Summary
O presente protocolo descreve uma injeção de dois pontos de linfosfatilcolina através de um quadro estereotaxico para gerar um modelo de desmielinização estável e reprodutível em camundongos.
Abstract
A sinalização linfosfolipídida mediada por receptores contribui para a fisiopatologia de diversas doenças neurológicas, especialmente a esclerose múltipla (EM). Lisofosphatidylcholina (LPC) é uma lisofosfosfolipídio endógena associada à inflamação, e pode induzir danos rápidos com toxicidade aos lipídios de mielina, levando à desmielinização focal. Aqui, um protocolo detalhado é apresentado para injeção estereotática de LPC de dois pontos que poderia causar diretamente desmielinização grave e replicar a lesão de desmielinização experimental rapidamente e stably em camundongos por procedimento cirúrgico. Assim, esse modelo é altamente relevante para as doenças de desmielinização, especialmente a ESM, podendo contribuir para o avanço clínico da pesquisa. Além disso, os métodos de coloração azul rápido e imunofluorescência e Luxol foram usados para retratar o curso do tempo da desmielinização no caloso corpus de camundongos injetados com LPC. Além disso, o método comportamental foi utilizado para avaliar a função cognitiva dos camundongos após a modelagem. No geral, a injeção de dois pontos de linfosfatidylcholina através de um quadro estereotaxico é um método estável e reprodutível para gerar um modelo de dessalinização em camundongos para estudos posteriores.
Introduction
A sinalização linfosfolipídica mediada por receptores envolve diversos processos fisiológicos de quase todos os sistemasde órgãos 1. No sistema nervoso central (SNC), essa sinalização desempenha um papel crítico nas patógenias de doenças neurológicas autoimunes, como a esclerose múltipla (EM). A esclerose múltipla é uma doença imunomediada crônica caracterizada por desmielinização patológica e resposta inflamatória, causando disfunção neurológica e comprometimento cognitivo 2,3. Após uma recaída contínua e a remissão durante a doença precoce, a maioria dos pacientes eventualmente evolui para o estágio secundário-progressivo, o que poderia causar danos irreversíveis ao cérebro e incapacidaderesultante 4. Acredita-se que a marca patológica do curso secundário-progressivo é a desmielinização de placas causadas por lesões inflamatórias5. Os tratamentos existentes para ESM podem reduzir significativamente o risco de recaída. No entanto, ainda não há terapia eficaz para danos desmielinizados de longo prazo causados pela ESMprogressiva 6. Assim, é necessário um modelo estávelmente estabelecido e facilmente reprodutível para estudar terapêuticas pré-clínicas que se concentrem na degeneração da matéria branca.
Demielinização e remiellinação são dois grandes processos patológicos no desenvolvimento da esclerose múltipla. A demyelinação é a perda da baia de mielina em torno de axônios induzidos por microglia com fenótipos pró-inflamatórios7, e leva à condução lenta de impulsos nervosos e resulta na perda de neurônios e distúrbios neurológicos. A remielinação é uma resposta endógena de reparo mediada por oligodenrócitos, onde distúrbios podem levar à neurodegeneração e comprometimento cognitivo8. A resposta inflamatória é crucial para todo o processo, afetando tanto o grau de dano e reparação da mielina.
Portanto, um modelo animal estável de desmielinização inflamatória persistente é significativo para a exploração de estratégias terapêuticas para MS. Devido à complexidade da ESM, vários tipos de modelos animais foram estabelecidos para imitar lesões desmielinizadoras in vivo, incluindo encefalomielite autoimune experimental (EAE), modelos tóxicos-desmielinizadores, cuprizone (CPZ) e linfosfatilina (LPC)9 . LPC é um lysofosfolipídio endógeno associado à inflamação, e pode induzir danos rápidos com toxicidade aos lipídios de mielina, levando à dessalinização focal. Com base em relatórios anteriores e pesquisas10,11, é fornecido um protocolo detalhado de injeção de dois pontos com algumas modificações. Geralmente, o modelo clássico de injeção LPC de um ponto só produz desmielinização local no local da injeção e é frequentemente acompanhado de remielinização espontânea12,13. No entanto, o modelo LPC de injeção de dois pontos pode demonstrar que o LPC pode induzir diretamente a desmielinização no calosum do corpus do mouse e causar desmielinização mais durável com pouca regeneração de mielina.
