Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Rose Bengal-mediert fotodynamisk terapi for å hemme Candida albicans

Published: March 24, 2022 doi: 10.3791/63558
Automatic Translation
*1,2, *3,4, 5, 3,6, 7, 7, 3, 3,8,9
1Institute of Clinical Medicine, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Ophthalmology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Dermatology, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 5Department of Dermatology, Fu Jen Catholic University Hospital, Fu Jen Catholic University, 6Institute of Clinical Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 7School of Medicine, National Cheng Kung University, 8Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 9Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University
* These authors contributed equally

Summary

Den økende forekomsten av legemiddelresistente Candida albicans er et alvorlig helseproblem over hele verden. Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) kan tilby en strategi for å bekjempe legemiddelresistente soppinfeksjoner. Den nåværende protokollen beskriver Rose bengal-mediert aPDT-effekt på en multidrug-resistent C. albicans stamme in vitro.

Abstract

Invasiv Candida albicans infeksjon er en betydelig opportunistisk soppinfeksjon hos mennesker fordi det er en av de vanligste kolonisatorene i tarmen, munnen, skjeden og huden. Til tross for tilgjengeligheten av antifungal medisinering forblir dødeligheten av invasiv candidiasis ~ 50%. Dessverre øker forekomsten av legemiddelresistente C. albicans globalt. Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) kan tilby en alternativ eller adjuvant behandling for å hemme C. albicans biofilmdannelse og overvinne narkotikaresistens. Rose bengal (RB)-mediert aPDT har vist effektiv celledrap av bakterier og C. albicans. I denne studien er effekten av RB-aPDT på multidrug-resistent C. albicans beskrevet. En hjemmelaget grønn lysdiode (LED) lyskilde er designet for å justere seg etter midten av en brønn på en 96-brønns plate. Gjærene ble inkubert i brønnene med forskjellige konsentrasjoner av RB og opplyst med varierende svingninger i grønt lys. Drapseffektene ble analysert ved platefortynningsmetoden. Med en optimal kombinasjon av lys og RB ble det oppnådd 3-logg veksthemming. Det ble konkludert med at RB-aPDT potensielt kan hemme legemiddelresistente C. albicans.

Introduction

C. albicans koloniserer i mage-tarm- og genitourinary trakter av friske individer og kan påvisnes som normal mikrobiota hos ca 50 prosent av individer1. Hvis en ubalanse er opprettet mellom verten og patogenet, er C. albicans i stand til å invadere og forårsake sykdom. Infeksjonen kan variere fra lokale slimhinneinfeksjoner til multippel organsvikt2. I en multisenterovervåkningsstudie i USA er rundt halvparten av isolasjonene fra pasienter med invasiv candidiasis mellom 2009 og 2017 C. albicans3. Candidemia kan være forbundet med høy sykelighet, dødelighet, langvarig sykehusopphold4. Us Centers of Disease Control and Prevention rapporterte at omtrent 7% av alle Candida blodprøver testet er resistente mot antifungal narkotika flukonazol5. Fremveksten av legemiddelresistente Candida-arter øker bekymringen for å utvikle en alternativ eller adjuvant terapi til antimykotiske midler.

Antimikrobiell fotodynamisk terapi (aPDT) innebærer å aktivere en bestemt fotosensibilisator (PS) med lys ved toppen absorpsjon bølgelengde av PS6. Etter eksitasjon overfører den begeistrede PS sin energi eller elektroner til de nærliggende oksygenmolekylene og går tilbake til bakken. Under denne prosessen dannes reaktive oksygenarter og singlet oksygen og forårsaker celleskade. aPDT har vært mye brukt til å drepe mikroorganismer siden 1990-tallet7. En av fordelene med aPDT er at flere organeller er skadet i en celle ved singlet oksygen og / eller reaktive oksygenarter (ROS) under bestråling; Dermed har motstand mot aPDT ikke blitt funnet før i dag. Videre rapporterte en nylig studie at bakteriene som overlevde etter aPDT ble mer følsomme for antibiotika8.

