Summary
Syftet med detta manuskript är att undersöka användningen av rabies indirekt fluorescerande antikroppstest för detektion av rabiesspecifika IgG- och IgM-antikroppar.
Abstract
Testet för indirekt fluorescerande rabiesantikroppar (IFA) utvecklades för att påvisa olika rabiesspecifika antikroppsisotyper i serum eller ryggmärgsvätska. Detta test ger snabba resultat och kan användas för att påvisa rabiesantikroppar i flera olika scenarier. IFA-testet för rabies är särskilt användbart för snabb och tidig upptäckt av antikroppar för att utvärdera immunsvaret hos en patient som har utvecklat rabies. Även om andra metoder för diagnos av rabies före döden har företräde, kan detta test användas för att påvisa nyligen exponering för rabiesvirus genom antikroppsdetektion. IFA-testet ger inte en virusneutraliserande antikroppstiter (VNA), men preexpositionsprofylaxsvaret (PrEP) kan utvärderas genom positiv eller negativ antikroppsnärvaro. Detta test kan användas i olika situationer och kan ge resultat för ett antal olika mål. I den här studien använde vi flera parade serumprover från individer som fick PrEP och visade deras förekomst av rabiesantikroppar över tid med hjälp av IFA-testet.
Introduction
Indirekt fluorescerande rabiesantikroppstest (IFA) används för att påvisa olika rabiesspecifika antikroppsisotyper i serum eller ryggmärgsvätska. Det är ett av en arsenal av tester som finns tillgängliga för att övervaka en rabiespatient före döden. Det är särskilt användbart för tidig upptäckt av antikroppar för att utvärdera en patients immunsvar mot rabiesinfektion. När IFA-testet används tillsammans med andra tester, fallhistoria och patientens vaccinationsstatus kan det hjälpa till att fastställa exponeringen för rabiesvirus eller ett vaccin1. Eftersom IFA-testet mäter IgM och/eller IgG kan värdena för den specifika antikroppen indikera en ungefärlig tidsram från exponering för antigen1. Detta test kan vara användbart i de listade applikationerna eller andra som ännu inte utforskats.
Det finns flera serologiska analyser av rabies. RFFIT (Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test) och FAVN-test (fluorescent antibody virus neutralization) eller modifieringar av dessa är de primära metoderna för att mäta rabiesvirusneutraliserande antikroppar (RVNA)1. Dessa tester skiljer dock inte mellan IgM- och IgG-antikroppar. När det är viktigt att differentiera antikroppsisotypen för att övervaka rabiesimmunsvaret används rabies IFA- och ELISA-tester (rabies enzyme-linked immunosorbent assay), men de mäter inte RVNA. Även om IFA- och ELISA-testerna kan användas för att fastställa förekomsten av rabiesspecifika antikroppar i ett prov, finns det vissa skillnader i hur de utförs. IFA-testet använder ett cellodlat levande virus som antigensubstrat, medan ett typiskt ELISA för rabiesdetektion använder ett eller flera av virusproteinerna. I laboratoriemiljö där rabiesviruset kan odlas kan det vara lättare att utföra IFA-testet i stället för att köpa eller odla enskilda virusproteiner för ELISA. Syftet med testningen och den information som erhålls från resultaten av en serologisk rabiesanalys bör beaktas när man bestämmer vilken som ska väljas2.
IgM är den första som svarar och ökar tills klassbyte observeras runt dag 28, då IgG blir den dominerande cirkulerande antikroppen3. IgM kan därför endast förväntas under en begränsad tid efter exponering för rabiesvirus eller vaccination. Testning av både serum och cerebrospinalvätska (CSF) kan indikera om exponeringen skedde genom vaccination, där antikroppar endast skulle ses i serum, eller från en virusinfektion, som potentiellt skulle visa antikroppar i CSF1.
Det har fastställts att rabiesantikroppar kvarstår i flera år efter preexpositionsprofylax (PrEP)4. IFA-testet kan vara ett användbart verktyg för att visa detta vid olika tidpunkter efter vaccination eller exponering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Följande protokoll har godkänts för etisk användning av mänskliga prover av New York State Department of Health Wadsworth Center för analysutveckling, protokollgodkännandenummer #03-019.
1. Säkerhet
- Ta på dig personlig skyddsutrustning (PPE), åtminstone ögonskydd (glasögon eller ansiktsskydd), en kirurgisk mask och handskar utan latex.
