Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

הערכת לוקומוטור של מודל מחלת פרקינסון למבוגרים המושרה על ידי 6-הידרוקסידופמין

Published: December 28, 2021 doi: 10.3791/63355
Automatic Translation
1, 1, 1,2, 1, 1, 2, 1
1Collaborative Drug Discovery Research (CDDR) Group and Brain Degeneration and Therapeutics Group, Faculty of Pharmacy, Universiti Teknologi MARA (UiTM), Cawangan Selangor, Kampus Puncak Alam, 2Department of Medicine, Faculty of Medicine, Universiti Malaya

Summary

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את ההזרקה התוך-חדרית (ICV) של דגי זברה בוגרים עם נוירוטוקסי-הידרוקסידופאמין (6-OHDA) בדיאנספלון הגחוני (Dn) ואת הערכת הליקוי וההתאוששות שלאחר מכן של פוסטלציה של התנהגות שחייה באמצעות מבחן הטנק הפתוח, המלווה בניתוח באמצעות תוכנת מעקב וידאו.

Abstract

המגבלות של הטיפולים הנוכחיים בעיכוב אובדן עצבי דופאמין במחלת פרקינסון (PD) להעלות את הצורך טיפולים חלופיים שיכולים לשחזר נוירונים אלה. מאמץ רב מופנה כיום להבנה טובה יותר של ניוון עצבי באמצעות מודלים פרה-קליניים ב- vivo . עם זאת, יכולת רגנרטיבית זו לתיקון עצמי אינה יעילה ביונקים. בעלי חיים שאינם יונקים כמו דגי זברה התגלו כך כמודל נוירו-גנרטיבי מצוין בשל יכולתו לחדש את עצמם ללא הרף ויש להם הומולוגיית מוח קרובה לבני אדם. כחלק מהמאמץ להבהיר אירועים תאיים המעורבים בארגון עצבי ב- vivo, הקמנו את מודל PD למבוגרים המבוסס על דגי זברה למבוגרים המושרה על ידי 6-HYDROXYDopamine (6-OHDA). זה הושג באמצעות אופטימיזציה תוך שרירית (ICV) microinjection של 99.96 mM 6-OHDA כדי במיוחד ablate נוירונים דופאמין (DpN) ב diencephalon הגחוני (Dn) של המוח דגי זברה. Immunofluorescence הצביע על יותר מ 85% של אבלציה DpN ביום השלישי postlesion ושיקום מלא של DpN באתר lesioned 30 ימים postlesionion. המחקר הנוכחי קבע את הליקוי ואת ההתאוששות שלאחר מכן של התנהגות שחייה של דגי זברה בעקבות נגע באמצעות מבחן השדה הפתוח שדרכו כימתו שני פרמטרים, מרחק נסע (ס"מ) ומהירות ממוצעת (ס"מ /s), היו מכמתים. התנועה הוערכה על ידי ניתוח ההקלטות של דגים בודדים של כל קבוצה (n = 6) באמצעות תוכנת מעקב וידאו. הממצאים הראו ירידה משמעותית (p < 0.0001) במהירות (ס"מ/ים) ובמרחק נסע (ס"מ) של דגי זברה נגועים 3 ימים postlesion בהשוואה לזיוף. דגי הזברה הנגעים הפגינו התאוששות מלאה של התנהגות השחייה 30 יום לאחר מכן. הממצאים הנוכחיים מראים כי 6-OHDA נגע זברה בוגר הוא מודל מצוין עם איכות רבייה כדי להקל על המחקר של neuroregeneration ב PD. מחקרים עתידיים על המנגנונים שבבסיס neuroregeneration, כמו גם גורמים פנימיים וחיצוניים לווסת את התהליך עשוי לספק תובנה חשובה לתוך אסטרטגיות טיפול החלפת תאים חדשים נגד PD.

Introduction

מחלת פרקינסון (PD), מחלה המאופיינת באופן ייחודי על ידי קשיחות שרירים, רעד במנוחה וברדיקינזיה, היא המחלה הנוירולוגית הגדלה במהירות הגבוהה ביותר בעולם1,2. הסיכון והשכיחות של PD להגדיל במהירות עם הגיל במיוחד אצל אנשים בגילאי 50 ומעלה. האטיולוגיה והפתוגנזה של PD עד כה נשארים מובנים בצורה גרועה. זה לעתים קרובות השאיר את ההתחלה המוקדמת של PD לא מאובחנת. נכון לעכשיו, חוסר דופמין ואובדן נוירונים דופאמין (DpN) בחולי PD קשורים מאוד לביטוי של סימפטומים מוטוריים4. ניצול מערכת יחסים זו, מספר טיפולים תוכננו או לפעול ישירות כתחליף דופמין (כלומר, levodopa) או כדי לפצות על אובדן DpN (כלומר, גירוי מוחי עמוק). למרות טיפולים אלה להביא יתרונות סימפטומטיים, הם אינם משנים את מהלך הידרדרות של המחלה5. לאור חולשה משמעותית זו, הוצע טיפול בתחליפי תאים. היעילות של גישה זו, עם זאת, אינה עקבית בהתחשב באתגרים של הכנת שתל, בקרת צמיחת תאים, וחוסר יציבות פנוטיפ. טיפול בתחליפי תאים, שהעלה חששות אתיים, מהווה גם את הסיכון לגרימת גידולים במוח ותגובות חיסוניות לא רצויות6,7.

המגבלות של אסטרטגיות טיפוליות נוכחיות הובילו לדגש רב יותר על התחדשות של DpN כגישה פוטנציאלית בטיפול PD. התחדשות של DpN או neuroregeneration התפתחה כאחת מפריצות הדרך המבטיחות בניהול PD, לא רק בשל הפוטנציאל שלה כשיטה טיפולית חדשה, אלא גם כאמצעי להבין את המנגנון של המחלה8, 9. גישה זו מתמקדת בשיקום התפקוד העצבי באמצעות בידול, הגירה ושילוב של תאי אב קיימים במעגלים הנגעים10. על מנת להמשיך לחקור neuroregeneration, מחקרים שונים ב vivo בוצעו. נמצא כי בעלי חוליות כגון יונקים, דו-חיים וזוחלים מייצרים תאי מוח חדשים בעקבות פציעה של 11,12. בקרב בעלי החוליות, בעלי חיים יונקים מבוקשים יותר בהתחשב בדמיון הגנטי שלהם לבני אדם. יונקים, לעומת זאת, מפגינים יכולת תיקון מוגבלת וענייה במערכת העצבים המרכזית (CNS) שיכולה להימשך עד הבגרות בעקבות נגע במוח13. באופן כללי, יונקים אינם מתאימים כמודלים בעלי חיים להבנת neuroregeneration בהתחשב בכך מספר נמוך של נוירונים המיוצרים לא יהיה מספיק כדי לשחזר מעגלים עצביים פגומים שנצפו PD. ככזה, המודל המבוסס על טלוסט, במיוחד בדגי זברה, מועדף מאוד על קצב ההתפשטות הגבוה שלו, היכולת לחדש את עצמו ברציפות, ולסגור את ההומולוגיה המוחית עם בני אדם 14,15.

