Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Para realizar la parálisis nadando, o ensayo SWIP, transfiera larvas de C. elegans escenificadas L4 a una placa de punto de vidrio llena de líquido.
Para evaluar la natación mediada por dopamina, registre el movimiento del gusano caracterizado por el comportamiento de flexión y paliza corporal en forma de C. Por lo general, las neuronas dopaminérgicas liberan dopamina en la hendidura sináptica, que a su vez, une los receptores de dopamina en la célula receptora.
Una vez que se transmite el mensaje, la dopamina se libera de los receptores, y neurotransmisores no consolidados pueden ser tomados por la neurona dopaminérgica a través de proteínas transportadoras especializadas y reutilizadas.
En larvas con señalización alterada de dopamina, causada por mutaciones inactivantes en el transportador de dopamina o tratamientos farmacológicos que aumentan la liberación de dopamina, la dopamina se acumula en la hendidura sináptica. El exceso de dopamina sobre estimula los receptores de dopamina que interfieren con el programa motor y dejan las larvas paralizadas.
En el protocolo de ejemplo, veremos demostraciones detalladas de ensayos SWIP manuales y automatizados en C. elegans tratados con anfetamina.
- Para la evaluación manual de SWIP, añadir 40 microlitros de solución de control con o sin anfetamina de 0,5 mililitros en una placa de punto de vidrio. Bajo un estereoscopio, recoger de 8 a 10 gusanos de etapa L4 tardía con una selección de pestañas, y sumergir la selección en el pozo que contiene la solución hasta que los gusanos se muevan fuera de la selección y naden en la solución.
Comience el temporizador. Tenga en cuenta el número de gusanos liberados en el pozo, y observe y registre el número de gusanos que exhiben SWIP en cada marca de minutos durante un total de 10 minutos.
Al final del procedimiento, copie los datos sin procesar en una hoja de cálculo y calcule el porcentaje de gusanos paralizados dividiendo el número de gusanos paralizados en cada minuto por el número total de gusanos probados a lo largo del ensayo y multiplicándose en un 100. Copie los valores porcentuales en cualquier software gráfico y estadístico y trace los datos con valores porcentuales de SWIP en el eje y el tiempo en el eje x utilizando el formato de gráfico xy.
Se puede realizar un análisis estadístico entre los grupos tratados con control y anfetamina y el momento del tratamiento.
Para el análisis automatizado de la parálisis inducida por natación, configure la cámara, el software de seguimiento de gusanos y el script para ejecutar el análisis de software de seguimiento.
A continuación, grabe vídeos de natación de un gusano a la vez y utilice el software de seguimiento de gusanos para calcular la frecuencia de los pliegues del cuerpo.
