Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

Antikanser antikor etkinliğinin Antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu Synergism kombinasyon Dizin denklem kullanılarak tespiti

Published: January 19, 2019 doi: 10.3791/58291
Automatic Translation
*1, *1, *1,2, *1, *1,3, *1,3
1Centre de Recherche en Cancérologie et Immunologie Nantes Angers (CRCINA), Institut national de la santé et de la recherche médicale (INSERM), Université d'Angers, Université de Nantes, Nantes, France, 2Service de chirurgie pédiatrique, Centre hospitalier universitaire (CHU) de Nantes, Nantes, France, 3Unité de Formation et Recherche (UFR) des Sciences Pharmaceutiques et Biologiques, Université de Nantes, Nantes, France
* These authors contributed equally

Summary

Bu iletişim kuralı, antikanser bir antikor ve antineoplastic ilaçlar içinde Preklinik modelleri arasında synergism Chou ve Talalay birlikte Dizin denklemi kullanarak değerlendirmek açıklar.

Abstract

Düşman monoklonal antikor (mAb) kemoterapötik ajanlar tarafından kullanılmasının muhtemelen kansere karşı etkili ve daha güvenli tedavi tasarlamak için değerli bir strateji kabul ettiğiniz anlamına gelir. Burada preklinik adım da rasyonel bir arada tanımlamak için bir protokol sağlar. İlk olarak, Chou ve Talalay1kombinasyonu Dizin denklemi kullanır synergism antikanser mAb ve sitotoksik ilaçlar arasında değerlendirmek için bir hücre tabanlı tahlil açıklar. Bu ölçüm, tümör hücre uyuşturucu ve antikor-kombinasyon dizin (CI) değerlerini hesaplamak için bir otomatik bilgisayar Analizi tarafından takip bir ÇMT tahlil kullanarak duyarlılığı içerir. CI değerlerini < 1 belirtmek synergism test mAbs ve sitotoksik ajanlar1arasında. Vitro bulgular vivoteyit için daha fazla kombinasyon rejimi etkinliğini xenograft tümör modelindeki değerlendirmek için bir yöntem açıklar. Bu modelde, kombine rejimi önemli ölçüde önemli bir genişletilmiş hayatta kalma tek ajan denetimleri ile karşılaştırıldığında sonuç tümör büyüme geciktirir. Önemlisi, in vivo deneyler kombinasyon rejimi iyi tolere edilir ortaya koymaktadır. Bu iletişim kuralı preklinik modelleri kombinasyonlarda antikanser ilaç etkili değerlendirilmesi ve klinik deneylere değerlendirmek için rasyonel birleşimini tanımlaması sağlar.

Introduction

Çok sayıda farklı kanser tedavisinde geleneksel yaklaşım üzerinde tedavinin dayanıyordu. Hala birçok durumda kullanılır olsa bile, bu yöntem kombine tedaviler2için gözle ilgili için önde gelen çeşitli engeller tanıştım. Özellikle, kanser hücrelerinin alternatif hayatta kalma mekanizmaları3hastalar4terapötik başarısızlıkla sonuçlanan, inducing tarafından tek bir ilaç ile tedavi ederken direnç geliştirmek daha yatkındır. Ayrıca, tedavinin içinde uyuşturucu genellikle yüksek bir doz idare. Bu durum genellikle dayanılmaz ve doktorlar tedavi2durdurmak için kuvvet güçlü doz bağımlı yan etkileri oluşumu içinde sonuçlanır. Bu nedenlerden dolayı antikanser molekülleri şimdi birliğidir tedavinin için tercih etti.

İdeal uyuşturucu kombinasyonları Bu sinerji tümör hücreleri, normal hücrelere karşı artan toksisite olmadan karşı hareket olacaktır. Synergism tedavi edici etkiye ayrı ayrı hareket her bireysel uyuşturucu toplamından daha büyük üreten iki veya daha fazla ilaç etkileşimi gösterir. Bu tür etkileşimler geliştirilmiş klinik tedavi etkinliğinin2' de neden olabilir. Tedavi direnci sınırlar, etkinliğini artırır ve ayrıca toksisite2azaltabilir. Aslında, her ilaç dozu farklı yollar hedefleyerek yan etkileri azaltmak için azaltılabilir. Buna ek olarak, bir moleküller de kanser hücrelerinin karşı duyarlılığı bir ajan olarak hizmet edebilir. İkinci ilacın etkisi duyarlilasmis hücreleri üzerinde gelişmiş ve daha az dozlarda kullanılan5olabilir.

Kombine tedavi iki veya daha fazla kemoterapötik ilaçlar ve/veya monoklonal antikorlar6gibi destekte içerebilir. Bu mAbs özellikle faiz ve immünolojik yollar dahil antikor bağımlı sitotoksisite (CCDA), hücre-aracılı ile tümör hücreleri öldürmek mümkün olan bir hücre yüzey antijeni ifade hücreleri hedef hücreleri bağışıklık efektör katılımı ile 7ve tamamlayıcı bağımlı sitotoksisite (CDC)6. Onlar da üzerinden apoptosis8,9,10,11tarafından aracılı immünolojik olmayan bir mekanizma hareket edebilir. Bu durumda, indüksiyon işleminin programlı hücre ölümü kanser hücrelerinin duyarlı, işlevlerine zayıflatmak ve ilişkili kemoterapötik ilaç daha düşük bir doz daha verimli hale getirmek. Bu nedenle, proapoptotic mAb kombinasyonu rejimlerinin antineoplastic ilaçlarla tasarlamak için iyi adaylar bulunmaktadır.

Uyuşturucu synergism değerlendirmek için farklı matematiksel modeller tarif var; Bunlardan biri üzerinde birlikte Dizin Yöntem1temel alır. Bu yöntem Chou1tarafından geliştirilen medyan-etkisi ilkesine dayanır. Medyan-etkisi denklem uyuşturucu doz ve uyuşturucu etkisi aşağıdaki gibi karşılıklı olarak ilişkilendirir.

Equation 1

D ilaç doz işte; DM medyan-etkisi doz ise; SK doz tarafından etkilenen kesir olduğunu; m 1doz-etki arsa şeklini belirten bir üstür. Medyan-etkisi doz doz Dx engeller ya da "x" yüzde hücre öldürür bir ilacın hesaplamak için kullanılır. CI değer o zaman1aşağıdaki gibi uyuşturucu kombinasyon katkı etkisini değerlendirmek için hesaplanır.

Equation 2

Bir katkı etkisi ve CI değeri 1 CI değeri gösterir < 1 CI değeri ise bir sinerjik etkisi gösterir > 1 husumet1gösterir. Bu yöntemin uygulama daha fazla bir bilgisayar programı, CompuSyn, synergism ve düşmanlık tüm dozda belirleyen kullanılabilirliğini tarafından yönetilir veya etkisi düzeylerini otomatik olarak12simüle.

Bizim grup mAb 8B6 özel O-asetil-GD2 gangliosid (OAcGD2) Nöroblastom antijen13 için geliştirilmiş ve daha fazla bu mAb hücre ölümü apoptozis11özniteliklerle ikna etmek mümkün olduğunu gösterdi. MAb 8B6 antineoplastic Ajan topotecan hücrelere Nöroblastom duyarlı olup olmadığını sınamak için yukarıda belirtilen yöntem Chou1tarafından geliştirilen uyarlanmış. İlk olarak, mAb 8B6 ve topotecan etkili doz 50 (ED50) değerlerini belirleriz. Daha sonra equipotent oranları ED50 değerlere göre iki bileşiklerin Nöroblastom hücrelerle yukarıda belirtilen simülasyon yazılımı kullanarak CI değerlerini belirlemek için sunulur. Bu yöntem synergism mAb 8B6 ve topotecan içinde vitroarasında göstermek için bize izin verir. Sonra biz daha fazla etki gücüne ve bu kombinasyon rejimi içinde vivogüvenliğini değerlendirmek için bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı, güçlü ve güvenli antikanser mAb ve kemoterapötik ajan kombinasyonuna preklinik çalışmalarda seçmek için kolayca uygulanabilir. Bu çalışmada şematik gösterimi Şekil 1' de verilmiştir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Hayvan barınma ve deneysel bir işlem (anlaşmaları #C44-278 ve #APAFIS 03479.01) Fransız hükümeti tarafından kabul edildi. Hayvan bakımı ve yordamlar yönergesi AB 2010/63/AB ve Fransız hukuku altında #2013-118 bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması üzerinde gerçekleştirilmiştir.

1. ilaç etkileşimi arasında mAb 8B6 ve Topotecan In Vitro değerlendirilmesi

  1. 96-şey numune hazırlama
    Dikkat: kurumun sağlık ve Güvenlik Komitesi danışmak ve laboratuvar emniyetle ilgili yerel yönetmelik kurallara uyun. Herhangi bir ortam, hücre hatları veya reaktifleri ile çalışmaya başlamadan önce malzeme ve güvenlik bilgi formu bilgileri gözden geçirin. Laminar akış mahallede iş ve uygun steril tekniği kullanabilirsiniz. Hücreleri işlemek için kullanılan tüm çözümleri/ekipman steril olmalıdır.
    Not: Aşağıdaki protokol yapışık hücreleri kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Değişiklik nonadherent hücre süspansiyon büyüyen yöntemi uygulamak için gerekli; Bu protokol quadruplicate deneysel her koşul için kullanır.
    1. Bir T75 şişesi IMR5 hücreleri büyümek.
    2. İlk gün (gün 0), hücre confluency kontrol etmek için mikroskop altında hücre kültürü gözlemlemek. Şişeye hücre ortamından Aspire edin, fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) 5 mL ile yıkayın ve 3 mL %0,05 ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) eklemek / PBS çözüm. Şişeye kuluçka makinesi 3 dk (37 ° C, % 5 CO2) için geri dönün.
    3. Hücre kültürü hücre dekolmanı için mikroskop altında incelemek.
      Not: gerekirse, tümör hücre türüne bağlı olarak ek bir 3-5 dk da kuluçka şişeye dönün.
    4. Tam hücre orta 10 mL şişe için ekleyin ve hücre süspansiyon steril 15 mL konik tüp aktarın. Hücreler için 300 x gde 5 dk santrifüj kapasitesi. Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.
    5. Kaldırmak ve süpernatant atın. Hücre Pelet tam büyüme aracı olarak resuspend. 1 x 105 hücre/mL nihai bir konsantrasyon elde etmek için orta ses düzeyini ayarlayın.
    6. Hücre süspansiyon, 100 µL olan bir 96-şey kültür plaka 104 hücreleri her, ile tohum 84 kuyu. Şekil 2' de gösterilen deneysel düzen izleyin.
    7. Hücreleri hücre kuluçka (37 ° C, % 5 CO2) 18 h için kuluçkaya.
  2. Uyuşturucu eriyik hazırlığı
    Not: uyuşturucu/mAb Sensitizasyonu çalışmaları için zamanlama, uzunluğu ve belirli uyuşturucu/mAb söz konusu uyacak şekilde konsantrasyon tedavi değiştirin. İlk toplama 3 x son konsantrasyonu olduğunu unutmayın.
    1. Ertesi sabah (1. gün) tam büyüme orta kullanarak aşağıdaki uyuşturucu çözümleri hazırlayın.
      1. mAb eriyik hazırlığı
        1. 240 µg/mL mAb konsantrasyon ile bir antikor çalışma çözümü elde etmek için tam büyüme ortamının 500 µL mAb sulandırmak.
        2. Beş iki kat seri dilutions Şekil 2' de gösterildiği gibi gerçekleştirin.
      2. Topotecan eriyik hazırlığı
        1. Seyreltik olarak yukarıda, 120 son bir konsantrasyon ile uyuşturucu çalışan bir çözüm elde etmek için tam büyüme ortamının 500 µL ilaç nM.
        2. Beş iki kat seri dilutions Şekil 2' de gösterildiği gibi gerçekleştirin.
      3. Antikor ve uyuşturucu eriyik hazırlığı
        1. 120 nM uyuşturucu ve 240 µg/mL mAb (çalışma çözüm) bir çözüm elde etmek için tam büyüme ortamının 500 µL uyuşturucu ve mAb çözümlerinde sulandırmak.
        2. Beş iki kat seri dilutions Şekil 2' de gösterildiği gibi gerçekleştirin.
    2. Son konsantrasyonu gelmesi, deneysel düzen ( Şekil 2) belirtildiği gibi ilgili kuyu, her ilaç çözümünün 50 µL aktarın.
      Not: tam büyüme ortamının 50 µL Şekil 2' de gösterildiği gibi işlenmemiş hücre kuyu aktarın.
    3. Kuluçka (37 ° C, % 5 CO2) 72 h için hücreleri kuluçkaya.
  3. MTT tahlil
    1. 10 µL MTT reaktif çözüm her kuyunun içine ekleyin.
    2. 4 h için 37 ° C'de kuluçkaya.
    3. Bir çok kanallı pipet kullanarak lysis çözüm (0.01 M HCl % 10 SDS) 100 µL her kuyunun içine ekleyin ve pipetting tarafından iyice karıştırın.
    4. 4 h içinde oksijen odası (% 95 nem) için 37 ° C'de kuluçkaya.
    5. 570 absorbans okumak nm (bir570) ve 620 nm (bir620) bir spektrofotometre kullanarak.
      Not: her örnek yeniden absorbans okumadan önce pipetting tarafından Mix; absorbans 620 nm spesifik olmayan arka plan değerleri düzeltme sağlar.
    6. Düzeltilmiş absorbans hesaplamak: absorbans düzeltilmiş bir570-620=.
    7. Hücre canlılığı aşağıdaki gibi hesaplar: hücre canlılığı = 100 x (ortalama düzeltilmiş absorbans örnek / ortalama düzeltilmiş absorbans kontrol).
    8. Aşağıdaki denklemi kullanarak kesir etkilenen değerleri (Fa) hesaplamak: 1 - (ortalama düzeltilmiş absorbans örnek / ortalama düzeltilmiş absorbans kontrol).
  4. İlaç etkileşimi analitik simülasyon yazılımı tek ve ilaç kombinasyonu araştırmaları
    1. Başlangıç penceresini açmak için simülasyon yazılımı çalıştırın.
    2. Ana penceresini açmak için Yeni bir deneme düğmesini tıklatın.
    3. Deney adı penceresinde yazın.
      Not: Bir tarih tarihi penceresinde eklenebilir.
    4. Yeni tek ilaç butonuna tıklayın.
    5. Adı Ve soyadı penceresinde yazın.
    6. Kısaltmayı Abbrev penceresinde yazın.
    7. İlaç konsantrasyonu birimi birimleri penceresinde yazın.
    8. Veri noktası 1 doz ve SK değeri, Entertuşuna basın girin.
    9. Tüm veri noktalarını girilen kadar bu adımı yineleyin.
    10. Tamamlandı butonuna tıklayın.
    11. MAb veri noktaları girmek için aynı adımları izleyin.
      Not: uyuşturucu tarafından kullanılanla aynı toplama ünitesi kullanın.
    12. Yeni uyuşturucu açılan butonuna tıklayın.
    13. Uyuşturucu ve mAbseçin.
    14. Sabit oranını seçin ve Tamam' ı tıklatın.
    15. Adı Ve soyadı penceresinde yazın.
    16. Kısaltmayı Abbrev penceresinde yazın.
    17. Uyuşturucu/mAb oranı oranı penceresinde yazın.
    18. Veri noktası 1 doz girin ve Entertuşuna basın.
      Not: Program mAb ve açılan doz otomatik olarak hesaplar.
    19. Veri noktası 1 SK değerini girin ve Entertuşuna basın.
    20. Tüm veri noktalarını girilen kadar bu adımı yineleyin.
    21. Tamamlandı düğmesini ve ardından Rapor oluştur düğmesini tıklayın.
    22. Uyuşturucu ve mAb seçin ve sonra Tamam' ı tıklatın.
    23. Açılan seçin ve sonra Tamam' ı tıklatın.
    24. Üstbilgi, CI tablosuve Özet Tabloseçin. O zaman, Tamam' ı tıklatın.
    25. Analiz dosyasının dosya adını ve raporu oluşturmak için Kaydet ' i tıklatın.
      Not: OKtıkladıktan sonra rapor otomatik olarak bilgisayarın varsayılan web tarayıcınızda açılır.
    26. Raporu yazdırmak için Yazdır web tarayıcının Dosya menüsünden seçin. Rapor Başlık, tarih, dosya adı, açıklama Not, parametreleri (m, Dm ve r), ED50 tedavinin veya kombinasyonu ve CI tablo ED50, ED her birleşimi için kullanılan her iki aracı içeren bir Özet Tablo bölümü içerir 75, ED90ve ED95.
      Not: CI değeri < 1 gösterir synergism, CI değeri = 1 gösterir additivity ve CI değeri > 1 husumet gösterir.

2. insan Nöroblastom Xenografts Nonobese diyabetik NOD Scid Gamma farelerde (NSG fareler) nesil

Not: hücre kültürü herhangi bir kirlenme hariç. Membran matris bir jel 5 ° C üzerindeki formlar, Bütün cultureware veya membran matris reaktif temas geliyor medya prechilled/buz-soğuk olmalıdır. Membran matris buz üzerinde tüm işlemi sırasında tutmak.