Lyskildene som brukes i aPDT inkluderer lasere, metall halogenlamper med filtre, nær-infrarødt lys og lysdiode (LED) 9,10,11,12. Laseren gir en høy lyseffekt, vanligvis større enn 0,5 W / cm2, som gjør det mulig å levere en høy lysdose på svært kort tid. Det har vært mye brukt i tilfeller der lengre behandlingstid er ubeleilig som aPDT for orale infeksjoner. Ulempen med en laser er at spotstørrelsen på belysningen er liten, alt fra noen få hundre mikrometer til 10 mm med en diffusor. Dessuten er laserutstyr dyrt og trenger spesifikk opplæring for å fungere. På den annen side er bestrålingsområdet til en metallhalogenlampe med filtre relativt større13. Lampen er imidlertid for heftig og dyr. LED-lyskilder har blitt mainstream av aPDT i dermatologisk felt fordi det er lite og billigere. Bestrålingsområdet kan være relativt stort med et utvalg av LED-lyspæren. Hele ansiktet kan belyses samtidig9. Likevel er de fleste, om ikke alle, LED-lyskilder som er tilgjengelige i dag, designet for klinisk bruk. Det er kanskje ikke egnet for eksperimenter i et laboratorium fordi det er plass-okkupasjon og dyrt. Vi utviklet en billig LED-matrise som er veldig liten og kan kuttes og monteres fra en LED-stripe. Lysdiodene kan monteres i forskjellige ordninger for ulike eksperimentelle design. Ulike betingelser for aPDT kan fullføres i en 96-brønns plate eller til og med en 384-brønns plate i ett eksperiment.

Rose bengal (RB) er et farget fargestoff som er mye brukt til å forbedre visualiseringen av hornhinnen skader i menneskelige øyne14. RB-mediert aPDT har vist drapseffekter på Staphylococcus aureus, Escherichia coli og C. albicans med omtrent sammenlignbar effektivitet som Toluidine blå O15. Denne studien viser en metode for å validere effekten av RB-aPDT på multidrug-resistente C. albicans.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. forberedelse av aPDT-systemet

  1. Klipp fire grønne lysdioder (lysdioder) fra en LED-stripe (se Materialtabell) og juster dem etter fire brønner på en 96-brønnsplate (figur 1).
    MERK: Lysdiodene ble ordnet i en 4 x 3 array. Baksiden av LED-lampen ble festet til en kjøleribbe for å spre varme under bestråling.
  2. Mål influensahastigheten11 på LED-lampen ved 540 nm med en lyseffektmåler (se Materialtabell). Se supplerende figur 1 for å sikre at led-lampens svingningshastighet er mellom 510-560 nm.
  3. Sett en elektrisk vifte ved siden av platen under bestråling for å opprettholde den konstante temperaturen (25 ± 1 °C)11. Se supplerende figur 2 for å sikre at den konstante temperaturen på mediet opprettholdes under bestråling.

2. Culturing av gjærformen av C. albicans

MERK: En multidrug-resistent C. albicaner (BCRC 21538/ATCC 10231), som er resistent mot de fleste antifungaler, inkludert flukonazol, brukes til forsøkene16.

  1. Bestem den antimykotiske legemiddelfølsomheten med en diskdiffusjonsmetode etter tidligere publisert rapport17.
  2. Vokse C. albicans i gjær, hyphae og pseudohyphae former avhengig av mikroøkologiske miljøer18.
    MERK: Hyphae- og pseudohyphaeformene er vanskelige for en nøyaktig beregning. Gjærformen kan beregnes nøyaktig under et mikroskop eller med strømningscytometri. Temperaturen under cellevekst bestemmer morfologien. Ved romtemperatur (25 °C) er nesten alle celler gjærform. En 4 timers kort inkubasjon av C. albicans ved 30 °C påvirket ikke gjærmorfologien.

