2光子レーザーの奇形化:ゼブラフィッシュ胚の軸索を傷つける方法と軸索の回復を観察する方法

-フェニルチオ尿素に関心のある胚を置き、 受精後24時間から始まる色素形成を阻害するリンガーの溶液であるPTU.これは、この手順に必要な開発解剖学をより目に見えるようにします。

サイトの前の画像を撮る。次に、GFPが赤を蛍光する910ナノメートルレーザーで軸索を見てください。 このレーザーの強度を高めて周囲の組織に影響を与えずに標的領域を傷つける。このプロセスはアキソトミーと呼ばれ、最初のレーザーで新しい画像を撮って、散乱した破片として現れるアキソトミーを確認する。

- カスタム構築された2光子スコープが実験室で利用できない場合、Zeiss 510共焦点2光子顕微鏡は軸索を切断するためにも使用できます。

両方のレーザーがGFPを検出するために使用されますが、2つの光子放射は赤で視覚化され、アルゴンレーザーは2つを区別するために緑色で視覚化されます。

アルゴンレーザーをオフにして2つの光子レーザーをオンにします。軸索がまだ焦点を合わせられるように約9%の強度でスキャンします。

次に、[チャネル]タブの下で、 2つの光子の強度を約9%の伝送から15%から30%の送信に変更します。新しい設定を有効にするには、Fast XYボタンをクリックし、その後すぐに停止をクリックして余分な損傷を避けます。