Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Developmental Biology
Click here for the English version

Developmental Biology

Brug af hæmatopoietisk stamcelletransplantation at vurdere oprindelsen af myelodysplastisk syndrom

Published: October 3, 2018 doi: 10.3791/58140
Automatic Translation
1, 1, 2, 1
1Genetics Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health, 2LGI Flow Cytometry Core Facility, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health

Summary

Vi beskriver brugen af hæmatopoietisk stamcelletransplantation (HSCT) til at vurdere det maligne potentiale af gensplejsede hæmatopoietisk celler. HSCT er nyttigt for evaluering af forskellige maligne hæmatopoietisk celler i vivo samt generere en stor kohorte af mus med myelodysplastisk syndrom (MDS) eller leukæmi for at evaluere nye behandlingsformer.

Abstract

Myelodysplastisk syndrom (MDS) er en meget forskelligartet gruppe af hæmatopoietisk stamcelle lidelser, der er defineret af ineffektive bloddannelsen, perifert blod cytopenier, dysplasi og en tilbøjelighed til transformation til akut leukæmi. NUP98-HOXD13 (NHD13) Transgene mus sammenfatte menneskelige MDS perifert blod cytopenier, dysplasi og transformation til akut leukæmi. Vi viste tidligere at MDS vil kunne overføres fra en genetisk manipulerede mus med MDS til wild-type modtagere af omplantning MDS knoglemarv nukleeret celler (BMNC). Til mere klart forstå cellen MDS i oprindelse, vi har udviklet metoder til transplantation specifikke, immunophenotypically defineret hæmatopoietisk undersæt. I denne artikel vil beskrive vi processen med at isolere og omplantning specifikke populationer af hæmatopoietisk stamceller og stamceller. Efter transplantation beskriver vi metoder til at vurdere effektiviteten af transplantation og persistens af donor MDS celler.

Introduction

Myelodysplastisk syndrom (MDS) repræsenterer et mangfoldigt sæt af klonede blodsygdomme karakteriseret af ineffektive bloddannelsen, morfologiske tegn på dysplasi og en tilbøjelighed til transformation til akut myeloid leukæmi (AML)1,2 ,3,4. Ineffektiv bloddannelsen er anerkendt som en modning anholdelse i knoglemarven og resultater i perifert blod cytopenier trods en hypercellular knoglemarv1,3. Forekomsten af MDS har været skiftevis anslået 2-12 tilfælde pr. 100.000 personer om året i USA, og forekomsten af MDS stiger med alderen, hvilket gør dette en vigtig betingelse for at forstå i betragtning af aldrende amerikanske befolkning3, 5. Selv om de fleste tilfælde af MDS har ingen klar ætiologi, der nogle tilfælde af MDS menes at være på grund af eksponering for kendte genotoksiske stoffer, herunder opløsningsmidler som benzen, og kræft kemoterapi6.

MDS patienter har typisk erhvervet mutationer i MDS celler7. Selvom relativt ualmindeligt, har en række af MDS patienter erhvervet balancerede kromosomale translokationer involverer gener såsom NUP98, EVI1, RUNX1 og MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). Vores laboratorium har en mangeårig interesse i kromosom omplantninger, som indebærer, at NUP98 gen8. Transgene mus at udtrykke en NUP98-HOXD13 (NHD13) transgen reguleret af Vav1-promotor og forstærker elementer vise alle nøglefunktioner i MDS, herunder perifert blod cytopenier, morfologiske tegn på dysplasi og transformation til AML9 .

Selvom MDS har været anerkendt for over 60 år10, og anses for at være en klonal stamcelle lidelse, har bestræbelser på at indpode human MDS celle i immundefekte mus været stort set forgæves, fordi MDS celler indpode dårligt11, 12,13,14 og musene ikke udvikler kliniske sygdom. I et forsøg på at identificere, hvilke hæmatopoietisk celler kan overføre MDS, vi viste at NHD13 modellen, og viste, at vi kunne indpode MDS som en sygdom enhed, der viste alle de kardinale funktioner af menneskelige MDS, herunder perifert blod cytopenier, dysplasi, og transformation til AML15. I denne betænkning præsenterer vi de tekniske detaljer i disse eksperimenter samt tilgange til yderligere fractionate hæmatopoietisk stilk og forløber celler (HSPC), i et forsøg på at identificere MDS-indlede celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

De animalske procedurer, der beskrives i denne artikel blev godkendt af National Cancer Institute i Bethesda Animal Care og brug udvalget, og de politikker, der er indeholdt i The Public Health Service politik på human pleje og brugen af forsøgsdyr, er i overensstemmelse med den Animal Welfare Act, og vejledning i pleje og anvendelse af forsøgsdyr.

1. celle forberedelse

  1. Høst knoglemarv nukleeret celle (BMNC)
    1. Brug kun sterile materialer. Sterilisere genbruges instrumenterne ved hjælp af en damp autoklave. Køb kanyler, sprøjter og plast ware i engangs sterile beholdere. Udføre alle dyr og celle manipulationer i en klasse II, Type A2 biologiske sikkerhed kabinet.
    2. Forberede BMNCs i en 14 mL rund bund tube indeholder 3 mL af HF2 Skik (Hanks afbalanceret saltopløsning suppleret med 2% føtal bovint serum).
    3. Aflive C57Bl6 donor mus (positiv for CD45 allel CD45.2), alder typisk 2-6 måneder, ved hjælp af et CO2 kammer.
    4. Sterilisere mus slagtekroppen af sprøjtning 70% ethanol over hele kroppen med en sprayflaske. Skræl huden fra ben fra bækkenet ned til anklen.
    5. Fjern femora og skinneben fra slagtekroppe ved hjælp af steril saks (lige, skarpe/sharp, 11,5 cm) og pincet (Graefe, savtakket, 0,8 mm spids bredde). Trim muskler klart.
    6. Skær de proksimale og distale ender af skinnebenet med saksen. Holder tibia med pincet, indsætte en 27-gauge 3 mL sprøjte indeholdende 2,5 mL HF2 Skik i tibial marv hulrummet i den distale ende af tibia (ankel). Skylle knoglemarv celler fra skinnebenet ved hjælp af blide tryk ind 14 mL rund bund tube.
      1. Gentag for de andre skinneben.
    7. Skær den proksimale og distale ende af lårbenet med en saks. Flush lårbenet marv hulrum ved at indsætte en 20-gauge kanyle tilknyttes en 3 mL sprøjte indeholdende 2,5 mL af HF2 Skik i den distale ende af lårbenet marv hulrum og anvende blid pres på sprøjten.
      1. Gentag for de andre lårbenet, indsamle alle knoglemarv fra begge skinneben og femora i den samme 14 mL rund bund tube.
    8. Sprede marv massen af sugning op og ned flere gange med de samme 20-gauge kanyle tilknyttes i 3 mL sprøjten.
  2. Antistoffarvning af BMNC
    1. Grev BMNC. Tilføj 20 µL af en 3% eddikesyreopløsning til 20 µL af BMNC suspension genereret i trin 1.1.8. Tæl derefter, ved hjælp af en hemocytometer og en inverteret mikroskop.
    2. Pellet BMNC ved skånsom centrifugering ved 450 x g i 5 min. ved 4 ° C. Resuspenderes med HF2 Skik benytter 90 µL pr. 107 celler og tilsæt 10 µL af biotinylated anti-lineage antistof cocktail til cellesuspension.
    3. Efter inkubation i 20 min. ved 4 ° C, bejdset cellerne vaskes med 3 mL af fosfatbufferet saltopløsning (PBS).
    4. Resuspend BMNC med 100 µL af HF2 Skik pr. 107 celler. Tilføj 2 µL af allophycocyanin (APC) konjugerede anti-biotin antistof mod cellesuspension, efterfulgt af inkubation ved 4 ° C i 20 min.
    5. Skyl de farvede BMNC med 3 mL PBS og pelleten BMNC med HF2 Skik suppleret med 0,2 µg/mL propidium Iodid (PI) for flow flowcytometri celle sortering.
  3. Flow flowcytometri celle sortering af BMNC
    1. Kalibrere flow flowcytometri celle sorteringsanlæg. Optimere alle photomultiplier rør (PMTs), scatter og fluorescens parametre ved hjælp af unstained celler og inden for det lineære område af hver detektor.
    2. Forberede unstained, PI-farvede, og APC mærket lineage cocktail celler sideløbende fra trin 1.2. Analysere spektrale erstatning.
    3. Diskriminerer doublet celler af sekventielle gating FSC-H vs SSC-H, 640-SSC-A vs 640-SSC-H og 640-SSC-S vs 640-SSC-W.
    4. Udelukke celler ved hjælp af PI spændt på 561 nm og emission indsamlet med et 614/20 band pass filter. Excite lineage APC mærket celler på 640 nm og indsamle emission med en 671/30 band pass filter.
    5. Optage fluorescens værdier som spænding højde og indsamle mindst 100.000 hændelser i listen mode datafiler at visualisere befolkninger skal sorteres.
    6. Beregne spektrale erstatning efter at erhverve tre prøver af 10.000 celler for følgende: umærket celler, PI mærket celler og anti-lineage antistof cocktail konjugeret med APC mærket celler.
    7. Angive tre regioner at sortere Lineage negative (LN), Lineage positive (LP) med dim fluorescens intensitet (LP1) og LP befolkning med lyse fluorescens (LP2) i 5 mL rør indeholdende 0,5 mL 10% FBS medier.
    8. Slags celler ved hjælp af en en dråbe indhylle og rense Afbryd tilstand.
    9. Udføre post slags analyse med 1.000 samlede celler på hver sorteret prøve at bekræfte renhed og levedygtigheden af de sorterede celler.
    10. Indsamle sorteret celler ved centrifugering ved 450 x g i 5 min. ved 4 ° C og resuspend celle pellet med 0,5 mL af hf2 skik.
    11. Bekræfte sorteret celle nummer med hemocytometer og Trypan blå. Justere celle nummer med HF2 Skik til transplantation.
      Bemærk: Et bredt spektrum af BMNC populationer kan isoleres til transplantation med flere kombinationer af fluorokrom-konjugerede antistoffer i trin 1.2.2 ovenfor.

2. modtagende mus forberedelse og hæmatopoietisk stamcelletransplantation (HSCT)

  1. Forberedelse af transplanterede
    1. Vedligeholde veterinære og opdræt af congenic recipient mus (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) i en specifik pathogen gratis (SPF) dyr facilitet.
    2. For profylaktisk dekontaminering af mave-sporet, levere sterilt vand indeholdende 100 mg/L af ciprofloxacin til modtagerne i 7 dage forud for dødbringende dosis (9 Gy) bestråling og vedligeholde for 14 dage efter bestråling.
    3. Give en dødelig dosis (9 Gy) bestråling fra en Cs source som følger. Bruge en uddannet, certificeret Cs operatør. Indstille Cs source instrument til at levere 70 cGy/min kroppens samlede gammastråling. Placer 10 mus i en specialdesignet indehaveren og indsætte indehaver i irradiator afdeling. Levere 9 Gy kroppens samlede bestråling i 13 min og vende tilbage mus til deres bure.
  2. Hæmatopoietisk stamcelletransplantation
    1. Bland vildtype (WT) BMNC fra en congenic recipient mus (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) i en celle dosis på 2 x 105 celler pr. mus med 2-5 x 104 celler renset test BMNC tilberedt med flow flowcytometri sortering som beskrevet i 1.3 ovenfor. Bland celler i de samme sprøjte.
      Bemærk: WT BMNC giver en stråling besparende-effekt til den modtagende mus og give mulighed for overlevelse af den modtagende mus, hvis test celler ikke understøtter bloddannelsen. WT-BMNC anvendes i denne type af eksperiment udtrykkelige CD45.1 allel, og således kan skelnes fra de test celler ved hjælp af antistoffer, som diskriminerer mellem CD45.1 og CD45.2. WT BM celler kaldes "helper celler", "stråling-sparing celler" eller "konkurrent celler".
    2. Justere blandingen cellevolumen til 200 µL pr. modtager ved hjælp af steril HF2 Skik for at lette injektion.
    3. Transplantation celle blandinger til lethally bestrålede recipient mus via intravenøs hale vene injektion bruger en 1 mL sprøjte og 28-gauge kanyle, inden for 24 timer af bestråling. Placer musen hale under en varmelampe, som varme fører til hale vene dilatation.
      Bemærk: Aflive alle recipient mus i slutningen af studiet og evaluere sygdomsprogression ved obduktion, histologi og flowcytometri.

3. engraftment analyse ved hjælp af Flow flowcytometri

  1. For at evaluere donor celle engraftment, indsamle perifert blod (PB) fra de modtagende mus på 6 uge, 12 uge og 16 uge efter transplantation.
  2. Varm modtagerne i buret med varmelampe til ca 1 min og placere musen i en Tilbageholderen.
  3. Klip hale vene med en skalpel (klinge 10, #3 skalpel håndtag) og indsamle 100 µL af PB pr. modtager ved hjælp af et microcapillary rør, der indeholder EDTA som en antikoagulans.
  4. Opdele de indsamlede PB i to lige store delprøver ved at placere 50 µL i sterile microcentrifuge rør. Bruge en alikvot for en automatiseret komplet blodtælling (CBC) (udføres på NCI histopatologi Core) og bruge den anden alikvot for antistoffarvning og flow flowcytometri.
  5. For at registrere donor engraftment ved flowcytometri, lyse røde blodlegemer (RBC) ved at tilføje 1 mL af hypotonic RBC lysisbuffer (8,29 g/L af NH4Cl, 1 g/L, KHCO3, 0.037 g/L af Na2EDTA, pH 7,2) i 50 µL af de indsamlede PB. Vortex prøven blandes og inkuberes 10 min ved stuetemperatur.
  6. Der centrifugeres den lysed PB på 4.600 x g for 1,5 min. omhyggeligt Aspirér supernatanten og kassér.
  7. Delvist forstyrre celle pellet ved forsigtigt at trykke eller "bladre" i bunden af røret. Tilføje 1,3 mL PBS i toerstoffet beliggende i røret, og der centrifugeres ved 4.600 x g for 1,5 min. omhyggeligt aspirat og kassér supernatanten.
  8. Forstyrre celle pellet ved at trykke eller svippede, og tilføje 200 µL af HF2 Skik suppleret med 5% rotte serum til celle pellet.
  9. Tilføje anti-CD45.2 antistof (1 µL) konjugeret med allophycocyanin (APC) til cellesuspension. Inkuber ved 4 ° C i mindst 30 min, og kortvarigt vortex blandingen.
  10. Efter farvning, vaske cellerne to gange som beskrevet ovenfor, og pelleten med 400 µL af HF2 Skik suppleret med 1 µg/mL af PI.
  11. Opdage engraftment ved hjælp af en 4-farve flow Flowcytometret. Få yderligere oplysninger om celletyper i det perifere blod ved at tilføje ekstra antistoffer til påvisning af specifikke celletyper såsom B eller T lymfocytter.
  12. Optag serie engraftment data ved hjælp af et regneark til at give mulighed for yderligere analyse af data.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi viser repræsentative tal for resultaterne af flere eksperimenter. Figur 1 viser et repræsentativt flowcytometri sortering eksperiment. Under normale hæmatopoietisk differentiering, som cellerne bliver forpligtet til en specifik hæmatopoietisk afstamning, de erhverve fastlæggelse af afstamning celle overflade markører og mister potentiale til selvfornyelse. Derfor, i wild-type mus, stamcelle selvfornyelse er begrænset til afstamning-negative BMNC. I dette eksperiment sorteret vi BMNC fra NHD13 knoglemarv i slægt-negative, lav slægt positive og høje afstamning-positive celler. Disse sorteret celler blev derefter transplanteres ind i WT modtagere til at bestemme selvfornyelse kapacitet.

Figur 2 viser resultaterne fra en særskilt eksperiment, i hvilken slægt negative celler eller usorteret celler fra NHD13 donorer med MDS blev transplanteret ind i lethally bestrålede WT modtagere. NHD13 donor celler udtrykt CD45.2 celle overflade markør, WT konkurrent celler (Se afsnit 2.2.1 ovenfor) udtrykt CD45.1 celle overflade markør. Figur 3 viser serie engraftment analyse af usorteret NHD13 BMNC, eller afstamning-negative NHD13 BMNC. Efter ca. 16 uger outcompete NHD13 celler WT celler, som det fremgår af den stigende procentdel af CD45.2 + celler i det perifere blod. Figur 4 viser et eksempel på leukemic transformation fra en mus transplanteret med NHD13 MDS celler.

Figure 1
Figur 1: flowcytometri sortering strategi af BMNC plettet med lineage antistof cocktail. Hver rektangulær kasse på dot plot repræsenterer cellen befolkningen sorteret for HSCT at vurdere cellefunktion. R4, lineage negative; R5, lav slægt positiv; R6, høj lineage positive. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2: repræsentative FACS profiler for engraftment analyse ved hjælp af donor specifikke anti-CD45.2 antistoffer. BMNC modtager blev transplanteret med 1 X 106 NHD13 BMNC (CD45.2 +) og LNBM modtageren med 5 X 104 NHD13 afstamning negative BM celler (CD45.2 +). I hvert tilfælde blev 2 x 105 WT BMNC (CD45.1 +) brugt som konkurrent celler. Tallene i de øvre og nedre bokse repræsenterer CD45.2 positive (afledt af NHD13 donor) og CD45.2 negative (stammer fra WT konkurrent celler), henholdsvis på efter transplantation 6 uge og 24 uge. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3: Engraftment kinetik af individuelle modtagere efter transplantation. Hver linje på grafen viser serie engraftment assays af en individuel modtager mus. BMNC modtagere blev transplanteret med 1 X 106 celler af NHD13 hele BMNC, og LNBM modtagere blev transplanteret med 5 X 104 af NHD13 afstamning negative BM efter sortering. NHD angiver NHD13 donor. BM, BMNC recipient mus; LNBM, slægt negative BM modtageren; PBMC, perifert blod mononukleære celler. I alle tilfælde outcompete NHD13 donor celler gradvist WT celler. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4: maj-Grünwald Giemsa (MGG) farvning af knoglemarven (BM) fra MDS modtager, som skred til AML. Bemærk tilstedeværelsen af talrige Blaster og umodne former. Pilene angiver eksplosioner, og pilespidser angive umodne former. Oprindelige 400 X. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Selvom MDS er en klonal hæmatopoietisk stamcelle lidelse, MDS "stammer", eller igangsættende celler, endnu ikke er blevet karakteriseret. Vi viste tidligere at MDS kan være ender til WT mus med knoglemarv fra NHD13 mus af HSCT, karakteriseret ved makrocytisk anæmi, leukopeni, neutropeni og morfologiske tegn på dysplasi15. Derudover identificeret konkurrencedygtige genindsættelse assays en vækst fordel af celler fra knoglemarven NHD13 MDS. Taget sammen, indebærer disse konklusioner eksistensen af en MDS stilk eller igangsættende celle. Yderligere eksperimenter er nu i gang, med henblik på raffinering immunophenotypic Karakteristik af et MDS indlede celle15 brug mere defineret stilk og stamfader celle markører (CD150, CD48, c-Kit og Sca-1)16 kombineret med slægt markør farvning i denne protokol beskrevne metode.

At identificere MDS indebærer indlede celler ved hjælp af NHD13 mus omfattende flow flowcytometri sortering procedure. Ex vivo -manipulation af primær BMNCs sætter stress på cellerne, potentielt resulterer i celledød eller funktionelle tab. Derfor bør gøres en indsats for at reducere tid af ex vivo manipulation herunder tidspunktet for flow flowcytometri sortering. Producent og model af flow flowcytometri instrumenter og flow dynamics er yderligere variabler, der kan påvirke cellernes levedygtighed efter sortering. HSCT procedure kræver celle infusion via et blodkar. Selv om hale vene injektion kan være en mere udfordrende teknik end retro-orbital injektion, vores erfaring, kan hale vene injektion udføres hurtigere end retro-orbital injektion som recipient mus ikke er bedøvede for hale vene injektioner. Begrænsning af Injektionsvolumen (maksimalt 150 µL) er et andet spørgsmål i retro-orbital injektion17, da en højere celle koncentration kan føre til yderligere tab af celler i løbet af celle forberedelse, såsom klipning af celler på væggen af sprøjter og nåle.

Selv om disse forsøg er fokuseret på NHD13 modellen til MDS, kan HSCT sortering og transplantation tilgange beskrevet her bruges til alle gensplejsede mus. Ud over bestemmelse af selvstændig fornyelse hæmatopoietisk celler karakteristika, kan denne transplantation tilgang bruges til andre formål. For eksempel, hvis man ønsker at opnå en stor kohorte af mus med MDS knoglemarven til at vurdere effekten af behandling med en lille molekyle, en stor kohorte (30 + mus) kan genereres ved hjælp af transplantation WT mus med MDS BM. Alternativt, HSCT strategien kan vendes. I et forsøg på at helbrede mus af MDS, NHD13 mus med MDS kan transplanteres med WT BM og succes af transplantation kan overvåges ved at vurdere andelen af hæmatopoietisk celler, der udtrykker CD45.1 (som markerer WT BM) i modsætning til CD45.2, (som markerer MDS BM) 18.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Vi har intet at videregive.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af den murene Research Program af National Cancer Institute, National Institutes of Health (tildele numre ZIA SC 010378 og BC 010983).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
14 mL round bottom tube Falcon 352057
Hank's balanced salt solution Lonza 10-527F
Anti-CD45.2 antibody Southern Biotech 1800-15 LOT# A077-T044O
3 mL Syringe Monoject 8881513934
27-G needle BD 305109
20-G needle BD 305176
Lineage Cocktail Miltenyi 130-090-858 LOT# 5170418221
Anti-Biotin antibodies Miltenyi 130-113-288 LOT# 5171109046
1 mL Syringe Excelint 26027 Insulin Syringe
Heating Lamp Thermo Fisher Scientific E70001901
FACS machine Cytec FACScan 2 lasers, 5 color detectors
FACS sorting instrument Beckman Coulter MOFLO ASTRIOS 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously
Propidium Iodide Thermo Fisher Scientific P3566
Gamma Irradiator Best Theratronics Gammacell 40
Blood collection tube RAM scientific 76011
Recipient mice Charles River B6-LY5.1/Cr, CD45.1
NUP98-HOXD13 mice n/a C57Bl/6, CD45.2 Colony maintained at NIH
5 mL round bottom tube Falcon 352058

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Corey, S. J., et al. Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases. Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).
  2. Garcia-Manero, G. Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management. American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).
  3. Heaney, M. L., Golde, D. W. Myelodysplasia. The New England Journal of Medicine. 340 (21), 1649-1660 (1999).
  4. Nimer, S. D. Myelodysplastic syndromes. Blood. 111 (10), 4841-4851 (2008).
  5. Aul, C., Giagounidis, A., Germing, U. Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics. International Journal of Hematology. 73 (4), 405-410 (2001).
  6. Pedersen-Bjergaard, J., Christiansen, D. H., Desta, F., Andersen, M. K. Alternative genetic pathways and cooperating genetic abnormalities in the pathogenesis of therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia. Leukemia. 20 (11), 1943-1949 (2006).
  7. Uy, G. L., et al. Dynamic changes in the clonal structure of MDS and AML in response to epigenetic therapy. Leukemia. 31 (4), 872-881 (2017).
  8. Gough, S. M., Slape, C. I., Aplan, P. D. NUP98 gene fusions and hematopoietic malignancies: common themes and new biologic insights. Blood. 118 (24), 6247-6257 (2011).
  9. Lin, Y. W., Slape, C., Zhang, Z., Aplan, P. D. NUP98-HOXD13 transgenic mice develop a highly penetrant, severe myelodysplastic syndrome that progresses to acute leukemia. Blood. 106 (1), 287-295 (2005).
  10. Block, M., Jacobson, L. O., Bethard, W. F. Preleukemic acute human leukemia. Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).
  11. Thanopoulou, E., et al. Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome. Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).
  12. Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. J. Engraftment of distinct clonal MDS-derived hematopoietic precursors in NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient mice after intramedullary transplantation of hematopoietic and stromal cells. Blood. 104 (7), 2202-2203 (2004).
  13. Benito, A. I., et al. NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors. Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).
  14. Medyouf, H., et al. Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit. Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).
  15. Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).
  16. Pietras, E. M., et al. Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions. Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).
  17. Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).
  18. Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome. PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).

Tags

Udviklingsmæssige biologi spørgsmål 140 myelodysplastisk syndromer hæmatopoietisk stamcelletransplantation fluorescens-aktiveret celle sortering knoglemarv NUP98-HOXD13 akut myeloid leukæmi hæmatopoietisk malignitet
Brug af hæmatopoietisk stamcelletransplantation at vurdere oprindelsen af myelodysplastisk syndrom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chung, Y. J., Khawaja, G., Wolcott,… More

Chung, Y. J., Khawaja, G., Wolcott, K. M., Aplan, P. D. Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome. J. Vis. Exp. (140), e58140, doi:10.3791/58140 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter