Summary
يصف هذا البروتوكول بالإزالة وتنقية خلايا بطانية الشريان الرئوي (بايكس) التي تلتزم بنصائح بالون من سوان-غانز القسطرة في حين أنها هي مثبتة في الشريان الرئوي أثناء قسطرة القلب الصحيح وتبقى ملتصقة بالون المنكمشة بعد إزالة من جسم المريض.
Abstract
مجموعة متنوعة من الأمراض التي تؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH)، الذي يعرف بأنه ضغط شريان الرئوي يعني تزيد عن 25 مم زئبق في بقية. لمزيد تشخيص وإدارة الأس الهيدروجيني، الخضوع مرضى القلب الحق المتكررة كاثيتيريزيشنز (يستبدل) حيث قسطرة سوان-غانز متقدمة في فرع من الشريان الرئوي وهو تضخم بالون آسفين نصيحة القسطرة. توضح هذه المقالة بروتوكول بموجبه خلايا بطانية الشريان الرئوي (باكس) قد يكون حصادها من تلميحات البالون من سوان-غانز القسطرة بعد يستبدل، وتنقية مع أسلوب عمود تقارب CD146 المضادة لتنقية باكس المفترضة. قد يتم استخدام هذه الخلايا لتوفير صورة في الموقع حالة البطانة الرئوية المفرج استكمالا للقياسات الفسيولوجية التي تم الحصول عليها خلال يستبدل البيولوجية. حصاد ويجوز استخدامها باكس المنقي للثقافة أما الخلية أو لفحوصات تحليلية اللاحقة مثل تدفق سيتوميتيري.
Introduction
تتطلب المبادئ التوجيهية الحالية للولايات المتحدة وأوروبا قسطرة القلب الصحيح لتشخيص ارتفاع ضغط الدم الرئوي1. الأطباء والعلماء تسعى إلى فهم هذا المرض رغبة عينات بيولوجية من المفرج الرئوية لتكملة البيانات الفسيولوجية التي تم جمعها خلال يستبدل. ولسوء الحظ، المخاطر المرتبطة خزعة الأوعية الدموية الرئوية مرتفعة جداً، وذلك عينات بيولوجية من المفرج الرئوية ونادراً ما إذا تم الحصول عليها من أي وقت مضى من معيشة المرضى الذين يخضعون للرعاية. في حين قد تم اكتساب قدر كبير من التبصر من نسيج وعائي رئوي الحصول عليها من المأخوذة أو اكسبلانتيد الرئتين، هذه العينات غير قادرين على تعكس بيولوجيا عملية المرض PH كما أنها تتكشف في مريض معيشية. في عام 2013، ونحن أولاً أفادت أن خلايا بطانية الشريان الرئوي (بايكس) يتم تجريد من فروع الشريان الرئوي بالاتصال المادي مع تلميح بالون قسطرة سوان-غانز خلال يستبدل، ويمكن استردادها بإعداد صغيرة من نصائح قسطرة بعد الإجراء2.
يوضح هذا المقال لدينا أسلوب لإزالة وتطهير خلايا بطانية الشريان الرئوي (باكس) من تلميحات البالون من سوان-غانز القسطرة بعد قسطرة القلب الصحيح. حتى الآن، قد وصفت منهجية لأداء هذا الأسلوب الحصاد في تفاصيل كافية في الأدب لضمان تحقيق نتائج موحدة بين المختبرات أداء التقنية. تم إعداد هذه المقالة للتغلب على هذا القصور، تقدم التظاهرة تصور تقنية، من جمع نصائح قسطرة للمنتج النهائي لتنقية خلايا CD146 + بطانية السرير. هذا الأسلوب يجب أن تساعد في النهوض بالبحوث في بل مسببات مختلفة لدرجة الحموضة، وربما يؤدي إلى تطوير فحوصات تشخيصية جديدة لتكملة البيانات الفسيولوجية التي جمعت خلال يستبدل.
أهمية هذا الأسلوب في ميدان طب الأوعية الدموية الرئوية والبحوث هو أنه يوفر الوصول إلى لقطة لبيولوجيا البطانة الرئوية في الموقع، وعلى النقيض من الدراسات السابقة على اكسبلانتيد أو المأخوذة من الرئتين، ولا تمثل نقطة نهاية للرئة في هذا الموضوع. في الآونة الأخيرة، ونحن تبين أن العلامات البيولوجية المضادة-أبوبتوتيك في هذه الخلايا قد يكون فائدة في أدق phenotyping المتعلقة بأنواع مختلفة من ارتفاع ضغط الدم الرئوي3. عائد الخلايا التي تم الحصول عليها صغيرة نسبيا، ~ 5، 000-25,000 باكس كل عينة، وهذه الخلايا صعبة (ولكن ليس من المستحيل) للثقافة. ونحن نعتقد أن ذكي الأطباء والباحثين ستجد التآزر بين هذه التقنيات رفيق بغية النهوض بالبحوث والأوعية الدموية الرئوية والتشخيص وبروجنوستيكس.
Protocol
وافق "مجلس المراجعة المؤسسية" "شبكة الصحة الغني" جميع الدراسات الموضحة في هذه المقالة. جميع المرضى المقدمة المستنيرة أمام إدارة العوامل المهدئة وحددت إزالة تعيين عدد دراسة.
1. جمع السرير
ملاحظة: كل شيء في هذا البروتوكول ينبغي أن يتم على الجليد، باستخدام حلول مبردة مسبقاً. من المهم للحث على ركود الباردة في الخلايا للحفاظ على النمط الظاهري البيولوجي في الموقع. هذا البروتوكول يتضمن التعامل مع الدم والخلايا التي تم الحصول عليها من البشر ولذلك ينبغي أن تراعي الاحتياطات العالمية.
- فورا بعد سحب القسطرة من الغمد، تزج القسطرة في أنبوب الطرد مركزي 50 مل يحتوي على 40 مل من المحلول الملحي العقيمة مبردة. دوامة القسطرة عدة مرات إزالة الدم، ومسح السطر إذا لزم الأمر لإزالة الدم الاحتفاظ داخل الخط.
- قطع القاصي 5 سم من طرف القسطرة والسماح لها بالوقوع في أنبوب الطرد المركزي 50 مل المحتوية على المحلول الملحي مبردة. إزالة تلميح القسطرة مع الملقط على الفور وأنه نقل إلى أنبوب الطرد مركزي 15 مل تحتوي على 15 مل متوسطة نمو الخلايا البطانية (المفوضية الأوروبية).
- إغلاق الأنبوب ووضعه على الجليد ونقلها إلى المختبر للتحضير للمعالجة أو الشحن. من الأهمية بمكان أن يبقى البالون منغمسين في المتوسط، لذا تأكد من هناك headspace الحد الأدنى في أنبوب 15 مل بملئه تماما مع المفوضية الأوروبية المتوسطة النمو.
- عملية العينة فورا قبل الانتقال إلى "الخطوة 2، 1" أو الختم والسفينة العينة على الجليد الرطب بين عشية وضحاها لتجهيز المختبر مهرة في هذا البروتوكول. إذا كانت الخلايا في نهاية المطاف سوف تستخدم لزراعة الخلايا، هو نوصي بشدة بأن طرف القسطرة معالجتها فورا في نفس الموقع التي تم جمعها.
2. الحصاد الخلية
ملاحظة: كل شيء في هذا البروتوكول ينبغي أن يتم على الجليد، باستخدام حلول مبردة مسبقاً. الخلايا في ركود الباردة، ومن المهم تجنب الصحوة لهم حتى أنهم على استعداد لأن تكون ثابتة أو مثقف. ينبغي أن يجري هذا البروتوكول كامل في غطاء الاندفاق الصفحي، باستخدام أدوات معقمة، إذا كان القصد النهائي ثقافة باكس المقطوع. إذا هو لم يخطط الثقافة (مثلاً، تدفق التحليل الخلوي)، فإنه ليس من الضروري مراعاة الاحتياطات العقيمة.
- إضافة 5 مل من محلول مفرزة الخلية إلى أنبوب الطرد مركزي 15 مل؛ ضع على الجليد.
- رسم 1 مل من المفوضية الأوروبية وسائل الإعلام من أن تبقى في أنبوب جمع السرير في محقن 1 مل.
- إكمال خطوات 2.3 عن طريق 2.5 بسرعة. قبضة قطع نهاية طرف القسطرة مع هيموستاتس.
- عناية إدراج إبرة حقنه 1 مل في حفرة "الأبيض" مقابل الأسلاك دليل ("الثقب الأسود"). الحرص على تجنب الإصابة بالإبرة.
- نقل طرف القسطرة في أنبوب الطرد المركزي 15 مل يحتوي على الخلية المفرزة الحل.
- انتفاخ البالون، مع الحرص على عدم الاندفاع؛ تضخيم البالون مع حوالي 200 ميليلتر من وسائل الإعلام تعمل بشكل جيد.
- تسمح القسطرة الجلوس في الخلية المفرزة الحل على الجليد لمدة 5 دقائق مع البالون تضخم. إذا كان يفرغ البالون بمفردها أثناء الاحتضان 5 دقائق، هذا أمر مقبول.
- صب محتويات الأنبوب الطرد المركزي 15 مل في الطبق 100 مم. ضع البالون في حل الخلية المفرزة "بركة".
- كشط البالون تضخم مع كاشطة لخلية. ويمكن استخلاص مكشطة الخلية حول البالون في حركة دائرية أو اقتراح الفرشاة. التركيز على "القطبين" البالون، حيث أنه يفي بالقسطرة. ضمان أن مكشطة خلية اتصالات كامل سطح البالون مرتين على الأقل. شطف مكشطة خلية في الخلية المفرزة الحل "بركة" بشكل دوري.
- انتفاخ البالون وتتخلص من ذلك مع حركة الفرشاة. شطف مكشطة خلية في الخلية المفرزة الحل "بركة".
- تجاهل مكشطة نصيحة وابرة وخلية القسطرة في حاوية النفايات المناسبة.
- من أجل الحل مفرزة خلية تحتوي على الحصاد الخلية في أنبوب 50 مل أجهزة الطرد مركزي. هز أنبوب جمع وصب العينة التي تم جمعها، فضلا عن وسائط الإعلام المتبقية من أنبوبة جمع.
- الطرد المركزي العينة في 650 x ز عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. من المهم ملاحظة أنه في كثير من الأحيان بيليه لن تكون مرئية. يمكن أن تكون مفيدة وضع علامة على موقع حيث ينظر بيليه، إذا كان مرئياً، لتجنب يسفط بيليه في حالة أنها صغيرة جداً النظر.
ملاحظة: عادة، ينظر بيليه فقط عند العينة قد تلوثت بالدم. تلوث الدم لا يهم للمنتج النهائي الحصاد لأنه فشل لربط الخرز CD146 الدم ويغسل من خلال العمود. وأظهرت اختبارات مكثفة أن ماركة معينة من أنابيب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل المشار إليها في الجدول للمواد يقلل من فقدان الخلية بالنسبة لأنابيب أخرى استخدمت خلال بروتوكول الأمثل. - عناية نضح وسائط الإعلام، وتجنب الإخلال أو يسفط بيليه.
3. تنقية الخلية
ملاحظة: كل شيء في هذا البروتوكول ينبغي أن يتم على الجليد، باستخدام حلول مبردة مسبقاً. الخلايا في ركود الباردة، ومن المهم تجنب الصحوة لهم حتى أنهم على استعداد لأن تكون ثابتة أو مثقف.
- ريسوسبيند بيليه في 1 مل من محلول تحلل خلايا الدم الحمراء المثلجة، وتحويلها إلى 1.5 مل [ميكروفوج] أنابيب؛ روك برفق لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.
- أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 500 x ز و 4 درجات مئوية. نضح الحل تحلل ربك.
- ريسوسبيند بيليه في 60 ميكروليتر من برنامج تلفزيوني و 20 ميكروليتر من مانع FcR و 20 ميكروليتر من ميكروبيدس CD146 المضادة الإنسان. احتضان لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية.
- أضف 1 مل من برنامج تلفزيوني مبردة. أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 500 x ز و 4 درجات مئوية. نضح المادة طافية وريسوسبيند بيليه في 1 مل من برنامج تلفزيوني مبردة.
- ضع عمود LS مغناطيسية على رف مغناطيسي (انظر الجدول للمواد لهويات تجارية محددة من هذه العناصر) في درجة حرارة الغرفة. رئيس الوزراء العمود عن طريق إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني والسماح لوحدة التخزين بالكامل لتدفق من خلال. تجاهل في التدفق من خلال.
- ضع العينة في العمود المغناطيسية. تجاهل في التدفق من خلال.
- أغسل العمود مع 3 مل من برنامج تلفزيوني مبردة ثلاث مرات. تجاهل من خلال التدفق من كل غسل.
- أضف 3 مل من برنامج تلفزيوني مبردة إلى أنبوب الطرد مركزي 15 مل. إزالة العمود المغناطيسية من المغناطيس وصب مل 3 من برنامج تلفزيوني من أنبوبة الطرد المركزي 15 مل في العمود بسرعة وضع العمود في أنبوب الطرد المركزي للحاق التدفق من خلال. فورا يغرقون مع المكبس المزود مع العمود. العينة الآن المنقاة، وجاهزة للتثبيت/التلوين، أو الثقافة.
Representative Results
هذا البروتوكول يؤدي إلى تنقية الخلايا من سوان-غانز القسطرة نصائح بعد قسطرة القلب الصحيح، أن ربط عمود اختيار CD146 ومبعثر الأمام/الجانب التشكيلات الجانبية التي لا يمكن تمييزها عن الإنسان الأولية مثقف الرئوية الشريان خلايا بطانية (الشكل 1). ونظرا لأن بالون قسطرة في الاتصال المادي مع فقط المقدم غمد (الخلية الحرة مادة)، جدار الوعاء الشريان الرئوي، والدم، والبيانات يتم توفيرها هنا لإثبات أن هذه الخلايا ليست مستمدة من الدم (الشكل 2) ، و لذلك فمن المفترض أن الواقع أنها مستمدة من جدار الوعاء الشريان الرئوي. القارئ ينبغي ملاحظة أن تظل مكافحة CD146 الخرز المغناطيسية التي تستخدم لتنقية الخلايا ملتصقة على سطح الخلية بعد الإجراء، ومن ثم دون المستوى الأمثل في محاولة لتحليل المحاصيل خلية CD146 كعلامة لخلايا بطانية. CD31 أو علامات بطانية أخرى يفترض أنها ستكون متاحة لوضع العلامات ويمكن اعتبارها بدائل.
وقد تم التعرف على العناصر الأساسية لهذا البروتوكول التي قد تؤثر على النتائج. أولاً، من المهم شطف نصيحة القسطرة في السرير بغية إزالة الدم. ويبين الشكل 3 الجانب مبعثر (SSC) مبعثر إلى الأمام (FSC) لمحات من التدفق عبر من العمود CD146 المضادة لواحد عينة أن كان بشكل صحيح تشطف وواحدة لم يكن. يظهر العمود استبعاد الخلايا المشتقة من الدم من المحاصيل (الشكل 2)، ولكن الخطوة الشطف سيضمن الحد الأدنى من التلوث المحتمل من تعميم خلايا بطانية (التي توجد عادة في < الخلايا 50 مليلتر من الدم4). وقد لاحظنا أن النذرة من CD146 العمود واضح تماما، وحتى في حالة العينات نصيحة القسطرة دموية للغاية. وهذا يوحي بأن العمود قادرة على التعامل مع كميات كبيرة من الدم دون إعاقة أو الاحتفاظ بها غير-CD146 + خلايا الدم.
ثانيا، من المهم أن تضخيم بالون تلميح مرة واحدة على الأقل خلال الخطوة مكشطة الحل/الخلية المفرزة الخلية. نظراً لأن باكس المفترضة في بالون تلميح تظل ملتصقة بالرغم من الخطوة شطف المالحة، يبدو من المرجح أنهم قد يكون جزئيا وقعوا في طيات في بالون الفينيل كما أنه هو قلصت استعدادا لإزالة من المريض. ومن المفترض أن يحرر الخطوة التضخم باكس، السماح لهم بلطف كشط بعيداً. ليس من الواضح فورا أحد يمكن اختبار هذه الفرضية، ولكن لوحظ تدني المحاصيل من الخلايا عندما لا يكون البالون تضخم (البيانات لا تظهر).
وأخيراً، من المهم ملاحظة أن غلات باكس المستمدة من هذا الأسلوب يمكن أن تختلف إلى حد كبير. ومن المفترض أن المريض، العوامل المحددة للدولة وطبيب الأمراض المساهمة في هذا التغير، كما البروتوكول لا يتضمن الخطوات التي يتوقع أن يتسبب في خسائر فادحة لمصدر المواد. ويبين الجدول 1 الممثل CD146 + غلة من طائفة متنوعة من المحاصيل الباكستانية الاستفادة من نصائح القسطرة التي تم الحصول عليها من مجموعة متنوعة من المرضى الذين يعانون من مرض مختلف الدول من ارتفاع ضغط الدم الرئوي ومجموعة متنوعة من مشغلي الطبيب.
الشكل 1 : الثقافة الملامح SSC/FSC المحصول تلميح بالون قسطرة نموذجية من مريض بارتفاع ضغط الدم رئوي (A) وعدد مماثل من الخلايا من الباكستانية بشرية الأولية المكتسبة تجارياً (ب)- كلا عينات تنقية مع العمود CD146 المضادة، ثابتة، وبيرميابليزيد كما هو موضح في البروتوكول، قبل نظام مراقبة الأصول الميدانية التحليل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : ملامح SSC/منتدى التعاون الأمني بالون قسطرة نموذجي نصيحة الحصاد من ارتفاع ضغط الدم رئوي المريض (A) والمسلسل 01:10 إضعاف فيكل تنقية التدرج البشرية بافي معطف (ب، ج، د)- (أ) تمت تنقية مع العمود CD146 مكافحة حين (ب-د) لم تكن. كل خلية العينات كانت ثابتة وبيرميبليزيد كما هو موضح في البروتوكول، قبل نظام مراقبة الأصول الميدانية التحليل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : ملامح SSC/FSC القسطرة بالون تلميح المحصول من مريض ارتفاع ضغط الدم رئوي في الدم الذي كان مرئياً على طرف القسطرة قبل تجهيزها. قبل الخطوة 3.1 للبروتوكول، تم تقسيم العينة وتحلل المخزن المؤقت إضافة إلى قاسمة واحد والمقتطعة من الآخر. (أ) و (ج) إظهار التشكيلات الجانبية SSC/منتدى التعاون الأمني للعينة ليسيد، كلا من الخلايا الاحتفاظ بالعمود (A) وخلال التدفق من العمود. (ب) و (د) إظهار التشكيلات الجانبية SSC/منتدى التعاون الأمني للعينة أونليسيد، كلا من الخلايا الاحتفاظ بالعمود (ب) وخلال التدفق من العمود (د). نخلص إلى أن تحلل يزيل بعض ولكن ليس كل من الكريات البيضاء ولكن تلك الكريات البيضاء لا يتم الاحتفاظ بالعمود وهكذا تستبعد من الحصاد النهائي، بغض النظر عن تحلل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| عينة | تاريخ | الخليوي العائد | تشخيص |
| 433 | 17/04/2018 | 7364 | أمراض الرئة الخلالي-الأس الهيدروجيني |
| 279 | 17/04/2018 | 7130 | الأس الهيدروجيني-تصلب الجلد |
| 432 | 13/04/2018 | 3976 | المتعددة العوامل الأس الهيدروجيني |
| 431 | 13/04/2018 | 3634 | هفريف |
| 390 | 13/04/2018 | 5666 | الهيئة العامة للإسكان |
| 423 | 23/03/2018 | 9024 | هفريف |
| 272 | 23/03/2018 | 7098 | هفريف |
| 408 | 27/02/2018 | 4784 | هفريف |
| 403 | 14/02/2018 | 10376 | الأس الهيدروجيني-ASD + المرض التاجي |
| 396 | 26/01/2018 | 4890 | هفبيف-إيبكف |
| 397 | 26/01/2018 | 7672 | الهليوكبتر العادي |
| 318 | 04/01/2018 | 7002 | هفريف-LVAD الحالي |
الجدول 1: CD146 + غلة من طائفة متنوعة من المحاصيل الباكستانية. الممثل CD146 + غلة من طائفة متنوعة من المحاصيل الباكستانية الاستفادة من نصائح القسطرة التي تم الحصول عليها من مجموعة متنوعة من المرضى الذين يعانون من مرض مختلف الدول من ارتفاع ضغط الدم الرئوي ومجموعة متنوعة من مشغلي الطبيب.
Discussion
الأسلوب الموصوفة في هذه المقالة هي تقدير أفضل في سياق السابقة نماذج تجريبية لدراسة في بطانة الأوعية الدموية الرئوية. محاولات سابقة للحصول على باكس من البشر كانت محدودة إلى الرئتين اكسبلانتيد/المأخوذة5 ومحاولة لم تدم طويلاً لوضع قسطرة قادرة على الشريان الرئوي خزعة6. كما لوحظ في مراجعة الأخيرة7، يتميز هذا الأسلوب من الحصاد أنسجة الرئة بقدرته على الحصول على باكس من حياة الإنسان، والقيام بذلك في نقاط زمنية متعددة في التطور المرض و/أو العلاج. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن أسلوب رفيق مؤخرا أبلغ بموجبه الناجمين عن الخلايا الجذعية pluripotent (إيبسكس) يمكن أن تكون ترانسديفيرينتياتيد في باكس4،5. هذا الأسلوب ينتج ثقافات وفيرة من باكس الخاصة بالمريض ويسمح لدراسة آثار الخلفية الوراثية الخاصة بالمريض على علم الأحياء الباكستانية. وعلى الرغم من هذه المزايا، لا توفر هذه باكس المستمدة من اللجنة التوجيهية أي معلومات حول التفاعل بين المكروية المحلية والخلفية الوراثية الخاصة بالمريض. وقد قدمت مجموعتنا الرأي القائل بأن "نصيحة القسطرة" وتقنيات [ايبسك] يحتمل أن يكون التآزر في النهوض بالميدان8.
ضمن هذا السياق الحالية والتاريخية، ينبغي أن يلاحظ أوجه القصور في هذا الأسلوب. أولاً، من المهم أن نلاحظ أن غلات باكس المستمدة من هذا الأسلوب يمكن أن تختلف إلى حد كبير. ومن المفترض أن المريض، العوامل المحددة للدولة وطبيب الأمراض المساهمة في هذا التغير، كما البروتوكول لا يتضمن الخطوات التي يتوقع أن يتسبب في خسائر فادحة لمصدر المواد. ويبين الجدول 1 الممثل CD146 + غلة من طائفة متنوعة من المحاصيل الباكستانية الاستفادة من نصائح القسطرة التي تم الحصول عليها من مجموعة متنوعة من المرضى الذين يعانون من مرض مختلف الدول من ارتفاع ضغط الدم الرئوي ومجموعة متنوعة من مشغلي الطبيب. ثانيا، غلة الخلية منخفضة عموما، وقد ثبت صلاحيتها للثقافة أن أقل حتى الآن في أيدينا. بينما نحن نمت سابقا ثقافات باكس باستخدام هذا الأسلوب1، علينا تحمل تلك النتائج تمثل الإنقاذ لمجموعة فرعية خلايا السلف عقب يموت قبالة معظم العينة وناجحا إلا بشكل متقطع في أيدينا. على سبيل المثال، ليس من النادر أن تجد إلا تمسكا عشرات قليلة باكس في الثقافة صباح اليوم بعد قد تم مطلي حصاد. غالباً ما هذه الثقافات الصغرى لا البقاء على قيد الحياة للتوسع. يلزم المزيد من العمل لتحسين هذا البروتوكول بطريقة أنه سيتم الحفاظ على استمرارية باكس وأحوالهم في الثقافة لتحقيق الهدف المنشود لإكثار المحاصيل الباكستانية الخاصة بالمريض. أخيرا، لا يمكن استبعاد التحديد الإيجابي CD146 نحن تكيفت التلوث مع غيرها CD146 + الخلايا، مثل تعميم خلايا بطانية4، بيريسيتيس، وخلايا العضلات الملساء ونادر CD146 + "تي" الخلايا9،10. ومع ذلك، هذه الخلايا يفترض أن تكون قليلة جداً في عدد العينات التي يتم جمعها بهذه الطريقة، و CD146 إلى حد كبير أكثر تحديداً لهذا البروتوكول من علامات خلية أخرى من خلايا بطانية مثل CD31 (والذي أيضا على مجموعة متنوعة من المنقولة بالدم الخلايا بما فيها الصفائح الدموية11). ينبغي أن يكون متوازنا أي التحسينات المستقبلية التي تهدف إلى تحسين نوعية ضد آثارها السلبية المحتملة على الغلة.
Disclosures
حركة العدالة والسلام ورلب بالمخترعين في براءات الاختراع المطالبة بأجزاء من الأساليب المذكورة.
Acknowledgments
يود المؤلفون أن أشكر الأطباء ودعم موظفي دائرة متقدمة قصور القلب وارتفاع ضغط الدم الرئوي من المستشفى العام في الغني لتوفير مئات عينات قسطرة على مدى عدة سنوات التي سهلت الأمثل لهذه المنهجية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 mm culture dish | Fisher | NC9385690 | |
| 15 mL Centrifuge Tubes | Midsci | C15R | |
| 16% Formaldehyde | Fisher | PI28908 | |
| 50 mL centrifuge tubes | Midsci | C50R | |
| Accutase | Thermo | A1110501 | cell detachment solution |
| Cell Scraper | Fisher | 08-100-241 | |
| Endothelial Cell Growth media | Cell Applications | 211-500 | |
| Forceps | any | ||
| Hemostat | any | ||
| LoBind microfuge tube | Fisher | 13-698-794 | |
| Miltenyi CD146 beads | Miltenyi | 130-093-596 | |
| Miltenyi FCR blocker | Miltenyi | 130-059-901 | |
| Miltenyi LS columns | Miltenyi | 130-042-401 | |
| Miltenyi magnet | Miltenyi | MidiMACS | |
| Miltenyi RBC lysis buffer | Miltenyi | 130-094-183 | |
| PBS | Fisher | BP2438-4 | |
| Scissors | any | ||
| Syringes | BD | 309597 |
References
- Galie, N., et al. 2015 ESC/ERS Guidelines for the diagnosis and treatment of pulmonary hypertension: The Joint Task Force for the Diagnosis and Treatment of Pulmonary Hypertension of the European Society of Cardiology (ESC) and the European Respiratory Society (ERS): Endorsed by: Association for European Paediatric and Congenital Cardiology (AEPC), International Society for Heart and Lung Transplantation (ISHLT). European Respiratory Journal. 46 (4), 903-975 (2015).
- Pollett, J. B., Benza, R. L., Murali, S., Shields, K. J., Passineau, M. J. Harvest of pulmonary artery endothelial cells from patients undergoing right heart catheterization. Journal of Heart Lung Transplantation. 32 (7), 746-749 (2013).
- Benza, R. L., et al. In situ expression of Bcl-2 in pulmonary artery endothelial cells associates with pulmonary arterial hypertension relative to heart failure with preserved ejection fraction. Pulmonary Circulation. 6 (4), 551-556 (2016).
- Bull, T. M., et al. Circulating endothelial cells in pulmonary hypertension. Thrombosis and Haemostasis. 90 (4), 698-703 (2003).
- Kaneko, F. T., et al. Biochemical reaction products of nitric oxide as quantitative markers of primary pulmonary hypertension. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 158 (3), 917-923 (1998).
- Rothman, A., et al. Transvenous procurement of pulmonary artery smooth muscle and endothelial cells using a novel endoarterial biopsy catheter in a canine model. Journal of the American College of Cardiology. 27 (1), 218-224 (1996).
- Savale, L., Guignabert, C., Weatherald, J., Humbert, M. Precision medicine and personalising therapy in pulmonary hypertension: seeing the light from the dawn of a new era. European Respiratory Reviews. 27 (148), (2018).
- Kanwar, M., Raina, A., Passineau, M., Benza, R. Idiopathic Pulmonary Arterial Hypertension: Evolving Therapeutic Strategies. Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 38 (5), 606-618 (2017).
- Elshal, M. F., Khan, S. S., Takahashi, Y., Solomon, M. A., McCoy, J. P. Jr CD146 (Mel-CAM), an adhesion marker of endothelial cells, is a novel marker of lymphocyte subset activation in normal peripheral blood. Blood. 106 (8), 2923-2924 (2005).
- Elshal, M. F., et al. A unique population of effector memory lymphocytes identified by CD146 having a distinct immunophenotypic and genomic profile. BMC Immunolology. 8, 29 (2007).
- Newman, P. J., et al. PECAM-1 (CD31) cloning and relation to adhesion molecules of the immunoglobulin gene superfamily. Science. 247 (4947), 1219-1222 (1990).