דגי זברה משמשים בדרך כלל לחקר תנועה פרועה ב- PD16. מודל PD מבוסס דגי זברה מושרה בדרך כלל על ידי רעלנים עצביים, הכוללים 1-מתיל-4-פניל-1,2,3,3,6-טטרהידרופירידין (MPTP) ו 6-הידרוקסידופאמין (6-OHDA)17. למרות יעיל גרימת אובדן ספציפי של DpN וירידה של רמות הדופאמין, מודלים מבוססי MPTP אינם מחקים מקרוב את התנאים של PD כמו אובדן DpN אינו מוגבל אך ורק CNS18. חוסר היכולת של 6-OHDA לחצות את מחסום הדם - מוח הגביל את השפעותיו על שינויים תאיים ותפקודיים בתוך המוח כאשר הוא מנוהל תוך גולגולתי לעומת תוך שרירית19. ניהול היקפי של 6-OHDA גרם לירידה גלובלית של רמות הדופאמין בכל מערכת העצבים20. בעוד מתן של 6-OHDA לתוך הנוזל השדרתי גרם אבלציה של DpN ברחבי CNS21, אשר אינו מחקה את המצב כפי שנראה PD לפיו אובדן DpN מתרחשת במיוחד בסובסטנציה ניגרה של המוח האנושי. ניהול ICV של 6-OHDA, להיפך, במיוחד גרם אבלציה משמעותית של DpN באזור של Dn הגחון במוח דג הזברה, אשר דומה מאוד סובסטנציה nigra22. מעניין, התאוששות של DpN דווחה 30 ימים לאחר נגע 6-OHDA המושרה נוירונים אלה שרדו במהלך החיים23,24. ההתאוששות הפונקציונלית של DpN הודגמה באמצעות הערכת לוקומוטור של המרחק שעבר (ס"מ) ומהירות ממוצעת (ס"מ/ים) באמצעות דגם PD למבוגרים מבוסס זברה 6-OHDA מבוססי דגי זברה22.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

המחקר הנוכחי אושר על ידי הוועדה לחקר בעלי חיים ואתיקה (CARE), האוניברסיטה טכנולוגית MARA (UiTM) [התייחסות לא: UiTM CARE 346/2021, מיום 7 במאי 2021].

הערה: הפרוטוקולים שפורסמו2,25,26 עבור גידול ותחזוקה סטנדרטיים של מודל PD דג זברה למבוגרים 6-OHDA נגע נוצלו. הניסויים נערכו עם דגי זברה זכריים בוגרים (דניו ריו) בני יותר מחמישה חודשים עם אורך סטנדרטי של 3.2-3.7 ס"מ.

1. תחזוקת דגי זברה ותכשירי מיקרו-ICV לפני ה-ICV

  1. לשמור על הדגים במיכל מים מאוורר תחת טמפרטורה מבוקרת של 28 ± 1.0 °C (50 °F). לגידול ותחזוקה של דגי זברה, יש להשתמש במים מזוקקים עם מלח ים מסחרי (1 גרם/ליטר) לאורך הניסוי27.
  2. בית מקסימום של 25 דגים לכל מיכל 45 L או דג אחד לכל מים 1.8 L ולחשוף אותם ללוח זמנים של 14 שעות אור ו 10 שעות פוטופריוד כהה. להאכיל את הדגים לפחות פעמיים ביום עם כדורי מזון בתוספת תולעים מיובשות בהקפאה.
  3. הכן פתרון מלאי מרוכז של טריקאין מתנסלפונט (MS-222) על ידי המסת 2.5 גרם של MS-222 ו 5 גרם של ביקרבונט נתרן ב 250 מ"ל של מים מזוקקים. לדלל 2 מ"ל של פתרון מלאי כדי לייצר 200 מ"ל של פתרון הרדמה עובד.
  4. הכן 99.96 מ"מ של 6-OHDA על ידי המסה ראשונה 0.2 מ"ג של חומצה אסקורבית ב 1 מ"ל של 0.9% w / v מסנן סטרילי NaCl. סנן את הפתרון עם מסנן 0.2 מיקרון לפני הוספת 25 מ"ג של 6-OHDA בצורת אבקה לתמיסה. הכן את הפתרון טרי לפני כל זריקה ולאחסן אותו בחושך ב 4 °C (60 °F).
    אזהרה: יש ללבוש ציוד מגן אישי מתאים (כלומר כפפות, מעיל מעבדה ומסכת פנים) ולתרגל שיטות מעבדה טובות בעת הטיפול בכימיקלים. כל הטיפולים בכימיקלים צריכים להיעשות בתוך ארון בטיחות ביולוגית.