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Protocol
Todos os procedimentos animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidados Com Animais da Tongji Medical College, Universidade de Ciência e Tecnologia de Huazhong, China. Foram utilizados para o presente estudo camundongos adultos C57BL/6 masculinos e femininos (tipo selvagem, WT; 20-25 g; 8-10 semanas de idade). Os camundongos foram obtidos a partir de fontes comerciais (ver Tabela de Materiais). Os camundongos foram alojados em uma instalação animal específica sem patógenos (SPF) com água e alimentos fornecidos ad libitum. Eles foram mantidos em um período alternado de 12h de ciclo claro e escuro nas condições padrão de temperatura de 22 °C e umidade relativa de 55%-60%.
1. Preparação da solução LPC
- Dissolva 25 mg de pó LPC (ver Tabela de Materiais) com 250 μL de solução mista de clorofórmio e metanol (1:1) para fazer uma solução LPC de 10% e transferi-la para um tubo de centrífuga de 500 μL.
NOTA: Se o LPC não estiver completamente dissolvido, coloque o tubo centrífuga em um limpador ultrassônico e ultrassônico a 40 kHz por ~1h para obter uma solução uniforme. - Divida a solução em 3 μL/tubo e armazene a −80 °C.
NOTA: A solução pode ser armazenada por ~2 anos. - Antes da cirurgia, diluir a solução (passo 1.2.) com 27 μL de solução naCl de 0,9% e manter a solução em um banho de água de temperatura constante a 37 °C.
NOTA: Prepare a solução pouco antes de iniciar a injeção.
2. Preparação cirúrgica
- Use uma agulha de 32 G, 2 na agulha para conectar a uma seringa de 5 μL (ver Tabela de Materiais). Certifique-se de que a seringa microliter está desobstruída. Retire 5 μL da solução LPC para a preparação da injeção.
- Anestesiar o rato em uma câmara de indução conectada a um vaporizador de isoflurano com 3% de isoflurane misturado com 100% de oxigênio a uma taxa de cerca de 0,3 L/min.
- Confirme a profundidade da anestesia pela falta de reflexo do dedo do sol enquanto a respiração está lisa.
- Raspe a cabeça do mouse entre as orelhas usando uma máquina de barbear elétrica. Aplique colírios lubrificantes para evitar o ressecamento da córnea durante o procedimento.
- Em seguida, posicione o mouse em uma estrutura estereotaxic (ver Tabela de Materiais) com o lado dorsal para cima, e fixe a cabeça com um cone de nariz e grampo de dente. Mantenha a anestesia com 1,2%-1,6% isoflurane pelo nariz.
NOTA: A concentração de isoflurano pode ser ajustada de acordo com o estado respiratório dos camundongos.
3. Procedimento cirúrgico
NOTA: Os animais são colocados em uma almofada de aquecimento durante todos os procedimentos.
- Fixar o mouse no aparelho estereotaxico com barras de ouvido bilaterais. Certifique-se de que as barras de ouvido estão nivelados e a cabeça está horizontal e estável.
- Desinfete a pele na cabeça limpando várias vezes com iodophor seguido de álcool em movimento circular. Em seguida, use um bisturi para cortar uma pequena incisão de cerca de 1,5 cm ao longo da linha média do couro cabeludo para expor o crânio.
- Limpe o crânio com um cotonete mergulhado em peróxido de hidrogênio de 1% até que a bregma, lambda e fontanelle posterior sejam expostas. Coloque a seringa no aparelho estereotaxic.
NOTA: Use peróxido de hidrogênio com cuidado e evite tocar nos tecidos circundantes. - Certifique-se de posicionamento horizontal da cabeça do animal (tanto dianteira quanto traseira e esquerda e direita).
- Ajuste o botão do eixo Z do quadro estereotaxico para que a ponta da agulha e o crânio toquem sem dobrar e, em seguida, meça a coordenada do eixo Z. Verifique as coordenadas Z de bregma e fontanelle posterior.
- Ajuste a barra de ouvido para que a diferença entre as coordenadas Z de bregma e fontanelle posterior não seja superior a 0,02 mm. Em seguida, siga o mesmo método para medir as coordenadas Z das posições correspondentes nos lados esquerdo e direito da linha média. Ajuste a barra de ouvido para garantir que a esquerda e a direita estejam no mesmo nível.
