соотношении матрица/исследуемое вещество. Наблюдения показывают, что перекристаллизации такие образцы не может обеспечить лучший сигнал повышения. Таким образом процесс дозирования должен работать с высокой эффективностью для защиты образца капли от предварительной кристаллизации в пределах кончика пипетки. Во-вторых подходящее количество метанола должны применяться к полностью реформы образцов. В процессе рекристаллизации метанола должны быть депонированы на поверхности образца как быстро, как можно избежать потери значительного испарения. MALDI образца кристаллы не полностью растворяются если объем наплавленного метанола недостаточно. В противоположность этому большой объем метанола разложить и уменьшения плотности образцов. Рекомендуется соблюдать морфологии образец под микроскопом, чтобы должным образом реформировать кристалл морфологии перед MS анализа. Если кристалл морфологии изменяются не полностью (см. Рисунок 1 и Таблица 1 для справки), это необходимо для подготовки нового образца с теми же процедурами.
Лучшим подходом количественного анализа в MALDI MS является анализ реформированной образцы с IMS. Хотя Реформации существенно минимизирует образца неоднородность, интенсивности сигнала аналитов в различных областях по-прежнему могут отличаться (рис. 2). По сравнению с ручной анализ выбранного образца позиций анализ всей выборки областей с IMS в среднем неопределенности и изменения данных. Наблюдения показывают, что перекристаллизации образцов, подготовленных с регулярным сумма (1.0 мкл пример решения) обеспечивает улучшенный углеводов образца однородности в количественный анализ (шаг 2.2). Однако IMS анализ таких образцов потребляет больше времени анализ метод ручного обследования. Для достижения быстрого анализа IMS, подготовка образцов с использованием 0.1 мкл пример решения (шаг 2.1) можно произвести небольшую выборку областей и уменьшить время анализа.
Рекристаллизация MALDI образцов обеспечивает улучшенный образца морфологии для чувствительных и количественного анализа в MALDI-МС. Основной принцип этого метода наглядно. Экспериментальный процессы, разработанные в этой работе являются удобным и эффективным для общего экспериментальных условиях. Эти экспериментальные процессы может быть легко применен к рутинных анализов без дополнительной стоимости.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Авторы имеют без подтверждений.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Detergent powder | Alconox | 242985 | |
| Methanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| 2,5-dihydroxybenzoic acid (DHB) | Alfa Aesar | A11459 | |
| sialyl-lewis A (SLeA) | Sigma-Aldrich | S1782 | |
| Maltoheptaose | Sigma-Aldrich | M7753 | |
| Pipette tips | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q water purification system | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Powder-free nitrile gloves | Microflex | SU-690 | |
| 600 mL beaker | Duran | 2110648 | |
| Ultrasonic cleaner | Delta | DC300H | |
| Hygrometer | Wisewind | 5330 | |
| Nitrogen gas flowmeter | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-type thermocouples | Digitron | 311-1670 | |
| Vortex mixer | Scientific Industries | SI-0236 | |
| Mini centrifuge | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipette | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | |
| Temperature controllable drying chamber | This lab | ||
| Ultraflex II TOF/TOF mass spectrometer | Bruker Daltonics | ||
| MTP 384 target plate polished steel BC | Bruker Daltonics | 8280781 | |
| Flexcontrol Version 3.4 | Bruker Daltonics | Control software | |
| Fleximaging Version 2.1 | Bruker Daltonics | Imaging software | |
| Flexanalysis Version 3.4 | Bruker Daltonics | Analysis software |
References
- Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
- Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).
- Caroff, M., Karibian, D. Structure of bacterial lipopolysaccharides. Carbohydrate Research. 338 (23), 2431-2447 (2003).
- Marvin, L. F., Roberts, M. A., Fay, L. B. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry in clinical chemistry. Clinica Chimica Acta. 337 (1), 11-21 (2003).
- Harvey, D. J. Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry of carbohydrates. Mass Spectrometry Reviews. 18 (6), 349-450 (1999).
- Ciucanu, I., Kerek, F. A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates. Carbohydrate Research. 131 (2), 209-217 (1984).
- Lamari, F. N., Kuhn, R., Karamanos, N. K. Derivatization of carbohydrates for chromatographic, electrophoretic and mass spectrometric structure analysis. Journal of Chromatography B. 793 (1), 15-36 (2003).
- Nishikaze, T., Amano, J. Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23 (23), 3787-3794 (2009).
- Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21 (5), 807-811 (2007).
- Nicola, A. J., Gusev, A. I., Proctor, A., Jackson, E. K., Hercules, D. M. Application of the fast-evaporation sample preparation method for improving quantification of angiotensin II by matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 9 (12), 1164-1171 (1995).
- Lai, Y. H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27 (8), 1314-1321 (2016).
- Ou, Y. -M., et al. Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications. Journal of Visualized Experiments. (116), e54409 (2016).
- Lee, H., et al. Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. , 49-55 (2017).
- Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes. Applied Surface Science. 103 (3), 231-244 (1996).
- Sadeghi, M., Vertes, A. Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization. Applied Surface Science. 127 (Supplement C), 226-234 (1998).
