Programlanabilir Çektirme Patch-pipetler ve Sharp Elektrotlar

Summary

Bu video elektrofizyoloji için yama pipetler ve keskin elektrotlar yapmak için programlanabilir çektirmenin nasıl kullanılacağını gösterir. Aynı prosedürü enjeksiyon iğneleri de dahil olmak üzere, çeşitli cam aletleri yapmak için kullanılan olabilir.

Abstract

Cam Mikroelektronlar (pipetler denir), on yıllar boyunca elektrofizyoloji, bir beygir olmuştur. Bugün, pipetler, cam kılcal damarların programlanabilir çektirmenin kullanarak yapılır. Bu tür araçların ısı, bir metal filament veya lazer ve yerçekimi, bir motor veya her ikisini birden kullanarak cam çizmek ya kullanarak kılcal. Intrasellüler kayıt için keskin elektrotlar, ısı, yerçekimi, ve bir motor bir kombinasyonunu kullanabilirsiniz patch-klemp kayıt için Pipetler, sadece ısı ve yerçekimi kullanılarak oluşturulur. , Hücre içi kayıt pipetler yapmak için kullanılan prosedür Crna Xenopus oosit içine enjeksiyon dahil olmak üzere çeşitli uygulamalar için enjeksiyon iğneleri, yapmak için kullanılan benzer. Ise dar cam hücre içi kayıt (dış çapı = 1.0 mm) için kullanılan genel, kılcal cam <1.2 mm çap, pipetler için yama kelepçe kayıt yapmak için kullanılır. Her araç için, çektirmenin biraz farklı programlanmıştır. Bu video kayıt pipetler, önceden belirlenmiş çektirmenin programları kullanarak her iki tür nasıl gösterir.

Protocol

Çekme pipetler

Sutter P-97 Flaming / Kahverengi olarak çektirmesi gibi bir mikroelektrot kullanarak, yaklaşık 10-20 pipetler bir set çekin.

1. Kılcal cam seçin. Biz borosilikat (Sutter BF150-110-10, 1,5 mm, dış çapı, iç çapı 1.1mm, uzun 10cm) kullanın. Temiz ve tozsuz kalır cam dikkatlice saklayın.
2. Çekme programı tasarlayın. Biz her aşamasında, ısı ve hızı azalan ve son adım küçük bir çekme, 5 adım programı kullanabilirsiniz. Sutter pipetle yemek kitabı uygun programlar geliştirmek için mükemmel bir referans.
3. Pipet uçları açılış çap ve pürüzsüzlük belirlemek için mikroskop altında inceleyin. Kaba, düzensiz ya da düzensiz ipuçları atın. Iyi bir çekme protokol, bu nadir sağlamalıdır. Standart patch-klemp kayıt için 1-3 mikron çapında, ucu açıklıklar olmalıdır. Dik konik (künt uçlu) aynı açılması çapı için direncini düşürmek için yol açar. Şekil ve büyüklük basınç parlatma tarafından değiştirilebilir.

Yangın parlatma pipetler

1. Parlatma teçhizat (microforge), bir ayak pedalı ile kontrol edilen bir platin ısıtma filament ile ayarlayın. Yararlı bir kiti ALA Bilimsel (CPM-2) veya benzer bir aparat parça parça monte edilebilir.
2. İsteğe Bağlı: Kat kapasitans azaltmak ve gürültü özelliklerini iyileştirmek için bir yalıtkan ile pipet. Biz diş balmumu kullanın. Sylgard 184 ™ (PDMS olarak da bilinen poli-dimetil siloksan elastomer) da bir seçenektir.
3. Mumu kullanıyorsanız, yakındaki küçük bir erimiş kaynağı tutmak. Pipet girerek mum tutmak için pipet arka tarafında hava basıncı ile sıvı balmumu içine ucu kısaca daldırma ve çıkartın. Sylgard ile mağaza hazırlanmış dondurulmuş alikot elastomer ve mikroskop altında pipet boya. Elastomer tedavisi için ısıtın.
4. Parlatma cihazı pipet (kaplı ya da değil) koyun ve ucu ~ 50 mikron filamandan getirmek. Isıtıldığında filament genişletmek olacağını aklınızda bulundurun.
5. Önerilen: en iyi direnç ve bahşiş çapı için pipet şeklini değiştirmek için "baskı parlatma" için ayrı protokol izleyin.
6. Kısa bir ısı darbe (1-2 saniye), pipet ucu balmumu kaldırmak ve camın pürüzsüz yeterli.
7. Bitmiş pipet, tozdan korumak için 10 başarılı pipetler için tekrarlamak kapalı bir kutu yerleştirin.

Discussion

Protokol resimli, elektrofizyoloji laboratuarlarında günlük kullanım hem de hücreler ve hayvanlar için enjeksiyon iğneleri yapmak için kullanılır. Programlanabilir çektirmesi ile, çeşitli kullanımlar için pipetler yapmak kolaydır. Çektirmesi üzerine, dikkat ve itina ile filament bir yıl veya daha uzun sürecek. Denemelerinizin iyi şanslar.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Micropipette Puller	Instrument	Sutter Instrument Co.	P-97	Or similar instrument (e.g. Sutter P-87 or P-2000)
Glass Capillaries	Reagent	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	Or, similar capillary glass. To make filling the pipette easier, use a capillary with a glass filament.