} الفرضيات: الفرضية التجريبية هي أنه في شرائح أطراف الجذر التي تمت معالجتها بالنوكودازول ، وهي مادة كيميائية تتداخل مع البلمرة الأنبوبية الدقيقة ، سيتم إيقاف جميع الخلايا في نفس المرحلة من دورة الخلية وأنه في شرائح طرف البصل غير المعالجة سيتم تصور جميع المراحل المختلفة لدورة الخلية. الفرضية الصفرية هي أنه لن تكون هناك اختلافات في الانقسام الفتيلي بين المجموعتين وأنه سيتم تصور مراحل مختلفة من دورة الخلية.
للتحضير لهذه التجربة ، ستستخدم البصل الذي تم وضعه في الماء لعدة أيام حتى تبدأ أطراف الجذور البيضاء الجديدة في النمو. استخدم شفرة حلاقة لقطع قطعة بطول 1 سم من نهاية أحد أطراف الجذر.
ضع شريحة البصل في أنبوب طرد مركزي دقيق يسمى "N" لحالة nocodazole.
ثم قم بقطع قطعة ثانية مقاس 1 سم من طرف جذر البصل وضعها في أنبوب طرد مركزي دقيق مكتوب عليه "C" لحالة التحكم.
أضف 2 ميكرولتر من 5 مجم / مل نوكودازول إلى 1 مل من الماء في أنبوب الطرد المركزي الدقيق المسمى N و 1 مل من الماء فقط إلى الأنبوب المسمى C.
اترك الأنابيب التي تحتوي على أطراف الجذر لتحتضن لمدة 12 ساعة وامسح مساحة العمل بنسبة 70٪ من الإيثانول.
عند اكتمال الحضانة ، اضبط كتلة حرارية على 60 درجة مئوية.
اغسل الأطراف المعالجة بالنوكودازول بالماء ثم استنشق السائل.
كرر هذا الغسيل مرتين أخريين ، ليصبح المجموع ثلاث غسلات.
املأ كلا الأنبوبين ب 1 مل من حمض الهيدروكلوريك العادي. احتضان الأنابيب في كتلة حرارية 60 درجة مئوية لمدة 12-15 دقيقة ، ثم تخلص من الحمض في قارورة النفايات.
الآن ، أضف 1 مل من الماء المقطر إلى الأنابيب ثلاث مرات على الأقل لشطف العينات.
أضف الآن ميكرولتر واحد من صبغة DAPI إلى 10 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
ثم ضع 50 ميكرولتر من بقعة DAPI المخففة هذه في كل أنبوب ، واتركها في درجة حرارة الغرفة لتحتضانها لمدة 12 دقيقة.
بعد ذلك ، قم بتشكيل ثلاث غسلات بالماء المقطر كما في الخطوة 10.
قم بتسمية شريحة مجهر واحدة على أنها "تحكم" وأخرى باسم "Nocodazole".
انقل الجذور الملطخة إلى شرائح المجهر الخاصة بها وأضف قطرة ماء إلى شريحة التحكم وقطرة من nocodazole إلى شريحة nocodazole.
استخدم شفرة الحلاقة لإزالة الأجزاء غير الملوثة من كل طرف جذر ووضع غطاء زجاجي فوق كل عينة.
اضغط بعناية على كل زلة غطاء بطرف إصبع مرتديا قفازا ، ثم اترك الشرائح لمدة 10 دقائق.
أخيرا ، اعرض الشرائح تحت هدف 40X لمجهر مضان والتقط صورا لمستحضرات خلايا طرف الجذر.