3. aPDT på planktonisk C. albicans

  1. Isoler en enkelt koloni av C. albicans fra en agarplate med en steril sløyfe og legg den til et 3 ml gjærekstrakt peptone dextrose (YPD) medium (se Materialbord) i et sterilisert glassrør.
    1. Inkuber røret ved 25 ± 1 °C over natten (14-16 h) i en inkubator med en rotasjonshastighet på 155 o/min for å utvide C. albicans og opprettholde soppen i gjærform for nøyaktig kvantifisering.
  2. Fortynn nattkulturen med middels til en OD600-verdi på rundt 0,5 ved 30 ° C og roter med en hastighet på 155 rpm i 4 timer for å oppnå en loggvekstfase av C. albicans.
  3. Fortynn loggfasekulturen igjen med friskt YPD-medium til en OD600-verdi på 0,65 (rundt 1 x 107 kolonidannende enheter, CFU / ml). Bekreft den endelige konsentrasjonen ved seriell fortynning på en agarplate8.
  4. Forbered en lagerløsning (4%) av Rose bengal (RB) ved å oppløse pulveret i 1x PBS. Filtrer og steriliser det med et filter på 0,22 μm og oppbevar det ved 4 °C i mørket. Den endelige arbeidskonsentrasjonen av RB er 0,2%.
  5. Tilsett 111 μL 2 % RB til 1 ml logfase C. albicans i et 1,5 ml mikrosenterrør og samkultur på forskjellige tidspunkter (0, 15 og 30 min) ved romtemperatur for å forstå absorpsjonen av RB i cellene (figur 2).
  6. Vask samkulturen tre ganger med 1 ml 1x PBS med sentrifugering ved 16 100 x g i 2,5 min ved romtemperatur.
    MERK: aPDT inneholder fire forskjellige forhold: absolutt kontroll (ingen lyseksponering, ingen RB), mørk kontroll (ikke noe lys, men inkuberer med RB), lyskontroll (utsettes for lys uten RB), aPDT (utsettes for lys i nærvær av RB).
  7. Resuspend C. albicans i 1 ml 1x PBS og tildel dem i tre forskjellige brønner i en 96 brønnplate for hver tilstand. Juster brønnene etter LED-matrisen etter vask.
  8. Slå på den elektriske viften og lyset i lysutsatte grupper.
    MERK: En annen flyt (J/cm2) kan oppnås ved å utsette brønnene for varierende tidsperioder. For eksempel kommer en 16,7 min lyseksponering til 10 J / cm2 med en 10 mW / cm2 LED-lyspære.
  9. Etter bestråling, tilsett 20 μL av co-kulturløsningen fra en brønn til et 1,5 ml sentrifugerør som inneholder 180 μL 1x PBS for å forberede en 10x fortynning. Videre fortynnes ti ganger, deretter etter samme metode.
  10. Slipp tre dråper 20 μL av hver seriell fortynning på en kvadrant av en YPD agarplate for å oppnå tellbare kolonier platen. Beregn CFU/ml ved å multiplisere koloniene med fortynningsfaktorene3.

4. Statistisk analyse

  1. Analyser de innsamlede dataene ved hjelp av en graf- og statistikkprogramvare (se Materialfortegnelser).
  2. Skildre data med gjennomsnitt ± standardfeil av gjennomsnittet. Utfør en toveis ANOVA-analyse av varians8 for å evaluere signifikante forskjeller mellom de ulike testbetingelsene.
  3. Utfør Tukeys multipareringstester for parvise sammenligninger8. For hver forskjellige behandling, utfør minst tre uavhengige eksperimenter. Vurder p-verdi < 0,05 statistisk signifikant.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figur 1 viser aPDT-systemet som brukes i denne studien. Siden høye temperaturer kan forårsake betydelig celledød, avkjøles LED-matrisen av en elektrisk vifte, og en kjøleribbe brukes under bestråling for å opprettholde en konstant temperatur ved 25 ± 1 °C. Varmeeffekten kan diskonteres. Å ha en jevn lysfordeling er også en viktig avgjørende faktor for en vellykket aPDT; Derfor er det viktig å justere LED-lyspæren til brønnen nøyaktig under belysning. På grunn av lysstyrken på LED-lampen må solbriller utstyres før du slår på lyset.

C. albicans er farget umiddelbart med RB som visualisert av rød fluorescens under fluorescerende mikroskopi (0 min i figur 2). Det kan ses at RB kommer inn i cellene på en tidsavhengig måte (figur 2). Studien brukte en 15 min RB inkubasjon der de fleste cellene etter 15 min ble farget med RB. En høyere konsentrasjon av RB fører til en sterkere fluorescens, og produserer flere frie radikaler for å drepe sopp. Likevel kan det også føre til betydelig celledød i normale celler; Derfor brukes 0,2% RB-konsentrasjon ofte i klinikker. Dermed ble den nøyaktige konsentrasjonen valgt i denne studien.

PDT innebærer aktivering av RB med lys. Når den aktiverte RB går tilbake til sin bakketilstand, overfører den energien og elektronene til det nærliggende oksygenet for å generere frie radikaler og singlet oksygen, noe som resulterer i celledød. Figur 3 viser ingen celledød under betingelse av ingen bestråling eller fravær av RB. C. albicaner ble hemmet på en lysdoseavhengig måte etter grønn lysbestråling i nærvær av 0,2 % RB (figur 3). Eksponering av sopp til grønt lys med 30 J/cm2 resulterte i en 4-logg (99,99%) hemming av cellevekst.

Figure 1
Figur 1: Det fotodynamiske systemet. (A) Et grønt LED-array ble festet til en metallvarmeavleder for å spre varmen under bestråling. En elektrisk vifte ble satt ved siden av lyskilden for å holde temperaturen konstant ved 25 ± 1 °C. (B) Lyset ble slått på. (C) Brønnene på en 96 brønnplate var på linje med midten av LED-lampen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 2
Figur 2: Den tidsavhengige studien av Rose bengal som kommer inn i C. albicans. Bright-field (A-D) og fluorescensbilder (E-H) av C. albicans etter 0-30 min co-cultured med 0,2% Rose bengal (RB). (A) og (E) Kontroll uten RB-samkulturert. (B) og (F) Cellene ble umiddelbart farget med 0,2% RB. (C) og (G) Etter 15 min kultur viste de fleste celler rød fluorescens, noe som indikerer RB inne i cellene. (D) og (H) Sterkere fluorescens av RB ble notert med en 30 min inkubasjon. Skalalinje = 50 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 3
Figur 3: Antimikrobielle fotodynamiske behandlingseffekter på multidrug-resistente C. albicans. Veksthemmingen av celler avhenger av lysstrømmen. UtsetteR C. albicans for en fluens på 10 J/cm2 hemmet cellevekst med 1,5 logger, med 2 logger med 20 J/cm2, og 4 logger med henholdsvis 30 J/cm2 i nærvær av 0,2% Rose bengal. -RB, uten Rose bengal inkubasjon; +RB, samkulturert med Rose bengal i 15 min. Data er midler ± SEM av tre separate eksperimenter utført i duplikat. p-verdier er angitt i figuren (Tukeys multipareringstester, toveis ANOVA). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Supplerende figur 1: LED-utgangsspekteret. Flytfrekvensen ble målt hver 2 nm fra 510-560 nm med en kraftmåler. Data samles fra to uavhengige eksperimenter med triplikatmålinger. Klikk her for å laste ned denne filen.

Supplerende figur 2: Temperaturen på mediet under bestråling. En termokobling ble satt inn i hver brønn av en 96-brønns plate fylt med 100 μL kjøttkraft for å måle temperaturen. Temperaturen var konstant ved 25 ± 1 °C. Data samles fra dupliserte eksperimenter med triplikatbrønner. Klikk her for å laste ned denne filen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Oppmuntrende resultater av kliniske anvendelser av RB-PDT for sopp keratitt har blitt rapportert nylig19. Absorpsjonstoppen til RB er på 450-650 nm. Det er viktig å bestemme lyskildens flythastighet for en vellykket aPDT. Høy influensa (vanligvis >100 J/cm2) er nødvendig for å behandle kreftceller, mens en lavere influensa forventes å behandle infiserte lesjoner6. Høy influensa betyr lang eksponeringstid som kanskje ikke er praktisk i kliniske omgivelser. For behandling av mykotisk keratitt er det avtalt en 5,4 J/cm2 i oftalmologisk samfunn20. En lang inkubasjonstid for RB er også ubeleilig for en pasient å få aPDT-behandling. Dermed ble en 15 min inkubasjonstid valgt for videre eksperimenter.

Noen trinn er avgjørende for et vellykket eksperiment. Agarplatene som ble brukt til soppkultur ble tørket i 15-20 min i en lamellstrømningshytte med viften slått på for å redusere fuktighet på overflaten. En fuktig overflate vil tillate strømmen av soppdråpene å blande, og forhindre dannelsen av en enkelt koloni.

Å utføre alle eksperimenter i svakt lys er viktig for å forhindre at RB blir fotobleaching. Den elektriske kretsen var i en parallell forbindelse, slik at hvis en pause skjedde i en av kretsene, ville de resterende apparatene ikke bli påvirket. Hvis det er resultater som utenfor rekkevidde av andre, kan matrisen kontrolleres først for å sikre at alle LED-lyspærer er i god funksjon.

En begrensning ved å bruke en LED-lyskilde er temperaturavhengigheten. I en LED produseres ikke varme av selve LED-lyspæren, men genereres ved halvlederkrysset i enheten9. Siden overdriving lysdioder over deres nominelle strøm fremkaller stigende av koblingstemperaturen, noe som til slutt fører til for tidlig svikt i lyspæren, er det nødvendig å utstyre enheten med en metallvarmeavleder for å gi passende kjøling av krysset. En annen begrensning av LED-arrayets nåværende design er det begrensede området opplyst av hver LED-lyspære, som bare har plass til en enkelt brønn på en 96-brønnsplate. Hvis et større belysningsområde er nødvendig, er et annet arrangement av LED-pærer med riktig tilsvarende avstander over eller under platen nødvendig for å oppnå jevn belysning.

Fordelene med denne studiedesignen er det enkle og rimelige oppsettet av det fotodynamiske systemet for aPDT-eksperimenter. Den kan brukes i eksperimenter om soppinfeksjoner. Virus og bakterier kan også testes i samme system. LED-lysstripen kan velges fra en annen lysfarge for å korrelere med absorpsjonstoppene til forskjellige lyssensibiliserere, alt fra synlig til nær-infrarødt lysspekter. De kan enkelt kjøpes fra markedet. Stripen kan kuttes og monteres i forskjellige matriser for å justeres etter en 96-brønnsplate for en høy gjennomstrømningsanalyse. Bruken av en 96-brønnsplate gjør det mulig med forskjellige testforhold samtidig for å spare tid og plass i laboratoriet.

Til slutt er det etablerte systemet i denne studien enkelt, enkelt og allsidig å undersøke ulike fotodynamiske effekter på ulike mikroorganismer og celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer ingen interessekonflikt.

Acknowledgments

Dette arbeidet har fått støtte fra Center of Applied Nanomedicine, National Cheng Kung University fra Featured Areas Research Center Program innenfor rammen av Higher Education Sprout Project av Ministry of Education (MOE), og Ministry of Science and Technology, Taiwan [MOST 109-2327-B-006-005] til TW Wong. J.H. Hung anerkjenner finansiering fra National Cheng Kung University Hospital, Taiwan [NCKUH-11006018], og [MOST 110-2314-B-006-086-MY3].

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL microfuge tube Neptune, San Diego, USA #3745.x
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap Falcon, USA #352235
96-well plate Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan #16196
Aluminum foil sunmei, Tainan, Taiwan
Aluminum heat sink Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan BK-T220-0051-01 Disperses heat from the LED array.
Centrifuge Eppendorf, UK 5415R
Graph pad prism software GraphPad 8.0, San Diego, California, USA graphing and statistics software
Green light emitting diode (LED) strip Nanyi electronics Co., Ltd., Tainan, Taiwan 2835 Emission peak wavelength: 525 nm, Viewing angle: 150°; originated from https://www.aliva.com.tw/product.php?id=63
Incubator Yihder, Taipei, Taiwan LM-570D (R)
Light power meter Ophir, Jerusalem, Israel PD300-3W-V1-SENSOR,
Millex 0.22 μm filter Merck, NJ, USA SLGVR33RS
Multidrug-resistant Candida albicans Bioresource Collection and Research CenterBioresource, Hsinchu, Taiwan BCRC 21538/ATCC 10231 http://catalog.bcrc.firdi.org.tw/BcrcContent?bid=21538
OD600 spectrophotometer Biochrom, London, UK Ultrospec 10
Rose Bengal Sigma-Aldrich, MO, USA 330000 stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tube Sunmei Co., Ltd., Tainan, Taiwan AK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium HIMEDIA, India M1363

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Naglik, J. R., Challacombe, S. J., Hube, B. Candida albicans secreted aspartyl proteinases in virulence and pathogenesis. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 67 (3), 400-428 (2003).
  2. Pappas, P. G., et al. Clinical practice guideline for the management of candidiasis: 2016 update by the Infectious Diseases Society of America. Clinical Infectious Diseases. 62 (4), 1-50 (2016).
  3. Ricotta, E. E., et al. Invasive candidiasis species distribution and trends, United States, 2009-2017. Journal of Infectious Diseases. 223 (7), 1295-1302 (2021).
  4. Koehler, P., et al. Morbidity and mortality of candidaemia in Europe: an epidemiologic meta-analysis. Clinical Microbiology and Infection. 25 (10), 1200-1212 (2019).
  5. Toda, M., et al. Population-based active surveillance for culture-confirmed candidemia - four sites, United States, 2012-2016. Morbidity and Mortality Weekly Report Surveillance Summaries. 68 (8), 1-15 (2019).
  6. Lee, C. N., Hsu, R., Chen, H., Wong, T. W. Daylight photodynamic therapy: an update. Molecules. 25 (21), 5195 (2020).
  7. Wainwright, M. Photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT). Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42 (1), 13-28 (1998).
  8. Wong, T. W., et al. Indocyanine green-mediated photodynamic therapy reduces methicillin-resistant staphylococcus aureus drug resistance. Journal of Clinical Medicine. 8 (3), 411 (2019).
  9. Kim, M. M., Darafsheh, A. Light sources and dosimetry techniques for photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 96 (2), 280-294 (2020).
  10. Wong, T. W., Sheu, H. M., Lee, J. Y., Fletcher, R. J. Photodynamic therapy for Bowen's disease (squamous cell carcinoma in situ) of the digit. Dermatologic Surgery. 27 (5), 452-456 (2001).
  11. Wong, T. W., et al. Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light. Dermatologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).
  12. Stasko, N., et al. Visible blue light inhibits infection and replication of SARS-CoV-2 at doses that are well-tolerated by human respiratory tissue. Scientific Reports. 11 (1), 20595 (2021).
  13. Crosbie, J., Winser, K., Collins, P. Mapping the light field of the Waldmann PDT 1200 lamp: potential for wide-field low light irradiance aminolevulinic acid photodynamic therapy. Photochemistry and Photobiology. 76 (2), 204-207 (2002).
  14. Feenstra, R. P., Tseng, S. C. Comparison of fluorescein and rose bengal staining. Ophthalmology. 99 (4), 605-617 (1992).
  15. Demidova, T. N., Hamblin, M. R. Effect of cell-photosensitizer binding and cell density on microbial photoinactivation. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49 (6), 2329-2335 (2005).
  16. Shahid, H., et al. Duclauxin derivatives from fungi and their biological activities. Frontiers in Microbiology. 12, 766440 (2021).
  17. Arendrup, M. C., Park, S., Brown, S., Pfaller, M., Perlin, D. S. Evaluation of CLSI M44-A2 disk diffusion and associated breakpoint testing of caspofungin and micafungin using a well-characterized panel of wild-type and fks hot spot mutant Candida isolates. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (5), 1891-1895 (2011).
  18. Mukaremera, L., Lee, K. K., Mora-Montes, H. M., Gow, N. A. R. Candida albicans yeast, pseudohyphal, and hyphal morphogenesis differentially affects immune recognition. Frontiers in Immunology. 8, 629 (2017).
  19. Hung, J. H., et al. Recent advances in photodynamic therapy against fungal keratitis. Pharmaceutics. 13 (12), 2011 (2021).
  20. Martinez, J. D., et al. Rose Bengal photodynamic antimicrobial therapy: a pilot safety study. Cornea. 40 (8), 1036-1043 (2021).

Tags

Immunologi og infeksjon utgave 181
Rose Bengal-mediert fotodynamisk terapi for å hemme <em>Candida albicans</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., … More

Hung, J. H., Wang, Z. X., Lo, Y. H., Lee, C. N., Chang, Y., Chang, R. Y., Huang, C. C., Wong, T. W. Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans. J. Vis. Exp. (181), e63558, doi:10.3791/63558 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter