Summary
Este protocolo inclui a dissecação de murino de ossos longos e isolamento de medula óssea, para gerar os macrófagos da medula óssea e produzir osteoclastos usando macrófago da colônia fator (M-CSF) e do receptor ativador de ligante fator nuclear Kappa-B (RANKL) ou fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e a sua detenção por anticorpo anti-c-fms, receptor de M-CSF.
Abstract
Remodelação óssea é um processo complexo e que envolve períodos de deposição e reabsorção. Reabsorção óssea é um processo pelo qual osso é dividido pelos osteoclastos em resposta a diferentes estímulos. Precursores de osteoclast diferenciarem-se em osteoclastos Relaxometria em resposta à colônia de macrófago fator (M-CSF) e do receptor ativador de ligante fator nuclear Kappa-B (RANKL). Sob condições patológicas, o perfil de citocinas é diferente e envolve uma mistura de citocinas inflamatórias. Fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) é dentre as citocinas mais importantes, como pode ser encontrada em grandes quantidades em áreas envolvidas com osteólise inflamatória. O propósito do presente protocolo é fornecer um método pelo qual murino de medula óssea é isolada para gerar osteoclastos através de indução com M-CSF e RANKL ou TNF-α, que posteriormente será inibido, aumentando as doses de anticorpo anti-c-fms, o receptor para o M-CSF. Esta experiência destaca o valor terapêutico do anticorpo anti-c-fms em doenças de reabsorção óssea inflamatória.
Introduction
Os osteoclastos são células altamente especializadas, e eles diferenciar de células-tronco hematopoiéticas através da fusão de vários precursores do osteoclast. Eles são essenciais para a remodelação óssea saudável e contribuem para a reabsorção óssea patológica associada a doenças inflamatórias osteolíticas, tais como artrite reumatoide e doença periodontal1.
Função Osteoclastogenesis e osteoclasto são mediadas por dois fatores-chave; macrófago colônia de fator (M-CSF) e do receptor ativador de ligante de fator nuclear kappa-B (RANKL). Tanto M-CSF e RANKL são importantes para osteoclast diferenciação2. Outro fator que tem sido mostrado para induzir a formação de osteoclast de macrófagos da medula óssea in vitro é o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α)3,4,5. TNF-α formação mediada osteoclast foi mostrada para ser crítico de osteólise em doenças como artrite reumatoide6, doença periodontal7e osteoporose pós-menopausa8destrutivo.
C-fms é o receptor de membrana do M-CSF e Medeia sua ação. O papel do c-fms é bem documentado na literatura, como foi demonstrado que a administração de um anticorpo contra c-fms (anticorpo anti-c-fms) completamente preso osteoclastogenesis em um modelo de artrite, bem como em TNF-α induzida por erosões ósseas, enquanto osteoclastogenesis distante da articulação inflamada foi ainda robusto9. Administração do anticorpo anti-c-fms inibiu a reabsorção de formação e osso osteoclast induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS) em rato Calvárias10 , bem como em periodontite induzida por LPS modelo11. Além disso, anticorpos anti-c-fms inibiam a reabsorção de raiz induzida por estresse mecânico durante de movimento ortodôntico do dente12, bem como o movimento ortodôntico do dente e reabsorção óssea associada de movimento ortodôntico do dente13.
M-CSF foi relatado para ter outras funções que são essenciais para a resposta imune do hospedeiro. A ausência de M-CSF em camundongos op/op com pneumonia bacteriana conduzir ao aumento da carga bacteriana e disseminação bacteriana no fígado com necrose hepática14. Portanto, M-CSF é importante para a resposta imunológica na proteção de infecção.
Este estudo demonstra o efeito do anticorpo anti-c-fms em M-CSF e RANKL ou TNF-α induzida formação osteoclast in-vitro e M-CSF induzida proliferação de precursores do osteoclast. Este protocolo demonstra o isolamento de células de medula murino de ossos longos e as etapas para gerar os macrófagos da medula óssea (BMM) que são considerados as precursoras do osteoclasto e para induzir a diferenciação de BMM em osteoclastos Relaxometria por dois métodos; RANKL ou TNF-α. O protocolo também compara a prisão de osteoclastogenesis em ambos os métodos usando anticorpo anti-c-fms.
