Summary
لدينا وضع تدبير مقولة من الأم التهاب المفاصل ويقترن مع أسلوب موحد لقياس الألم عفوية في مختلف النماذج مورين من التهاب المفاصل المستحث كيميائيا. هذه التدابير حساسة واستنساخه لأنواع مختلفة من الألم المشترك.
Abstract
الألم هو السبب الرئيسي للعجز من التهاب المفاصل. حاليا أن هناك حاجة غير ملباة للعلاجات المناسبة لألم التهاب المفاصل. نماذج ما قبل السريرية ضرورية ومفيدة لدراسة آليات الألم وتقييم مدى فعالية العلاجات التهاب المفاصل. قياس الألم في نماذج حيوانية لالتهاب المفاصل التحدي. قمنا بتطوير أساليب لقياس الألم مقولة وعفوية في ثلاثة نماذج من التهاب المفاصل مورين. ونحن كوانتيتاتي استجابات الألم مقولة الفئران يتعرضون لملامسة الراسخ للركبة المؤلمة. ونحن أيضا بتقييم الألم العفوي من نسبة الوزن ومقدار الوقت على كل من أطرافهم 4 بعد تحريض الأم التهاب المفاصل في الركبة واحد. ألم مشتركة في هذه النماذج الماوس تنتج زيادة ملحوظة في مقولة الألم الردود وتغيير في تحمل الوزن. منذ الفئران كوادروبيدس، أنهم إفراغ أطرافهم مؤلمة لأطرافه contralateral، الأمامية، أو الجمع بين بعض. هذه الأساليب هي بسيطة وتتطلب الحد الأدنى من المعدات، واستنساخه وحساسة للكشف عن الألم. ومفيدة لدراسة تعديل مرض التهاب المفاصل العلاجات والمسكنات في الفئران.
Introduction
الألم هو السبب الرئيسي للعجز من التهاب المفاصل1،2. حاليا المسكنات المتاحة غالباً ما تكون غير فعالة، والسمية، ويحتمل أن تسهم في مشكلة المخدرات على مستوى الأمة3. جراحة ليست دائماً خياراً لنهاية مرحلة من التهاب المفاصل، خاصة في كبار السن، الذين قد يكون لديهم المراضات المشارك متعددة. المنشطات داخل المفصل وفيسكوسوبليمينتيشن قد تكون فعالة في وقت مبكر من المرض ولكن عادة ما تفقد فعاليتها في أواخر مرحلة المرض4. هناك حاجة غير ملباة عظيم للمسكنات الفعالة للألم المفاصل يمكن معالجتها بالعلاجات المتاحة حاليا.
نماذج ما قبل السريرية مفيدة لفهم إليه العمل من العلاجات الألم والتنبؤ بالسمية تحد، ولكن قياس الألم في الحيوانات التحدي5. يمكن أن يكون الألم التدابير المباشرة والعفوية (ثابت أو حيوي الوزن واضعة، والقدم الموقف وتحليل مشيه وحركة عفوية والحساسية الميكانيكية أو الحرارية) أو غير المباشرة/أثارت (اختبار سحب هند أطرافهم أو قوة ضغط الركبة أو تصوير الدماغ) 6-أشكال monoarthritis معتدل، تحليل مشيه هو غير حساس ويفتقر إلى الاتساق7. تأثير الوزن ثابت مفيد لقياس الألم في الفئران هيندليمبس ولكن يمكن أن يكون صعباً في الفئران. التدابير حساسية الميكانيكية مثل اختبار فراي فون غير مباشر الكشف عن التوعية بلوحة المفاتيح سيرا على الأقدام في الإعداد من التهاب المفاصل في الركبة، ولكن لا تقيس مباشرة الأم في الركبة ومرهقة لأداء. قوة ضغط الركبة كما يقاس بجهاز P.A.M (قياس ضغط التطبيق). يمكن أن تستخدم في الفئران، ولكن الجهاز كبيرة يصعب استخدامها في الفئران دون إنتاج السلوكيات السلبية التي لا تعكس بالضرورة الألم8.
قمنا بتطوير أساليب لقياس الألم العفوي وأحدثت في ثلاثة نماذج مختلفة من التهاب المفاصل مورين التي تتسم بالحساسية واستنساخه لقياس شدة الألم ومسكن آثار العلاجات داخل المفصل9، 10. ونحن أيضا الربط بين تخفيف الألم مع علامات نسيجية أخرى من المخدرات الفحص الألم والشاشة لن يكون ممكناً في البشر. يمكننا تقييم التآزر المسكنات متواضعة فعالة لتحديد أنجع العلاجات المركبة. باستخدام أساليب ثبت للألم كل مقولة وعفوية، علينا أن نتجنب مأزق الفشل في التعرف على الألم الذي ينعكس في نوع واحد من السلوك الألم وليس غيرها وأوثق قياس الألم مرآة في البشر11. عن طريق الحد من التقييم ألم إلى المنهجيتين، نستطيع تقليل الإجهاد على الحيوانات، والتي يمكن أن تؤثر على سلوك الألم، وتحقيق أقصى قدر من إنتاجية المختبر.
Protocol
وافقت عليها لجنة رعاية الحيوان المؤسسية مينيابوليس قدامى المحاربين في شؤون الرعاية الصحية نظام (باكس) واستخدام جميع الحيوانات الإجراءات والبروتوكولات وتتفق مع "دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية" (الوطنية الأكاديمية الصحافة، الولايات المتحدة الأمريكية) 12.
1-اختيار الحيوانات
ملاحظة: يتم استخدام الفئران C57Bl6 لجميع النماذج الثلاثة من التهاب المفاصل.
- استخدام الفئران الذكور أو الإناث، ولكن لاحظ أن الاستجابة لآلام التهاب المفاصل قد تختلف تبعاً لنوع الجنس والآلية المرضية للنموذج الذي يتم اختباره.
- حدد الفئران التي قد وصلت إلى مرحلة النضج الجنسي، ولكنها لم تعد تنمو بسرعة ولا يبلغ من العمر ما يكفي لوضعت التهاب المفاصل العفوية التي يمكن الخلط بين القياسات الألم.
ملاحظة: اثني عشر أسبوعا من عمر مثالي لقياس الألم في النماذج المذكورة ولكن هذا يعتمد على تصميم الدراسة. العمر عند بدء التهاب المفاصل يعتمد على المدة الوقت الذي يستغرقه النموذج لتطوير. يتطلب التهاب المفاصل الحاد (نموذج الكاراجينان) 3 (ح) وضع، وبالتالي الحيوانات 12 أسبوعا عمر وقت التعريفي. التهاب المفاصل المزمن (نموذج فرنكات الجماعة المالية الأفريقية) يتطلب 3 أسابيع لوضع، وللحيوانات القديمة في وقت التوجيهي 9 أسابيع. التهاب المفاصل التنكسية المزمنة (نموذج كولاجيناز) يتطلب 4 أسابيع لوضع، وبالتالي الحيوانات 8 أسابيع في وقت التعريفي. يمكن استخدام نموذج التهاب المفاصل التنكسية مزمنة أكثر بحمل التهاب المفاصل في 6 أسابيع عمر. وهذا ما يسمح 6 أسابيع تنمية المشتركة الضرر. ومع ذلك، لا ينتج التهاب المفاصل التنكسية المزمنة في الفئران الألم مقولة هامة. - الحصول على الحيوانات من مصادر التوليد تجاري وطني.
- بيت الحيوانات في مجموعات تصل إلى 8 الحيوانات في أقفاص البولي القياسية مع النظام الغذائي القوارض ad متواصلة والمياه.
- المحافظة على الشروط البيئية في 72 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية، ونسبة 33% ± 1% رطوبة مع دورات الضوء/الظلام ح 12.
2-داخل المفصل حقن في الركبة
- إنشاء ز 30 ملم 2.5 العقيمة التي تغطي طول إبرة 0.5 بوصة مع غمد مصنوع من أنابيب البولي إثيلين مع داخل القطر 0.38 مم والقطر الخارجي 1.09 ملم، وترك فقط 2.5 ملم من بروز الإبرة. وهذا ما يمنع إدخال الإبرة عميقا جداً وتخرج المشترك من الخلف.
- اختر ركبة واحدة لحقن، والحلاقة باستخدام أي المتقلب الشعر الوجه الكهربائية المتاحة تجارياً، وتعقيم مع فرك بروفيدوني-اليود.
- تخدير الماوس مع إيسوفلوراني 3% في 100 ٪ O2 في 1 لتر في الدقيقة لدقيقة 3 ± 1 دقيقة المحافظة على التخدير باستخدام نوسيكوني من خلال الإجراء. تأكيد عمق التخدير برشة أخمص القدمين. العناية برصد الحالة التنفسية والتقليل من التعرض للتخدير للحفاظ على ريسبيريشنز كافية.
- أدخل المشترك في خط الوسط عن طريق وتر الرضفة فقط أدنى من الحافة السفلية من الرضفة باستخدام إبرة معقمة مغمد حالما يتم تخديره الماوس تماما. هذا النهج خط الوسط الأمامي يزيد من دقة إدخال المشترك والحقن مضمون الفائدة.
- استخدام نفس النهج لحقن المواد المسببة التهاب المفاصل والمواد مسكن. عناصر تحكم الشام تنتج بإدخال الإبرة وصفها أعلاه ولكن من دون أي مضمون بالحقن.
3-إنتاج من التهاب المفاصل
- تخدير الحيوان كما في الخطوة 2، 3 أعلاه.
- تزن المبالغ المناسبة من الكاراجينان، Adjuvant كاملة فروند والنوع الرابع كولاجيناز (انظر أدناه)، وتمييع لتركيز مناسب مع المحلول الملحي العادي في غطاء الاندفاق الصفحي للسلامة والعقم.
- حقن 10 ميليلتر من الكاراجينان 2.5% المخفف في سالين معقم 0.9 في المائة في الركبة أعلاه باستخدام المحاقن هاملتون لإنتاج التهاب المفاصل الحاد. التهاب المفاصل قمم ح 3 بعد الحقن.
- حقن، 30 ميليلتر (30 ميكروغرام) من Adjuvant (فرنكات الجماعة المالية الأفريقية إكمال فروند) في الركبة لإنتاج التهاب المفاصل المزمن. وهناك مرحلة التهابات حادة أولية إلى الذروة في أسبوع واحد ثم مرحلة مزمن إلى الذروة في 3 أسابيع بعد الحقن.
- حقن 10 ميليلتر الذي يحتوي على 10 وحدات دولية النوع الرابع كولاجيناز لإنتاج التهاب المفاصل التنكسية المزمنة. قمم الألم التهاب المفاصل 4 أسابيع بعد الحقن.
4-قياس مقولة الألم المشترك
- دائماً فحص الركبة المقارنة العادية أولاً للتقليل من الألم الصليب وعلى مدى الاستجابة (windup) من الركبة المؤلمة13.
- تدريب الفاحص لتطبيق ضغط ثابت وراسخ من 700 فرنك غيني/سم2 = 10 رطل/بوصة مربعة باستخدام مستوى بالبوميتير 4؛ الجهاز سوف تنبعث منها أصوات تنبيه 4 عند تطبيق هذا المستوى من الضغط. هذا المبلغ من الضغط سوف تحظى باستمرار استجابة ألم أكبر من التهاب المفاصل مشتركة من مشترك عادي.
ملاحظة: يتم معايرة الجهاز في المصنع للحصول على أصوات تنبيه 4 عندما يتم تطبيق المستوى المناسب للضغط. استخدام الجهاز للتدريب فقط؛ لا تستخدم الحيوانات ولكن عند دراسة الحيوانات، تطبيق مقدار الضغط المستفادة من خلال التدريب. - كبح جماح الماوس محكم ما يكفي لمنع حركة عارضة بعقد القفا العنق بالسبابة والإبهام واستخدام 4th و 5th الأصابع لكبح جماح الذيل. ينبغي أن يكون قادراً على إجراء حركات قصيرة ومنفصلة مع الجهد وعندما تحفز الماوس، ولكن لا ينبغي أن تكون قادرة على التحرك بحرية أو بشكل مستمر.
- إدارة بالبيشنز (مستوى بالبوميتير 4) الثابت المتكرر في نفس الوقت إلى الجانب الوحشي والانسي من كل الركبة على خط مشترك تقريبا مع الإبهام وسبابة اليد الحرة مرة في الثانية لمدة دقيقة واحدة بينما الزجرية الماوس. لا تستخدم بالبوميتير لفحص الماوس؛ يتم استخدامه فقط للتدريب.
- وقد مراقب ثاني حساب عدد مرات الحيوان فوكاليزيس ويحارب من أجل الهروب إلى ضبط النفس خلال هذه الفترة الزمنية في دقيقة واحدة. مجموع المعارك والألفاظ هي "درجة الألم أثارت".
- دائماً لنا الفاحص نفسه طوال فترة الدراسة وتأكيد هي أعمى ممتحن والمراقبة فيما يتعلق بحالة تجريبية.
5-قياس الألم المشترك عفوية.
ملاحظة: الجهاز المتقدم دينامية الوزن واضعة (أدوب) حساب النسبة المئوية من إجمالي الوقت ينفق الحيوان على كل أطرافه والنسبة المئوية من إجمالي وزن يوضع على كل أطرافهم.
- ملء كوب بلاستيك مع 2 لتر الماء. ضع وسادة رغوة واللوح الليفي متوسط الكثافة التي يتم تضمينها مع المعدات جنبا إلى جنب مع كوب معبأ على نطاق مختبر وتسجيل الوزن مجتمعة.
- افتح برنامج أدوب وحدد نوع المجس الفئران .
- معايرة النظام قبل كل تجربة:
- حدد كامل المعايرة تحت القوائم المعايرة . أدخل 0.00 القيمة الفارغة ووزن وسادة رغوة واللوح الليفي متوسط الكثافة، والكأس البلاستيك، والمياه معايرة الوزن، ثم حدد التالي.
- حدد الفارغة قبل وضع أي شيء على جهاز استشعار. قبل اختيار الحصول على معاينة، تغطي لوحة أجهزة الاستشعار مع وسادة رغوة المقدمة واللوح الليفي متوسط الكثافة، والكأس بلاستيكية مليئة 2 لتر من الماء، بهذا الترتيب. حدد الحصول على المعاينة مرة واحدة وزن المعايرة على أجهزة الاستشعار.
- ضبط الوزن المعايرة بحيث أنها موزعة بالتساوي عبر أجهزة الاستشعار الفردية، وعندما تكون قيمة المؤشر المعايرة أعلاه 95، حدد الحصول على تعريف. هذه العملية تنتج وسيلة طبيعية لأجهزة الاستشعار الفردية ويؤكد سلامة أجهزة الاستشعار الفردية. وأخيراً، قم بتحديد التالي.
- حفظ ملف المعايرة إلى مجلد المعايرة.
- حدد جديد ، وحيثما تنص على إدخال اسم المشروع واسم الحيوان للماوس أول اختبار.
- حدد استعراض ، وافتح ملف المعايرة الذي تم إنشاؤه للمشروع. حدد المقبل، وضمان تمكين التقاط الفيديو المحدد، وانقر فوق موافق.
- وزن الحيوان وحدد التقاطوتسجيل الوزن في البرنامج. حدد "موافق".
- عدم تأقلم الفئران إلى الدائرة قبل جمع البيانات لأن هذا الجهاز يقيس السلوك العفوي.
- ضع الماوس في الدائرة لمدة 5 دقائق للاختبار. لتحديد عند الحيوان في الدائرة إطلاق. البرنامج سوف تسجيل نشاط الحيوان أثناء هذا الوقت، التقاط فيديو وتزامن مع بيانات الاستشعار، وتقسيم هذا الفيديو تلقائياً إلى شرائح أناليزابلي وغير أناليزابلي.
ملاحظة: البرنامج تعتبر قطاعات أناليزابل عندما يتم الكشف عن منطقة مستقرة واحد على الأقل. يتم إنشاء منطقة مستقرة عند الكشف عن أجهزة استشعار إيه تو ز على استشعار واحد مع الحد ني استشعار المجاورة واحد كشف إيه وان ز، وعندما يتم توزيع الوزن من منطقة مستقرة لأكثر من 0.38 s. - قبل التحليل الأول في سلسلة حدد سجل سهلة و المستقلة الكفوف الإعداد.
ملاحظة: التسجيل سهلة يسمح التحقق من التكرار قطاعات حيث منطقة مستقرة لا تتغير استناداً إلى المصادقة على أول منطقة مستقرة من هذا الجزء. آثار أقدام المستقلة إعداد يوفر المراقب مع الوصول إلى اختصارات لوحة المفاتيح التي تسمح للهوية الفردية لكل مخلب. تنشيط مناطق يعين المراقب التي تستوفي معايير الحد الأدنى كهند الحق أو ترك هند، حق الصدارة، ترك الصدارة، فوريباوس، الأخرى جزء من الجسم، أو تجاهل المنطقة باستخدام اختصارات لوحة المفاتيح أثناء الضغط بالمؤشر فوق المقطع كل خريطة الفيديو وتحجيم أجهزة الاستشعار. - حدد >> الانتقال إلى الجزء أناليزابل الأولى. إذا كانت منطقة مستقرة ليس لديها مخلب الصحيحة المحددة ثم اضغط المؤشر فوق تلك المنطقة واضغط على اختصار (حق هند, s؛ هند الأيسر، ؛ حق الصدارة، ث؛ اليسار الصدارة، q؛ كلا فوريباوس، ه؛ والقسم الآخر من الجسم، z، تجاهل المنطقة، x) الذي يتوافق مع الجزء الصحيح من الجسم.
ملاحظة: مطلوب الحد أدنى من 1.5 دقيقة من الوقت أناليزابل لتلبية تحليل العتبات. يتم إضافة شرائح تم تحليلها وبلغ متوسط تلقائياً لإخراج كل paw(s) بالبرنامج. - البرنامج أدوب ثم يقوم تلقائياً بحساب النسبة المئوية من الوقت المستغرق في تحليل والنسبة المئوية لوزن الجسم (ز) على كل خيار من الخيارات الأربعة أطرافهم. تصدير هذه القيم في جدول جديد بتحديد النتائج، تصدير، اختيار نعم لطرح مسألة عاجلة إلا إذا كان ينبغي أن يتم تصدير موجز الأسطر الخمسة الأولى، وتحديد موقع الإخراج.
- Euthanize الحيوانات باستنشاق CO2 تليها ثوراكوتومي في نهاية فترة الدراسة.
- لكل الحيوانات إضافية في نفس المجموعة، حدد جديد وقم بإدخال اسم حيوان فريدة من نوعها ولكن لا تقم بتغيير اسم المشروع. حدد المقبل، وضمان تمكين التقاط الفيديو المحدد، وانقر فوق موافق. اتبع الخطوات من 5.5 إلى 5.12 أما بالنسبة للحيوان الأول.
Representative Results
وأنتجت الحادة والمزمنة التحريضية والمزمنة التنكسية المفاصل IA حقن في الركبة اليسرى من الفئران الذكور والإناث C57BL/6J قبل تقييم الألم باستخدام البروتوكول المشار إليها أعلاه. الألم المشترك تم قياس درجات الألم مقولة (EPS) وقياس سلوكيات الألم العفوي مع جهاز وزن ديناميكية متقدمة تحمل (أدوب). لأغراض هذا التقرير، أجريت المقارنات الفردية باستخدام اختبارات t للطالب. قد يكون ANOVA للتجارب حيث يتم مقارنة جرعات مسكن، مقارنة إحصائية أكثر ملاءمة.
EPS (مجموع تدوين المعارك بالإضافة إلى الألفاظ) زادت مع كافة الأنواع الثلاثة من الألم المشترك (الشكل 1). تم الحد من نسبة الوزن تؤثر على أطرافهم هند الأيسر مقارنة بالفئران السذاجة تدابير أدوب في المفاصل الالتهابات الحادة والمزمنة. الإناث ولكن ليس من الذكور مع المزمنة التنكسية المشتركة الألم (COL) أظهرت تخفيضات مماثلة في التدابير أدوب (الشكل 2أ). الذكور مع الحاد التهاب المفاصل نقل المزيد من الوزن للأمامية من السذاجة الحيوانات. زيادة الوزن تؤثر على الأمامية في الفئران الإناث مقارنة بالسذاجة ولكن ليس في الذكور مع المفاصل التنكسية المزمنة (COL) (الشكل 2ب). تدابير أدوب للمرة المائة على أطرافهم هند اليسرى المتأثرة انخفضت مقارنة بالسذاجة في الفئران مع الأم المفاصل الالتهابات الحادة والمزمنة، ولكن هذا لم يكن معتدا به إحصائيا. هذه الحيوانات وقتاً أقل بشكل ملحوظ في أطرافهم هند الأيسر مما في أطرافهم هند الصحيح. في كل من الذكور والإناث مع الأم المفاصل التنكسية المزمنة، لم يكن هناك فرق في الوقت الذي يقضيه في أطرافهم هند الأيسر مقارنة بالسذاجة. الإناث مع الأم المفاصل التنكسية المزمنة أنفاق المزيد من الوقت على أطرافهم هند حق نونارثريتيك مقارنة بالسذاجة (الشكل 3أ). الفئران مع الحاد التهاب الألم والإناث مشتركة مع الأم المفاصل التنكسية المزمنة أمضى وقتاً أطول في الأمامية من السذاجة الحيوانات (الشكل 3ب) إلى حد كبير.
الشكل 1 . أثارت درجات الألم لليسار (العمود الأزرق) واليمين (العمود أحمر) هند أطرافه. حق هند أطرافه بمثابة الضوابط الداخلية، ولم تطرأ أي حقن IA. أخذ القياسات في الظروف التالية: أونينجيكتيد السذاجة (الذكور والإناث)، الحاد التهاب المستحثة الكاراجينان المفاصل (السيارات)، المزمن كاملة التهابات المفاصل التي يسببها Adjuvant الشعبية فروند (CFA) والمزمنة نونينفلاماتوري المفاصل التي يسببها كولاجيناز (COL-الذكور والإناث). في الحيوانات السذاجة EPS في الركبة اليسرى هند لم يكن مختلفاً إحصائيا عن الحق في الذكور وإلا دنيا مختلفة في الإناث (* *P = 0.038) المحتمل بسبب بعض زيادة استجابة الألم في الركبة درس الثاني (اليسار) بسبب الألم كروس استجابة. في جميع الفئات المفاصل والركبة اليسرى المفاصل EPS كان أكبر كثيرا من الركبة اليمنى كونترالاتيرال نونارثريتيك. عند مقارنة EPS في الركبة اليسرى التهاب المفاصل مجموعات الحيوانات السذاجة، كان جميع المفاصل المجموعات عشرات EPS أكبر بكثير في الركبة اليسرى المفاصل مقارنة ساذجة الأيسر على ركبتيها. وكان هذا صحيحاً في كل من الذكور والإناث. ف < 0.05 مقارنة بالذكور من السذاجة، #ف < 0.05 مقارنة بالإناث من السذاجة. كافة أشرطة الخطأ هي وزارة شؤون المرأة في جميع الأرقام. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : السلوك العفوي الآلام يقاس وزن الجسم نسبة تحملها على أطرافه. (أ) السلوك الألم العفوي يقاس بإجمالي نسبة وزن الجسم على اليسار (العمود الأزرق) واليمين (العمود أحمر) هند أطرافه. في الحيوانات السذاجة الذكور والإناث على حد سواء، كان هناك لا يوجد فرق كبير بين نسبة الوزن تحملها على أطرافه هند الأيمن والأيسر. الفئران الذكور مع سيارة وفرنكات الجماعة المالية الأفريقية التي يسببها الألم المشترك والإناث مع العقيد الناجم عن الألم المشترك تتحمل وزن أقل بشكل ملحوظ على أطرافهم هند الأيسر مقارنة السذاجة. ف < 0.05 مقارنة بالذكور من السذاجة، #ف < 0.05 مقارنة بالإناث من السذاجة. (ب) ألم عفوية السلوك يقاس بإجمالي نسبة وزن الجسم على الأمامية. في الذكور مع السيارة التي يسببها المفاصل الحاد والإناث مع COL الناجمين عن الأم المفاصل المزمنة، كان هناك زيادة كبيرة قدرها الوزن تحملها على الأمامية. هذا وكان لا ينظر في الذكور مع فرنك أو بفعل العقيد الألم المشترك. الإناث من السذاجة تميل إلى تحمل المزيد من الوزن في الأمامية من الذكور naïve (P = 0.02). قد تتحملها وزنا إضافيا في أجزاء أخرى من الجسم مثل الذيل أو (صربيا ومونتينيغرو). هذه عادة ما تكون ضئيلة جداً ولم تسهم إلى حد كبير فهم استجابة الألم ولذلك لا تظهر. ف < 0.05 مقارنة بالذكور من السذاجة، #ف < 0.05 مقارنة ساذجة الإناث والذكور الأسبوع 4 عمود في ويايتبيرينج فوريليمب. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: السلوك العفوي الآلام يقاس بالنسبة المئوية من الوقت المستغرق في أطرافه. (أ) السلوك الألم العفوي يقاس بإجمالي الوقت المئة قضى على اليسار (العمود الأزرق) واليمين (العمود أحمر) هند أطرافه. وكان هناك لا يوجد فرق كبير بين أطرافه هند اليمين واليسار في الفئران الذكور والإناث ساذجة فيما يتعلق بالوقت الذي يقضيه في الطرف المصاب. الفئران الذكور مع سيارة وفرنكات الجماعة المالية الأفريقية التي يسببها التهاب المفاصل ويبدو أن تنفق أقل ويايتبيرينج الوقت مع التهاب المفاصل أطرافهم هند الأيسر مقارنة بالسذاجة، ولكن هذا لم يكن معتدا به إحصائيا والمرجح نظراً لزيادة التنوع في هذا التدبير في هذه الفئران. وكان هناك اختلاف كبير في هذه الحيوانات مقارنة اليمين إلى اليسار حيث أمضى أطرافهم هند حق ويايتبيرينج الوقت الإجمالي أكثر من اليسار. في الإناث مع العقيد الناجم عن التهاب المفاصل، كانت أطرافهم هند حق ويايتبيرينج نسبة أكبر من الزمن من الإناث ساذجة. ف < 0.05 مقارنة من اليمين إلى اليسار، #ف < 0.05 مقارنة ساذجة الإناث والذكور الأسبوع 4 عمود في الوقت المستغرق في الأمامية. (ب) ألم عفوية السلوك يقاس بإجمالي مقدار الوقت ينفق على الأمامية. أنفقت الفئران في الذكور مع السيارة التي يسببها التهاب المفاصل والإناث مع العقيد الناجم عن التهاب المفاصل ويغتبيرينج وقت أكثر بشكل ملحوظ على أطرافه الصدارة من فعل الحيوانات ساذجا. الفئران الإناث من السذاجة أنفاق المزيد من الوقت في الأمامية من الحيوانات الذكور من السذاجة. ف < 0.05 مقارنة بالذكور من السذاجة، #ف < 0.05 مقارنة بالإناث من السذاجة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Discussion
قياس الألم المشترك في نماذج السريري لالتهاب المفاصل والأمراض التنكسية المشتركة أداة ذات قيمة متزايدة لتقييم علاجات جديدة للألم المفاصل واستعادة وظيفة مشتركة9،10. قياس سلوكيات الألم في الفئران مع المزمنة التنكسية المشتركة يمثل تحديا. قوادروبيدس، أنها يمكنها إلغاء تحميل أحد أطرافه مؤلمة لأي مجموعة من الأطراف الثلاثة الأخرى أو الذيل. قد لا يتم عرض الدالة انخفاض في أحد أطرافه كمن الواضح كما الحال في البشر قدمين. كما فريسة الحيوانات، أن الفئران فائدة البقاء على قيد الحياة للتقليل من السلوكيات الألم.
يوضح هذا التقرير أن الألم مشتركاً من مختلف آليات مرضية يمكن أن يقاس في الفئران بطرق بسيطة وغير مكلفة نسبيا. التهاب المفاصل يسبب تغييرات أكبر في تحمل الوقت وتوزيع الوزن وقد يكون ذلك نموذجا أكثر حساسية للكشف عن التسكين. ومع ذلك، نماذج أخرى من الألم المشترك سيكون من المهم عند تقييم المسكنات المحتملة الجديدة نظراً لآليات بدء الألم والصيانة ومن المرجح مختلفة مع أمراض مختلفة. يمكننا العثور على الاختلافات في أنماط التفريغ بين الذكور والإناث وبين نماذج مختلفة من الأم التهاب المفاصل.
من المهم أن ندرك أن هناك يكون سلالة فضلا عن الاختلافات بين الجنسين في سلوك الأم في الفئران14،،من1516. ومن المعروف أيضا أن هناك اختلافات سلالة متميزة في عتبات الألم. ووجدنا أن الإناث في فئران C57/Bl6، أثبتت سلوكيات الألم إلى حد كبير أكثر عفوية (زيادة في الوزن والوقت على الأمامية) من الفئران الذكور مع الأم المفاصل التنكسية المزمنة (الشكل 2 و الشكل 3). ونحن لم تحدد فترة السفاد لهذه الفئران الإناث، ولذلك لا يمكننا القول ما إذا كان لهذا أي تأثير على النتائج التي توصلنا إليها، ولكن الآخرين قد حددت تلك المرحلة السفاد لم تشرح الاختلافات بين الجنسين لوحظت في فئران C57/Bl617.
سلوك الأم مقولة حساسة لجميع أنواع المفاصل اختبارها وإمكانية تكرار نتائج جيدة. من الأهمية بمكان أن يتم تدريب الفاحص تسليم الضغط الجس متسقة وموحدة، واستخدام أساليب متسقة من ضبط النفس الذي يسمح نطاق السلوك الألم للكشف عن الألم والتسكين. من المهم دائماً فحص الركبة العادي أولاً لتقليل استجابة الألم في الركبة طبيعية بسبب تأثير كروس وزيادة الفرق بين الركبة طبيعية ومؤلمة في استجابة الألم. استخدام أحد مراقبي ثانية إلى رصيده الردود الألم التي تشكل EPS ضروري حيث أن الفاحص يركز على ملامسة متسقة وحيث أن تدوين الألفاظ وتحارب استمرار. قد يكون من الضروري على ممارسة أسلوب ضبط النفس وبخاصة لضمان الحيوان يمكن الاستجابة للألم بشكل كاف ولكن لا تتفاعل بسهولة جداً حيث يضعف استجابة الألم. ميزة قياس EPS أنها مماثلة لقياس الرقة المشتركة في المرضى البشرية.
أننا نرى هذه الأساليب متفوقة على الطرق الموجودة في ذلك أنها تقيس مباشرة الألم القادمة من مفاصل الركبة للفئران، ويمكن استخدامها في نماذج مختلفة من الألم مونوارثريتيس، وأنها تشمل كل الردود العفوية ومقولة الألم، ونسبيا رخيصة ولكن يمكن الاعتماد عليها واستنساخه. كما يتم تطوير علاجات أكثر فعالية في معالجة التهاب المفاصل، هذه الأساليب ستكون مفيدة لتأكيد ما إذا كانت العلاجات فعلا فعالة لنتائج تعطيل أكثر من التهاب المفاصل والألم.
وقد طرقنا بعض القيود. في المقام الأول، يقتصر التدبير EPS بشرط ممتحن واحد والمراقب والحاجة إلى تقنية متسقة للغاية. التدابير مقولة الألم هي أكثر آليا ولا كما تخضع للفروق بين المراقبين. وقد تشمل مزيد من الصقل للتدبير EPS أساليب مؤتمتة لعد الألفاظ ردا على الجس، مثل استخدام كاشف الخفافيش بالموجات فوق الصوتية عد الألفاظ. أن هذا الأسلوب بحاجة إلى مقارنة باسلوبنا الحالي لتأكيد حساسية وخصوصية قبل فإنه يمكن تنفيذها على نطاق واسع.
وباختصار، يصف لنا تدبيرين السلوك ألم مختلفة للتحديد الكمي للألم المشترك في الفئران. يجب النظر في الفروق بين الجنسين وسلالة قبل اختيار نموذج تجريبي. تتطلب تدابير الألم مقولة التدريب الدقيق والتنفيذ المتسق الفاحص. كلا السلوكيات الألم العفوي ومقولة ينصح لتقييم شدة الألم وتقييد وظيفية، وينبغي أن تستخدم لإجراء تقييم كامل للآثار للمسكنات المحتملة الجديدة.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
الممولة بمنح إدارة "الجدارة شؤون قدامى المحاربين" 2 I01 RX000379-05.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Advanced Dynamic Weightbearing Device | Bioseb In Vivo Research Instruments, Vitrolles, France | Model: BIO-DWB-M - For mice | |
| C57/Bl6 mice (male and female) | Jackson Labs, Bar Harbor ME | Stock No: 000664 | Black 6 | |
| Carrageenan | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | 22049-5G-F | |
| Complete Freund's Adjuvant | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | F5881 | |
| Palpometer | Palpometer Systems, Inc. Victoria, B.C | Not available - no longer in business | |
| Type IV Collagenase | Worthington Biomedical Corp, Lakeville, NJ | LS004210 |
References
- Neggi, T. The epidemiology and impact of pain in osteoarthritis. Osteoarthritis and Cartilage. 21, 1145-1153 (2013).
- Center for Disease Control and Prevention. Prevalence of doctor-diagnosed arthritis and arthritis-attributable activity limitation - United States, 2007-2009. Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 1261-1265 (2010).
- Kaye, A., et al. Prescription Opioid Abuse in Chronic Pain: An Updated Review of Opioid Abuse Predictors and Strategies to Curb Opioid Abuse: Part 1. Pain Physician. 20, 93-109 (2017).
- Maheu, E., et al. Why we should definitely include intra-articular hyaluronic acid as a therapeutic option in the management of knee osteoarthritis: Results of an extensive critical literature review. Seminars in Arthritis and Rheumatism. , (2018).
- Malfait, A. -M. Why we should study pain in animal models of rheumatic diseases. Clinical and Experimental Rheumatology. 35, 37-39 (2017).
- Piel, M. J., Kroin, J. S., van Wijnen, A. J., Kc, R., Im, H. -J.
- Dorman, C. W., Krug, H. E., Frizelle, S. P., Funkenbusch, S., Mahowald, M. L. A comparison of DigiGait™ and TreadScan™ imaging systems: assessment of pain using gait analysis in murine monoarthritis. Journal of Pain Research. 7, 25-35 (2013).
- Barton, N., et al. Pressure application measurement (PAM): A novel behavioural technique for measuring hypersensitivity in a rat model of joint pain. Journal of Neuroscience Methods. 163, 67-75 (2007).
- Bert, J., et al. The Effect of Treatment with Resiniferatoxin and Capsaicin on Dynamic Weight Bearing Measures and Evoked Pain Responses in a Chronic Inflammatory Arthritis Murine Model. Internal Medicine Review. 2016 (6), 89 (2016).
- Abdullah, M., et al. The effect of intra-articular vanilloid receptor agonists on pain behavior measures in a murine model of acute monoarthritis. Journal of Pain Research. 9, 563-570 (2016).
- Anke, T. T., Kuner, R. Studying ongoing and spontaneous pain in rodents - challenges and opportunities. European Journal of Neuroscience. 39, 1881-1890 (2014).
- National Research Council. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , National Academies Press. (2011).
- Kuner, R.
- Banik, R., Woo, Y., Park, S., Brennan, T. Strain and Sex Influence on Pain Sensitivity after Plantar Incision in the Mouse. Anesthesiology. 105, 1246-1252 (2006).
- Mogil, J. S., Chesler, E., Wilson, S. G., Juraska, J. M., Sternberg, W. F. Sex differences in thermal nociception and morphine antinociception in rodents depend on genotype. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 24, 375-389 (2000).
- Mogil, J., et al. Heritability of nociception I: Responses of 11 inbred mouse strains on 12 measures of nociception. Pain Physician. 80, 67-82 (1999).
- Meziane, H., Ouagazzal, A. -M., Aubert, L., Wietrzych, M., Krezel, W. Estrous cycle effects on behavior of C57BL/6J and BALB/cByJ female mice: implications for phenotyping strategies. Genes, Brain, and Behavior. 6, 192-200 (2007).