2. הרדמה והזרקת ICV של דגי זברה

  1. לצום את הדגים במשך 24 שעות כדי למנוע regurgitation במהלך הרדמה. להרדים את הדג על ידי טבילתו לתוך מיכל המכיל 0.01% w / v של פתרון MS-222 במשך כ 1 דקה או עד כל התנועה השרירית הנראית לעין מפסיק.
  2. מקם את הדגים המרדים על ספוג ספוג מים שהונח מתחת לסטריאומיקרוסקופ והרטיב את הדגים באופן קבוע.
  3. זהה את המיקום להזרקה בהתבסס על ההצטלבות בין תפר metopic (MS), תפר קורונלי (CS), ותפר קשתי (SS) המחבר את הגולגולת הקדמית והקודקודית של מוח דג הזברה.
  4. צור חור קטן של שטח 1.0 מ"מ2 באמצעות מחט חדה של 27 גרם בגולגולת מונחה על ידי המיקום האנטומי הספציפי על גולגולת דג הזברה (איור 1A, B).
  5. מנמיכים את מזרק המיקרו-קפילרי בזווית של 60° עד שהוא מגיע לעומק של 1,200 מיקרומטר מגג הגולגולת הגולגולתי של גולגולת דג הזברה (איור 1C). הקש על מגבלת Z כדי לתקן את המיקום.
  6. הגדר את לחץ ההזרקה הראשוני ל 4000 hPa ולחץ פיצוי ל 10 hPa. הגדר את משך ההזרקה ל-0.3 שניות. מנמיכים את עוצמת ההזרקה עם כל זריקה עוקבת.
  7. להזריק 0.5 μL של 99.96 mM neurotoxin 6-OHDA (או 0.9% w / v מלוחים עבור קבוצת בקרה מזויפת) ולתת microcapillary לנוח במשך 20 שניות. ממשיכים להרטיב את הדגים במים מזוקקים לאורך כל תהליך ההזרקה כדי למנוע התייבשות.
  8. הסירו באיטיות את המיקרו-קפרילריה והחיו את הדגים תחת מים מזוקקים זורמים. מניחים את הדגים במיכל התאוששות מבודד ומסירים כל הסחת דעת שעלולה להפריע לתהליך ההחלמה.
  9. לשטוף את microcapillary לפני הזריקה הבאה כדי לנקות את החסימה ולוודא כי עוצמת ההזרקה מספיק כדי להניב את הנפח הרצוי של 0.5 μL של 6-OHDA.

Figure 1
איור 1: אתר הזרקה של רעלן עצבי, 6-OHDA. (A) נקודת הכניסה המיקרו-קפילרית מונחית על ידי ההצטלבות בין התפר המטופי (טרשת נפוצה), תפר קורונלי (CS) ותפר קשתי (SS) המחבר בין הגולגולת הקדמית והקודקודית של מוח דגי הזברה (תצוגת תוכנית). (ב) שרטוט סכמטי (תצוגת תוכנית) של הגולגולת והמוח של דגי הזברה מראה את המיקרו-קפילרי, אשר מונמך ישירות מעל האבנולה (Hab), ואת נקודת הכניסה שלו בצומת שבין ההמיספרות. (C) שרטוט סכמטי (חלק קשתי) של מוח דגי הזברה מראה את זווית ההזרקה ועומק החדירה. הנקודה השחורה מייצגת את האתר הנגע הממוקם מעל האזור המיועד, הדיאנספלון הגחוני. קיצורים: 6-OHDA: 6-hydroxydopamine, CS: תפר קורונלי, Dn: diencephalon, Hab: habenula, Hyp: hypothalamus, MS: תפר metopic, OB: נורת חוש הריח, POA: אזור טרום ניתוחי, PT: שחפת אחורית, SS: תפר קשתי, טק: טק: טקטון, וטל: טלנספלון. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

3. הערכת לוקומוטור

הערה: הערכת Locomotor של דגי זברה (n = שישה / קבוצה; זיוף לעומת נגע) הוערך בנפרד באמצעות מבחן הטנק הפתוח באמצעות פרוטוקולים שנקבעו28,29 ביום השלישי וביום 30 לאחר נגע 6-OHDA.

  1. הקלטת וידאו
    1. הניחו את מיכל הניסוי (אורך 20 ס"מ, רוחב 11.5 ס"מ, גובה 13 ס"מ) כשקירותיו מכוסים בנייר לבן על פלטפורמה מוגבהת (איור 2A).
    2. להאיר את הטנק מלמטה באמצעות מקור אור. מלאו את המיכל במים מזוקקים (80%-90% מלאים) ושמרו על הטמפרטורה ב-28 ± 1.0 מעלות צלזיוס. למדוד את הטמפרטורה באמצעות מדחום ולווסת אותו באמצעות תנור אקווריום מסחרי.
    3. לאחר מינימום של 2 דקות של התאקלמות, תיעדו את התנהגות השחייה של הדגים מתצוגה מתוכננת במישור הדו-ממדי (דו-ממדי) של הזירה הניסיונית באמצעות מצלמת וידאו למשך 5 דקות (איור 2B). כדי למנוע חוסר עקביות בהתנהגות השחייה של הקבוצה הקודמת והאחרונה של הקלטות, אין לחרוג מההתאקלמות עד 10 דקות.
    4. נתח את הסרטונים באמצעות תוכנת מעקב וידאו עם פרוטוקול הטנק הפתוח לרכישת מרחק נסע (ס"מ) ומהירות ממוצעת (ס"מ/ים) של כל נושא.

Figure 2
איור 2: התקנה ניסיונית של מבחן טנק פתוח להערכת התנהגות לוקומוטור דגי זברה. (א) הטנק הניסיוני (מבט קדמי) ממוקם על פלטפורמה מוגבהת המוארת מלמטה. ארבעת הקירות של הטנק מכוסים בנייר לבן וההקלטות נלכדות באופן אקסיאלי. הטמפרטורה נמדדת באמצעות מדחום ומווסתת ב 28 ± 1.0 °C (50 °F) באמצעות תנור אקווריום מסחרי. (ב) צילום מסך (תצוגת תוכנית) של הקלטת וידאו שנלכדת באמצעות ההתקנה. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

