Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
-In primo luogo, ottenere un numero prestabilito di Drosophila adulti. La camera di prova per il saggio di arrampicata è composta da due fiale nastrate insieme. Una di queste fiale deve essere contrassegnata con una linea.
Senza anestesia da anidride carbonica, che può compromettere il comportamento di arrampicata, trasferire un certo numero di mosche nella camera di prova. Consentire alle mosche di recuperare per un periodo di tempo predeterminato. Con il lato marcato della camera verso il basso, toccare saldamente la camera su un tappetino del mouse posizionato su una superficie solida. Ciò costringerà le mosche verso il fondo della camera. Il saggio di arrampicata sfrutta la naturale tendenza di Drosophila a salire verso l'alto contro la gravità, un comportamento chiamato geotassi negativa.
Durante lo studio, le mosche non dovrebbero essere esposte alla luce solare diretta perché le mosche potrebbero mostrare il comportamento della fototassi, o il movimento in risposta allo stimolo della luce. Registrare il numero di mosche che raggiungono o superano la linea. Quindi ottenere la percentuale di passaggio dividendo questo numero per il numero totale di mosche testate. Consentire alle mosche di riprendersi prima di ripetere lo studio. Nell'esempio, osserveremo un saggio di arrampicata su mosca utilizzato per valutare la funzione motoria di Drosophila dopo la mutagenesi chimica.
-Per iniziare, raccogliere mosche omozigote da linee appartenenti alla collezione mutagenizzata ENU di mutanti Drosophila mappati al secondo cromosoma. Capovolgere le mosche di età compresa tra 10 e 12 giorni in una camera di prova senza anestesia una linea alla volta e consentire loro di riprendersi per cinque minuti.
Con la linea di cinque centimetri contrassegnata lateralmente verso il basso, toccare forzatamente la camera tre volte su un tappetino del mouse posizionato su una superficie solida in modo che tutte le mosche inizino il saggio in basso. Osservare la locomozione della mosca per un periodo di 10 secondi. Registrare il numero di mosche che raggiungono o superano la linea di cinque centimetri entro questo periodo, nonché il numero totale di mosche testate. Attendere un minuto prima di iniziare una seconda prova. Ripetere almeno tre repliche di prova per linea.
