Summary
Hücre tabanlı tahlil serum anti-aquaporin-4 immünglobulin G. algılamak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir Bu yöntem, klinik tanı ve Nöromyelitis optik spektrum bozuklukları, bilimsel araştırmalar için uygulanabilir.
Abstract
Anti-aquaporin-4 (AQP4) immünoglobulin G (IgG) Nöromyelitis optica spektrum bozuklukları (NMOSD) için temel tanılama biyomarker olduğunu. Hücre tabanlı tahlil (CBA) yüksek duyarlılık ve özgüllük ile insan serumu anti-AQP4 IgG algılamak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Kısaca, serum Anti-AQP4 IgG biochip üzerinde sabit o zaman floresein etiketli bir ikincil antikor tarafından tespit AQP4 transfected hücre tarafından ele geçirdi. Floresans mikroskobu Floresans görselleştirmek için kullanılmaktadır ve floresan yoğunluğu en az iki deneyimli klinisyenler tarafından değerlendirilir. NMOSD son tanısı anti-AQP4 IgG algılama sonuçları, klinik bulgular ve neuroradiological bulgular kombinasyonuna göre yapılabilir. Önceki çalışmalara göre daha hassas ve diğer anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri daha belirli CBA ve klinik tanı ve NMOSD çalışmaları için uygulanabilir. Yöntemi sınırlamaları vardır; Örneğin, serum anti-AQP4 IgG titreleri değerlendirmek için uluslararası bir ölçüde hala eksik. Burada, insan serumu anti-AQP4 IgG algılama CBA için detaylı bir protokol açıklanmıştır.
Introduction
AQP4 serum IgG Nöromyelitis optica spektrum bozuklukları (NMOSD)1için bir çekirdek tanılama biyomarker olduğunu. Hücre tabanlı tahlil (CBA) yaygın olarak kullanılan anti-AQP4 IgG algılama yüksek duyarlılık ve özgüllük ile yöntemidir. Burada, CBA için detaylı bir protokol tanıttı.
AQP4, bir su kanalı protein altı membran kapsayan birimler bulunmaktadır ve sulu bir çevreleyen iki Helisel etki alanı2gözenek. Anti-AQP4 IgG NMOSD patogenezinde hedefine AQP4, esas olarak astrocytes3endfeet üzerinde bulunan bağlama ile ilgilenmektedir. Bu anti-AQP4 IgG yaklaşık üçte içinde NMOSD hastalar4olumlu gösterilmiştir. En son uluslararası tanı ölçütlerini içinde NMOSD, anti-AQP4 IgG göbek tanılama biyomarker5olarak kabul edilir. Bu bağlamda, insan serumu algılamak için güvenilir bir protokolü kurmak önemlidir anti-AQP4 IgG ve NMOSD klinik tanı kolaylaştırmak.
Şu anda, çeşitli anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri CBA, doku tabanlı tahlil, enzim bağlı immunosorbent assay ve Akış Sitometresi6,7gibi kullanılabilir. CBA anti-AQP4 IgG yakalamak için insan AQP4 ile transfected EU90 hücreleri kullanır. Yakalanan anti-AQP4 IgG floresan ikincil antikorlar tarafından algılanır ve daha sonra mikroskobu tarafından görüntülenmiştir. Kanıt biriken CBA daha hassas ve diğer anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri6,7' den belirli olduğunu göstermiştir. Bir meta-analiz göre duyarlılık ve özgüllük CBA % 76 ve doku tabanlı daha yüksekti % 99 olarak gösterildi ve enzim bağlı immunosorbent6deneyleri. Ayrıca, tanı testleri anti-AQP4 IgG kadınlarında karşılaştırılması yürütülen7yaşındaydım. Toplam 193 eğitim 15 Avrupa tanı merkezleri bir konu vardı7kayıtlı. Dört farklı yöntem serum anti-AQP4 IgG7algılamak için kullanılmıştır. CBA daha hassas ve belirli diğer yöntemleri7' den gösterilmiştir. AQP4 iki büyük izoformlarının (AQP4-M1 ve AQP4 M23) ifade edildiği gibi anti-AQP4 IgG yakalama hücre AQP4-M1 veya AQP4 M23 ile transfected. Ancak, yakalama hücre hangi tip daha iyi tartışmalı kalır. Bir soruşturma AQP4-M1 dayalı desteklenen iken diğerleri AQP4 M23 CBA dayalı belirttiler CBA8olduğunu, daha iyi7,9,10. Ancak, AQP4 M23 esaslı CBA yanlış pozitif belirsiz IgG bağlama8nedeniyle sonuçlar verebilir. Jarius ve ark. 11 AQP4-M1 ve AQP4 M23 esaslı CBAs arasında anlamlı bir fark anti-AQP4 IgG algılama oranları olduğunu bildirdi.
İçinde Özet, serum anti-AQP4 IgG NMOSD için bir çekirdek biyomarker olduğunu. CBA daha yüksek özgüllük ve diğer anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri daha duyarlılık vardır. AQP4-M1 veya AQP4 M23-tabanlı CBA iyidir tartışmalı kalır. Bu makalede, AQP4 M1-tabanlı CBA için detaylı bir protokol, klinik tanı ve NMOSD çalışmaları için uygulayabileceğiniz açıklanmıştır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu yordamı Jilin ilk hastane Üniversitesi Etik Komitesi tarafından kabul edildi ve yaklaşık 1500 konularda gerçekleştirildi.
1. hasta kayıt ve kan örnek koleksiyonu
- Anti-AQP4 IgG Şef şikayet ve belirtiler klinik hastaları için aşağıda listelenen serum laboratuvar tespiti uygulanır. Fiziksel muayene de gerçekleştirmek.
Optik nörite: hastaların acı kaybı visual alanlarının ve görme keskinliği azaltma gibi görsel açıkları ile.
Akut miyelit: hasta felç, duyusal açıkları ve otonomik disfonksiyon ile mevcut.
Alan postrema sendromu: hastaların açıklanamayan hıçkırık, bulantı veya kusma belirtileri olabilir.
Akut beyin sapı sendromu: beyin sapı lezyonları sonucu farklı semptom ve fizik bulguları lezyonlar yere bağlı olarak.
Semptomatik Narkolepsi veya NMOSD tipik diencephalic Mr lezyonları ile akut diencephalic klinik sendrom.
NMOSD tipik beyin lezyonlar ile semptomatik serebral sendromu.
Not: Hastanın serum anti-AQP4 ise uluslararası bir fikir birliği tanı ölçütlerini göre NMOSD5, NMOSD tanısı yapılabilir IgG pozitif ve sahip en az bir çekirdek klinik özellikleri yukarıda bahsedilen. Ancak, biz anti-AQP4 IgG hastalarda optik nörite yalnızca test tavsiye etmiyoruz. -
Kan örneği koleksiyonu
Not: hastalarda açlık olması gerekmez.- 2-3 mL Venöz kan bir 4 mL vakumlu kan toplama tüp çizmek.
- (RT) oda sıcaklığında 30 dakika pıhtısı serum izin.
Not: Uzun süreli pıhtılaşma trombosit gelen sızıntı nedeniyle serum düzeyleri artırabilir. - 5 dakika süreyle santrifüj 2100 x g de dikkatli bir şekilde yeni bir tüp serum aktarın.
- Hemen serum veya aliquot analiz ve mağaza -20 veya-80 ° C.
Not: -80 ° C yıl depolanması için depolama-20 ° C'de ay, depolama için ise.
2. anti-AQP4 antikor algılama
Uyarı: Hasta numuneleri ve kullanılan seti Kimyasalları bulaşıcı malzemeler kabul. Sodyum azid içeren reaktifler seti zehirlidir. İletişim kuralının akış şeması şekil 1' de verilmiştir.
-
Hazırlık
- Belgili tanımlık teçhizat RT için kullanmadan önce getir.
Not: Mağaza 2-8 ° C'de kiti - En az 200 mL % 0,2 içeren PBS yıkama arabelleği hazırlamak ara 20. Yıkama arabelleği 100 mL, 500 mL kabı dökün.
- Seyreltik serum örnekleri yıkama arabelleği ile 10 x. Dağıtımcı talimatları doğrultusunda pozitif ve negatif kontrolleri hazırlayın.
- Belgili tanımlık teçhizat RT için kullanmadan önce getir.
-
Örnek kuluçka
- Önceden seyreltilmiş örnekleri, olumlu denetim veya negatif kontrol 30 µL reaktif tepsi (Şekil 2) reaksiyon alanları ekleyin.
Not: Hava kabarcıkları kaçının. - Biochip slaytlar üzerindeki koruyucu kapağı çıkarın.
Not: Dekolmanı ve sabit hücre kontaminasyonu önlemek için biochips dokunmayın. Slayt yan yana Kapaðý çýkarmadan önce tutun. - Biochip slayt reaktif tepsi (Şekil 2) uygulanır. RT, bir 30 dk kuluçka başlatmak
Not: Her örnek için karşılık gelen biochip diğer damlacıkları ile karıştırma olmadan bağlı bireysel bir damlacık olmalıdır. - Yavaşça biochip slaytla bir kez yıkama arabellek durulayın. Biochip slayt yıkama arabellek en az 5 dk. yer kabı bir shaker mümkünse üzerinde 100 mL dolu 500 mL kabı içine bırakın.
- Yıkama arabellek biochip slayttan dışarı çıkar. Dikkatlice uzakta bir kağıt havlu ile reaksiyon alanları dışında kalan yıkama arabellek silin. 1-2 dk tepki alan üzerinde kalan yıkama arabellek buharlaşır için açık havada biochip slayt maruz.
Not: Reaksiyon alanları kuru değil. Kağıt havlu ile biochips dokunmayın.
- Önceden seyreltilmiş örnekleri, olumlu denetim veya negatif kontrol 30 µL reaktif tepsi (Şekil 2) reaksiyon alanları ekleyin.
-
İkincil antikor kuluçka
- İkincil antikor çözüm dağıtımcı talimatları doğrultusunda hazırlamak.
- İkincil floresan antikor 25 µL temiz reaktif tepsi reaksiyon alanları ekleyebilirsiniz.
- Biochip slayt yüklü ile ikincil Antikor Reaktif tepsi uygulanır. 30 dk RT. az için kuluçkaya
-
Montaj
- El yıkama arabellek dökmek ve taze yıkama arabellek 100 mL kabı ekleyin. Çamaşır 2.2.4 ve 2.2.5 adımlarda açıklandığı gibi tekrarlayın.
- Dikkatle gömme orta biochip slayttaki (tepki alan başına bir damla) reaksiyon alanları ekleyin. Biochip slayt bir cam parçası ile kapatın. Hava kabarcıkları kaçının.
-
Floresans algılama
- Floresan lamba mikroskop ve 15 dk. Seç 488 nm filtre öncesi ısı açın.
- Açık fotoğraf yazılım. Transfected ve untransfected alanları farklı büyüklüklerde ile tüm reaksiyon alanların fotoğraf çekmek. İlk olarak, genel bir bakış için 4 x büyütme ile bir resim çekmek, sonra 10 x ve 20 x büyütme ile daha fazla fotoğraf çekmek.
Not: Detaylı iletişim kuralı Tablo 1' de gösterilen. Sonuçların yorumlanması temsilcisi sonuçları bölümünde ele alınmıştır.
3. hastaların tanı
- Hastanın serum anti-AQP4 ise IgG pozitif ve NMOSD en az bir çekirdek klinik özelliği gösterir (tartışma bölümüne bakın), NMSOD5hastaya teşhis. Hasta anti-AQP4 ise ancak, IgG negatif, NMOSD tanısı atlanabilir değil.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Burada açıklanan yordamı kullanarak, belirli anti-AQP4 IgG Serumda saptanabilir. İşlem sırasında önceden seyreltilmiş örnekleri, olumlu bir kontrol ve bir negatif kontrol transfected ve untransfected alanları (Şekil 2) içeren reaksiyon alanları için eklenmiştir. Floresan transfected bir alanda olumsuz denetiminin esas olarak biochips (şekil 3) transfected hücrelerine ikincil antikor belirsiz bağlama belirtti. Homojen zayıf Floresans görülebilir (şekil 3) idi. Pozitif kontrol gelince, anti-AQP4 antikor reaksiyonu alan eklendi. Güçlü Floresans anti-AQP4 IgG AQP4-M1 transfected hücrelerinde (şekil 4) için belirli bağlama belirtilen transfected alanında, görülmüştür. Floresan untransfected bir alanda olumlu denetiminin ipuçları anti-AQP4 IgG sabit hücrelere belirsiz bağlama biochips (şekil 4) gösterdi. Olumlu serum olumlu denetim (şekil 5) benzer bir desen gösterdi seyreltilmiş numune x 10 için anti-AQP4 IgG negatif serum floresan bir desen negatif Denetimi'ne benzer gösterdi. Floresan yoğunluğu anti-AQP4 IgG titresi ile ilişkili idi. Farklı floresan yoğunluğu örnekleri şekil 5' te sunulmaktadır. Şekil 5 A ve 5B edildi anti-AQP4 IgG negatif örnekleri, şekil 5C-H anti-AQP4 IgG pozitif örnekleri iken. Türdeş olmayan ve taneli floresan transfected bölgelerde göründüğü gibi anti-AQP4 örnek olarak kabul edildi IgG pozitif, Floresans gücü ne olursa olsun. Serum anti-AQP4 dayalı NMOSD tanı ölçütlerini IgG, daha fazla tartışma bölümünde açıklanacaktır.
Birkaç örnek, az sayıda hücre şiddetle transfected alanlarda lekeli ve serum anti-AQP4 IgG pozitif veya negatif (şekil 6) olup olmadığını belirlemek zor. Bu durumda, "muhtemel pozitif" raporlanabilir. Nadir durumlarda, bir örnek transfected alanlarda Floresans homojen daha güçlü untransfected alanlarda (Şekil 7). Bu durumda, örnek anti-AQP4 IgG negatif düşünülmelidir. Arka plan Floresans yüksek yoğunluklu belirsiz olabilir. Güvenilir bir rapor oluşturmak için tüm fotoğrafları körü körüne en az iki klinisyenler tarafından değerlendirilmelidir. Klinisyenler önce değerlendirmeyi eğitim. Bu iletişim kuralı, onlar farklı örnek türleri temsilci fotoğrafları gösterildi ve sonuçları değerlendirmek nasıl bilgi verilmiştir. O zaman, onlar fotoğrafları ile birlikte deneyimli bir klinisyen değerlendirildi. Son olarak, eğitimli klinisyenler bağımsız olarak çalıştı. İdeal bir durumda, her zaman sonuçları değerlendiren aynı klinisyenler olmalıdır.
Resim 1 : Akış şeması anti-AQP4 IgG Algılama Protokolü'nün. AQP4 M1 transfected veya untransfected AB 90 hücre biochips üzerinde sabitlenir. Serum biochips için eklerken, anti-AQP4 IgG serum içinde sabit transfected hücreleri tarafından yakalanır. Daha sonra ikincil antikor floresein etiketli anti-AQP4 IgG algılamaya uygulanır. Floresans mikroskobu ile çeşitli büyüklüklerde tarafından görüntülenmeyecektir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : Örnek kuluçka. (A)reaktif tepsi üstten görünüm. Her reaktif tepsi beş bireysel reaksiyon alanları içerir. Pozitif kontrol, örnekler ve negatif kontrol için ayrı reaksiyon alanları eklenmelidir. (B) üst biochip slayt görünümünü. Her biochip slayt iki alt bölümleri var beş reaksiyon alanları içerir. Untransfected alt untransfected hücreleri içerirken, transfected alt AQP4 M1 transfected sabit hücreler içeriyor. (C) ön reaktif tepsi ve biochip slayt görüntüleyin. Reaktif tepsi ve biochip slayt tepki alanların birbiriyle eşleştirilmelidir. Reaktif tepsi tepki sahada eklenen örnek biochip slayt üzerinde karşılık gelen tepki alana bağlanmalıdır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : Negatif kontrol için temsilcisi rakamlar. (A)negatif kontrol transfected alan bir bakış elde edilen 4 x büyütme mikroskobu tarafından. Homojen zayıf Floresans alan gözlendi. (B, C) Daha fazla ayrıntı 10 dakika sonra gözlendi x (B) ve (C) büyütme fotoğraf x. Genel olarak, hücre zarı ve plazma biraz lekeli ve hücre çekirdeği günahı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4 : Olumlu denetim için temsilci rakamlar. (A, B) Transfected (A) ve untransfected (B) alanlarda olumlu denetiminin gösterilir. Homojen zayıf floresan untransfected alanlarda, anti-AQP4 IgG sabit hücrelere belirsiz bağlama gösteren gözlendi. Diğer taraftan, türdeş olmayan güçlü Floresans anti-AQP4 IgG AQP4-M1 sabit hücrelerdeyse ifade için belirli bağlama gösteren transfected alanlarda, gözlenmiştir. (C-F) Daha fazla bilgi transfected (C, E) ve untransfected (D, F) alanları ile 10 gözlenir (C, D) x-20 x (E, F) büyütme. Zayıf ve hatta floresan untransfected alanlarda ortaya çıktı. Ancak, transfected alanlarındaki hücreler büyük bir yüzdesi yoğun Floresans gösterdi. Güçlü lekeli hücreleri plazmada anti-AQP4 IgG pürüzsüz ve taneli Floresans gösterdi. Hücre çekirdeği günahı ya da biraz lekeli. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5 : Anti-AQP4 antikor negatif veya pozitif örnek için temsilcisi rakamlar. 10 x seyreltilmiş edildi, ve gösterilen tüm rakamlar 10 x amacı ile götürdüler. (A, B) Negatif Floresans örnek: floresan homojen zayıf her iki (A) transfected ve (B) alanları untransfected. (C, D) Zayıf Floresans örnek: untransfected alanları (D), hücre (yaklaşık %25 50) küçük bir miktar ile karşılaştırıldığında daha yoğun Floresans gösterdi transfected alanlar (C). (E, F) Orta floresan örnek: transfected alanlarda (E), güçlü taneli floresan hücreleri (yaklaşık % 50 ila %75) orta bir miktarda gözlendi. (G, H) Güçlü Floresans örnek: (H) untransfected alanlarındaki hücreler zayıf lekeli. Ancak, transfected alanlarda (G), taneli Floresans yüksek yoğunluğu ile çok sayıda hücre (yaklaşık üzerinden %75) çıktı. Genel olarak, floresan yoğunluğu ve güçlü lekeli hücrelerinin yüzdesi, buna bağlı olarak anti-AQP4 IgG titresi arttıkça yüksek. Floresan untransfected alanların her zaman homojen zayıftı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 6 : Anti-AQP4 antikor "muhtemel pozitif" örnekleri için temsilcisi rakamlar. (A, B) Floresans desen yok önemli farklılıklar gözlenmiştir transfected (A) ve 4 x büyütme, untransfected (B) alanlar arasında. (C-E) 10 ile (C, D) x 20 (E, F) x büyütme, birkaç alanlarındaki hücreler güçlü taneli Floresans gösterdi transfected (C, E). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 7 : Untypical anti-AQP4 IgG negatif örnek örneği. Transfected (A) ve untransfected (B) alanlarda homojen lekeli. Ancak, floresan transfected alanlarda untransfected alanda daha güçlü. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
| Büyütme | Transfected alanı | Untransfected alanı |
| 4 x | 1 resmi | 1 resmi |
| 10 x | 4 resim | 1 resmi |
| 20 x | 5 fotoğraf | 1 resmi |
Tablo 1: Floresans mikroskobu. Bu 4 x, 10 x ve 20 x hedefi transfected ve untransfected alanları görüntüleme için kullanmak için tavsiye edilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Anti-AQP4 IgG insan serumu algılamak için yaygın olarak erişilebilir bir yöntemi anlatmıştık. Anti-AQP4 IgG NMOSD için yakından ilgilidir ve güvenilir anti-AQP4 IgG algılama yöntemi kurulması NMOSD klinik tanısı için çok önemlidir. İlk olarak, anti-AQP4 IgG NMOSD için özeldir. Multipl skleroz da bir immün aracılı hastalığı merkezi sinir sisteminin ve NMOSD12ile büyük benzerlikler paylaşmaktadır. Ancak, anti-AQP4 IgG sadece NMOSD13' te pozitiftir. İkinci olarak, anti-AQP4 IgG NMOSD hastaları arasında yaygındır. NMOSD hastaların yaklaşık üçte serum anti-AQP4 IgG pozitif4vardır. Üçüncü olarak, için NMOSD serum anti-AQP4 üzerinde dayalı en son tanı ölçütleri test5IgG. Birlikte ele alındığında, serum anti-AQP4 IgG algılama NMOSD klinik tanı kolaylaştırabilir.
Çeşitli anti-AQP4 IgG algılama yöntemleri arasında CBA yüksek duyarlılık ve özgüllük6,7nedeniyle klinik tanı için yaygın olarak kullanılır. CBA hızlı ve basit bir yöntem olsa da, bazı önemli noktaları ele alınması gerekir. İlk olarak, AQP4 M1 transfected ve untransfected hücreleri üzerinde biochips sabit olarak Denemecileri biochips ile çalışırken dikkatli olmalısınız. Tüm prosedürü sırasında biochips el ile dokundu veya gereken kurudu. Ayrıca, slaytlar biochips ile hafifçe işlenmesi gerektiği, aksi halde biochips sabit hücrelerin düşebilir veya kontamine, hangi Floresans arızalı bölgeleri veya yüksek bir floresan arka plan neden olabilir. İkinci olarak, reaksiyon alanları reaktif tepsi örnekleri eklerken, araştırmacılar örnekleri damla birbiriyle karıştırılır değil ki sağlamalıdır. Hava kabarcıkları örnekleri ve biochips arasında kaçınılmalıdır.
Bu yöntem sınırlamalar vardır; Örneğin, CBA anti-AQP4 IgG algılamak için kullanırken, Floresans yoğunluğunu ölçmek ve anti-AQP4 IgG titresi serum açıklamak zordur. Şu anda, tanı merkezimizde floresan yoğunluğu subjektif iki klinisyenler tarafından örnekleri vs. denetimleri fotoğraflarını karşılaştırarak sonra bildirilmektedir. Çoğu durumda, bu serum anti-AQP4 IgG pozitif veya negatif olup olmadığını belirlemek zor değil. Ancak, nadiren de olsa, Floresans örneklerinden sadece biraz daha güçlü negatif kontrol görünebilir ve örnek "muhtemel pozitif" olarak kabul edilir. Bu durumda, klinisyenler bir tanı yapımında daha dikkatli olmalısın. Başka bir olası çözüm CBA tekrarlıyor. Floresan yoğunluğu ve uluslararası bir tanımını ölçmek için daha doğru bir yöntem "Anti-AQP4 IgG pozitif" garanti. Özellikle, serebrospinal sıvı anti-AQP4 IgG pozitif oranı serum içinde çok daha düşük olduğunu ve anti-AQP4 IgG serebrospinal sıvı için test bilgilendirici14,15değil.
CBA klinik tanı ve NMOSD bilimsel çalışmaları için uygulanabilir. NMOSD klinik tanısı klinik belirtileri, serum kombinasyonuna göre yapılır anti-AQP4 IgG ve neuroradiological bulguları. NMOSD en az bir çekirdek klinik karakteristik olan serum anti-AQP4 IgG pozitif hastalar NMOSD5ile teşhis edilebilir; Ancak, hasta anti-AQP4 ise IgG negatif, NMOSD tanısı dışlanmış5olmamalı ve klinisyenler daha fazla klinik bulgular ve neuroradiological bulgular5,16,17 değerlendirmek . Serum miyelin oligodendrocyte glikoprotein antikor tanı18,19,20yardımcı olmak için algılanabilir. Özellikle, her ne kadar serum anti-AQP4 IgG titresi rituximab tedavi21ile değiştirilebilir, hastalık tabii ki ve immünoterapi22,23yanıt akıllı değil. CBA bilimsel araştırmalar için de yaygın olarak kullanılır. Örneğin, Yang ve ark.24 anti-AQP4 IgG pozitif NMOSD hastaların klinik özellikleri nitelendirdi. Ayrıca, Kitley vd.25 anti-AQP4 IgG pozitif NMOSD hastalar25prognostik faktörleri analiz. Her iki çalışmalar CBA serum algılamak için kullanılan anti-AQP4 IgG.
Özetle, CBA anti-AQP4 IgG algılamak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir ve klinik tanı ve NMOSD bilimsel araştırma için uygulanabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Yazarlar için destek hibe Ulusal Bilim Vakfı Çin (No. 31600820), sağlık ve Jilin Province, aile planlaması Komisyonu (Hayır 2016Q036) ve bilim ve teknoloji planlama projesi, Jilin eyaletinde (No dan minnettarız 20180520110JH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
References
- Zekeridou, A., Lennon, V. A.
- Ho, J. D., et al. Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).
- Takeshita, Y., et al. Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro. in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).
- Sato, D. K., et al. Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders. Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).
- Wingerchuk, D. M., et al. International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders. Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).
- Ruiz-Gaviria, R., et al. Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).
- Waters, P., et al. Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).
- Fryer, J. P., et al. AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).
- Long, Y., et al. Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China. The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).
- Pisani, F., et al. Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity. PloS One. 8 (11), 79185 (2013).
- Jarius, S., et al. Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate. Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).
- Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).
- Chen, H., et al. Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders. Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).
- Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).
- Jarius, S., et al. Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance. Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).
- Asgari, N., et al. Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).
- Kim, H. J., et al. MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update. Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).
- Jarius, S., et al. MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).
- Narayan, R., et al. MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).
- Ogawa, R., et al. MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).
- Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).
- Kessler, R. A., et al. Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).
- Mealy, M. A., et al. Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders. Multiple Sclerosis. , (2017).
- Yang, Y., et al. The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica. Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).
- Kitley, J., et al. Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan. Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).