  1. ניתוח נתונים
    1. לחץ פעמיים על הסמל כדי לפתוח את תוכנת מעקב הווידאו. לחץ על הכרטיסיה קובץ ובחר צור ניסוי ריק חדש. זה יאפשר למשתמש להתאים אישית את פרמטרי הניסוי בהתאם למטרות החקירה.
    2. לחץ על הכרטיסיה פרוטוקול , בחר מקורות וידאו ולחץ על הוסף מקור וידאו חדש. לחץ על הרשימה הנפתחת הזמינה ובחר באפשרות קובץ וידאו . פעולה זו תציג בקשה לקובץ המוקפץ שממנו ניתן לבחור את הקלטות הווידאו מעניינות.
    3. לחץ על תת הפעולה של המנגנון ובחר את הסמל המלבני כדי להגדיר את המנגנון. גרור את הסמל המלבני כדי לכסות את כל הזירה הניסיונית. הגדר את סרגל קנה המידה בהתאם והזן את הערך המספרי של מדידת קנה המידה המשמשת באורך מקטע הסרגל. הניסוי הנוכחי השתמש בקנה מידה של 10 מ"מ לניסוי הטנק הפתוח.
    4. הגדר את צבע החיה על-ידי בחירת החיות כהות יותר מרקע המנגנון. השאר את האפשרויות הזמינות האחרות במעקב להגדרות ברירת המחדל המוגדרות מראש.
    5. בכרטיסיה המשנה אזורים , לחץ על המנגנון שצויר בעבר. אזור זה מוגדר כאזור הסטנדרטי שבו המיקום זהה עבור כל הבדיקות.
    6. בחר את האפשרויות הבאות תחת דוח נתוני תזמון ובדיקה: משך בדיקה, מרחק כולל נסיעה ומהירות ממוצעת. בדיקות זמינות אחרות ברשימה הן אופציונליות ותלויות בעניין החקירה של החוקר.
    7. בכרטיסיה ניסוי , הקצה את בעלי החיים בהתאם לקבוצת הניסוי שלהם על-ידי הקלדת שם הקבוצה תחת המקטע שם ומספר בעלי החיים לקבוצה במקטע מספר בעלי חיים .
    8. עבור לכרטיסיה בדיקות כדי להפעיל את הניסוי. לחץ על סמל בדיקת התחל והמתן עד שכל הסרטונים ינותחו.
    9. בכרטיסיה תוצאות , לחץ על הסמל הצג את הדוח כדי להציג את נתוני Locomotor בטופס דוח טקסט.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

הניסוי הנוכחי העריך את השינויים בהתנהגות השחייה של דגי זברה למבוגרים בעקבות מיקרו-ICV עם 6-OHDA. הסיבה לשימוש 6-OHDA כמו neurotoxin של בחירה נבע חוסר היכולת שלה לחצות את מחסום הדם - מוח, אשר הפיק אבלציה ספציפית וממוקדת של DpN בתחום של דיאנספלון עניין-גחון (Dn)16. אוכלוסיית המשנה של DpN כאן מחזיקה דמיון אנטומי לתת-אוכלוסיית ה-DpN בסובסטנציה של האדם nigra pars compacta31.

לפי העבודה הקודמת שלנו22, ההשפעה התאית של 6-OHDA ICV microinjection נגד DpN של דגי זברה בוגרים אושרה באמצעות immunohistostaining של DpN סמן-טירוזין הידרוקסילאז (TH). אזור המוח העיקרי של עניין היה Dn, המורכב של האזור הקדם ניתוחי (POA), שחפת אחורית (PT), והיפותלמוס (הייפ). נמצא כי 99.96 mM 6-OHDA הביא שיעור הישרדות של 100% של דגי זברה בוגרים עם המספר הנמוך ביותר של TH-חיסוני (TH-ir) ב- Dn. כמו כן נמצא כי יותר מ 85% (p < 0.01) של TH-ir DpN ב Dn היה ablated ביום השלישי postlesion. מספר ה-TH-ir DpN גדל אז ביותר מ-50% ביום ה-14 לפני שהשיג התחדשות מלאה 30 יום לאחר מכן (איור 3). נתונים אלה תומכים ביכולות הרגנרטיביות של אוכלוסין משנה DpN ב- Dn של דגי זברה בוגרים בעקבות אבלציה32.

Figure 3
איור 3: התחדשות של DpN באזור Dn של דגי זברה נגע על ידי 99.96 mM 6-OHDA. (A) מספר TH-ir DpN בשלושה אזורים עיקריים של אזור Dn, POA, PT, ו Hyp, על פני ארבע נקודות נתונים: זיוף, 3, 14, ו 30 ימים לאחר נגע על ידי 99.96 mM 6-OHDA neurotoxin. כל עמודה מייצגת ממוצע ± SD של n = 6 ניסויים עצמאיים; *p < 0.05. (ב) תמונות מיקרוסקופ קונפוקליות מייצגות של מוח מזויף של דגי זברה בחתך קשתי (אני, אני', ואני''), 3 ימים לאחר הנגע (II, II', ו- II''), 14 ימים לאחר הנגע (III, III', ו- III'), ו-30 יום לאחר הנגע (IV, IV', ו- IV'' המוכתמים ב- TH (DpN; ירוק) ו- DAPI (גרעינים; כחול). סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר. קיצורים- DAPI: 4′, 6-diamidino-2-פנילינדולה, 6-OHDA: 6-hydroxydopamine, Dn: diencephalon, DpN: נוירונים דופאמין, Hyp: היפותלמוס, POA: אזור טרום ניתוחי, PT: שחפת אחורית, SD: סטיית תקן, ו TH-ir: טירוזין הידרוקסילאז אימונוראקטיבי. הותאם מויג'יאנתאן ואח' 22. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

לאחר מכן ביצענו הערכת לוקומוטור באמצעות בדיקת הטנק הפתוח כדי לחקור שינויים במרחק נסע (ס"מ) ומהירות ממוצעת (ס"מ / ים) של דגי זברה בוגרים בעקבות מיקרו-ICV של 6-OHDA ו- sham. דגים ניסיוניים הוערכו אז ביום השלישי של נגע (המספר הנמוך ביותר של TH-ir DpN נצפה) וביום 30 postlesion (DpN משוחזר לחלוטין שדווח באתר נגע). ניתוח התנהגות השחייה של דגי הזברה באמצעות תוכנת מעקב וידאו הצביע על כך שהמהירות הממוצעת (ס"מ/ים) והמרחק שעברו (ס"מ) של הקבוצה הנגעת ביום השלישי הופחתו משמעותית (p < 0.001) ל-<45% בהשוואה לזיוף (איור 4). הקבוצה הנגעים הציגה התאוששות של תפקוד מוטורי 30 יום לאחר מכן ללא הבדל משמעותי הן של המהירות הממוצעת (ס"מ / ים) והן המרחק שעבר (ס"מ) בהשוואה לזיוף.

Figure 4
איור 4: שינויים בהתנהגות השחייה בעקבות הזרקה תוך-חדרית על ידי 6-OHDA. התנהגות השחייה של דגי זברה בוגרים הוערכה לפני הנגע, ביום השלישי וביום 30 postlesion על ידי 99.96 mM 6-OHDA. פרמטרים שהוערכו כללו: (A) מהירות ממוצעת (ס"מ/ים) ו-(B) מרחק נסיעה (ס"מ). כל בר מייצג ± ממוצע SD של שישה דגים; p < 0.0001 (מבחן t סטודנט). קיצורים: 6-OHDA: 6-הידרוקסידופאמין, SD: סטיית תקן. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

העבודה הנוכחית הדגימה בהצלחה את הערכת הלוקומוטור של מודל ה-PD המבוסס על דגי זברה למבוגרים בגודל 6-OHDA. הניסוי כולו כלל שלושה שלבים עיקריים: תכשירי מיקרו-ג'ינג'ים טרום-ICV, מיקרו-ICV של דגי זברה והערכה של לוקומוטור. כדי להבטיח התאוששות בריאה של דגי זברה בוגרים בעקבות הליך microinjection ICV ותוצאה ניסיונית טובה, כמה שיטות טובות עבור כל צעד הומלצו במחקר הנוכחי.

הכנה מיקרו-ICV טרום ICV: בחירת בעלי חיים בוצעה בצורה הטובה ביותר יום לפני הניסוי. המין זוהה ואורך הדג נמדד. דגי זברה בוגרים זכרים באורך סטנדרטי של 3.2-3.7 ס"מ הונחו במיכל ניסיוני נפרד. בנוסף, הדג צריך לעבור תקופת צום של 24 שעות כדי למנוע ספיגה במהלך הרדמה33. מיכל דגים (עם ארבעת קירותיו מכוסים בנייר לבן) עם מיכל מים עומד שהוקם צריך להיות מוכן לפני הניסוי כדי להפחית את הלחץ החיצוני ולעזור בתהליך ההתאוששות של דג הזברה. כל הכימיקלים הוכנו טריים לפני תחילת כל ניסוי מכיוון שהם יכולים להתדרדר במהירות עם הזמן ולהיות לא יציבים בטמפרטורת החדר 34,35.

Microinjection של 6-OHDA: טיפול נקי ועדין של דגי זברה צריך להתבצע לאורך כל התהליך כדי למנוע החדרת פגיעה מיותרת וזיהום לדגים. הדג צריך להיות ממוקם על גבי ספוג רטוב ונשמר במצב לח כדי למנוע ייבוש החוצה36. חתך קטן נעשה באמצעות מחט סטרילית עם כוח מוצק ומתאים כדי למנוע לחץ נוסף שעלול לפצח את גולגולת דג הזברה. חתך זה אמור לאפשר כניסה של המיקרו-קפילרי לחלל המוח. לאחר מכן הורידו את המיקרו-קפילרי עד לעומק של 1,200 מיקרומטר מנקודת הכניסה, שנמצאת בין שתי ההמיספרות - הטלנספלון והטקטום (איור 1B,C). נקודת הכניסה נבחרה בין ההמיספרות האלה כדי למנוע כל חתך נוסף של נוירונים37. טכניקה זו כללה את השימוש microinjector, הלחץ והתזמון של המסירה צריך להיות מכויל כדי להבטיח משלוח של 0.5 μL של neurotoxin. כיול זה יכול להתבצע על ידי מדידת גודל הטיפה שנוצרה על נייר המסנן38. התרגול שלנו כלל בדרך כלל את ההגדרה הבאה של פרמטרים לתכנות לפיהם עוצמת ההזרקה הורדה עם כל זריקה עוקבת (לחץ הזרקה: 4000 hPa, משך הזרקה: 0.3 s, ולחץ פיצוי: 10 hPa). על מנת למנוע את neurotoxin מדליפה מתוך חלל המוח, מרווח של 20 s הוחל בין הזרקה ונסיגה של microcapillary35. בשל הגודל הקטן של הנימים, microcapillary עשוי להיות חסום לאחר כל זריקה. ככזה, microcapillary צריך להיות בעצם הסמיק לפני הזריקה הבאה כדי לנקות את החסימה ולהבטיח כי עוצמת הזריקה מספיק כדי להניב את הנפח הרצוי של 0.5 μL של 6-OHDA. לאחר מכן, הדגים יועברו למיכל התאוששות המתוחזק ב-28 ± 1.0 מעלות צלזיוס. אם הדג לא מצליח להתאושש בתוך 30 שניות, לשטוף את הזימים והפה שלה עם מים מזוקקים עד התאוששות מלאה של תנועות שרירים מתרחשת.

