表皮激光损伤：诱导局部损伤以检查C. elegans 的修复过程

- 首先，将年轻的成年蠕虫转移到幻灯片上的新糖垫上。然后加入几滴12毫升的利瓦米索尔溶液，使蠕虫瘫痪。用盖子盖住蠕虫，等待几分钟。 将幻灯片放在旋转盘对焦显微镜下，聚焦于蠕虫的最外侧表面。

成人蠕虫的表皮是一种薄的单层结构，由细胞融合事件产生的多核同步体组成。 表皮表面分泌一个灵活的胶原蛋白角质层，而基底表面则覆盖着一层称为基底拉米纳的薄层细胞外基质。

接下来，用激光将表皮表面缠绕。受损细胞的细胞质可能会泄漏出来，在伤口部位出现气泡。

激光照射比其他技术（如针伤）有优势，因为它会导致皮质层和表皮细胞局部破坏，而不会损害内部组织。 在示例协议中，我们将看到C.elegans的激光损伤过程。

-为了精确伤害线虫，本协议使用附着在旋转盘共焦显微镜上的股骨激光。使用女性至第二激光器（如双光子显微镜中的激光）进行线或点扫描也就足够了。

-首先收集 10 个年轻人在 agar 垫上。在两微升12毫升的溶液中使它们瘫痪。然后用盖子盖住他们滑倒，等待几分钟，而他们瘫痪。

-动物必须完全瘫痪。12毫摩尔的利瓦米索尔不会影响伤口的反应。然而，还可以使用其他固定方法。

- 确保女性到第二秒的激光功率设置为140毫瓦， 在目标之前测量，激光重复率为80兆赫，现在，在旋转盘共焦显微镜下定位蠕虫。使用数字光圈高的100倍目标，聚焦于目标蠕虫的侧前或后同步表皮。

聚焦于表皮细胞的表面，将激光照射到两个200毫秒的脉冲，间隔20毫秒。 这应该足以伤害表皮。 稍等片刻，观察细胞质的局部中断，细胞质将显示为冒泡。如果存在荧光标记，则可以观察到局部漂白。