O processo pelo qual medula óssea é extraída e posteriormente usada para gerar precursores osteoclasto é confiável em produzir grandes quantidades de culturas osteoclast puro que podem ser usadas em múltiplas aplicações a jusante, tais como testes de drogas. O uso de RANKL ou TNF-α para induzir osteoclastogenesis neste protocolo distingue osteoclastogenesis como um processo fisiológico (RANKL) de osteoclastogenesis como um processo patológico (TNF-α), que por sua vez, fornece dois procedimentos alternativos para guiar a decisão das quais uma é superior em termos de reagentes a ser usada em aplicações a jusante. Este protocolo também fornece um método pelo qual podemos determinar uma concentração adequada de anticorpo anti-c-fms, que pode ser utilizada para estudos posteriores envolvidos na reabsorção óssea e doenças osteolíticas.
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Protocol
Todos os procedimentos de animal e cuidados com animais foram realizadas de acordo com os regulamentos e as regras da Universidade de Tohoku.
1. manipulação e dissecação do membro posterior murino
- Antes de dissecação, encha um prato com aproximadamente 50 mL de α-MEM, dependendo do tamanho do recipiente e coloque-o no gelo. Isto servirá como um recipiente de coleta até a dissecação de todos os ossos é completa. Para isto e subsequentes experimentos, use α-MEM contendo 10% fetal de soro bovino (FBS), 100 UI/mL penicilina G e 100 estreptomicina μg/mL.
- Eutanásia por inalação de uma overdose de 5% de isoflurano em C57Bl/6J rato.
- Fixar o mouse em posição supina usando pinos perfurados as palmas das mãos e pés e spray completamente com etanol a 70%.
- Faça uma incisão de pele usando uma tesoura cirúrgica estéril e pinças ao nível do quadril e estendê-lo até os pés, expondo os músculos.
- Corte o tendão anexar o músculo quadríceps e o tendão anexar o tendão muscular ao osso. Descasca os músculos expondo as articulações do quadril e o joelho. Localizar estes tendões facilitará liberando ambos os músculos dos seus anexos sem deixar etiquetas de tecidos moles. Não corte no osso.
- Coloque a tesoura entre a cabeça do fêmur e o espaço articular e desviá-la libertando o fêmur, mas manter o osso intacto. Isto irá permitir o desprendimento dos ossos sem o risco de expor a medula óssea.
- Da mesma forma, corte os músculos anexar à tíbia. Corte a tíbia livre de sua fixação na articulação do tornozelo, mantendo o osso intacto para evitar contaminação.
- Raspe qualquer tecido mole restante do fêmur e tíbia usando as lâminas da tesoura e kimwipe e coloque-o em um prato com α-MEM colocado no gelo.
2. murino membro posterior isolamento de medula óssea
- Encha uma seringa de agulha 30G com α-MEM.
- Desconecte-se da tíbia e fêmur longe da articulação do joelho.
- Corte as extremidades do osso longo de ambos os lados com uma tesoura.
- Segure o osso do eixo usando uma pinça, insira a agulha no espaço da medula do osso e liberar lentamente o conteúdo da medula em um prato de cultura de 6 cm. O osso vai aparecer branco, indicando a extração de todo o conteúdo da medula óssea. Repita para todos os ossos.
- Tensão da medula óssea extrair usando um coador de célula de nylon μm 40 em um tubo de centrifuga conico de 50 mL e centrifugar x g por 5 min.
- Desprezar o sobrenadante, lavar com 5 mL de α-MEM e centrifugar a 300 x g durante 5 min. repetir lavagem para um total de 2 vezes.
-
Resuspenda o pellet em 10 mL de α-MEM e realizar uma contagem de células usando um hemocytometer como segue:
- Fazer uma diluição de 1:1 da suspensão de células, adicionando 10 μL da suspensão de células de 10 μL de 0,4% trypan azul em um tubo de 1,5 mL e pipetar uma vez.
- Cubra a câmara de hemocytometer com uma tampa corrediça e transferir a suspensão do corante para o hemocytometer. É importante para não encher demais ou underfill da câmara e permitir a suspensão encher a câmara por ação capilar.
- Coloque o hemocytometer em um palco de microscópio. Com objetivo de x 10, concentre-se na Praça do centro. Conte todas as células vinculadas por 3 linhas. Para se certificar de que as células não são contadas duas vezes, conte os cantos superiores e direito de cada quadrado. Células mortas aparecerá azul escuro, estas são excluídas da contagem.
- Dependendo da aplicação a jusante, propagar as células dentro de um vaso de cultura apropriado. Para esta experiência particular, siga seção 3.
3. geração de BMM
- Semente de 1 x 107 células/10 mL em um 10cm cultura prato e adicionar M-CSF 100 ng/mL. A concentração final de M-CSF é 100 ng/mL de meio de cultura. Incube a cultura a 37 ° C, 5% de CO2 por 3 dias.
- Depois de 3 dias, retire o meio de cultura, lavar as células vigorosamente com 10 mL de salina tamponada fosfato (PBS) duas vezes para remover as células não-aderentes, adicionar 5 mL de 0,02% de temperatura do trypsin-EDTA em PBS e incubar a 37 ° C, 5% de CO2 por 5 min.
- Separe as células pipetando minuciosa. Certifique-se que as células têm sido desanexadas, observando a cultura sob um microscópio (as células devem aparecer arredondados e flutuante na mídia). Se as células continuam a ser anexadas, repita a pipetagem minuciosamente para desanexá-los. Quando as células têm sido desanexadas, adicione 5 mL de α-MEM para inactivar a reação.
- Coletar as células em um tubo cônico de 50 mL e centrifugar x g por 5 min. descartar o sobrenadante e lavar com 5 mL de α-MEM.
- Centrifugar a 300 x g por 5 min e resuspenda o pellet em 10 mL de α-MEM.
- Realize uma contagem de células, conforme descrita na etapa 2.7.1.
- Semente de 1 x 106 células/10 mL em um 10cm cultura prato e adicionar M-CSF 100 ng/mL. A concentração final de M-CSF é 100 ng/mL de meio de cultura. Incube a cultura a 37 ° C, 5% de CO2 por 3 dias.
4. geração de osteoclastos de BMM como precursores de Osteoclast
- Após 3 dias, colhem as células anexadas que representam BMM como precursores de osteoclasto, seguindo passos 3.2-3.7.
- BMM semente em 5 x 104 células/200 μL de α-MEM em um prato bem 96. Adicione RANKL para uma concentração final de 50 ng/mL ou TNF-α, para uma concentração final de 100 ng/mL. Adicione o M-CSF para uma concentração final de 100 ng/mL a cada poço.
- Adicione o anticorpo anti-c-fms (concentração final de 0, 1, 10, 100, 1000 ng/mL) a cada poço.
- Incube a 37 ° C, 5% de CO2 por 4 dias. Mudar a mídia todos os dias por 4 dias.
5. mancha de fosfatase ácida tartarato-resistente (TRAP)
- Após 4 dias de incubação, Aspire cuidadosamente o meio de cultura de cada poço. Lave bem uma vez com 200 μL de temperatura 1X PBS.
- Adicionar 200 μL de formol a 10% a cada poço para fixação e incube por 1h à temperatura ambiente. Aspirar a formalina e lave cada poço 3 vezes com água desionizada.
- Adicione 200 μL de 0,2% Triton X-100 em PBS a cada bem para permeabilização e incubar por 1h à temperatura ambiente. Aspirar o Triton X-100 e lave cada poço 3 vezes com água desionizada.
- Adicione 200 μL de solução de mancha de armadilha para cada poço. Visualize a mancha sob o microscópio. Vai demorar de 10 a 30 min para a mancha desenvolver adequadamente.
- Aspire a mancha e lave cada bem com água desionizada 3 vezes e secar ao ar. Manter à temperatura ambiente para usar em observação posterior.
6. proliferação ensaio
- BMM semente como precursores de osteoclast em 5 x 103 células/200 μL de α-MEM em um prato bem 96. Adicione o M-CSF para uma concentração final de 100 ng/mL a cada poço.
- Adicione o anticorpo anti-c-fms (concentração final de 0, 1, 10, 100, 1.000 ng/mL) e incubar a 37 ° C, 5% de CO2 por 3 dias sem mudança de média.
- Após 3 dias, lavam-se as células com PBS 1x. Adicione 100 μL de α-MEM a cada poço.
- Adicionar 10 μL de célula contando solução kit e incubar a 37 ° C, 5% de CO2 por 2 h e determinar a absorbância de cada poço a 450 nm, utilizando um leitor de microplacas.
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Representative Results
O propósito do presente protocolo é avaliar o efeito do anticorpo anti-c-fms na formação osteoclast na presença de RANKL ou TNF-α e para determinar o efeito do M-CSF na proliferação de precursores do osteoclast. Neste protocolo, nós fornecemos um processo confiável, pelo qual grandes quantidades de culturas puras osteoclast são geradas. Nós também fornecemos uma maneira de testar a concentração adequada de anticorpo anti-c-fms para inibir a formação de osteoclast sob condições de cultura diferentes.
A formação de osteoclast em M-cultura CSF + RANKL com anticorpo anti-c-fms é mostrado na Figura 1. Em 1, anticorpo de anti-c-fms 10 ng/mL, não havia nenhuma diminuição significativa do número de osteoclastos, comparado ao controle (0 ng/mL). Enquanto em 100, 1.000 anticorpo anti-c-fms de ng, houve uma diminuição significativa do número de osteoclastos, comparado ao controle. A formação de osteoclast em cultura de M-CSF + TNF-α com anticorpo anti-c-fms é mostrada na Figura 2. No 1 anticorpo anti-c-fms de ng/mL, não houve nenhuma diminuição significativa do número de osteoclastos, comparado ao controle (0 ng/mL). 10, 100, 1.000, ao anticorpo anti-c-fms de ng/mL, houve uma diminuição significativa do número de osteoclastos, comparado ao controle.
Cultura de precursores osteoclast com M-CSF + anti-c-fms anticorpo é mostrada na Figura 3. Em 1, 10, 100 ng/mL, não havia nenhuma diminuição significativa no número de precursores osteoclast comparado ao controle (0 ng/mL), enquanto a 1.000 ng/mL, houve uma diminuição significativa no número de precursores osteoclast comparado ao controle. Isto indica que uma concentração tão alta quanto 1.000 ng/mL é necessário para inibir a proliferação de precursores osteoclast significativamente.
Estes resultados fornecem informações sobre a natureza robusta de RANKL em produzir osteoclastos, enquanto utilizou-se uma concentração de 50 ng/mL de RANKL, e uma concentração de 100 ng/mL de TNF-α foi necessário para obter o mesmo número de osteoclastos. Ambos os métodos são apropriados para geração de osteoclasto, mas a decisão de qual é superior depende da aplicação a jusante no contexto dos reagentes deve ser usado mais tarde. Como indicam os resultados, usar RANKL não é o equivalente a usar o TNF-α para gerar osteoclastos.
Neste protocolo, usamos o anticorpo anti-c-fms para inibir a osteoclastogenesis, e, olhando para os resultados, encontramos que uma concentração de 100 ng/mL de anticorpo anti-c-fms era necessária para produzir diminuição significativa no número de osteoclast em RANKL wells. Uma concentração de 1.000 ng/mL de anticorpo anti-c-fms era necessária para inibir a proliferação de precursor osteoclast no ensaio de proliferação de MCSF, enquanto que uma concentração de apenas 10 ng/mL de anticorpo anti-c-fms foi necessária para produzir uma diminuição significativa no osteoclasto número de poços de TNF-α.
Figura 1: efeito do anticorpo anti-c-fms na formação induzida pelo RANKL osteoclast. Observação microscópica de precursores de osteoclasto que foram tratados com M-CSF, RANKL e várias doses de anticorpo anti-c-fms (0, 1, 10, 100 e 1.000 ng/mL) por 4 dias. Células foram fixadas e coradas com coloração de armadilha. Número de células positivas armadilha cultivadas com M-CSF, RANKL e várias concentrações de anticorpos anti-c-fms (0, 1, 10, 100 e 1.000 ng/mL) por 4 dias. Células foram fixadas e coradas com coloração de armadilha. O número de células positivas armadilha foi avaliado. Os resultados foram expressos como média ± D.P. de quatro culturas. Diferenças estatísticas foram detectadas por meio de testes de Scheffe (n = 4; * p < 0,01). Escala de barras = 200 µm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: efeito do anticorpo anti-c-fms na formação de TNF-α-induzida osteoclast. Observação microscópica de precursores de osteoclasto que foram tratados com M-CSF, TNF-α e várias doses de anticorpo anti-c-fms (0, 1, 10, 100 e 1.000 ng/mL) por 4 dias. Células foram fixadas e coradas com coloração de armadilha. Número de células positivas armadilha cultivadas com M-CSF, TNF-α e as diferentes concentrações de anticorpos anti-c-fms (0, 1, 10, 100 e 1.000 ng/mL) por 4 dias. Células foram fixadas e coradas com coloração de armadilha. O número de células positivas armadilha foi avaliado. Os resultados foram expressos em meanv ± S.D. de quatro culturas. Diferenças estatísticas foram detectadas por meio de testes de Scheffe (n = 4; * p < 0,01). Escala de barras = 200 µm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: efeito do anticorpo anti-c-fms de proliferação de precursor do osteoclast. Viabilidade de precursores de osteoclasto que foram tratados com M-CSF e várias doses de anticorpo anti-c-fms celular (0, 1, 10, 100 e 1.000 ng/mL) por 3 dias. Celular contando kit-8 foi usado para medir a viabilidade. Os dados são apresentados em percentagem para comparar a atividade relativa dos poços contendo M-CSF + anti-c-fms contra os poços contendo M-CSF sozinho e expressa como média ± D.P. de quatro culturas. Diferenças estatísticas foram detectadas por meio de testes de Scheffe (n = 4; * p < 0,01). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Neste estudo, investigamos o efeito do anticorpo anti-c-fms na formação induzida pelo RANKL osteoclasto, formação de TNF-α-induzida osteoclasto e proliferação de precursor de osteoclast M-CSF-induzida. Nós achamos que a quantidade efetiva de anticorpo anti-c-fms para a inibição da osteoclastogenesis entre formação induzida pelo RANKL osteoclasto, formação de osteoclast induzida por TNF-α e M-CSF-induzida proliferação de precursores osteoclast é diferente.
RANKL Medeia osteoclastogenesis na presença de M-CSF in vitro, e ratos RANK-nulo experimentam osteoporose severa devido à falha dos osteoclastos para desenvolver15, , portanto, RANKL é uma citocina obrigatória para osteoclastogenesis e tem um importante papel regulador na homeostase do osso. Portanto, se a formação osteoclast RANKL-induzida pode ser controlada, a diminuição no osso em massa pode ser controlada. No entanto, se ocorrer supressão excessiva, homeostase óssea não se manterá. Neste experimento, mostramos que os anticorpos anti-c-fms precisa estar em alta concentração 100 ng/mL para ser capaz de diminuir a formação de osteoclast induzida pelo RANKL.
TNF-α formação mediada osteoclast foi mostrada para ser crítico de osteólise em destrutiva do osso doenças como artrite reumatoide6, doença periodontal7e osteoporose pós-menopausa8 e aqui nós mostramos que anti-c-fms anticorpo facilmente pode inibir a formação de osteoclast mediada pelo TNF-α em uma baixa concentração de 10 ng/mL. O resultado sugere que uma baixa concentração de anticorpos anti-c-fms poderia ser de valor terapêutico para diminuir o processo de osteoclastogenesis em condições patológicas, mas teria um efeito mínimo na osteoclastogenesis em condições normais.
M-CSF é o fator-chave para a formação de osteoclast como os ratos op/op que falta Csf1 o gene que codifica para o show de M-CSF um fenótipo osteopetrotic devido à falta completa de osteoclastos16. M-CSF também promove a sobrevivência de osteoclast precursores2. M-CSF níveis aumentam no soro de pacientes com artrite reumatoide que tenham grave espondilite anquilosante17 e no líquido sinovial ao redor da prótese comum solta18. TNF-α aumenta o número de osteoclast precursores na vivo como resultado da indução de expressão de gene M-CSF em células do estroma9. Tendo em conta estes dados, podemos concluir que o M-CSF é um importante mediador da inflamação devido ao impacto do TNF-α em células do estroma que provoca um aumento na produção de M-CSF a partir dessas células.
Tem sido relatado que o M-CSF desempenha um papel importante na resposta imune do hospedeiro tais como antimicrobianas funções do pulmão e do fígado fagócitos mononucleares durante uma pneumonia14. Portanto, se ocorre supressão excessiva do M-CSF, há uma possibilidade que vai diminuir a resposta imune. Neste experimento, mostramos que uma concentração muito elevada de anticorpos anti-c-fms (1.000 ng/mL) era necessária para inibir a proliferação mediada por M-CSF e sobrevivência de precursores do osteoclast. Estes resultados tomados ao lado sugerem que os anticorpos anti-c-fms podem funcionar como uma terapêutica para prender osteoclastogenesis em TNF-α induzida osteolíticas doenças em baixa concentração, ao mesmo tempo por que esta concentração poupará formação osteoclast induzida RANKL e M-CSF, que permitirá uma remodelação para ocorrer óssea.
Passos críticos no protocolo precisam ser executada cuidadosamente para garantir o sucesso do experimento. No início do protocolo durante a dissecação, é importante evitar o corte no osso para evitar a contaminação da medula óssea. No processo de extração de medula óssea, para garantir que todos os da medula óssea foram extraídos, o procedimento de lavagem deve ser repetido por necessário até que todos da medula óssea foram extraídos, que oferecerá um alto rendimento de células. Este protocolo pode ser utilizado em múltiplas aplicações a jusante, tais como reagentes de teste, e ele também fornece uma maneira pela qual a concentração do anticorpo anti-c-fms pode ser testada evitando a falsa interpretação dos resultados. Como mostramos, a concentração de anticorpos anti-c-fms, que era necessário para inibir a formação de osteoclasto não é igual entre os métodos pelos quais osteoclastos foram obtidos (RANKL ou TNF-α), assim, todos os resultados obtidos no que diz respeito à concentração de anti-c-fms tem para ser cuidadosamente examinados, no futuro, experiências.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Este trabalho foi financiado em parte por um KAKENHI JSPS conceder da sociedade para a promoção da ciência (n. º 16K 11776 H. K., n º 17K 17306 de K. S., n. º 16K 20637 de K. K., n. º 16K 20636 para S., n. º 18K 09862 de I. M.) de Japão.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-c-Fms antibody | AFS98, a rat monoclonal, antimurine, c-Fms antibody (IgG2a) | ||
| TNF-α | Recombinant murine TNF-α prepared in our laboratory. TNF-α cDNA fragment cloned by RT-PCR and cloned into a pGEX-6P-I (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) to generate a GST-fusion protein. GST-TNF-α was expressed in Escherichia coli BL21 cells cells (Stratagene, La Jolla, CA). The cells were lysed under nondenaturing conditions and GST-TNF-α was purified over a glutathione-Sepharose column. GST was cleaved off by PreScission Protease (Amersham Biosciences) by manufacturer’s directions and was removed by a glutathione-Sepharose column. | ||
| RANKL | PEPROTECH | 315-11 | Recombinant Murine sRANK Ligand, Source: E. coli |
| M-CSF | Recombinant human M-CSF. 1/10 vol of CMG14–12 cell line culture supernatant at 5x106 cells in a 10 cm suspension culture dish. | ||
| α-MEM | Wako | with L-Glutamine and phenol red | |
| Fetal Bovine Serum | Biowest | s1820-500 | Fetal Bovine Serum French Origin |
| Culture dish | Corning | 100 mm x 20 mm style dish | |
| 96-well plate | Thermofischer Scientific | Nun clon Delta surface | |
| Cell counting kit-8 | Dojindo, Kumamoto, Japan | ||
| Microplate reader | Sunrise REMOTE; Tekan Japan, Kawasaki, Japan | ||
| Cell strainer | Corning | 40 μm Nylon | |
| Centrifuge tube | Corning | 50 mL CentriStar cap | |
| Triton X-100 | Wako | Polyoxyethylene (10) Octyphenyl ether |
References
- Crotti, T. N., Dharmapatni, A. A., Alias, E., Haynes, D. R. Osteoimmunology: Major and Costimulatory Pathway Expression Associated with Chronic Inflammatory Induced Bone Loss. Journal of Immunology Research. 2015, 281287 (2015).
- Teitelbaum, S. L.
- Azuma, Y., Kaji, K., Katogi, R., Takeshita, S., Kudo, A. Tumor necrosis factor-alpha induces differentiation of and bone resorption by osteoclasts. Journal of Biological Chemistry. 275 (7), 4858-4864 (2000).
- Kobayashi, K., et al. Tumor necrosis factor alpha stimulates osteoclast differentiation by a mechanism independent of the ODF/RANKL-RANK interaction. Journal of Experimental Medicine. 191 (2), 275-286 (2000).
- Kim, N., et al. Osteoclast differentiation independent of the TRANCE-RANK-TRAF6 axis. Journal of Experimental Medicine. 202 (5), 589-595 (2005).
- Redlich, K., et al. Osteoclasts are essential for TNF-alpha-mediated joint destruction. Journal of Clinical Investestigation. 110 (10), 1419-1427 (2002).
- Abu-Amer, Y., Ross, F. P., Edwards, J., Teitelbaum, S. L. Lipopolysaccharide-stimulated osteoclastogenesis is mediated by tumor necrosis factor via its P55 receptor. Journal of Clinical Investestigation. 100 (6), 1557-1565 (1997).
- Zha, L., et al. TNF-alpha contributes to postmenopausal osteoporosis by synergistically promoting RANKL-induced osteoclast formation. Biomedicine & Pharmacotherapy. 102, 369-374 (2018).
- Kitaura, H., et al. M-CSF mediates TNF-induced inflammatory osteolysis. Journal of Clinical Investigation. 115 (12), 3418-3427 (2005).
- Kimura, K., Kitaura, H., Fujii, T., Hakami, Z. W., Takano-Yamamoto, T. Anti-c-Fms antibody inhibits lipopolysaccharide-induced osteoclastogenesis in vivo. FEMS Immunology and Medical Microbiology. 64 (2), 219-227 (2012).
- Kimura, K., et al. An anti-c-Fms antibody inhibits osteoclastogenesis in a mouse periodontitis model. Oral Diseases. 20 (3), 319-324 (2014).
- Kitaura, H., et al. An M-CSF receptor c-Fms antibody inhibits mechanical stress-induced root resorption during orthodontic tooth movement in mice. Angle Orthodontist. 79 (5), 835-841 (2009).
- Kitaura, H., et al. An anti-c-Fms antibody inhibits orthodontic tooth movement. Journal of Dental Research. 87 (4), 396-400 (2008).
- Bettina, A., et al. M-CSF Mediates Host Defense during Bacterial Pneumonia by Promoting the Survival of Lung and Liver Mononuclear Phagocytes. Journal of Immunology. 196 (12), 5047-5055 (2016).
- Dougall, W. C., et al. RANK is essential for osteoclast and lymph node development. Genes & Develpoment. 13 (18), 2412-2424 (1999).
- Wiktor-Jedrzejczak, W., et al. Total absence of colony-stimulating factor 1 in the macrophage-deficient osteopetrotic (op/op) mouse. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 87 (12), 4828-4832 (1990).
- Yang, P. T., et al. Increased expression of macrophage colony-stimulating factor in ankylosing spondylitis and rheumatoid arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 65 (12), 1671-1672 (2006).
- Takei, I., et al. High macrophage-colony stimulating factor levels in synovial fluid of loose artificial hip joints. The Journal of Rheumatology. 27 (4), 894-899 (2000).