  1. IMR5 hücre süspansiyon hazırlanması
    1. Membran matris reaktif gecede kullanmadan önce 4 ° C buzdolabında buz şişede batış tarafından çözülme.
    2. 0 gün, kültürlü IMR5 hücreler yukarıda ayrıntılı olarak hasat.
    3. Hücreleri bir 15 mL konik tüp ve 5 min için 300 x g , santrifüj aktarın.
    4. Süpernatant atmak. Hücreler 2 yıkama x ile buz gibi PBS, 15 mL ve 5 x 107 hücre/mL buz gibi PBS bir hücre süspansiyon hazırlamak.
      Not: gerekirse, hücre süspansiyon 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarın.
    5. Membran matris şişe girdap.
      Not: Membran matris reaktif çözdürülen ve dağınık.
    6. Bir membran matris reaktif hacmi ve hücre süspansiyon 2, 5 x 107 hücreleri /mL elde etmek için pipetting karıştırın.
    7. Hücre süspansiyon buz üzerinde tutun.
  2. Fareler hazırlanması
    Not: Altı-yedi hafta yaşlı fareler olmalıdır.
    1. Fareler altında belirli bir patojen bırakma durumu korumak.
    2. Fareler geldikten sonra bir üç - beş günlük iklimlendirme süre izin.
    3. Enjeksiyonu nerede olacak kanadını aşı günü, tıraş (2.3.6 bkz. adım).
  3. Tümör hücre enjeksiyon hazırlanması
    Not: buz gibi membran matris hücre süspansiyon aseptik prosedürü boyunca devam et.
    1. Hücreleri karıştırın ve dikkatle 21 G iğne ile monte edilmiş bir 1 mL şırınga içine hücre süspansiyon çizin.
    2. Emin olmak için şırıngada hava hava kabarcığı yok olduğundan emin olun.
    3. Fare antiseptik bir çözüm ile aşı alanı dezenfekte.
    4. Yavaşça fare cilt parmaklar, enjeksiyon yerinde arasında kanatta sıkmak.
    5. İğneyi tam olarak cilt kapağı içine yerleştirin. İğne koymayın içine derin doku Subkutan Enjeksiyon emin olmak için.
    6. IMR5 hücre süspansiyon (yani, 2. 5 x 106 hücreler), 100 µL Subkutan Fareler alt sağ kanat enjekte.
    7. Kaçağı önlemek ve iğne çekmek için şırınga döndürün.
  4. Vücut ağırlığı değişiklikler ve tümör büyüme izleme
    1. Uzunluğu (A) ve (B) bir kumpas ile tümör genişliği ölçmek.
    2. Tümör birimin 0.5 x (A x B2) formülü kullanarak hesaplar.
    3. Tümör ~ 50-60 mm3ortalama hacmi ulaştığında tedavi başlatmak.

3. ilaç ve antikor yönetim farelerde

  1. İntravenöz mAb 8B6 İdaresi
    1. Dikkatle mAb çözüm ile 25 G iğne ile monte 1 mL şırıngaya doldur.
    2. A ısı lamba kuyruk ven genişletmek 10 dakika altında fareyi getirin.
    3. Bir kemirgen restrainer fare dizginlemek.
    4. Fare antiseptik bir çözüm ile aşı alanı dezenfekte.
    5. İğneyi paralel olarak kuyruk ven, delici 2-4 mm iğne yüzünü yukarı doğru eğimi (Şekil 3A) tutarken lümen içine yerleştirin.
    6. 100 µL antikor Çözüm intravenöz enjekte (IV).
    7. Enjeksiyon sona erdiğinde, yavaşça kanama önlemek için enjeksiyon yeri basınç.
  2. Topotecan, mayi yönetimi
    1. 25 G iğne ile monte edilmiş bir 1 mL şırınga uyuşturucu çözüm çizmek.
    2. Fare ile posterior sona biraz yüksek bir sırtüstü pozisyonda tutun.
    3. Fare antiseptik bir çözüm ile aşı alanı dezenfekte.
    4. Fare karın orta hat bulun ve zihinsel karın bölgeleri bölmek. Enjeksiyon yeri sağ veya sol alt çeyreğinde (Şekil 3B) bulun.
    5. İğneyi karın (5 mm derin) sağ veya sol alt kadranda ~ 10 ° açıyla yerleştirin.
    6. Uyuşturucu çözeltinin 100 µL intraperitoneally enjekte (IP).
    7. Aşı site dezenfekte.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Temsilcisi sonuçları ve rakamlar daha önce yayımlanmış çalışma14izinle adapte olmuşlardır.

Anti-OAcGD2 mAb 8B6 sinerjik inhibitör etkileri Topotecan Nöroblastom hücre satırı büyüme geliştirir:

İlaç ve synergism topotecan ve mAb 8B6, uyuşturucu ve insan IMR5 Nöroblastom hücreleri ilk olarak ölçüldü bir ÇMT tahlil kullanarak antikor hassasiyetleri arasında değerlendirmek için kullanılmak üzere antikor konsantrasyonları kurmak için. MAb 8B6 veya topotecan için 72 h yalnız maruz kalma IMR5 hücre canlılığı (Şekil 4A) konsantrasyon bağımlı inhibisyonu içinde sonuçlandı. Doz-yanıt eğrileri ED hesaplanması50 değerleri her bileşik için izin. Bu amaçla, SK değerleri analiz simülasyon yazılımı kullanarak hesaplanan. Hesaplanan ED50 değerleri 10 nM ± 1 topotecan (Şekil 4B) için ve 18 µg/mL ± 3 mAb 8B6 için bulunmuştur (veri gösterilmez).

Bu ED50 değerlere göre daha sonra altı kombinasyon equipotent oranları mAb 8B6 ve topotecan vardı potens (Şekil 2) test. Kombinasyon doz-yanıt eğrisi grafik hassas yana doğru kayması kombinasyon rejimi her tedavinin (Şekil 4A) daha güçlü olduğunu gösterir. Karşılık gelen ED50 ve CI değerleri elde etmek için SK değerleri hesaplanan. Topotecan ED50 değerleri mAb 8B6 varlığında önemli ölçüde düşük bulunmuştur (p < 0,05, Şekil 4B), o mAb gösteren 8B6 topotecan tümör hücresine sensitizes. Önemlisi, CI değerleri önemli ölçüde daha az 1.0 (p < 0,05), sinerjik etkileşim (Şekil 5) gösteren edildi. Böylece, mAb 8B6 topotecan kemoterapi için adjuvan tedavi karşılayacak potansiyele sahiptir.