- Se till att personalen är vaccinerad mot rabies och att en titer på ≥0,5 IE/ml har påvisats under de senaste 6 månaderna.
2. Förberedelse av antigenglas
OBS: Utför alla virus-, CSF- och serummanipulationer i ett biosäkerhetsskåp (BSC) med hjälp av universella försiktighetsåtgärder.
- Förbered 20 ml musneuroblastom eller BHK-21-celler till en koncentration av 3,0 x 105 celler/ml i Eagles minsta essentiella media kompletterat med 10 % fetalt bovint serum (EGM) och förvara kallt fram till användning.
- Förbered CVS-11-virus genom att späda i EGM till en arbetsutspädning på 1,0 x 106,5 50 % vävnadskulturinfektionsdos (TCID50) per milliliter och förvara kallt tills det är klart för användning.
OBS: TCID50 bestäms av Reed and Muench-metoden som publicerats tidigare5. - Rengör en fuktrutschkana och polytetrafluoreten (PTFE)-belagda brunnsglasen med 70 % etanol och låt lufttorka i BSC.
- Tillsätt destillerat vatten (dH2O) till remsor av absorberande papper i objektglaskammaren för att säkerställa att luftfuktigheten förblir konstant under hela proceduren.
- Använd en penna och märk varje objektglas som ska användas med partinummer, datum, celltyp och annan identifierande information som krävs för förvaring och placera i objektglaskammaren.
OBS: De flesta markörer, pennor eller etiketter tål inte det framtida acetonfixeringssteget (steg 2.9). - Applicera 50 μl virusutspädning på varje brunn på objektglasen med en upprepad pipett. Applicera sedan 50 μL cellutspädning på varje brunn, var försiktig så att du inte kontaminerar pipettspetsen med viruset som redan finns på brunnen.
- Stäng fuktrutschkanans kammare och placera den i den fuktiga inkubatorn vid 34-36 °C. Bedöm cellens smittsamhet efter 24 timmar.
Utför steg 2.8-2.12 på endast en bild. - Ta bort objektglaset från fuktkammaren och aspirera försiktigt supernatanten. Tvätta objektglaset i en fosfatbuffrad koksaltlösning (PBS)-fylld Coplin-burk i 2 minuter och låt sedan objektglaset lufttorka.
- Placera objektglaset i Coplin-burken och fixera objektglaset i kall aceton i minst 1 timme i en -20 °C frys som är godkänd för brandfarliga material. Utför alla acetonhällnings- och lufttorkningsprocedurer i ett dragskåp.
- Låt acetonet avluftas och låt det torka. Applicera rabies direkt fluorescerande antikroppskonjugat (DFA) preparerat enligt tillverkarens anvisningar på objektglasets brunnar och inkubera i 30 minuter i en fuktig inkubator vid 34–36 °C.
- Tvätta objektglaset i Coplin-burkar med PBS två gånger i 2 minuter vardera. Lufttorka rutschkanan.
- Montera ett täckglas med 0,05 M Tris, 0,15 M NaCl (pH 9,0) och 20 % glycerolmonteringsmedel och läs av objektglaset med ett fluorescerande mikroskop vid 200x förstoring för att bedöma smittsamheten. Om cellerna inte är infekterade till cirka 50 %, upprepa steg 2.7-2.12 följande dag tills önskad smittsamhet uppnås.
OBS: Cellernas smittsamhet approximeras genom en visuell bedömning av förhållandet mellan negativa celler och rabiespositiva celler på objektglaset. Negativa celler ser röda ut i färgen, medan positiva celler visar grön fluorescerande färgning. - Ta bort de återstående objektglasen från inkubatorn och fuktkammaren. Aspirera försiktigt supernatanten från varje brunn och placera sedan objektglasen i en eller flera Coplin-burkar med PBS i 1-2 minuter. Lufttorka objektglasen i ca 30 min. Förvara objektglasen vid -80 °C tills de ska användas.
3. Beredning av prover
- Förbered utspädningar av patientserum eller CSF-prover för testning. Förbered det nödvändiga konjugatet för en korrekt arbetskoncentration utspädd i PBS med 0,05 % Evans-blått.
OBS: Förvara konjugatet i mörker för att bibehålla fluoroforens integritet före applicering
4. IFA-förfarande
- Ta bort det nödvändiga antalet preparerade antigenglas som behövs för varje analys och låt glasen tina och torka helt.
- Placera objektglasen i en eller flera Coplin-burkar och fäst glasen i kall aceton i mellan 2 timmar och över natten i en frys på -20 °C som är godkänd för brandfarliga material. Ta bort objektglasen från acetonet och låt lufttorka.
- Placera objektglasen i en fuktkammare inuti BSC med dH2O-indränkta absorberande remsor för att bibehålla luftfuktigheten. Applicera 50 μl av varje provutspädning, kontrollprov eller PBS på den förutbestämda brunnen.
OBS: Varje objektglas måste innehålla ett lämpligt antal patientprovbrunnar, positiv kontroll, negativ kontroll och PBS-cellkontrollbrunn. - Placera den stängda fuktighetsrutschkanan i en 37 °C, 5 % CO2 fuktig inkubator. Inkubera objektglasen i 30 minuter, ta sedan bort fuktrutschkanans kammare från inkubatorn och placera den i en BSC.
- Använd en sugspets för att försiktigt aspirera supernatanten från varje brunn och se till att inte störa cellens monolager. Använd en steril dropppipett för att applicera en droppe PBS på varje brunn.
- Upprepa noggrann aspiration, placera sedan varje glas i en PBS-fylld Coplin-burk och tvätta två gånger i totalt 15 minuter.
- Sätt tillbaka objektglasen i fuktkammarens låda och applicera 50 μL lämpligt antihumant antikroppskonjugat i varje brunn. Upprepa steg 4.4 till 4.6.
- Låt objektglasen lufttorka, montera ett täckglas med monteringsmedia och läs objektglasen under fluorescerande mikroskop.
5. Analys av objektglas
- Gradprover baserade på färgningsmönster och fluorescensintensitet jämfört med positiva kontrollprover med bekräftad hög anti-rabiesantikroppstiter.
- Gradera proverna på en skala från negativ, 1+, 2+, 3+ och 4+, med ett negativt resultat som inte visar någon fluorescerande färgning och 4+ som representerar en ljusgrön äppelfärgfluorescens med ett färgningsmönster som liknar positiva kontrollprover1.
OBS: Den gröna äppelfärgen gäller endast FITC-märkta antikroppar; Färgen varierar beroende på val av fluorofor. - Tilldela proverna ett slutpunktsvärde som representeras av utspädningsfaktorn vid vilken provet visar en 1-2+ lutning. Testa proverna med en högre utspädningsfaktor om slutpunkten inte uppnås i den första analysen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Alla serumprover samlades in från patienterna vid ungefär samma tidpunkter efter PrEP. Proverna testades från fem olika patienter vid följande tidpunkter: 2 veckor efter den sista rabiesvaccinationen, 6 månader efter rabiesvaccinserien och 18 månader efter rabiesvaccinserien. Varje serumprov späddes i serie och graderades med avseende på både IgM- och IgG-förekomst, enligt beskrivningen i protokollsteg 5.2 och 5.3. Det tilldelade antikroppsvärdet representerar utspädningsfaktorn där provet nådde en slutpunktsgrad på 1-2+.
Resultaten från testning vid varje tidpunkt efter PrEP visar analysens förmåga att detektera olika nivåer av antikroppsnärvaro. Kort efter den första vaccinationen fanns höga nivåer av både IgM och IgG i patientproverna, vilket framgår av figur 1. Områden med ljusgrön fluorescerande cellfärgning indikerar positiv antikroppsnärvaro; Röda blodkroppar är rabiesnegativa celler där inga antikroppar kan binda. Cirka 6 månader efter vaccination fanns signifikant lägre nivåer av både IgM och IgG i patientproverna, men IgM hade fallit bort nästan helt. Vid den sista tidpunkten, 18 månader efter vaccinationen, påvisades inga IgM-antikroppar i några patientprover, vilket visas i figur 2 där ingen färgning av gröna fluorescerande celler observeras. IgG-nivåerna kvarstod dock och förblev liknande de nivåer som upptäcktes vid 6-månaderstidpunkten efter den initiala minskningen från 2-veckorstidpunkten. Resultaten för detektion av IgG och IgM i prover från 2 veckor efter vaccination, 6 månader efter vaccination och 18 månader efter vaccination listas i tabell 1, tabell 2 respektive tabell 3. Bild 3 visar flödesschemat för körningsstegen.
Figur 1: Rabies IgM IFA-positiv färgning. Patientserum i spädning 1:8 uppvisade ett positivt infärgningsmönster kort efter avslutad PrEP-vaccinserie. Skalstrecket på bilden representerar 100 μm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Rabies IgM IFA negativ färgning. Patientserum vid en spädning på 1:2 visade ingen positiv infärgning cirka 18 månader efter avslutad PrEP-vaccinserie. Skalstrecket på bilden representerar 100 μm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: IFA-flödesschema för rabies. Flödesschema som visar exekveringsstegen för de viktigaste stegen i IFA-proceduren för att underlätta processvisualiseringen. Klicka här för att se en större version av denna figur.
| Patient Sample | Igm | IgG |
| PS1-1 | 1:32 | 1:512 |
| PS2-1 | 1:8 | 1:128 |
| PS3-1 | 1:16 | 1:256 |
| PS4-1 | 1:64 | 1:512 |
| PS5-1 | 1:16 | 1:128 |
Tabell 1: Resultat 2 veckor efter vaccination. Patientprovsresultat från serumprover som samlats in cirka 2 veckor efter avslutad PrEP-vaccinserie.
| Patient Sample | Igm | IgG |
| PS1-2 | 1:2 | 1:128 |
| PS2-2 | 1:1 | 1:128 |
| PS3-2 | 1:1 | 1:64 |
| PS4-2 | 1:1 | 1:256 |
| PS5-2 | 1:1 | 1:32 |
Tabell 2: Resultat 6 månader efter vaccination. Patientprovsresultat från serumprover som samlats in cirka 6 månader efter avslutad PrEP-vaccinserie.
| Patient Sample | Igm | IgG |
| PS1-3 | Upptäcktes inte | 1:128 |
| PS2-3 | Upptäcktes inte | 1:128 |
| PS3-3 | Upptäcktes inte | 1:64 |
| PS4-3 | Upptäcktes inte | 1:64 |
| PS5-3 | Upptäcktes inte | 1:32 |
Tabell 3: Resultat 18 månader efter vaccination. Patientprovsresultat från serumprover som samlats in cirka 18 månader efter avslutad PrEP-vaccinserie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
IFA-testet drar nytta av ett antigen-antikroppskomplex, vilket gör det möjligt för en märkningsplats att visualisera rabiesspecifika antikroppar. Neuroblastom- eller BHK-celler sås på PTFE-belagda mikroskopglas med flera brunnar och inokuleras med rabiesviruslaboratoriestammen CVS-11. När monolagret är sammanflytande och cellerna når den önskade infektionsförmågan på cirka 50 % lagras objektglasen tills de är klara för användning6.
Patientserum eller cerebrospinalvätska appliceras på det infekterade cellmonolagret och inkuberas så att eventuella rabiesspecifika antikroppar kan binda till virusantigenet7. Efter en tvättprocedur appliceras en fluorescerande märkt anti-human IgG- eller IgM-antikropp och binder till alla virusbundna antikroppar från provapplikationen. Märkta antikroppar kan sedan visualiseras under ett fluorescerande mikroskop.
När du förbereder dig för att utföra denna analys är det viktigt att bestämma den bästa beredningen av patientprover, kontroller och konjugat. De första patientproverna screenades med en låg utspädningsfaktor eller outspädda för att testa om det fanns några antikroppar. Parade prover eller tidigare screenade prover som uppvisade en hög nivå av antikroppar späddes sedan ytterligare till slutpunkten. Initiala utspädningar av patientprover för IgG-testning bereddes i kommersiellt tillgängligt IFA-spädningsmedel. IgM-testprover bereddes initialt i ett kommersiellt tillgängligt IgG-blockerande reagens. Efterföljande seriespädningar för båda testerna bereddes sedan i PBS.
Kontrollerna som användes för testningen erhölls från kända mottagare av rabies PrEP eller från individer utan tidigare rabiesvaccination. Alla kontrollprover testades för antikroppsförekomst före användning. IgG-kontrollen erhölls från en rabiesvaccinmottagare med en etablerad rabiesneutraliserande antikroppstiter bekräftad av FAVN. Det IgM-positiva kontrollprovet togs från en person som fått rabiesvaccin cirka 2 veckor efter avslutad vaccination.
Användningen av lämpligt konjugat är en annan viktig aspekt av att utföra IFA-testet. Det konjugat som används för varje test beror på antikroppsisotypmålet för den analysen. I detta fall användes kommersiellt tillgängliga FITC-märkta anti-humana IgG- och anti-humana IgM-antikroppar. Fungerande antikroppskonjugatutspädningar bestämdes före testning baserat på tillverkarens rekommendation.
Det finns flera viktiga steg i proceduren som kommer att säkerställa ett framgångsrikt utförande av IFA-testet, kanske det viktigaste är förberedelse av antigenglas. Att nå cirka 50 % smittsamhet ger rikligt med bindningsställen för tillgängliga antikroppar, samtidigt som det skapar tydlighet vid avläsning och gradering av prover. De rabiesnegativa cellerna skapar en kontrasterande bakgrund för att visualisera märkta antikroppar bättre. Ospecifik färgning kan också utgöra ett problem när man utför fluorescerande färgning med komplexa provmatriser, såsom serum. Användningen av IgG-inaktiveringsreagenser (t.ex. Gullsorb) hjälper till att minska ospecifik färgning på grund av störande IgG-antikroppar vid bedömning av förekomsten av IgM8. Korrekt förberedelse av material och införlivande av speciella reagenser i proceduren hjälper till att minska problematisk färgning samtidigt som högkvalitativa resultat bevaras.
En mängd testmetoder har utvecklats som fokuserar på detektion, kvantifiering och identifiering av rabiesantikroppar. Vart och ett av dessa tester ger resultat som kan användas på olika sätt beroende på vilken information som söks. Rabies IFA-testning är ett kraftfullt verktyg för att identifiera virusspecifika antikroppsisotyper, och resultaten kan vara klara på relativt kort tid jämfört med andra testmetoder, såsom RFFIT- och FAVN-testerna.
Även om IFA-testet kan detektera rabiesantikroppar i ett prov, ger det inte en standardiserad kvantifiering av antikropparna. IFA-testet ger en serumspädningsfaktor vid vilken antikroppsdetektionen avslutas. Som jämförelse kvantifierar RFFIT- och FAVN-testerna antikropparnas neutraliserande förmåga i ett prov, vilket resulterar i en titer av internationella enheter (IU), vilket ger ett mer detaljerat och standardiserat resultat. Resultat från ett FAVN- eller RFFIT-test visar förekomsten av neutraliserande antikroppar, som har fastställts vara IgG-antikroppar9. IgM:s roll i neutraliserande aktivitet anses vara begränsad på grund av dess struktur10. Därför detekterar dessa tester inte specifikt närvaron av IgM.
Typen av test och dess resultat kan vara något problematiskt när man tillämpar dem på ett specifikt problem. Begreppet skyddande antikroppsskydd mot rabiesvirusinfektion används inte längre för att utvärdera immunsvaret mot rabiesvaccination. Tidigare definierades ett skyddande svar som ≥0,5 IE. Aktuella publikationer hänvisar dock vanligtvis till antikroppssvaret efter immunisering som acceptabelt (≥0,5 IE) eller oacceptabelt (<0,5 IE). Som nämnts ger IFA-testet inte en antikroppstiter i IE och bör inte användas för att härleda en skyddsnivå mot rabies. Att använda IFA-testet vid utvärdering av en patient som har utvecklat rabies kanske inte alltid resulterar i en positiv antikroppsnärvaro på grund av variationer i immunsvaret under hela sjukdomen. På grund av den nästan 100-procentiga dödligheten hos en rabiesinfektion är det viktigt att överväga testet och hur mycket information som säkert kan härledas från dessa resultat11. Av dessa skäl är det alltid bäst att utvärdera alla testmetoder för rabiesantikroppar och avgöra vilken som fungerar bäst i ett givet scenario.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Vi är tacksamma mot New York State Department of Health Wadsworth Center för att de stöder detta projekt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 25x55mm glass cover slips | Any | ||
| Acetone | Any | ||
| Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
| Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
| Aspirating pipette tip | Any | ||
| BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
| BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
| Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
| Coplin Jars | Any | ||
| Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
| Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
| Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
| L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
| Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
| Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
| Multi-well PTFE coating glass slides | Any | ||
| PBS | Any | pH 7.6 | |
| Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
| Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500, 6500, RU5100, or RU5500 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
| Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
| Sterile dropper | Any | ||
| Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
| Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
| Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
| Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
References
- Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , Geneva. 232-245 (2018).
- Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. Viruses. 13 (8), 1516 (2021).
- Zajac, M. D. Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera. Viruses. , 40-49 (2019).
- Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis. Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).
- Ramakrishnan, M. A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).
- Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies. Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).
- Fooks, A. R., Jackson, A. C. Rabies: scientific basis of the disease and its management. , Academic Press. (2020).
- Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).
- Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives. Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).
- Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. Immunological aspects of rabies: a literature review. Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).
- Moore, S. M., Hanlon, C. A. Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease. PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).
