Summary
Denne protokol beskriver, hvordan man laver en simpel voksen Drosophila adfærd observation kammer, og hvordan man tager high-definition fotografier / videoer af morfologi eller adfærd af forskellige typer af frugt fluer i observationskammeret gennem relativt enkle og overkommelige metoder.
Abstract
Drosophila melanogaster er en meget kraftfuld model inden for biologisk forskning, men en dårlig model til fotografering eller videografi. Dette papir beskriver en enkel, men effektiv metode til at observere og dokumentere adfærd eller morfologi af fluer. Fluer blev placeret i et gennemsigtigt observationskammer ca. Ø15 x 5mm (ingen mad indeni) eller Ø15 x 12 mm (med et 8 mm højt stykke mad indeni). Efter at have dækket med et ultraviolet (UV)/klart filter med høj lystransmission blev kammeret placeret under et 5-50x zoom stereomikroskop, og mini lysdiode (LED) videolys blev placeret på begge sider af mikroskopet for at belyse kammeret for at opnå ensartet, blødt, lyst og næsten skyggefrit lys. Derefter blev et kompakt digitalt kamera med 3-5x optisk zoom, som kan optage 1080 P high-definition eller højere opløsningsvideo (med en billedhastighed på ≥30 fps), forbundet til mikroskopets okular gennem et beslag, og fotografier eller videoer blev taget gennem okularet. Ved at justere zoomknappen på zoomstereoskopet var det meget nemt at spore fluerne og tage panorama- eller detaljerede nærbilleder efter behov, mens kameraet optog alt under mikroskopet. Fordi fluerne kan forblive på enhver position i kammeret, kan de observeres og registreres fra alle retninger. De fotografier eller videoer, der er taget, er af god billedkvalitet. Denne metode kan bruges både til videnskabelig forskning og undervisning.
Introduction
Drosophila melanogaster er en fremragende model inden for biologisk forskning; det er dog en dårlig model til fotografering eller videografi, da den er for lille til et kamera eller et videokamera og for stor til et sammensat mikroskop1. På trods af fremragende forskning beskrevet i litteraturen, har de fleste undersøgelser kun givet slørede, uklare billeder, snarere end klare og skarpe fotografier med klare detaljer, der illustrerer flyveadfærd bliver beskrevet. Desuden, selv om flyve adfærd er blevet grundigt undersøgt (f.eks frieri og kampe), de fleste af disse papirer har brugt illustrationer til at forklare deres forskning til læserne.
Dette papir beskriver en enkel og økonomisk tilgang. Ved hjælp af denne metode kan ikke kun drosophilas forskellige adfærd observeres, men også alle de detaljer, der kan observeres under et stereozoommikroskop, kan registreres klart og skarpt. Selvfølgelig kan denne metode også bruges til at registrere morfologien af fluer, som når de går ind i en søvn- eller semi-søvntilstand, giver den stationære model brugeren mulighed for at tage et fotografi eller en stak fotografier med forskellige fokale fly for at få et udvidet dybdeskarphedsfoto. Disse metoder kan realiseres uden kompliceret teknologi og dyrt udstyr eller endda fremragende manuelle færdigheder.
Videokomponenten i denne artikel viser videoer af flere typiske adfærd hos fluer. Formålet med at vise disse videoer er dobbelt: den ene er at lade publikum vide, hvad der kan fanges og præsentere billedkvaliteten opnået ved hjælp af denne metode; den anden er at lade nye studerende, der er interesseret i Drosophila, men hidtil ikke har haft mulighed for rent faktisk at observere adfærd fluer forstå adfærd fluer (såsom frieri, kampe) gennem disse klare videoer i stedet for illustrationer eller slørede billeder.
Supplerende Video: Fruit Fly Behavior: Klik her for at downloade denne fil.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Konstruktion af observations-/dokumentsystemet
BEMÆRK: De materialer, der er nødvendige for at konstruere flyveadfærdsobserverings-/dokumentsystemet, vises i figur 1, og det færdige system vises i figur 2. Protokollen til at konstruere systemet, og hvordan du bruger det er beskrevet nedenfor.
- Lav en fly behavior observation chamber (FBOC).
- Få fat i en lille, gennemsigtig (ikke gennemsigtig) beholder til fremstilling af en FBOC med størrelsesdiameter (Ø) 15 mm x 20 mm. Brug en gennemsigtig plastflaskehætte af størrelse ~ Ø17 mm x 22 mm til at lave en FBOC, eller skær en sektion på ~ 17 mm fra den tykke ende af en 5 mL pipettespids for at lave en FBOC.
- Hæld 1% agar i FBOC for at justere dens dybde. Hvis der skal placeres mad i FBOC (se for tilberedningsmetoden for fødevaren), hæld agaren for at opnå en dybde på 12 mm. Hvis mad ikke behøver at blive placeret i FBOC, hæld agaren til en dybde på 5 mm for lettere at spore, hvor frugtfluer er.
- Hvis du bruger en pipettespids til at lave en FBOC, skal du placere den afskårne pipettespidssektion i en Ø35 mm eller en Ø60 mm Petriskål. Hæld 1% agar gel i Petriskålen til en tykkelse på ~ 5 mm, vent på agar at størkne, og forsegle bunden af FBOC. Hæld derefter agargelen i FBOC til den ønskede tykkelse.
- Lav en FBOC base ved at bore en ~ 10 mm-dybt hul i midten af et stykke af en 60 mm x 60 mm x 15 mm ethylamin skum ark med samme diameter som FBOC. Sæt FBOC i hullet.
BEMÆRK: FBOC-basen holder FBOC stabil og forhindrer den i at vælte og letter FBOC's bevægelse for at spore fluerne under observation og videografi. - Lav fluemad, hvis det er nødvendigt, med gær medium2, kunstig kost3eller ren saccharose / glukose (brug 1% agar som geleringsmiddel), afhængigt af formålet med observation.
- For visuelt at afgøre, om fluer fodrer og øger kontrasten mellem fluer og deres miljø, tilsættes fødevarefarvestoffer (se materialetabellen)til fødevaren til en endelig koncentration på 12,5 mg/100mL.
BEMÆRK: Fluernes underliv skifter farve umiddelbart efter fodring. - Hæld den tilberedte mad i en petriskål i en højde på 8 mm. Efter størkning skal du bruge et barberblad til at skære et stykke mad i størrelse 8 mm x 4 mm x 8 mm ud og placere det på et stykke plastik (såsom slikindpakning).
- Skær maden i en firkantet pyramide eller firkantet frustumpyramide, som vist i figur 3, for at tillade observation og registrering af flyveadfærd fra forskellige vinkler, da fluerne lander tilfældigt på maden. Brug plasten under maden er at forhindre farvestoffet i maden i at sprede sig til agaren i FBOC. Brug pincet til at placere maden i midten af FBOC.
- For visuelt at afgøre, om fluer fodrer og øger kontrasten mellem fluer og deres miljø, tilsættes fødevarefarvestoffer (se materialetabellen)til fødevaren til en endelig koncentration på 12,5 mg/100mL.
- I nogle adfærdsmæssige observationer skal du sikre dig, at fluerne sultes på forhånd. Hæld 1% agargel (1 g agar/100 mL vand, 600 μL propionsyre) i en ren tom flaske til en tykkelse på 1-2 cm, og læg ved stuetemperatur i 1-2 timer. Overfør fluer til flasken og placer ved 25 °C i ≥36 h.
BEMÆRK: Fluer kan absorbere vand fra agargelen, så der er ingen grund til at tilføje vand fra tid til anden4,5. - Overfør en eller flere fluer til FBOC ved hjælp af en aspirator. Hvis det er svært at bruge en aspirator, skal du afkøle og inaktivere fluerne i knust is, sortere dem på en ispose og overføre dem til FBOC som beskrevet tidligere6.
BEMÆRK: Brugen af frysning letter i høj grad overførslen af fluer; de afkølede fluer kan genvinde bevidstheden inden for 1 min, meget hurtigere end dem bedøvet med CO2. Selvom nedkøling kan have skadelige virkninger på fluernes adfærd, f.eks. øget kopulationsventetid af fluer fra 5min. 7 til 40min. 8, ændrer det ikke flyveadfærd (såsom frieriadfærd). Derfor kan nedkølingsmetoden bruges til at overføre fluer til generel observation (såsom undervisningseksperimenter) og videografi. Men hvis observationerne skal anvendes i en videnskabelig rapport, anbefales det stærkt ikke at udsætte fluerne for anæstesi. - Når fluerne er overført til FBOC, skal du dække den med et 30-40 mm UV/klart filter, så kameraet kan danne et FBOC-kompleks (Figur 4). Placer FBOC-komplekset under stereomikroskopet til observation.
BEMÆRK: For at opnå klare og skarpe billeder anbefales det på det kraftigste at bruge UV/clear-filter af høj kvalitet med høj lystransmission (>98 %) og reduceret flare. Der henvises til nogleforslag,der er beskrevet tidligere9,10; selvom der ikke er behov for at købe dyre filtre, skal du undgå at dække FBOC med glas som låget på en petriskål. - Belys FBOC. Monter mini LED video lys til flash hot shoe mount stativer og placere dem på venstre og højre side af FBOC (Figur 2). Tænd LED-lysene, og indstil lysstyrken til 100% og farvetemperaturen til 5000-5600 K.
BEMÆRK: Mini LED-videolamperne med dæmpbart lys, 5600 K farvetemperatur kan give ensartet, lys, næsten skyggefri belysning. Ved hjælp af den øverste lyskilde, der følger med stereomikroskopet, gav LED Ring Light-belysningen eller fiberoptisk illuminator ikke tilfredsstillende resultater. Det er bedst at bruge kontinuerlig strømforsyning (transformere) til LED-videolamper. - Observation og videografi af flyveadfærd
- Tænd LED-videolysene, og juster stereozoommikroskopet, indtil fboc'ens kant tydeligt kan ses med det blotte øje. Flyt FBOC til midten af synsfeltet.
- Fastgør fastspændingen på universalteleskopets digitale kameraadapter til et okular i stereomikroskopet, og fastgør derefter et kompakt digitalt kamera sikkert på adapteren ved skiftevis at dreje kameraets monteringsskrue og kamerafastgørelsesskrue (Figur 2).
- Tænd for det digitale kamera, og drej de vandrette/lodrette finjusteringsknapper, indtil FBOC-kanten tydeligt vises i midten af det lyse cirkulære synsfelt på kameraets LCD-skærm. Roter modeknappen til Automatisk tilstand med blændeprioritet, tryk på fokus på multivælgeren, vælg Makro-lukning, og tryk derefter på knappen OK. Flyt zoomkontakten fra vidvinkelafslutningen til telefotoafslutningen, og zoom ind på det cirkulære billede, indtil den centrale del fylder hele LCD-skærmen. Tryk på knappen Filmoptagelse for at starte optagelsen (tryk på knappen igen for at afslutte optagelsen).
BEMÆRK: Hvis billedet er for mørkt eller for lyst, skal du trykke på siden af kontrolknappen tæt på ikonet for eksponeringskompensation (Figur 1) og dreje skiven for at ændre den eksponeringsværdi (EV), som kameraet foreslår for at opnå den ønskede effekt. Positive elbiler gør billedet lysere, og negative elbiler gør billedet mørkere. Billedet skal være ensartet, lyst, uden vignettering. - Drej fokusknappen på mikroskopet, indtil fluerne i FBOC er tydeligt synlige. Vælg flueadfærden af interesse for observation eller videooptagelse. Drej zoomknappen for at zoome ind og ud for at opnå den ønskede forstørrelse til observation eller videooptagelse.
BEMÆRK: Denne metode til at tage billeder under mikroskopet gennem okularerne gælder for ethvert mikroskop med okularer. Hvis du vil tage billeder af eksperimentelle resultater, skal du bruge et kamera, der kan skyde i RAW-format, da RAW-billedfiler er at foretrække frem for JPEG'er. Brug kameraets LCD-skærm som en skærm til at observere frugtfluernes opførsel, og sørg for, at stereozoommikroskopet har mindst 5-50x zoom.
2. Protokoller for observation og videografi af flyveadfærd
- Forberedelse af fluerne
- Kultur fluerne på majsmel medium ved 25 °C med 60% fugtighed og en 12 timer lys / mørk cyklus. Saml fluer inden for 6 dage efter udklækning til observation (undtagen frieri og kampadfærd).
BEMÆRK: Her bestod mediet af 1000 mL vand, 105 g majsmel, 75 g saccharose, 15 g agar, 40 g gærpulver, 28 mL 10% methylparaben (w/v i 95% ethanol) og 6,25 mL propionsyre.
- Kultur fluerne på majsmel medium ved 25 °C med 60% fugtighed og en 12 timer lys / mørk cyklus. Saml fluer inden for 6 dage efter udklækning til observation (undtagen frieri og kampadfærd).
- Genvinde bevidstheden fra anæstesi ved at køle
- Chill fluerne som beskrevet tidligere. 6 Overfør Drosophila fra iskassen til FBOC ved hjælp af pincet. Optag fluens proces fra inaktivitet til normal kropsholdning på video.
- Flyve søvn, fodring, udskillelse og social adfærd
- Sult fluer i 36 timer. Overfør 4-6 frugt fluer til FBOC med farvet mad. Overhold og optag flueadfærd på video.
BEMÆRK: Fluer, der forbliver ubevægelige i mere end 5 minutters skærm søvnadfærd11. Drosophila kan sove på mad eller på en lodret FBOC væg (kroppen er vinkelret på observationskammervæggen). Selvom kroppen ikke bevæger sig, når den sover, kan maven ses at være bølgende. Fodringsadfærd manifesteres, når fluen strækker sin proboscis, bevæger sig på maden, mens den konstant suger, og dens underliv bliver blå. Under gruppefodring eller andre aktiviteter strækker bananfluer deres fødder for at røre ved ligene af andre frugtfluer på en venlig måde. Dette er en social adfærd.
- Sult fluer i 36 timer. Overfør 4-6 frugt fluer til FBOC med farvet mad. Overhold og optag flueadfærd på video.
- Flue grooming adfærd
- Chill fluerne som beskrevet6. Kast de frosne fluer i agarpulver, og rul for at dække dem med agarpulver. Overfør fluerne til FBOC. Overhold og registrer grooming adfærd.
BEMÆRK: Når frugtfluen genvinder bevidstheden fra frysningen, vil den hurtigt ryste agarpulveret af kroppen og rense alle dele af kroppen med benene12,13. Grooming adfærd kan også ses under fodring, frieri, og andre adfærd.
- Chill fluerne som beskrevet6. Kast de frosne fluer i agarpulver, og rul for at dække dem med agarpulver. Overfør fluerne til FBOC. Overhold og registrer grooming adfærd.
- Fly frieri og kampadfærd
- Saml kvindelige og mandlige fluer som beskrevet tidligere7. For at observere forlovelsesadfærden af fluer skal du placere en kvindelig flyve og en mandlig flyve ind i FBOC for at observere og registrere 6 frieri (vellykket og mislykket) adfærd.
- For at observere fluernes kampadfærd skal du placere to mænd i FBOC. Overhold og registrere deres adfærd med at skubbe og skubbe hinanden.
- Fly æglægningsadfærd
- Forbered kvindelige fluer som beskrevet tidligere5. Overfør 4 kvindelige fluer til FBOC med mad.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Skyd gennem et UV-filter for klare og skarpe billeder
Udfør et simpelt eksperiment for at observere forskellen mellem et UV-filter og almindeligt glas i laboratoriet. Tag en flue kultur hætteglas, fjerne proppen, placere den under et stereo dissekere mikroskop, og dække det (skiftevis) med et UV-filter og en Petri parabol låg. Fotografierne taget i disse to tilfælde er vist i figur 5. Fotografiet taget gennem UV-filteret er klart og skarpt, meget lig det fotografi, der er taget, når kulturglasset ikke er dækket. Kvaliteten af billedet taget gennem glasset i petriskålen er meget dårlig, selv når fokus er nøjagtigt. Almindeligt glas (eller akrylplade) er ikke belagt, den højeste transmission er 92%14,15, og det klare / UV-filter med flerlagsbelægning har en let transmission på 98-99%.
Således er billedet skudt gennem almindeligt glas (eller akryl ark) er ikke så klart som billedet skudt gennem klar / UV-filter. En anden vigtig defekt ved almindeligt glas, såsom låget på en laboratorieskål, er dens ujævne overflade. Det kan ses i figur 5, at på grund af glasoverfladens ujævnhed er en del af billedet klart og delvist sløret. Derfor bør der anvendes klare/UV-filtre i stedet for at bruge almindelige glas- eller akrylplader til at dække FBOC. UV-filteret, der blev brugt i denne protokol (Figur 5), var billigt (~$ 10), ikke-mærkede, og dets lystransmission ukendt. Med andre ord, selvom det er et billigt UV-filter, kan billedet fanget gennem det være meget klarere og skarpere end det, der er fanget gennem almindeligt glas.
God kvalitet uden dyrt udstyr
Flueadfærd blev optaget med et KAMERA kun for JPEG med en betydeligt mindre sensor (1/2.3'). Videoopløsning er 1920 x 1080 pixels (ved 30 frames per second, fps); kvaliteten af filmen er tilfredsstillende. En billig UV-filter blev brugt til at dække FBOC, og stereo zoom mikroskop var unbranded. Omkostningerne ved LED-lys (f.eks GODOX led-p120) var ca $ 70 for to pakker (se tabellen af materialer). Med andre ord var det anvendte udstyr meget økonomisk; Videokvaliteten er dog god, der tydeligt viser panoramaet af nogle adfærd af fluer, såsom frieri og kampe, og detaljerne i nogle adfærdsmønstre, såsom oviposition og udskillelse. Med andre ord, selvom det er et billigt UV-filter, kan billedet, der er taget gennem det, være klarere og skarpere end det, der er fanget gennem almindeligt glas.
Figur 6 er et fotografi taget fra videooptagelsen, der viser detaljerne i hver del af fluens krop. Naturligvis vil brugen af et kamera og et stereomikroskop med bedre billedkvalitet give videoer eller fotografier med højere billedkvalitet. Hvis kameraet har en billedhastighed på ≥60 fps med god billedkvalitet, kan langt flere detaljer fanges i større klarhed i adfærd med masser af handling eller bevægelse. En anden fordel ved dette system er, at fordi kameraet er forbundet til et zoom stereomikroskop, er det meget nemt at skyde fra panorama til nærbilleder ved hjælp af zoomsystemet.
Allround-optagelse
Observation og videografi sker normalt fra toppen; men da fluer kan forblive på enhver del af FBOC: den lodrette FBOC-væg, den skrå madoverflade og endda UV-filteret (med maven vendt opad), og deres kroppe er vinkelret på disse overflader, kan deres adfærd observeres og dokumenteres fra flere betragtningsvinkler. For eksempel kan det tydeligt ses i figur 7, at den kvindelige flyve konstant gnider ovipositoren med bagbenene under æglægningen. Denne detalje af æglægningsadfærd kan ikke ses tydeligt fra siden5.
Figur 1: Fotografisk udstyr og andet tilbehør, der anvendes til at konstruere flyveadfærd observere og dokumentere system. Forkortelse: LED = lysdiode. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Drosophila adfærd observation og registrering system.
Figur 3: Illustration af madstørrelsen og formen.
Figur 4: Illustration af FBOC-komplekset. Forkortelse: FBOC = flyveadfærdsobservationskammer. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Sammenligning mellem fotografierne taget gennem UV-filteret, gennem låget på laboratoriet Petriskål, og taget direkte uden dækning.
Figur 6: Et billede taget fra videooptagelsen.
Figur 7: Et usædvanligt perspektiv for at observere æglægningsadfærden af bananfluer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Lys er kernen i fotografering og videografi og er den afgørende faktor for at opnå billeder af høj kvalitet16. Her blev to LED-videolamper med justerbar lysstyrke og farvetemperatur brugt som illuminatorer, og et gennemsigtigt materiale blev valgt til at lave FBOC. LED-lyspanelerne på begge sider gav nok lysstyrke, og det gennemsigtige materiale blødgjorte og spredte lys, der til sidst producerede ensartet, blødt og stærkt lys til at belyse fluerne i FBOC uden at producere ubehagelige overeksponerede eller underbelyst områder. Den ideelle belysning kan opnås uden sofistikeret og dyrt belysningsudstyr. Her havde det anvendte UV/klare filter meget høj lystransmission og lav refleksion til at dække FBOC, og lystabet er meget lille. Disse foranstaltninger sikrede klare og skarpe billeder.
Vi tilsluttede et digitalt kamera til okularet af stereo zoom mikroskop gennem et beslag og tog fotografier eller videoer gennem okularet. Alle billeder, der kunne observeres under mikroskopet, kunne optages. Ved at dreje fokusknappen og løfte mikroskopet var det meget nemt at spore fluerne i FBOC's smalle rum og zoome ind eller ud efter behov for at registrere lokale detaljer eller overordnede dynamikker, hvilket ikke kan opnås ved hjælp af en videooptager eller kamera til direkte videografi af FBOC. Samtidig kan kameraet vælges i henhold til kravene til billedkvalitet. Faktisk kan et digitalt kamera tilsluttes ethvert mikroskop med et okular gennem et beslag. Den tilsvarende forfatter af dette papir har med succes registreret eksperimentelle resultater på denne måde i mange år.
Det kompakte digitale kamera, der bruges til at optage frugtfluernes adfærd, skal have 3-5x optisk zoom (digital zoom bør ikke bruges til videooptagelse). Telefoto slutningen af disse kameraer (~ 100 mm brændvidde) bruges til at forstørre billedet i midten af synsfeltet til hele skærmen, således at det endelige billede opnået er et behageligt billede uden vignetter omkring det. Hvis et kamera kun har en vidvinkel fast fokus linse, eller en optisk zoomobjektiv over 7x, vil der være mere eller mindre ubehagelig vignetter omkring det optagne billede. Hverken digitale enkelt-linse refleks kameraer eller videokameraer er egnet til den metode, der er beskrevet i denne artikel. Kameraet skal kunne optage video med en opløsning på mindst 1080 P ved 30 fps. Hvis kameraet ikke kan drives af kontinuerlig strøm, skal der til enhver tid købes flere ekstra batterier til udskiftning.
Fluerne kan stå på et plan i enhver vinkel, deres kroppe er vinkelret på denne overflade. Selv når de sover, kan de stå ubevægelige på den lodrette kulturflaskevæg. Derfor, når du optager fra top til bund, så længe vi giver dem et fly i en passende vinkel, kan frugtfluens opførsel observeres og fotograferes i alle retninger uden at skulle skyde sin adfærd fra siden af en FBOC. Dette er grunden til den firkantede madpyramide design.
Men i dette system kan kameraet ikke fokusere og låse fluerne og skyde automatisk, når de bevæger sig over rammen. Eksperimentatoren skal altid bruge stereomikroskopets fokus- og zoomfunktioner til at spore fluerne til optagelse. Det er derfor, at FBOC's diameter skal være lille, og dybden af FBOC skal være lav, så eksperimentatoren hurtigt kan spore de bevægelige bananfluer. Nogle funktionsmåder skal muligvis registreres i mørke17,18. Denne artikel diskuterer ikke disse aspekter af flyveadfærd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Vi takker professor Li Xiangdong og fotograf Mr. Cheng Jing for nyttige diskussioner og forslag. Dette arbejde blev støttet af Exploratory Project (20200101) af Life Science Experimental Teaching Demonstration Center of China Agricultural University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| compact camera, Nikon P310 | Nikon | 3-5x optical zoom, cam record 1080 P HD video | |
| ethylamine foam | 60 mm x 60 mm x 15 mm | ||
| Food Blue No 1 | CAS 3844-45-9 | ||
| mini LED lights and transformer | GODOX | LED-P120 | have 5000-5600 K color temperature |
| small container (e.g. bottle cap) | about Ø 15 mm x 20 mm | ||
| UV / Clear filter | high-quality UV/Clear filter with high transmittance, 30-40 mm | ||
| zoom stereo microscope | 5-50x zoom |
References
- Chyb, S., Gompel, N. Atlas of Drosophila morphology: Wild-type and classical mutants. , Academic Press. (2013).
- Yang, D. Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species. Scientific Reports. 8, 15484 (2018).
- Piper, M. D., et al. A holidic medium for Drosophila melanogaster. Nature Methods. 11, 100-105 (2014).
- Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis extension response (PER) assay in Drosophila. Journal of visualized experiments : JoVE. (3), e193 (2007).
- Yang, C. -H., Belawat, P., Hafen, E., Jan, L. Y., Jan, Y. -N. Drosophila egg-laying site selection as a system to study simple decision-making processes. Science. 319 (5870), 1679-1683 (2008).
- Yang, D. Simple homemade tools to handle fruit flies-Drosophila melanogaster. Journal Of Visualized Experiments: JoVE. (149), e59613 (2019).
- Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. Methods to assay Drosophila behavior. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (61), e3795 (2012).
- Barron, A. B. Anesthetizing Drosophila for behavioural studies. Journal of Insect Physiology. 46 (4), 439-442 (2000).
- Cicala, R. My not quite complete protective filter article. , Available from: https://www.lensrentals.com/blog/2017/06/the-comprehensive-ranking-of-the-major-uv-filters-on-the-market (2017).
- Carnathan, B. UV and clear lens protection filters review. , Available from: https://www.the-digital-picture.com/Reviews/UV-and-Clear-Lens-Protection-Filters.aspx (2013).
- Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster. Science. 287 (5459), 1834-1837 (2000).
- Barradale, F., Sinha, K., Lebestky, T.
- Szebenyi, A. L.
- Arkema Inc. Plexiglas : optical and transmission characteristics. , Available from: https://www.plexiglas.com/export/sites/plexiglas/.content/medias/downloads/sheet-docs/plexiglas-optical-and-transmission-characteristics.pdf (2000).
- Fluegel, A. Calculation of the light reflection and transmission. , Available from: https://www.glassproperties.com/reflection/ (2007).
- Hunter, F., Biver, S., Fuqua, P. Light science & magic: an introduction to photographic Lighting. , Routledge. (2015).
- Hendricks, J. C., et al. Rest in Drosophila is a sleep-like state. Neuron. 25 (1), 129-138 (2000).
- Rieger, D., et al. The fruit fly Drosophila melangaster favors dim light and times its activity peaks to early dawn and late dusk. Journal of Biological Rhythms. 22 (5), 387-399 (2007).