- Localize o corpus calosum. Defina a origem XYZ como bregma.
NOTA: O primeiro local de injeção é 1,0 mm lateral para o bregma, 2,4 mm de profundidade e 1,1 mm anterior. O segundo local de injeção é 1,0 mm lateral para o bregma, 2,1 mm de profundidade e 0,6 mm anterior. Por exemplo, a coordenada do bregma é (0,0,0). Meça a coordenada Z do local correspondente marcado como (-1, 1.1, X) e (-1, 0,6, Y). Pode-se determinar que a primeira coordenada do local de injeção do corpus callosum é (-1, 1.1, −[X + 2.4]), e o segundo local de injeção é (-1, 0,6, −[Y + 2.1]). - Uma vez que o local de injeção é determinado, faça uma marca com um marcador estéril no crânio e registe as coordenadas.
- Perfurar suavemente o local marcado com uma broca de crânio (ver Tabela de Materiais). Tome cuidado para evitar qualquer sangramento.
- Mova lentamente a agulha para as coordenadas dadas e inicie a injeção. Para induzir a desmielinização do corpus callosum, injete 2 μL de solução LPC (etapa 1.) em cada local de injeção (etapa 3,5.) a uma taxa de 0,4 μL/min.
- Após a injeção, mantenha a agulha em cada local por mais 10 minutos.
NOTA: Certifique-se de que o intervalo de duas injeções não seja superior a 20 minutos. - Suture a pele com uma sutura 4-0 e espere o animal acordar dentro de 10 minutos. Administrar analgésicos no pós-operatório de acordo com as normas institucionais de cuidados com animais.
NOTA: O tempo recomendado para eutanásia pode ser determinado de acordo com o propósito do experimento.
4. Extração amostral para desmielinização focal
NOTA: Para obter detalhes sobre esta etapa, consulte o relatório publicado anteriormente14.
- Dissolver corante vermelho neutro (ver Tabela de Materiais) em uma solução de 1% em soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS).
- horas antes de sacrificar os camundongos (para detalhes, ver referência anterior10), injetar 500 μL de corante vermelho neutro de 1% em PBS por injeção intraperitoneal para cada rato.
- Realizar perfusão cardíaca12 com 30 mL de 0,1% PBS pré-cozido a 4 °C.
- Corte o cérebro em 1 mm com um molde cerebral (ver Tabela de Materiais).
- Visualize a lesão manchada com vermelho neutro sob o microscópio e dissociar a lesão.
NOTA: Remova o máximo possível de tecido normal ao redor para melhorar a precisão da análise subsequente. O tecido da lesão pode ser examinado com RT-PCR, microscopia eletrônica e análises de manchas ocidentais.
5. Coloração histológica e imunofluorescência
- Para coloração histológica e imunofluorescência12, após perfusão cardíaca (passo 4.3.), remover o cérebro10, fixar em 4% PFA durante a noite (a 4 °C) e desidratar completamente em 30% de sacarose.
- Corte em seções cerebrais coronais de 20 mm usando um cortador congelado10 em temperatura constante (−20 °C).
- Use as fatias para coloração azul rápido luxol (LFB), imunofluorescência e mancha ocidental10.
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Representative Results
A injeção de dois pontos do LPC resultou em uma dessalinização mais durável
LPC leva principalmente a danos rápidos com toxicidade à mielina e decote da integridade do axônio15. O dia da injeção foi considerado como o dia 0. Os camundongos foram mantidos por um período de 10 a 28 dias (10 dpi e 28 dpi). A coloração10 do azul rápido luxol (LFB) foi utilizada para avaliar a área de desmielinização em camundongos nesses pontos de tempo. No modelo de injeção de dois pontos, houve desmielinização significativa no 10 dpi em comparação com o grupo sham, mostrando que a injeção localizada de LPC pode desmyelinate com sucesso o corpus calosum. Um grau relativamente alto de desmielinização ainda existe em 28 dpi, indicando desmielinização persistente e estável devido à injeção de LPC de dois pontos (Figura 1D-E).
Para avaliar melhor a perda da baia de mielina, 10 dias foram selecionados como um ponto de tempo chave quando a demyelinação é relativamente aparente. Através da coloração da imunofluorescência de proteína básica degradada (dMBP), observou-se um notável aumento de dMBP no grupo injetado por LPC em 10 dpi (Figura 1F), o que representa a perda de mielina no calosum corpus. Além disso, utilizou-se a proteína do tecido da lesão (etapa 4.) para analisar a expressão do MBP pela mancha ocidental. Após a modelagem de acordo com o protocolo, o MBP apresentou perda significativa (Figura 1G). Esses resultados foram consistentes com a LFB e a coloração da imunofluorescência.
A morfologia da mielina no corpo caloso 10 dias após a injeção de LPC foi observada com o microscópio eletrônico (o tecido da lesão foi extraído de acordo com a etapa 4.). A demyelinação óbvia verifica o sucesso da modelagem (Figura 2).
Injeção de LPC de dois pontos influenciou a regeneração da mielina
A diferenciação e maturação dos oligodendrocitos (OLGs) desempenham um papel crucial na reparação da bainha de mielina na ESM. A regeneração da mielina ocorre principalmente pela diferenciação de células precursoras oligodendrocidas (OPCs) em oligodendrocitos mielinizantes. Assim, o processo de reparação da mielina será influenciado uma vez que a diferenciação de OPCs em OLGs é bloqueada. Gst-π é o marcador da maturação de diferenciação OPC16. Após 10 dias de injeção de LPC, pode-se ver pela imunofluorescência que o Gst-π diminuiu em comparação com o grupo falso (Figura 3A). Ao mesmo tempo, a capacidade de proliferação dos oligodendrocitos pode ser refletida pela razão de Ki67 (oligodendrócitos proliferam) e Olig2 (células de linhagem oligodendrocida total)17,18. A maior proporção de co-localização ki67/Olig2+ representa mais proliferação de oligodendrocitos após 10dpi (Figura 3B). Essas imagens sugerem que a área da lesão tenta reparar através da maturação e proliferação de OPCs após a injeção de LPC.
Injeção de LPC de dois pontos prejudicou a memória espacial de camundongos
Para analisar a capacidade de memória espacial da injeção de LPC em camundongos, o labirinto de água Morris (WMM)19 foi usado e não mostrou diferença na velocidade de natação entre camundongos sham e LPC injetados. No entanto, quando a plataforma foi removida no labirinto de água morris, a latência para encontrar a plataforma oculta foi reduzida (aprendizado espacial prejudicado), e o tempo gasto no quadrante alvo aumentou (retenção de memória prejudicada) (Figura 4). Os resultados sugerem que a memória espacial de camundongos desmielinados é significativamente prejudicada no modelo de injeção LPC de dois pontos. O número de animais usados em diferentes experimentos está listado na Tabela 1. Cada rato recebeu treinamento a partir do dia 2 ou dia 20.
Figura 1: Injeção de dois pontos da desmielinização induzida pelo LPC. (A) Representação dos locais de injeção (1,0 mm lateral, 2,4 mm de profundidade e 1,1 mm anterior). (B) Representação dos locais de injeção (1,0 mm lateral, 2,1 mm de profundidade e 0,6 mm anterior). (C) Ilustração dos pontos de tempo de detecção. (D) Detecção das lesões de matéria branca via coloração LFB. Coloração LFB a 10 dias pós-injeção (dpi) e 28 dpi, mostrando desmielinização persistente do caloso corpus (barra de escala = 200 μm). (E) Quantificação da área de desmielinização em diferentes pontos de tempo. Os dados são representados como ± SD médios, ANOVA unidirecional, seguido pelos múltiplos testes de comparação da Bonferroni. ****p < 0,0001, n = 6 por grupo. (F) Imagens representativas da imunostaining dMBP no caloso corpus (barra de escala = 100 μm). Comparado com a farsa, que quase não tinha dMBP, dMBP óbvio poderia ser visto após a injeção de LPC. (G) Análise da mancha ocidental da expressão MBP. O MBP apresentou perda significativa após a injeção de LPC. β-actin foi usado como controle de carregamento para medir a expressão da linha de base. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Imagens de microscopia eletrônica confirmam a ultraestrutura mieliada no caloso corpus de sham em comparação com a desmielinizada nos camundongos injetados pelo LPC (barra de escala = 1 μm). Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: A injeção de dois pontos influenciou a maturação e a proliferação de OPCs. (A) Imagens representativas de GST-π no caloso corpus de camundongos sham e LPC-injected (barra de escala = 20 μm). O vermelho significa GST-π. (B) Imagens representativas da co-localização de Olig2 e Ki67 (barra de escala = 20 μm). O vermelho significa Ki67, e o verde significa Olig2. As imagens foram capturadas usando um sistema de microscopia confocal com linhas laser de 488 nm e 594 nm. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: Prejuízo de memória espacial induzido pela injeção de LPC. (A) Imagens representativas do caminho de natação dos ratos em cada grupo na presença da plataforma (fase de aprendizagem). (B) Imagens representativas dos caminhos de natação dos ratos em cada grupo após a remoção da plataforma (fase de memória). O número de animais usados está listado na Tabela 1. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Grupo | Farsa | Grupo LPC |
| Coloração LFB | 6 | 12 (10 dpi, 6; 28 dpi, 6) |
| Microscopia eletrônica | 4 | 4 |
| Se | 6 | 6 |
| Mancha Ocidental | 4 | 4 |
| Labirinto de Água Morrris | 12 | 12 |
Tabela 1: O número de animais utilizados para os diferentes testes.
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Discussion
A ESM, doença desmielinização crônica do SNC, é uma das causas mais comuns de disfunção neurológica em adultos jovens20. Clinicamente, aproximadamente 60%-80% dos pacientes com ES experimentam o ciclo de recaídas e remissões antes de desenvolver umaESM 21,22 secundária-progressiva, e isso eventualmente leva a prejuízos de movimento cumulativos e déficits cognitivos ao longo do tempo23. Atualmente, nenhum modelo experimental abrange toda a variedade de características clínicas, patológicas ou imunológicas da doença24. Para simular o processo patológico e a patogênese da ESM em diferentes estágios, existem três modelos animais desmielinizadores comuns com suas vantagens e limitações, incluindo o modelo EAE, animais de alimentação CPZ e modelos de desmielinização induzidos pelo LPC.
Em camundongos, a EAE é induzida por uma resposta imune após a injeção de antígenos de mielina, resultando em ativação microglial e infiltração de linfócitos perivasculares T e B, e o dano de mielina que acompanha é frequentemente associado à recidiva da doença20,25. Simula melhor as características do período de remissão do MS. No entanto, também tem várias limitações. Por exemplo, a EAE é principalmente uma doença que afeta a matéria branca da medula espinhal, enquanto a ESM causa principalmente a desmielinização do córtex cerebral, e a localização e o tempo das lesões são aleatórios, dificultando a obtenção de lesões com precisão19.
CPZ e LPC são as substâncias mais utilizadas para induzir modelos desmielinizadores tóxicos. Todos eles são capazes de causar desmielinização cns após a administração. No modelo CPZ, alimentar camundongos jovens o cuprizone do chelator de cobre resultou na morte do oligodendrocyte e posterior desmielinização reversível. Após a retirada da cuprizone, um processo de remielinação espontânea foi acionado no prazo de 4 dias 26,27. O CPZ resulta principalmente em desmielinização extensiva, enquanto a injeção de LPC inclina-se para a desmielinização focal. Devido à toxina e à resposta inflamatória, a clássica injeção de um ponto de LPC desencadeia uma forma rápida e altamente reprodutível de desmielinização28.
No entanto, nenhum dos modelos acima pode imitar adequadamente o processo patológico de EM progressiva caracterizado pela desmielinização persistente. Portanto, o presente protocolo propõe um modelo para uma injeção de dois pontos de LPC diretamente no corpo calosum para induzir a desmielinização a longo prazo. As etapas críticas do protocolo incluem o ajuste horizontal da cabeça do animal e a localização das coordenadas de injeção. Na etapa 3.5., deve-se garantir ajustar primeiro o nível de bregma e fontanelle posterior e, em seguida, ajustar os níveis esquerdo e direito. Ao mesmo tempo, é preciso notar que, após o ajuste dos níveis esquerdo e direito, o ponto zero deve ser reposicionado antes das operações subsequentes. Esta etapa é crucial porque está diretamente relacionada com a precisão do posicionamento. Na etapa 3.6., ao determinar as coordenadas do eixo Z, deve-se garantir que a extremidade da agulha e do crânio permaneçam em contato exato, e o pesquisador possa observar se a agulha está dobrada. Na etapa 3.10., a agulha permanece no lugar por 10 minutos para evitar que a droga flua para fora da passagem da agulha.
O presente protocolo tem algumas limitações. Como outros modelos desmielinizantes induzidos por toxicidade, falta a modelagem de processos imunológicos. Em segundo lugar, embora o modelo de injeção de dois pontos possa manter a desmielinização por um tempo relativamente longo, ele ainda é inevitavelmente acompanhado por um leve grau de regeneração de mielina à medida que a doença progride para um estágio posterior. Pode não ser um modelo mais adequado para simular esclerose múltipla progressiva secundária do que a mielina oligodendrocyte glycoprotein (MOG) induzida encefalomielite autoimune experimental29,30. O modelo clássico de injeção LPC de um ponto produz apenas desmielinização inflamatória localizada acompanhada de remielinização espontânea. Pesquisas anteriores mostraram que a infiltração de células T, células B e macrófagos após a injeção de LPC é um fator-chave no reparo da mielina15. No entanto, em comparação com o modelo de injeção clássica, o modelo LPC de injeção de dois pontos induz a rápida desmielinização focal do caloso corpus e mantém o grau de desmyelinação por um período mais longo com pouca remielinização.
Devido à complexidade da ESM, diferentes estágios da doença requerem diferentes modelos para serem melhor descritos. A injeção de dois pontos de LPC através de um quadro estereotaxico é um modelo de mouse experimental estável, eficiente e reprodutível. Este modelo pode levar à desmielinização a longo prazo, acompanhado de menos reparo de mielina ao longo do tempo. Isso significa que o modelo de injeção de dois pontos pode ser usado não apenas para estudar doenças de desmielinização, mas também para estudar intervenções de reparação de mielina. Além disso, este modelo pode avaliar de forma fácil e rápida a desmielinização após a intervenção através da imunofluorescência e métodos histológicos, e a disfunção cognitiva da EM pode ser refletida pela memória espacial prejudicada de camundongos desmielinados no teste comportamental. Em conclusão, esse modelo de desmielinização estável poderia facilitar estudos patológicos e pré-clínicos tanto sobre a progressão secundária da ESM quanto sobre a recaída em esclerose múltipla.
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Disclosures
Os autores não têm nada a revelar.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China (Grants: 82071380, 81873743).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| L-α-Lysophosphatidylcholine from egg yolk | Sigma-Aldrich | L4129-25MG | |
| 32 gauge Needle | HAMILTON | 7762-05 | |
| 10 μl syringe | HAMILTON | 80014 | |
| high speed skull drill | strong,korea | strong204 | |
| drill | Hager & Meisinger, Germany | REF 500 104 001 001 005 | |
| Matrx Animal Aneathesia Ventilator | MIDMARK | VMR | |
| Portable Stereotaxic Instrument for Mouse | Reward | 68507 | |
| Micro syringe | Reward | KDS LEGATO 130 | |
| Isoflurane | VETEASY | ||
| Paraformaldehyde | Servicebio | G1101 | |
| Phosphate buffer | BOSTER | PYG0021 | |
| LuxoL fast bLue | Servicebio | G1030-100ML | |
| Suture | FUSUNPHARMA | 20152021225 | |
| Brain mold | Reward | 68707 | |
| Electron microscope fixative | Servicebio | G1102-100ML | |
| Neutral red (C.I. 50040), for microscopy Certistain | Sigma-Aldrich | 1.01376 | |
| Anti-Myelin Basic Protein Antibody | Millipore | #AB5864 | |
| Anti-GST-P pAb | MBL | #311 | |
| Ki-67 Monoclonal Antibody (SolA15) | Thermo Fisher Scientific | 14-5698-95 | |
| Beta Actin Monoclonal Antibody | Proteintech | 66009-1-Ig | |
| Myelin Basic Protein Polyclonal Antibody | Proteintech | 10458-1-AP | |
| OLIG2 Polyclonal Antibody | Proteintech | 13999-1-AP | |
| Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) | YEASEN | 34206ES60 | |
| Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) | YEASEN | 34412ES60 | |
| Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) | YEASEN | 34212ES60 | |
| HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | abclonal | AS014 | |
| HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | abclonal | AS003 | |
| Adult C57BL/6 male and female mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd |
References
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