Anti-OAcGD2 mAb 8B6 geliştirir antitümör aktivitesi, Topotecan İn Vivo

Vitro modelleri de uyuşturucu half-life ne de uyuşturucu metabolizma dikkate almak için vitro bulgular içinde vivoteyit gereklidir. Ayrıca, in vivo modelleri kombinasyon rejimi Emanet değerlendirmek çok yararlıdır. Synergism topotecan ve mAb 8B6 arasında kanser hücrelerinin belirli olduğunu onaylamak için kombinasyon tedavisi bir tümör xenograft modelinde antineuroblastoma etkileri değerlendirildi. Bunun için ağır immünyetmezligi NSG fare baskı seçildi. Bu fareler bir doğuştan gelen ve edinilmiş bağışıklık sistemi15eksikliği ve bu nedenle, herhangi bir immunomodulatory etkisi mAb kudret etkileyebilir topotecan tedavisi ile indüklenen dışlamak araştırmacılar sağlamış olursunuz. Tümör ortalama hacmi 50 ± 2.5 mm3 (Şekil 6A) görüntülenen bir kez tedavi başlatıldı. Tedaviler ya mAb 8B6 oluşuyordu (150 µg damardan, 7 gün ve gün 11), topotecan (0,36 mg/kg ı.p., gün 7-11), veya bir arada mAb 8B6 ve topotecan. Tümör birimleri deneme seyri boyunca takip. Tüm tedaviler tümör büyüme geriliği (Şekil 6A) kontrol grubu ile karşılaştırıldığında yol açtı. Kombinasyon rejimi, ancak, en güçlü etkisi (Şekil 6A) indüklenen.

Tümör büyüme daha fazla hayatta kalma oranı tedavi üzerine eğitim için analiz edilebilir. Bu amaçla, fare ötenazi sonuçlanan olay tümör cilt ≥ 1 cm3 etik nedenlerle tanımlanmıştır. Bu bize bir Kaplan-Meyer sağkalım analizi gerçekleştirmek için ve her deney grubu için medyan olay ücretsiz hayatta kalma süresini hesaplamak için izin. Şekil 6Bgösterildiği gibi her iki monotherapies olay-Alerjik Yaşam (EFS) önemli ölçüde zaman kontrol gruplarına göre geliştirilmiş (EFS araç tedavi grubu medyan 21 gün yapıldı; denetim antikor grubunun 22 gün; topotecan grubunun 26 gün ; mAb 8B6 grubu, 29 gün [Şekil 6B]). Henüz, kombine tedavi fareler sağkalıma medyan 39,5 gün (p < 0,05, mAb 8B6 kombinasyon vs ; genişletilmiş EFS ile en güçlü etkiye p < 0,01, topotecan vs. kombinasyonu [Şekil 6B]).

Sinerjik etkileşim artan toksisite sağladığından, kombinasyon rejimi Emanet değerlendirilmek gerekir. Bu nedenle, kilo kaybı genellikle sağlık kemirgenler16' izlemek için hassas bir işaretleyici olarak kullanılır. Böylece, ağırlık kaybı-ölçülen ilk kilo arasında yüzde bir düşüş olarak-her test rejimi sistemik tolerabilite bir göstergesi olarak muhafaza edildi. Vücut kilo kaybı gözlendi, tedavinin iyi olduğunu düşündüren tolere (Şekil 7). Bu verileri topotecan artı mAb 8B6 arada her iki ajan yalnız tespit toksisite daha daha güçlü bir antitümör etkinliği vivo içinde temsil ettiğini göstermektedir.

Figure 1
Resim 1 : Çalışma şematik Gösterim. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2 : 96-şey plaka üzerinde birlikte denemenin düzeniyle oranları altı çözümler olarak hazırlanan topotecan mAb 8B6. Çözümler iletişim kuralında tanımlandığı gibi hazırlanmıştır. 1-4 etiketli wells mAb 8B6 çözümler olarak hizmet, 5-8 etiketli kuyu topotecan çözümler olarak hizmet ve 9-12 etiketli wells mAb 8B6 ve topotecan (birlikte) olarak hizmet çözümleri. A ve H hizmet denetimleri etiketli Wells; B etiketli wells ED50 konsantrasyon uyuşturucu çözümleri x 0.125 olarak hizmet; C harfiyle wells ED50 konsantrasyon uyuşturucu çözümleri x 0,25 olarak hizmet; D etiketli wells ED50 konsantrasyon uyuşturucu çözümleri x 0,5 olarak hizmet; E hizmet ED50 konsantrasyon uyuşturucu çözümler olarak etiketli wells; F etiketli wells 2 x ED50 konsantrasyon uyuşturucu çözümleri olarak hizmet; G etiketli wells belirtildiği gibi 4 ED50 konsantrasyon uyuşturucu çözümleri, x olarak hizmet vermektedir. İki farklı birimler (yani, µg/mL mAb 8B6 için ve topotecan için nM) ile terapötik ajanlar bir sabit oranlı arada (0.075, topotecan/8B6) analiz edilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3 : Enjeksiyonları. (A)İntravenöz enjeksiyon bir insülin şırınga, 27 G x 1/2, 1 mL kullanarak ölçülü bir fare kuyruğu ven içine. 1 mL şırınga kullanarak fare karın alt sağ kadran (B) mayi enjeksiyon 25 G iğne ile monte. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4 : Topotecan, mAb 8B6 ve 72 h sonra IMR5 Nöroblastom hücre büyüme canlılık inhibisyon kendi kombinasyonu maruz kalma doz-sonuç ilişkisi. Bir ÇMT tahlil iletişim kuralında tanımlanan gerçekleştirildi. (A) doz-yanıt eğrileri gösterilen üç bağımsız çoğaltır temsilcisi, her quadruplicates içinde çalıştırın. Verileri ortalama ± SD sunulur; p < 0,001. (B) ED50 topotecan mAb 8B6 ile birlikte ya da tek bir ajan olarak kullanılabilir. Verileri ortalama ± SEM sunulmaktadır Bu rakam Faraj vd değiştirildi 14. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. 

Figure 5
Şekil 5 : Birlikte endeks değerleri. Yüzde hayatta kalma değerleri (Fa) değerlere kesir etkilenen değiştirdi ve kombinasyon dizin (sinerji, additivity ve düşmanlık ölçüsü) hesaplamak için kullanılan bilgisayar yazılımı, metnin içinde gösterildiği gibi kullanarak. Kombinasyon Dizin araziler veri ± SD için üç bağımsız çoğaltır demek gibi sunulmaktadır. Sonuçları göster o mAb 8B6 topotecan ile sinerjik etkisi vardı (CI < 1). Bu rakam Faraj vd değiştirildi 14. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6 : IMR5 xenografts mAb 8B6 artı topotecan ile NSG farelerde kombinasyon tedavisi. (A)fareler, insan Nöroblastom IMR5 xenografts araç (PBS, IP) ile tedavi taşıyan topotecan yalnız (0,36 mg/kg, IP), kontrol IgG yalnız (150 µg, damardan), mAb 8B6 yalnız (IV) veya kombine, topotecan ve mAb 8B6 belirtildiği gibi. MAb 8B6 veya denetim antikor tedavisi yönetimi gün 7'den sonra IMR5 hücre aşılama başladı ve günde 11 kez tekrarlandı. Topotecan veya PBS tedavi gün 7 başladı ve beş gün üst üste verilen. Tümör büyümesi izlenen ve tümör birimleri hesaplanmıştır. Her tedavi grubunda ortalama tümör hacmi ± SEM (PBS grubunun, 9 fareler; diğer tüm grupları 10 fareler) tasvir edilmektedir (* p < 0,05 mAb 8B6 mAb 8B6 ve topotecan birlikte, karşı için ** p < 0,01 mAb 8B6 karşı topotecan ve topotecan birlikte), olarak belirtti. Xenograft birim önemli bir azalma belirtildiği gibi uyuşturucu yalnız kontrollere göre mAb 8B6/topotecan kombinasyon için (p < 0,05) gözlenmiştir. (B) olay-Alerjik Yaşam Kaplan-Meyer eğrileri farklı grupların tedavi gösterilir. Bu rakam Faraj vd değiştirildi 14. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7 : Yani ağırlık her tedavi grubu için belirtildiği gibi. Fareler üzerinde gün 0 ortalama ağırlığı % 100 kilo tanımlanmıştır. Ağırlık her grupta tedavi süresi için sabit kalmıştır. Verileri ortalama ± SEM sunulmaktadır Bu rakam Faraj vd değiştirildi 14. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

İlaç etkileşimleri etkisini tahmin etmek için üç yöntem kullanılabilir:1isobologram metodoloji17, doğrusal olmayan karışımı modeli18ve kasanın içindekiler. Uygulama kullanıcı dostu bilgisayar programı kullanılabilirlik tarafından Basitleştirilmiş kombinasyonu Dizin analiz en sık kullanılır. Bu amaçla, ilk doz-etki tepki bir ÇMT tahlil19gerçekleştirerek tek başına veya birlikte, kullanılan her aracısının karakterize. Bu metodoloji tetrazolium tuz bir absorbans en fazla 570 nm19ile mor renkli formazan üründeki azaltmak için hücrelerin yeteneğini kullanır. Ölüm hücreleri MTT formazan dönüştürmek için kapasite kaybetmek. Böylece, renkli formazan ürünün miktarını kültür19hücrelerin sayısı orantılıdır. Nitekim, biz bu yöntemi tritiated timidin birleşme DNA içine nonradioactive alternatif olarak hücre proliferasyonu19ölçmek için seçti. Bu nedenle, ÇMT deneyleri yaygın kabul ve akademik labs hizmetinde yayımlanmış makaleleri binlerce tarafından kanıtladığı popüler kalır. 570 absorbans kaydederek formazan miktarı ölçülür iken kullanarak bir plaka okuma spektrofotometre, bir referans dalga boyu 620 nm nm bazen kullanılan ancak çoğu tahlil koşulları için gerekli değildir. Burada açıklanan kritik adım söz konusu bulduk hücreleri büyümek için kullanılan kültür koşulları MTT deneyleri sonuçlarını etkileyebilir. Uygun telefon numarası, cep metabolik aktivite, kültürler, yaş ve geçişleri sayısını ve büyüme orta detaylarını tüm önemli faktörler olabilir bulduk. Böylece, onlar dikkate tahlil yinelenen alınmalıdır ve veri analizi. Ayrıca, hücre kültür koşulları her hücre hatlarında farklı. Olduğunu, bu nedenle herhangi bir belirti yoğunluğu tohum hücre hakkında net sağlamak için karmaşık. Pratik bir kural olarak hücreler de başına 2.000-10.000 hücre arasında ortalama bir dizi bir optimum hücre yoğunluğu 72 h. içinde önemlisi sağlamak için tavsiye edilir, ÇMT azaltma geçerli hücre metabolizması yansıtır ve özellikle, nükleer silahların yayılmasına karşı değil, hücre veya ölüm hücresi. Bu nedenle, ÇMT deneyleri de ölçüm olarak açıklanmalıdır hücre proliferasyonu ne de sitotoksisite20,11hücre. Hücre ölümü tespiti belirli hücre tabanlı deneyleri üzerinde dayanır. Örneğin, önceki çalışmalarda, western blot Analizi caspase 3 harekete geçirmek algılamak ve/veya Akış Sitometresi Analizi Fosfatidilserin mAb 8B613proapoptotic etkinliği kanıt için dış plazma zarı broşür içinde algılamak için gelirdik.

Kombinasyon test ilaçları zaman, onlar birlikte veya art arda zamanında teslim edilebilir. Etki mekanizması çeşitli göz önüne alındığında, kesin kurallar için ilgili deneysel ayarı sağlamak zordur. Ancak, çoğu müfettişler doğrudan uyuşturucu kombinasyonları test kullanmaktadır. Buna ek olarak, % 50 hücre büyüme inhibisyon tanımlanmış bir tek ajan etkisi üretmek konsantrasyonları yaygın olarak kullanılır. Plazma konsantrasyonları hastalarda ulaşılabilir yansıtan ilaç konsantrasyonları sık ilgili olarak klinik olarak kabul edilir. Bu nedenle, kombinasyon doz-etki çözümleme birkaç doz, kombinasyon oranı (ED50)mAbseri bir seyreltme ile sabit tutmak için yapılır / (ED50)uyuşturucu oranı, mutlak bir gereklilik olmamakla 1. Not, CI değerleri Ayrıca çeşitli ED test (Örneğin, ED50, ED75ve ED90) onlar bir doğrusal olmayan bir şekilde1Fa ile değiştirmek için hesaplanmalıdır. CI değerleri, doğrusal korelasyon katsayısı rotomatik analizi yaptıktan sonra-algoritmaları tarafından tahmini değer-meli var olmak > iyilik, deneysel verilerin uygun yansıtmak için 0,9,. CI değerlerini < 1 sinerji, CI değerleri belirtmek = 1 belirtmek additivity ve CI değerleri > 1 göstermek husumet1. Deneysel yöntemleri ve biyolojik sistem değişkenlik nedeniyle hesaplanan CI daha fazla istatistik dikkat etmeniz gereken maruz. Bu nedenle, basit bir sonuç CI değerlerini hesaplama ortalama ± SD1istatistikler belirlemeden önce birkaç kez ardından ilaç kombinasyonu denemeyi tekrarlamak için yöntemidir. Ayrıca hücre satır aralarında bulunan değişkenliğin dikkate almak, en büyük olası panelinde kombinasyonunu test etmek için tavsiye edilir.

Önemlisi, in vitro çalışma birkaç parametre için in vivo ekstrapolasyon dikkate alınmaz. İkisi de ilaç, ne de uyuşturucu inactivation neden olabilir vivo içinde uyuşturucu metabolizma vivo içinde yarı ömrü göz önünde mesela vitro canlılığı deneyleri. Böylece, vitro üzerinden ekstrapolasyon vivo içinde için ayrı bir soru ve faydalı ilaç kanıtlanan etkileşim içinde vitro daha da teyit içinde vivoolmalıdır. Bu nedenle, sinerji farelerde tümör xenografts, bileşik dizin yöntemi kullanarak taşıyan açık bir gösteri yayınlanan21oldu. Henüz, in vivo çalışmalar çok sayıda hayvan doğru sinerji tanımlayacak gerekir ve daha pahalı ve daha uzun sürmesine bulunurlar. Alternatif etkili model F-test hala önemli kaynaklar22gerektirir. Hücre kültür modelleri bir artan antitümör yanıt sınırlı xenograft çalışma14birleşimi kanıtlar ardından uyuşturucu sinerji gösteren çok sayıda hayvan kullanımını sınırlamak için farklı bir yaklaşım oluşur, biz kullanılan insan Nöroblastom IMR5 hücreler için in vivo çalışmada tümör hedef olarak. Çünkü onlar immün fareler23' te tumorigenic IMR5 hücreleri korudu. İnsan tümör xenograft modelleri uyuşturucu kombinasyonları vivo içinde24test etmek için değerli modelleri sağlarken, hücre hatları25çeşitli modelleri gibi kurmak zor olabilir. Farelerde tümör oluşumu insidansı artırmak için hücre membran Bodrum matris ile fareler içine bir araç25enjekte edilebilir. Önemlisi, membran Bodrum matris polymerizes ve 5 ° C üzerindeki sıcaklıklarda katılaşır beri bütün cultureware veya membran Bodrum matris ile temas geliyor medya prechilled/buz-soğuk olmalıdır ve membran Bodrum çözümleri tutulmalıdır sırasında tüm süreci25buz. Membran Bodrum matris kullanımı ile biz IMR5 hücreleri, bir % 100 almak oranla gözlenen membran Bodrum matris yokluğunda, bu hücre kültürünü gösterdi iken, bir < % 80'i al oranı (veri gösterilmez). Buna ek olarak, tümör greft insidansı artırmak için membran Bodrum matris de tümör büyüme hızı25artırabilir. Biz tüm xenografts gün 11 tarafından ortaya çıkmıştı gözlenen. Ancak, tümör hücre meydan takip ilk yedi gün boyunca, topaklar varlığı, ilk inoculum (veri gösterilmez) varlığı ile neden olabilir gözlenen. Böylece, biz tümör boyutu ölçümleri anlamlı bu sefer daha önce görmediği. Membran Bodrum matrisi kullanarak fare Deneysel ortamda sayısını azaltmak için ve in vivo deneme sonra üç ay içinde gerçekleştirmek için mümkün kıldı.

Uyuşturucu/antikor dozlarda hücre satır ve fare zorlanma bağlı olarak değişebilir. Yukarıda açıklanan vivo içinde uyuşturucu/antikor dozaj extrapolating için vitro canlılığı tahlil sınırlaması nedeniyle, klinik dozlarda için hem topotecan hem de mAb 8B6 in vivo Deneysel ortamda muhafaza, 26,27başkaları tarafından yayınlanan verilere dayalı. İnsan doz ayarı farelere ulaşmak için daha önce yayımlanan yönergeleri28 takip. Se, ikinci bir iğne ile beş gün sonra takip 150 µg, gün 7, antikor 8B6 damardan enjekte (Toplam doz/fare 300 µg =). Topotecan tedavi 0,36 mg/kg topotecan veya PBS denetim ı.p. beş gün üst üste enjekte edilerek aynı gün ilk mAb 8B6 enjeksiyon başladı. Burada açıklanan kritik adım dikkate alınarak, tümör xenografts ~ 50 mm3ulaştığınızda antikor infüzyon başlayan öneririz. Tümör yükünü açıkça ters antikor konsantrasyon, antikor pozlama ve antikor etkinliği29ile ilişkilendirmek çünkü daha yüksek tümör xenograft birimleri daha düşük bir yanıt oranı neden olur. Ayrıca her test rejimi16sistemik tolerabilite bir göstergesi olarak kilo kaybı korudu. Ancak, toplanan ağırlıkları yorumlanması ile büyük bir tümör yararlı olmayabilir kitle. Bu durumda, vücut durum Puanlama, başka bir yerde16, açıklandığı gibi tavsiye edilir.

Tümör İmmünokimya analiz, daha fazla eylem mekanizması hakkında bilgi içinde vivotetiklenen sağlamak için farklı zaman noktalarda toplanabilir. Bir önceki çalışmalarında tümör apoptotik Dizin mAb 8B6 infüzyon13den sonra değerlendirildi. Bu amaçla, tümör apoptotik hücreler bir tünel tahlil13kullanarak tespit edildi. Buna ek olarak, tümör hücre çekirdeği yüzdesi antijen pozitif tümör yayılması Dizin13çözümlenecek Ki67 boyama atan oldu.

Şiddetli immünyetmezligi fareler T hücreleri, B hücreleri ve doğal öldürücü (NK) hücreleri azaltılmış makrofaj ve antijen sunan hücre fonksiyonları kaybı ve tamamlayıcı30dolaşan yokluğu ile doğuştan gelen ve edinilmiş bağışıklık eksikliği. Böylece, bu iletişim kuralını araştırmacılar kemoterapi tümör microenvironment vivo içinde31değiştirerek mAb terapi potentiating içinde sözde etkileri ile ilgili herhangi bir sonuç çıkarmak izin vermez. Ancak, her iki kemoterapötik ajan sözde immunomodulatory etkileri ve uyuşturucu antitümör etki gücüne artırmada mAb parçası crystallizable (Fc) bölgesinin rolü dikkate hak, ama bu soruları durumu gerektirir bir sağlam bir bağışıklık sistemi ve fizyolojik tümör microenvironment syngeneic model.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

S.Fa., J.F. ve SB anti-O-asetil-GD2 terapötik antikorlar klinik uygulama kapsayan patent bekleyen mucitler olarak atanır.

Acknowledgments

Hibe desteği: Fondation de projesi de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le kanser Comite de Loire-Atlantique, comité du Morbihan ve Comite de Vendée, une gül dökün S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin ve la Société Française de Lutte contre les Kanser et les leucémies de L'Enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. ve J.F. La Ligue Contre Le kanser tarafından desteklenir. Yazarlar UTE tesisin yapısı Fédérative de Recherche François Bonamy, teşekkür ederim. Yazarlar onun teknik yardım almak için Ayrıca Dr. S. IMR5 hücreler sağlamak için Suzin (INSERM, Paris) ve Bayan H. Estéphan teşekkür ederiz.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cell Proliferation kit (MTT) Roche 11-465-007-001
CompuSyn software ComboSyn Combosyn can be downloaded for free at http://www.combosyn.com
Electric shaver Bioseb BIO-1556
Fetal calf serum Eurobio CVFSVFF00-01 10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640
Firefox  Mozilla Corporation Firefox can be downloaded for free at http://www.mozilla.org/en-US/firefox/
Heat lamp Verre&Quartz 4003/1R
Human neuroblastoma IMR-5 cell line Accegen Biotechnology ABC-TC0450 IMR-5 is a clone of the human neuroblastoma cell line IMR32 5459762. IMR-5 cells were generously provided by Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)
L-glutamine Gibco 25030-024 2 mM in RPMI 1640
Lysis solution  Roche  11-465-007-001
mAb 8B6 University of Nantes N/A
Matrigel Corning 354248
Multiskan FC Thermofischer Scientific  N08625
Needle 21G 1 ½  BD Microlance 304432
Needle 25G 1 Terumo NN-2525R
NSG mice Charles River Laboratories 5557
Nunc MicroWell 96-well microplates Thermofisher 167008
PBS VWR L182-10
PBS, 0,05% EDTA Sigma-Aldrich E9884
PC that runs windows 7 Microsoft Windows 7 can be purchased at http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7
Penicillin-Streptomycin Gibco 15140-122 100 units/mL penicillin and 100 mg/mL streptomycin in RPMI 1640
Reagent reservoir Thermofischer Scientific 8094
Rodent restrainer Bioseb TV-150-SM
RPMI 1640 Gibco 31870-025
Syringe 1 mL Henke Sass Wolf 5010.200V0
Topotecan Sigma-Aldrich T2705

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Chou, T. C. Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies. Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).
  2. Bayat Mokhtari, R., et al. Combination therapy in combating cancer. Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).
  3. Zahreddine, H., Borden, K. L. Mechanisms and insights into drug resistance in cancer. Frontiers in Pharmacology. 4, 28 (2013).
  4. Martin, T. P., Baguley, D., et al. Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6. Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).
  5. Choi, B., et al. Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27. Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).
  6. Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy. Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).
  7. Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer. Journal of Hematology & Oncology. 6, 1 (2013).
  8. Kowalczyk, A., et al. The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells. Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).
  9. Retter, M. W., et al. Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts. Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).
  10. Nakamura, K., et al. Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody. Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).
  11. Cochonneau, D., et al. Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo. Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).
  12. Chou, T. C., Martin, N. CompuSyn for drug combinations: PC software and user’s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , ComboSyn Inc. Paramus, NJ. (2005).
  13. Alvarez-Rueda, N., et al. A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity. PLoS One. 6 (9), e25220 (2011).
  14. Faraj, S., et al. Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside. Oncoimmunology. 7 (1), e1373232 (2017).
  15. Ishikawa, F., et al. Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice. Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).
  16. Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice. Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).
  17. Teicher, B. A. Assays for in vitro and in vivo synergy. Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).
  18. White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example. Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).
  19. Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).
  20. Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix. Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).
  21. Thompson, J., et al. Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts. Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).
  22. Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures. Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).
  23. Tang, X. X., et al. Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma. Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).
  24. Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice. Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).
  25. Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines. International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).
  26. Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).
  27. Cheung, N. K., et al. Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma. Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).
  28. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  29. Dayde, D., et al. Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20. Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).
  30. Racki, W. J., et al. NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection. Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).
  31. Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer. Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).

Tags

Kanser Araştırmaları sayı 143 kanser araştırmaları ilaç geliştirme antikor-ilaç kombinasyonu antikor-ilaç etkileşimi ÇMT tahlil antikor-uyuşturucu sinerji kombinasyon Dizin denklem içinde in vitro hücre satırı modeli tümör xenograft modeli
Antikanser antikor etkinliğinin Antineoplastic uyuşturucu tarafından kullanılmasının muhtemelen: antikor-uyuşturucu Synergism kombinasyon Dizin denklem kullanılarak tespiti
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bahri, M., Fleurence, J., Faraj, S., … More

Bahri, M., Fleurence, J., Faraj, S., Ben Mostefa Daho, M., Fougeray, S., Birklé, S. Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation. J. Vis. Exp. (143), e58291, doi:10.3791/58291 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter