Summary
En protokol for at øge kulhydrat ion signaler i MALDI massespektrometri af reformen krystallinske strukturer under prøven forberedelse processer godtgøres.
Abstract
Forberedelse af prøver er en kritisk proces i massespektrometri (MS) analyse af kulhydrater. Selvom matrix assisted laser desorption/Ionisation (MALDI) MS er den foretrukne i kulhydrat analyse metode, dårlig ion signal og data reproducerbarhed af kulhydrat prøver fortsat at være alvorlige problemer. Til kvantitativ analyse af kulhydrater er en effektiv analytiske protokol giver overlegen datakvalitet nødvendige. Denne video viser prøve forberedelse protokoller for at forbedre signal intensitet og minimere data ændring af kulhydrater i MALDI-MS. Efter tørring og krystallisering af prøven dråber reformeret krystal morfologi af methanol før massespektrometrisk analyse. Ekstraudstyr i kulhydrat signal er undersøgt med MALDI imaging massespektrometri (IMS). Eksperimentelle resultater viser, at crystal reformationen justerer krystallinske strukturer og omfordeler kulhydrat analysander. I forhold til metoden tørrede droplet forberedelse i konventionelle MALDI-MS, reformere kulhydrat krystal morfologier med methanol viser betydeligt bedre signal intensitet, ion image distribution og data stabilitet. Da protokollerne vist heri ikke indebærer ændringer i prøven sammensætning, er de generelt gælder for forskellige kulhydrater og matrixer.
Introduction
Kulhydrat analyse er et vigtigt og udfordrende emne. Kulhydrater og deres derivater spiller vigtige roller i levende organismer1,2,3. Disse molekyler har komplicerede strukturer og er tilbøjelige til at nedbryde. Mange af dem kan ikke tydeligt kendetegnet på grund af vanskeligheder med separation og afsløring. Selv om matrix assisted laser desorption/Ionisation (MALDI) massespektrometri (MS) er blevet anvendt til analyse af en bred vifte af biomolekyler, på grund af dens følsomhed og forståelige resultater4, fortsætter analysere kulhydrater bruger MALDI-MS at være en stor udfordring på grund af lav ionisering effektiviteten af sådanne molekyler5. Kemiske forædling er en almindelig måde at effektivisere ionisering af kulhydrater6,7, men sådanne procedurer er tid og prøve forbrugende. Desuden er ionisering effektiviteten af derivatized kulhydrater stadig lavere end for proteiner. Således er er udviklingen af metoder til at forbedre kulhydrat signal i MALDI-MS uden komplicerede procedurer nødvendige.
Anvendelsen af MALDI-MS til kvantitativ analyse er en anden udfordrende emne. Et stort problem for MALDI-MS er, at dens følsomhed og data reproducerbarhed er kritisk afhængig prøve forberedelse protokoller og eksperimenterende parametre. I mange tilfælde er kvantitativ analyse af MALDI-MS upålidelige som følge af heterogene prøve morfologier og analysanden distribution. Et velkendt eksempel er prøver forberedt med en 2,5-dihydroxybenzoic acid (DHB) MALDI matrix. Når DHB er udkrystalliseret langsomt under omgivende miljø, er omfanget af analysand iblanding i matrix krystaller uforudsigelige, fordi deraf følgende prøver viser uregelmæssige morfologier. Sådanne prøver består normalt af store kanyle-formet og fine krystaller. Når DHB er udarbejdet ved hjælp af et flygtigt opløsningsmiddel og/eller en opvarmet prøve plade, resulterer en hurtig tørringsproces i mere homogene fine krystaller og bedre kvantitative resultater8,9,10. Denne teknik er kendt som "omkrystallisering" MALDI prøver. Forbedring tilskrives bedre inkorporering af analysander i fine matrix krystaller under hurtig krystallisering processen. Vi har også vist, at justere sample forberedelse miljø reduceret heterogenitet af kulhydrat signal og forbedret kvantitative resultater11,12. Resultaterne i disse værker foreslår at prøve morfologi er en kritisk faktor for kulhydrat signalkvalitet. For at udvikle en generel strategi for daglige analyse, er en effektiv prøve reformationen metode giver forbedret kulhydrat følsomhed påkrævet.
Vi har systematisk undersøgt sammenhængen mellem prøve morfologi og kulhydrat følsomhed i MALDI-MS i en nylig rapport13. Resultater opnået ved hjælp af flere vigtige kulhydrater og matrixer show, det bedste signal ekstraudstyr er opfyldt af recrystallizing tørret MALDI prøver. Morfologi af prøver udarbejdet ved hjælp af metoden konventionelle tørrede slipværktøj (DD) er reformeret ved hurtig omkrystallisering med methanol (MeOH). Detaljerede prøve forberedelse protokoller er vist her. Protokollen består af tre hovedtrin, herunder prøve plade forkonditionering, prøve deposition og omkrystallisering og massespektrometri analyse. De udnyttede kulhydrater omfatter sialyl-lewis et (SLeA) og maltoheptaose (MH). DHB er brugt som en model matrix. Resultaterne viser, at kulhydrat signal intensitet og rumlige fordeling forbedret markant efter omkrystallisering. Sådan en metode kan anvendes til prøver med andre populære matrixer, herunder 2,4,6-trihydroxyacetophenone (THAP) og α- cyano-4-hydroxycinnamic syre. Denne metode fungerer som en generel tilgang, der nemt kan integreres i rutinen laboratorium for kulhydrat analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. prøve plade forkonditionering
-
Rengøring af prøve plade
- Nitril handsker for at undgå kontaminering af prøven plade under rengøring.
- Hånd-vask prøve plade med 100,0 mL af opløsning af et rengøringsmiddel (1,0 mg/mL).
- Hånd-vask prøve plade med destilleret-deioniseret vand (DDW).
- Skyl plade prøveoverfladen med 30,0 mL MeOH.
- Sætte prøve pladen i et 600 mL bægerglas og fyld op med DDW, indtil prøven plade er fuldt nedsænket i vand.
- Sætte bægerglasset i en ultralyds bad (Se tabel af materialer) og sonikeres prøve plade i 15 min. (200 W, 40 kHz).
- Tag prøven plade og blæse vanddråber ved hjælp af tryk kvælstof.
- Deponere 0.2 µL af MeOH på prøve plade til at kontrollere, om MeOH spreder sig til andre steder.
Bemærk: Hvis MeOH fusionerer med andre steder, skal du gentage trin 1.1.3-1.1.5; Hvis ikke, gå videre til næste trin.
-
Regulering af tørring kammertemperaturen
- Bruge en tørring kammer under konstant betingelser tørre dråber, som beskrevet tidligere11,12,13. Især bruge detaljerede fremgangsmåden i trin 2.1-2.5 i Ou, Y.-M. et al. 201612. Kort:
- Rense tørring kammeret ved stuetemperatur kvælstof ved en konstant gennemstrømningshastighed at opretholde en lav relativ luftfugtighed.
- Holde den prøve plade-temperatur konstant på regelmæssig - (25 ° C) eller fast-tørring betingelser (50 ° C), reguleret af en temperatur-kontrolleret kobber blok i tørring salen.
- Bruge en tørring kammer under konstant betingelser tørre dråber, som beskrevet tidligere11,12,13. Især bruge detaljerede fremgangsmåden i trin 2.1-2.5 i Ou, Y.-M. et al. 201612. Kort:
-
Forberedelse af matrix og analysanden løsninger
-
Forberedelse af matrix løsninger
- Opløse DHB i 50% acetonitril (ACN): 50% DDW at forberede en 0,1 M opløsning.
-
Forberedelse af kulhydrat analysander
- Opløse SLeA i DDW at forberede en 10-4 M opløsning.
- Opløse MH i DDW at forberede en 10-4 M opløsning.
-
Forberedelse af matrix løsninger
2. prøve Deposition og omkrystallisering
Bemærk: De optimerede procedurer til at analysere små og regelmæssig mængder af prøver er beskrevet her. Sikre at prøve plade temperaturen er stabiliseret ved den ønskede temperatur inden deponering af løsninger. Hvis prøven breder sig over et stort område til at dække andre prøven steder under omkrystallisering, forberede en ny prøve eller Gentag trin 1.1.
-
Til analyse af en lille mængde (0,1 µL) af prøven
Bemærk: de følgende trin er blevet udviklet for at minimere eksempeldatabase og tid forbrug. Det er velegnet til kvantitativ analyse af virkelige prøver med en begrænset mængde eller hurtig IMS for kvantificering analyse.- Premix 0,25 µL af DHB løsning og 0,25 µL af SLeA eller MH løsning i et microcentrifuge rør.
- Vortex blandet løsningen ved hjælp af en vortex-mixer til 3 s.
- Spin ned den blandede løsning i en mini centrifuge for 2 s (2000 x g).
- Bruge en pipette til at trække ud 0,1 µL af opløsningen forblandet og straks deponere det på prøve plade.
Bemærk: Når du indsætter en lille mængde af prøven, Må ikke holde den forblandet løsning i spidsen af pipetten for over 10 s. - Vente på prøve at tørre ud. Typiske tørretider er angivet i tabel 1.
- Bruge en pipette til at deponere 0.2 µL af MeOH højre ad tørrede prøve stedet. Prøven vil få våde og tørre ud umiddelbart.
Bemærk: Sikre, at proceduren for deposition er færdig i 3 s at undgå betydelig fordampning tab af MeOH. - Undersøge prøven ved hjælp af et mikroskop. Hvis krystal morfologier ikke er som forventet (Se figur 1 for eksempel af ønskede resultater), skal du gentage trin 2.1.1-2.1.6 at forberede en ny prøve.
- Nitril handsker og omhyggeligt tage prøven plade fra tørring salen.
-
Til analyse af en regelmæssig mængde (1 µL) af prøven
Bemærk: Følgende trin er udviklet til at maksimere homogeniteten af kulhydrat prøver med typisk udnyttede MALDI prøve beløb. Processen er egnet til rutine og kvantitative analyser. Omkrystallisering proces omfordeler prøver og matrixer jævnt til større områder.- Premix 2,5 µL af DHB løsning og 2,5 µL SLeA eller MH løsning i et microcentrifuge rør.
- Vortex forblandet løsningen med en vortex mixer til 5 s.
- Spin ned den blandede løsning i en mini centrifuge for 2 s (2000 x g).
- Bruge en pipette til at trække ud 1,0 µL af opløsningen forblandet og straks deponere det på prøve plade.
Bemærk: ikke brug den resterende forblandet løsning igen efter deponering af prøver. - Vente på prøve at tørre ud. Typiske tørretider er angivet i tabel 1.
- Bruge en pipette til at indbetale 1,5 µL af MeOH højre ad tørrede prøve stedet. Prøven vil få våde og tørre ud umiddelbart.
Bemærk: I tilfælde med høj sample plade temperatur (50 ° C), omkrystallisering skridt bør ske inden for 5 s for at minimere fordampning af MeOH i pipette tip. - Undersøge prøven ved hjælp af et mikroskop. Hvis krystal morfologier ikke er som forventet (Se figur 1 for eksempel af ønskede resultater), skal du gentage trin 2.2.1-2.2.6 at forberede en ny prøve.
- Nitril handsker og omhyggeligt tage prøven plade fra tørring salen.
3. masse massespektrometri Data erhvervelse og analyse
Bemærk: Analysen udføres ved hjælp af en kommerciel time of flight massespektrometer (Table of Materials) udstyret med en MALDI ion kilde. Apparatet drives af specifikke kontrol software (Tabel af materialer) med pre optimeret udvinding forsinkelse og laser energi. Spektre registreres i lineære tilstand med en massiv vifte af m/z = 0-1500. Prøve plade potentielle er ±25 keV og hvert spektrum i gennemsnit 10 laser skud. Brugere bør gennemføre instrument optimering og prøve analyse ved hjælp af kompatible software og følge instrument producentens anvisninger.
- Åbn instrument kontrol software (Se Tabel af materialer).
- Indsæt den massespektrometer prøve plade.
- Vælg metoden pre optimeret data erhvervelse i softwaren.
- Registrere regionen hele prøven for IMS ved hjælp af billedbehandling software (Se Tabel af materialer).
Bemærk: Springe dette trin, hvis ikke gør IMS. - Start dataopsamling i batchtilstand kontrol software.
- Plot ion billeder ved hjælp af billedbehandling software, når dataopsamling er fuldført.
- Analysere massespektre ved hjælp af analysesoftwaren (Se Tabel af materialer) hvis data, der er registreret uden en ion billede.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Repræsentative SEM billeder af SLeA blandet med DHB tilberedt med DD og omkrystallisering metoder er vist i figur 1. En typisk DHB morfologi er som er udarbejdet af metoden DD stor kanyle-formet krystaller på rim og fine krystallinske strukturer i midten af prøven steder. De typiske længder af sådanne kanyle-formet krystaller er ~ 100 µm. Efter omkrystallisering af MeOH har prøven en større dækningsområde jævnt med fine flake-lignende krystaller. Længder af "flage" krystaller er ca 20-50 µm. Recrystallized prøver giver større effektiv overfladen områder end dem, der produceres af konventionelle DD prøver.
IMS resultater viser, at flake-lignende krystaller normalt resultere i højere kulhydrat signal intensitet og en mere ensartet geografisk fordeling. I konventionelle DD prøver fordeles kulhydrat ion signaler for det meste i periferien af prøven steder. Figur 2 viser IMS resultaterne af SLeA og MH med og uden MeOH omkrystallisering. Efter omkrystallisering, distribution af SLeA og MH signaler match godt med lysfelt image prøve steder. Også, alle recrystallized kulhydrat prøver viser betydelige forbedringer i signal intensitet over de resultater, der opnås fra DD prøver. På grund af højere signal intensitet og homogenitet forbedrer omkrystallisering markant datakvaliteten i kvantitativ analyse.
Øge kulhydrat signal intensitet ved omkrystallisering er effektiv til både positive og negative ion tilstande. Figur 3 sammenlignes signal intensiteten af sodiated (positiv ion mode) og deprotonated (negativ ion mode) kulhydrater af recrystallized prøver for at DD prøver. I gennemsnit øger omkrystallisering SLeA og MH eksempler sodiated signaler af faktorer af 3,9 og 3.3, henholdsvis. For deprotonated SLeA, er ion signal typisk forøget med en faktor på ca 4,7 efter omkrystallisering.
Figur 1. SEM billeder af SLeA tilberedt med DHB matrix. Prøverne er tilberedt med tørret droplet og omkrystallisering metoder. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Repræsentative resultater af billede massespektrometri af SLeA og MH tilberedt med tørret droplet og omkrystallisering metoder. Ion billeder repræsenterer fordelinger af sodiated eller deprotonated analysander. Alle lyse-felt og ion billeder vises i den samme skala. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Kulhydrat signal intensiteter fås med forskellige prøve præparationsmetoder. Sortstål, stænger: sodiated SLeA (m/z: 843); rød barer: deprotonated SLeA (m/z: 819); blå barer: sodiated MH (m/z: 1175). Fejllinjer udgør standardafvigelser. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Stikprøve | Prøve plade temperaturen (° C) |
Prøven beløb (ΜL) |
Prøven tørring tid (s) |
MeOH tørring tid (s) |
Ordentlig eksempelområde udvidelse efter omkrystallisering (%) |
| SLeA | 25 | 0,1 | 100-150 | < 5 | 0-200 |
| 1 | 300-350 | < 10 | |||
| MH | 0,1 | 100-150 | < 5 | ||
| 1 | 200-350 | < 10 | |||
| SLeA | 50 | 0,1 | < 5 | < 5 | |
| 1 | < 10 | < 10 | |||
| MH | 0,1 | < 5 | < 5 | ||
| 1 | < 10 | < 10 |
Bord 1. Eksperimentelle parametre og tørring betingelser under forskellige prøve plade temperatures.x
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Prøven heterogenitet er et afgørende problem i MALDI-MS. DD er mest almindeligt anvendte prøve forberedelse metode, men de resulterende krystaller er meget heterogen. Sådanne prøver viser dårlig skud til skud og prøve til prøve signal reproducerbarhed. Derfor er søger efter "sweet spots" i stikprøven områder under dataopsamling en fælles procedure i MALDI eksperimenter. Prøverne heterogene er uegnet til kvantificering i rutineanalysemetodens.
I den aktuelle undersøgelse, er MALDI prøve morfologi optimeret ved omkrystallisering. Forbedring i kulhydrat signal intensitet og data stabilitet ved omkrystallisering tilskrives forbedrede integreringen mellem kulhydrater og matrixer. På grund af de hydrofile egenskaber af de fleste kulhydrater og matricer, kan MeOH effektivt smuldre MALDI krystaller og kulhydrater. Observation viser, at depositionen og hurtig fordampning af MeOH reformer kanyle-formet DHB krystaller i små flake-lignende krystallinske strukturer. Denne proces også minimerer prøve segregation og øger overfladearealet. Ifølge IMS data give de reformerede krystaller en bedre mikromiljø for kulhydrat ionisering. Navnlig, er udnyttelse af tørring salen at give en reference tilstand netop kontrolleret eksperimentel parametre. Til rutinemæssig analyse, kan generelle MS brugere følge protokoller under en omgivende miljø at opnå lignende resultater, ekstraudstyr.
Signal forstærkning ved omkrystallisering kan også skyldes en stigning i effektive areal, da MALDI er domineret af overflade kemiske reaktioner14,15. Sammenhængen mellem signal intensitet og effektive areal af MALDI krystaller er blevet undersøgt ved at forberede prøverne under forskellige prøve plade temperaturer11,12. I forhold til en stor ændring i crystal størrelse ved hjælp af metoden omkrystallisering, kan finjustering af krystal størrelse opnås ved at regulere prøve plade temperatur under slipværktøjet tørring proces. Når du bruger THAP som en matrix, reducerer den gennemsnitlige størrelse af kanyle-formet krystaller af THAP 10-fold når prøven plade temperatur reducerer ved 40 ° C. Observationer viser, at kulhydrat signal intensiteten stiger som krystal størrelse falder13. Dog er reducere prøve plade temperatur uegnet til rutinemæssig analyse, fordi det kan ikke ændre morfologi af DHB effektivt og det kræver lang forberedelse gange.
For at sikre den bedste omkrystallisering resultat, skal forberedelse processer udføres med omhu. For det første, frisk prøve blandinger giver det bedste signal forstærkning ved hjælp af metoden omkrystallisering. Når forblandet løsninger er udsat for det omgivende miljø, opstår før krystallisering i den løsning, som ændrer den endelige krystal størrelse og morfologi. En sådan morfologi ændring er formentlig på grund af en ændring i matrix/analysand forholdet. Observationer viser, at omkrystallisering af sådanne prøver kan ikke give det bedste signal ekstraudstyr. Derfor bør proceduren pipettering drives med høj effektivitet til at beskytte prøve droplet fra før krystallisering inden for pipette tip. For det andet, en passende mængde MeOH bør anvendes til helt reform prøver. Undervejs omkrystallisering bør MeOH indbetales på prøveoverfladen så hurtigt som muligt for at undgå betydelig fordampning tab. MALDI prøve krystaller ikke opløses fuldstændigt, hvis mængden af deponerede MeOH ikke er nok. Derimod vil en stor mængde af MeOH spredt ud og reducere prøver tæthed. Det anbefales at observere prøve morfologier under et mikroskop for at sikre, at crystal morfologier er reformeret ordentligt før MS analyse. Hvis krystal morfologier ikke er fuldt ud er ændret (Se figur 1 og tabel 1 for reference), er det nødvendigt at udarbejde en ny prøve med de samme procedurer.
Den bedste kvantitativ analyse tilgang i MALDI-MS er analysere reformeret prøver med IMS. Selv om reformationen minimerer betydeligt prøve heterogenitet, kan signal intensiteten af analysander på forskellige områder stadig variere (figur 2). I forhold til manuel gennemgang af udvalgte stikprøve positioner gennemsnit analyse af hele stikprøven områder med IMS ud usikkerheder og data variation. Observationer viser, at omkrystallisering prøver forberedt med en regelmæssig beløb (1,0 µL prøveopløsningen) giver overlegen kulhydrat prøve homogenitet i kvantitativ analyse (trin 2.2). Dog forbruger IMS analyse af prøverne mere analyse tid end metoden manuel undersøgelse. For at opnå hurtig IMS analyse, kan prøver ved hjælp af 0,1 µL prøve løsninger (trin 2.1) producere lille udsnit områder og reducere analyse tid.
Omkrystallisering MALDI prøver giver overlegen prøve morfologi for følsomme og kvantitativ analyse i MALDI-MS. Det grundlæggende princip bag denne metode er tydeligt. De eksperimentelle processer udviklet i dette arbejde er praktisk og effektiv for generelle forsøgsbetingelser. Disse eksperimentelle processer kan let anvendes til rutinemæssig analyser uden ekstra omkostninger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Forfatterne har ingen anerkendelser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Detergent powder | Alconox | 242985 | |
| Methanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| 2,5-dihydroxybenzoic acid (DHB) | Alfa Aesar | A11459 | |
| sialyl-lewis A (SLeA) | Sigma-Aldrich | S1782 | |
| Maltoheptaose | Sigma-Aldrich | M7753 | |
| Pipette tips | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q water purification system | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Powder-free nitrile gloves | Microflex | SU-690 | |
| 600 mL beaker | Duran | 2110648 | |
| Ultrasonic cleaner | Delta | DC300H | |
| Hygrometer | Wisewind | 5330 | |
| Nitrogen gas flowmeter | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-type thermocouples | Digitron | 311-1670 | |
| Vortex mixer | Scientific Industries | SI-0236 | |
| Mini centrifuge | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipette | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | |
| Temperature controllable drying chamber | This lab | ||
| Ultraflex II TOF/TOF mass spectrometer | Bruker Daltonics | ||
| MTP 384 target plate polished steel BC | Bruker Daltonics | 8280781 | |
| Flexcontrol Version 3.4 | Bruker Daltonics | Control software | |
| Fleximaging Version 2.1 | Bruker Daltonics | Imaging software | |
| Flexanalysis Version 3.4 | Bruker Daltonics | Analysis software |
References
- Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
- Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).
- Caroff, M., Karibian, D. Structure of bacterial lipopolysaccharides. Carbohydrate Research. 338 (23), 2431-2447 (2003).
- Marvin, L. F., Roberts, M. A., Fay, L. B. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry in clinical chemistry. Clinica Chimica Acta. 337 (1), 11-21 (2003).
- Harvey, D. J. Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry of carbohydrates. Mass Spectrometry Reviews. 18 (6), 349-450 (1999).
- Ciucanu, I., Kerek, F. A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates. Carbohydrate Research. 131 (2), 209-217 (1984).
- Lamari, F. N., Kuhn, R., Karamanos, N. K. Derivatization of carbohydrates for chromatographic, electrophoretic and mass spectrometric structure analysis. Journal of Chromatography B. 793 (1), 15-36 (2003).
- Nishikaze, T., Amano, J. Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23 (23), 3787-3794 (2009).
- Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21 (5), 807-811 (2007).
- Nicola, A. J., Gusev, A. I., Proctor, A., Jackson, E. K., Hercules, D. M. Application of the fast-evaporation sample preparation method for improving quantification of angiotensin II by matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 9 (12), 1164-1171 (1995).
- Lai, Y. H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27 (8), 1314-1321 (2016).
- Ou, Y. -M., et al. Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications. Journal of Visualized Experiments. (116), e54409 (2016).
- Lee, H., et al. Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. , 49-55 (2017).
- Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes. Applied Surface Science. 103 (3), 231-244 (1996).
- Sadeghi, M., Vertes, A. Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization. Applied Surface Science. 127 (Supplement C), 226-234 (1998).