הערכת לוקומוטור: כדי להבטיח הערכה טובה של לוקומוטור על דגי זברה בוגרים המושרים על ידי 6-OHDA, המחקר ההתנהגותי צריך להתבצע באותה מסגרת זמן עבור כל נקודת זמן. כל מחקר התנהגותי צריך לאפשר מינימום של 2 דקות תקופת התאקלמות ויש לבצע בתוך 4 h39. הניסוי הנוכחי בוצע בשעות הבוקר המוקדמות בין השעות 08:00-12:00, כאשר דגי הזברה היו פעילים יותר בתקופה זו 40. יש צורך בתקופת התאקלמות ארוכה יותר אם דגי הזברה מראים התנהגות חריגה כלשהי עם סימנים ברורים של מתח וחרדה (הקפאה והתנהגות בלתי יציבה)41. עם זאת, כדי למנוע חוסר עקביות בהתנהגות השחייה של הקבוצה הקודמת והאחרונה של הקלטות, ההתאקלמות לא תעלה על 10 דקות 30. עבור מבחן השדה הפתוח, טנק ניסיוני בכל גודל, צבע, צורה ומרקם יכול לשמש להקלטות הנעות בין מינימום של 5 ל 30 דקות42,43. התנהגות דגי הזברה מושפעת מאוד מטמפרטורת סביבתו. תנודות קטנות של יותר מ 4 °C (65 °F) יכול להשפיע מאוד על מהירות השחייה44. לפיכך, טמפרטורת המים במיכל הניסוי צריכה להישמר בקפדנות תחת טמפרטורה מבוקרת של 28 ± 1.0 מעלות צלזיוס באמצעות תנור מסחרי, ומפלס המים נשמר סביב 12 ס"מ עמוק לאורך כל הניסוי. קירות הטנק היו מכוסים בנייר לבן כדי ליצור ניגודיות בין הנבדק לזירה הניסיונית, כמו גם כדי להפחית גירויים חיצוניים שעלולים לגרום לתגובה לא מוכחת של נבדקים45. הדגים מכל קבוצה נבדקו בנפרד בהתאם לנוהג הסטנדרטי הנוכחי למחקר נוירו-בהביאורלי של דגי זברה23,37,46. בהתחשב בנטייה של דגי הזברה לאינטראקציות חברתיות, קיים חשש שבידוד במהלך תקופת הבדיקות עלול להשפיע על התנהגותם47. עם זאת, ההתקנה הניסיונית הנוכחית הוגבלה למקסימום של 10 דקות לכל ניסיון ותקופת בידוד קצרה זו נמצאה ללא כל השפעה על פעילות הלוקומוטור של דגי זברה בוגרים48. על מנת לספק איסוף נתונים מדויק למחקר ההתנהגותי, ההערכה בוצעה על ידי בחירה אקראית של דגי הזברה מקבוצות ניסוי שונות (כלומר, לסירוגין שני דגי זברה מקבוצת הנגע המזויף ו- 6-OHDA עד n = 6) במהלך מבחן הטנק הפתוח49. הסרטונים המוקלטים נותחו באמצעות מערכת מעקב וידאו המשמשת בדרך כלל למעקב התנהגותי של מכרסמים. כמו דגי זברה הוא מודל בעלי חיים המתהווה, הבדיקות ההתנהגותיות שנערכו באמצעות דגי זברה מותאמים בדרך כלל מן הספרות המדעית הוקמה על מכרסמים50. כאן הדגמנו את היכולת של תוכנת מעקב הווידאו לעקוב באופן אוטומטי אחר דגי זברה בזירת הניסויים ולחשב ביעילות את הפרמטרים הרצויים. תוכנת מעקב הווידאו בלטה מהתוכנות הזמינות האחרות בשל מגוון קבצי הווידאו הנתמכים על ידי התוכנה, מהדורות חבילת עדכון רגילות ותמיכה הניתנת עבור מערכות הפעלה שונות51.

אחת המגבלות של מודלים קיימים של PD המבוססים על בעלי חיים היא היעדר קווי דמיון מכאניסטיים המחקים את הפגיעה המוטורית כפי שנצפתה לאחר אובדן עצבי דופאמין בסובסטנציה ניגרה pars compacta של המוח האנושי52. הופעתו של מודל PD המבוסס על דגי זברה למבוגרים עשויה, עם זאת, לטפל במגבלה מסוימת זו. כפי שנצפה במחקר הנוכחי, מהירות השחייה המופחתת תואמת את הממצאים התאיים הקודמים שלנו לפיהם יותר מ -85% אובדן עצבי דופאמין בדיאנספלון הגחון של דגי זברה בוגרים 6-OHDA המושרה שלושה ימים לאחר מכן22. נראה כי אבלציה ספציפית של נוירונים דופאמין בתחום זה של עניין נדרש לשבש את איתות המנוע היורד מהמוח, גרימת איטיות בתנועה53. L. J. קולדוול, et al.23 שביצע הזרקת ICV של 6-OHDA בטקטום האופטי (נקודת הכניסה), למשל, הבחין רק שינויים בלהקות דגי זברה והתנהגות ההזדווגות. אבלציה של DpN ב Dn הגחון הוא חיוני כמו האוכלוסייה של DpN ב Dn של דגי זברה בוגרים פועל כמקור הדופמין היחיד עבור נוירונים מוטוריים דגי זברה. זה מקביל לסובסטנציה האנושית ניגרה54. המחקר הנוכחי גם הבחין במהירות שחייה מהירה יותר ומרחק ארוך יותר נסע על ידי דגי זברה נגע בנקודות זמן מאוחרות יותר לאחר מכן, המציין המשך ובסופו של דבר שיקום מלא של איתות דופמין השולט בהתנהגות השחייה של דגי זברה. ממצאים אלה אימתו אפוא את היכולת של נוירונים דופאמין שחודשו לאחרונה להחזיר את הפעילות התפקודית שלהם בדגי זברה בוגרים נגועים.

מסלול היישום הנוכחי של 6-OHDA כלל פרדיגמת הזרקה פולשנית מעט שדרשה החדרה של מיקרו-קפילרי עמוק לתוך המוח, לכיוון אזור הנגע של Dn הגחוני. שיטה זו היא מעט מייגעת בהשוואה להזרקה היקפית ויש לבצע אותה תוך 3 דקות לדגים כדי להפחית את הסיכון לתמותה לאחר הזרקה. ככזה, תרגול מוקדם של הזרקת ICV נדרש כדי להבטיח כי השיטה יכולה להתבצע בתוך משך הקריטי באזור היעד (Dn). על מנת להשיג הערכה לוקומוטורית תקפה של דגי זברה בוגרים, בדיקת הטנק הפתוח מוגבלת ל -4 שעות בלבד של תקופת הערכה ליום. לפיכך, תכנון מוקדם נדרש במסגרת ניסיונית הכוללת מספר רב של בעלי חיים לפיה יש להקצות זמן נוסף כדי להבטיח כי ההתקנה עמדה בדרישות המינימום עבור כל הקלטה (למשל, טמפרטורה ועומק מים). תכנון זה חיוני במיוחד בניסויים מבוססי זמן כגון זה של המחקר הנוכחי, שכן כל הקלטה צריכה להתבצע על נקודת הזמן המיועדת. ההתקנה הניסיונית הנוכחית הוגבלה למחקר של שני פרמטרי שחייה שהעריכו באופן ספציפי את התפקוד המוטורי של דגי הזברה. עם זאת, פרמטרים התנהגותיים אחרים כגון להקה והתנהגות דמוית חרדה דרשו הגדרות ניסיוניות אחרות ושיטות אנליטיות שונות. לסיכום, זוהי שיטה ניתנת לשחזור ושימושית לחקר תהליך ה-DpN neuroregeneration בדגי זברה בוגרים המושרים ב-6-OHDA, אשר עשויים להניב תובנות חשובות על אסטרטגיות טיפול בהחלפת תאים נגד PD.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים מצהירים שאין ניגודי עניינים.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי המשרד להשכלה גבוהה מלזיה במסגרת תוכנית מענק המחקר הבסיסי [600-IRMI/FRGS 5/3 (033/2019)].

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Materials
6-Hydroxydopamine (6-OHDA) Sigma-Aldrich, Missouri, USA 162957
Ascorbic acid Thermo Fisher Scientific, California, USA FKC#A/8882/53
Disposable pasteur pipette, 3 mL Thermo Fisher Scientific, California, USA FB55348
Microcentrifuge tube, 0.2 mL Eppendorf, Hamburg, Germany 30124332
Nice conical flask, 100 mL Evergreen Engineering & Resources, Semenyih, Malaysia SumYau0200
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma-Aldrich, Missouri, USA P4417
Sodium bicarbonate Sigma-Aldrich, Missouri, USA S5761
Sodium chloride Merck, Darmstadt, Germany 106404
Stereomicroscope Nikon, Tokyo, Japan SMZ745
Tricaine methanesulfonate (MS-222) Sigma-Aldrich, Missouri, USA E10521
Equipment
ANY-maze software Stoelting Co., Illinois, USA - version 7.0; video tracking software
Cubis II Micro Lab Balance Sartorius, Göttingen, Germany SE 2
FemtoJet IV microinjector Eppendorf, Hamburg, Germany 5192000035
Femtotip II, sterile injection capillary Eppendorf, Hamburg, Germany 5242957000
InjectMan 4 micromanipulator Eppendorf, Hamburg, Germany 5192000027
LED Portable Lamp MR. DIY, Selangor, Malaysia 9023251 20 mAh
PELCO Pro Superalloy, offset, fine tips Ted Pella, California, USA 5367-12NM
Shanda aquarium heater Yek Fong Aquarium, Selangor, Malaysia SDH-228
Thermometer Sera Precision, Heinsberg, Germany 52525
Video camera Nikon, Tokyo, Japan D3100

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dorsey, E. R., et al. regional, and national burden of Parkinson's disease, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet Neurology. 17 (11), 939-953 (2018).
  2. Maserejian, N., Vinikoor-Imler, L., Dilley, L. Estimation of the 2020 global population of Parkinson's Disease (PD). Movement Disorder Council. 35 (1), 198 (2020).
  3. Hirsch, L., Jette, N., Frolkis, A., Steeves, T., Pringsheim, T. The Incidence of Parkinson's Disease: A Systematic Review and Meta-Analysis. Neuroepidemiology. 46 (4), 292-300 (2016).
  4. Przedborski, S. The two-century journey of Parkinson disease research. Nature Review Neuroscience. 18 (4), 251-259 (2017).
  5. Cookson, M. R. Disease-Modifying Targets in Neurodegenerative Disorders. , Academic Press. Ch. 6 157-174 (2017).
  6. Jamebozorgi, K., et al. Cellular and molecular aspects of Parkinson treatment: Future therapeutic perspectives. Molecular Neurobiology. 56 (7), 1-13 (2018).
  7. Parmar, M., Grealish, S., Henchcliffe, C. The future of stem cell therapies for Parkinson disease. Nature Review Neuroscience. 21 (1), 1-13 (2020).
  8. Foltynie, T. Can Parkinson's disease be cured by stimulating neurogenesis. Journal of Clinical Investigation. 125 (3), 978-980 (2015).
  9. Winner, B., Winkler, J. Adult neurogenesis in neurodegenerative diseases. Cold Spring Harbour Perspect Biology. 7 (4), 021287 (2015).
  10. Huang, C., et al. Nerve guidance conduits from aligned nanofibers: improvement of nerve regeneration through longitudinal nanogrooves on a fiber surface. ACS Applied Materials & Interfaces. 7 (13), 7189-7196 (2015).
  11. Alunni, A., Bally-Cuif, L. A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates. Development. 143 (5), 741-753 (2016).
  12. Dietz, V., Schwab, M. E. From the rodent spinal cord injury model to human application: promises and challenges. Journal of Neurotrauma. 34 (9), 1826-1830 (2017).
  13. La Rosa, C., Bonfanti, L. Brain plasticity in mammals: An example for the role of comparative medicine in the neurosciences. Frontiers in Veterinary Science. 5 (274), 1-8 (2018).
  14. Ferretti, P., Prasongchean, W. Neural Stem Cells in Development, Adulthood and Disease. , Springer. 1-21 (2015).
  15. Vijayanathan, Y., et al. Adult endogenous dopaminergic neuroregeneration against Parkinson's Disease: Ideal animal models. Neurotoxicity Research. 39 (2), 504-532 (2021).
  16. Vaz, R. L., Outeiro, T. F., Ferreira, J. J. Zebrafish as an animal model for drug discovery in Parkinson's disease and other movement disorders: a systematic review. Frontier Neuroscience. 9, 347 (2018).
  17. Nie, S., et al. Small molecule TrkB agonist deoxygedunin protects nigrostriatal dopaminergic neurons from 6-OHDA and MPTP induced neurotoxicity in rodents. Neuropharmacology. 99, 448-458 (2015).
  18. Schober, A. Classic toxin-induced animal models of Parkinson's disease: 6-OHDA and MPTP. Cell Tissue Research. 318 (1), 215-224 (2004).
  19. Betarbet, R., Sherer, T. B., Greenamyre, J. T. Animal models of Parkinson's disease. Bioessays. 24 (4), 308-318 (2002).
  20. Anichtchik, O. V., Kaslin, J., Peitsaro, N., Scheinin, M., Panula, P. Neurochemical and behavioural changes in zebrafish Danio rerio after systemic administration of 6-hydroxydopamine and 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine. Journal of Neurochemistry. 88 (2), 443-453 (2004).
  21. Fiametti, L. O., Correa, C. N., Castro, L. M. d Peptide profile of zebrafish brain in a 6-OHDA-induced Parkinson model. Zebrafish. 18 (1), 55-65 (2021).
  22. Vijayanathan, Y., et al. 6-OHDA-lesioned adult zebrafish as a useful Parkinson's disease model for dopaminergic neuroregeneration. Neurotoxicity Research. 32 (3), 496-508 (2017).
  23. Caldwell, L. J., et al. Regeneration of dopaminergic neurons in adult zebrafish depends on immune system activation and differs for distinct populations. Journal of Neuroscience. 39 (24), 4694-4713 (2019).
  24. Zupanc, G. K., Hinsch, K., Gage, F. H. Proliferation, migration, neuronal differentiation, and long-term survival of new cells in the adult zebrafish brain. Journal of Comparative Neurology. 488 (3), 290-319 (2005).
  25. Lawrence, C. The husbandry of zebrafish (Danio rerio): a review. Aquaculture Research. 269 (1-4), 1-20 (2007).
  26. Reed, B., Jennings, M. Guidance on the Housing and Care of Zebrafish Danio rerio. Royal Society for the Prevention of Cruelty to Animals (RSPCA). , 7-53 (2011).
  27. Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4196 (2012).
  28. Altenhofen, S., et al. Tebuconazole alters morphological, behavioral and neurochemical parameters in larvae and adult zebrafish (Danio rerio). Chemosphere. 180, 483-490 (2017).
  29. Bridi, D., Altenhofen, S., Gonzalez, J. B., Reolon, G. K., Bonan, C. D. Glyphosate and Roundup alter morphology and behavior in zebrafish. Toxicology. 392, 32-39 (2017).
  30. Wright, D., Krause, J. Repeated measures of shoaling tendency in zebrafish (Danio rerio) and other small teleost fishes. Nature Protocols. 1 (4), 1828-1831 (2006).
  31. Pienaar, I. S., Götz, J., Feany, M. B. Parkinson's disease: insights from non-traditional model organisms. Progress in Neurobiology. 92 (4), 558-571 (2010).
  32. Becker, T., Becker, C. G. Axonal regeneration in zebrafish. Current Opinion in Neurobiology. 27, 186-191 (2014).
  33. Collymore, C., Tolwani, A., Lieggi, C., Rasmussen, S. Efficacy and safety of 5 anesthetics in adult zebrafish (Danio rerio). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (2), 198-203 (2014).
  34. Katz, E. M., et al. The stability and efficacy of tricaine methanesulfonate (MS222) solution after long-term storage. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 59 (4), 393-400 (2020).
  35. Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a unilaterally-lesioned 6-OHDA mouse model of Parkinson's disease. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (60), e3234 (2012).
  36. Neiffer, D. L., Stamper, M. A. Fish sedation, analgesia, anesthesia, and euthanasia: considerations, methods, and types of drugs. Institute for Laboratory Animal Research. 50 (4), 343-360 (2009).
  37. Barbosa Júnior, A., et al. Zebrafish Protocols for Neurobehavioral Research. 66, Springer. 323-330 (2012).
  38. Cocchiaro, J. L., Rawls, J. F. Microgavage of zebrafish larvae. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (72), e4434 (2013).
  39. Stewart, A., et al. Modeling anxiety using adult zebrafish: a conceptual review. Neuropharmacology. 62 (1), 135-143 (2012).
  40. Sykes, D. J., Suriyampola, P. S., Martins, E. P. Recent experience impacts social behavior in a novel context by adult zebrafish (Danio rerio). PLOS ONE. 13 (10), 0204994 (2018).
  41. Collymore, C., Tolwani, R. J., Rasmussen, S. The behavioral effects of single housing and environmental enrichment on adult zebrafish (Danio rerio). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (3), 280-285 (2015).
  42. Grossman, L., et al. Characterization of behavioral and endocrine effects of LSD on zebrafish. Behavioural Brain Research. 214 (2), 277-284 (2010).
  43. Stewart, A., et al. Homebase behavior of zebrafish in novelty-based paradigms. Behavioural Processes. 85 (2), 198-203 (2010).
  44. Abozaid, A., Tsang, B., Gerlai, R. The effects of small but abrupt change in temperature on the behavior of larval zebrafish. Physiology and Behavior. 227, 113169 (2020).
  45. Sekhar, M., Singh, R., Bhat, A., Jain, M. Feeding in murky waters: acclimatization and landmarks improve foraging efficiency of zebrafish (Danio rerio) in turbid waters. Biology Letters. 15 (7), 1-5 (2019).
  46. Valcarce, D. G., Martínez-Vázquez, J. M., Riesco, M. F., Robles, V. Probiotics reduce anxiety-related behavior in zebrafish. Heliyon. 6 (5), 03973 (2020).
  47. Tunbak, H., Vazquez-Prada, M., Ryan, T. M., Kampff, A. R., Dreosti, E. Whole-brain mapping of socially isolated zebrafish reveals that lonely fish are not loners. eLife. 9, 55863 (2020).
  48. Shams, S., Seguin, D., Facciol, A., Chatterjee, D., Gerlai, R. Effect of social isolation on anxiety-related behaviors, cortisol, and monoamines in adult zebrafish. Behavioral Neuroscience. 131 (6), 492-504 (2017).
  49. Burghardt, G. M., et al. Perspectives - Minimizing observer bias in behavioral studies: A review and recommendations. Ethology. 118 (6), 511-517 (2012).
  50. Kalueff, A. V., et al. Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond. Zebrafish. 10 (1), 70-86 (2013).
  51. Franco-Restrepo, J. E., Forero, D. A., Vargas, R. A. A review of freely available, open-source software for the automated analysis of the behavior of adult zebrafish. Zebrafish. 16 (3), 223-232 (2019).
  52. Beal, M. F. Parkinson's disease: a model dilemma. Nature. 466 (7310), 8-10 (2010).
  53. Jha, U., Thirumalai, V. Neuromodulatory selection of motor neuron recruitment patterns in a visuomotor behavior increases speed. Current Biology. 30 (5), 788-801 (2020).
  54. Reimer, M. M., et al. Dopamine from the brain promotes spinal motor neuron generation during development and adult regeneration. Developmental Cell. 25 (5), 478-491 (2013).

Tags

מדעי המוח גיליון 178
הערכת לוקומוטור של מודל מחלת פרקינסון למבוגרים המושרה על ידי 6-הידרוקסידופמין
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Md Hamzah, N., Lim, S. M.,… More

Md Hamzah, N., Lim, S. M., Vijayanathan, Y., Lim, F. T., Abdul Majeed, A. B., Tan, M. P., Ramasamy, K. Locomotor Assessment of 6-Hydroxydopamine-induced Adult Zebrafish-based Parkinson's Disease Model. J. Vis. Exp. (178), e63355, doi:10.3791/63355 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter