Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
الفرضية التجريبية هي أنه في شرائح أطراف الجذر التي تمت معالجتها بالنوكودازول ، وهي مادة كيميائية تتداخل مع البلمرة الأنبوبية الدقيقة ، سيتم إيقاف جميع الخلايا في نفس المرحلة من دورة الخلية وأنه في شرائح طرف البصل غير المعالجة ، سيتم تصور جميع المراحل المختلفة لدورة الخلية. الفرضية الصفرية هي أنه لن تكون هناك اختلافات في الانقسام الفتيلي بين المجموعتين وأنه سيتم تصور مراحل مختلفة من دورة الخلية. للتحضير لهذه التجربة ، ستستخدم البصل الذي تم وضعه في الماء لعدة أيام حتى تبدأ أطراف الجذور البيضاء الجديدة في النمو.
استخدم شفرة حلاقة لقطع قطعة بطول سنتيمتر واحد من نهاية أحد أطراف الجذر. ضع شريحة البصل في أنبوب طرد مركزي دقيق يحمل علامة N لحالة nocodazole. ثم قم بقطع قطعة ثانية بطول سنتيمترا واحدا من طرف جذر البصل وضعها في أنبوب طرد مركزي دقيق يسمى C لحالة التحكم.
أضف ميكرولترين من خمسة ملليغرام لكل مليلتر نوكودازول إلى مليلتر واحد من الماء في أنبوب الطرد المركزي الدقيق المسمى N ومليلتر واحد من الماء إلى الأنبوب المسمى C. اترك الأنابيب التي تحتوي على أطراف الجذر لتحتضانها لمدة 12 ساعة وامسح مساحة العمل بنسبة 70٪ من الإيثانول. عند اكتمال الحضانة ، اضبط كتلة حرارية على 60 درجة مئوية. اغسل الأطراف المعالجة بالنوكودازول بالماء ثم استنشق السائل.
كرر هذا الغسيل مرتين ليصبح المجموع ثلاث غسلات. املأ كلا الأنبوبين بمليلتر واحد من حمض الهيدروكلوريك العادي. احتضان الأنابيب في كتلة حرارية 60 درجة مئوية لمدة 12 إلى 15 دقيقة ثم تخلص من الحمض في قارورة نفايات وأضف ملليلترا واحدا من الماء المقطر إلى الأنابيب ثلاث مرات على الأقل لشطف العينات.
أضف الآن ميكرولتر واحد من صبغة DAPI إلى 10 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات. ثم ضع 50 ميكرولترا من صبغة DAPI المخففة في كل أنبوب واتركها في درجة حرارة الغرفة لتحتضانها لمدة 12 دقيقة. بعد هذا التشكيل ، يغسل ثلاثة ماء مقطر كما هو موضح للتو.
قم بتسمية شريحة مجهر واحدة على أنها تحكم وأخرى باسم Nocodazole. انقل الجذور الملطخة إلى شرائح المجهر الخاصة بها وأضف قطرة ماء إلى شريحة التحكم وقطرة من nocodazole إلى شريحة nocodazole. استخدم شفرة الحلاقة لإزالة الأجزاء غير الملوثة من كل طرف جذر ووضع غطاء زجاجي فوق كل عينة.
اضغط بعناية على كل زلة غطاء بطرف إصبع مرتديا قفازا ثم اترك الشرائح لمدة 10 دقائق. أخيرا ، اعرض الشرائح تحت هدف 40x المتمثل في المجهر الخفيف أو الفلوري والتقط صورا لمستحضرات خلايا طرف الجذر. قبل أن تتمكن الخلايا من المرور عبر جميع مراحل دورة الخلية ، هناك العديد من نقاط التفتيش التي يجب أن تمر بها.
يتم تنظيم نقاط التفتيش هذه بواسطة بروتينات كيناز تعتمد على cyclin و cyclin ، أو CDKs. إذا قررت الأعاصير و CDKs أن الأحداث الخلوية السابقة لم تكتمل بشكل كاف ، فسوف تعتقل الخلايا في هذه الخطوة وتمنعها من التكاثر. في الخلايا السرطانية ، يتم فقد واحد أو أكثر من هذه القيود الجزيئية لتنظيم انقسام الخلايا وهذا يسمح للخلايا التالفة بالهروب من التحكم في تكاثر الخلايا.
تتطور هذه الخلايا غير الطبيعية إلى أورام وهي كتل من الخلايا المتكاثرة غير المنضبطة التي تتداخل مع الوظائف الطبيعية للجسم. لاحظ كيف قبل أن تنقسم هذه الخلية السرطانية تتجمع وتكسر الضوء بقوة شديدة تحت المجهر الضوئي. وذلك لأنه لا تنقسم جميع الخلايا السرطانية بنجاح إلى خلايا وليدة بعد كل جولة من الانقسام.
هذا يعني أنها غالبا ما تحتوي على فائض من العضيات والحمض النووي ، وهذه الزيادة في المحتوى الخلوي تعني أنها ستنكسر الضوء بشكل مكثف أكثر من الخلايا الطبيعية. الآن بعد أن تم جمع جميع البيانات ، دعنا نلقي نظرة على نتائجنا. ما هي الهياكل الخلوية التي يمكن تحديدها في شريحة طرف البصل التي تمت معالجتها بالنوكودازول؟
هل تخضع أي خلايا للانقسام؟ ما هي مراحل انقسام الخلايا التي تراها؟ سجل النسبة المئوية للخلايا في كل مرحلة من مراحل الانقسام في الجدول.
انظر بعد ذلك إلى شريحة طرف البصل غير المعالجة. ما هي هياكل الخلايا التي يمكنك تحديدها؟ هل تخضع أي خلايا للانقسام؟
ما هي مراحل انقسام الخلايا التي تراها؟ سجل النسب المئوية للخلايا في كل مرحلة من مراحل الانقسام في الجدول. ستلاحظ أن معظم الخلايا الموجودة في شريحة البصل المعالجة بالنوكودازول في نفس مرحلة الانقسام بسبب خصائص الأنابيب الدقيقة التي تعطل الكاشف والتي تمنع تكوين ألياف المغزل وفصل الكروموسوم اللاحق وانقسام الخلايا.
تظهر العديد من مراحل الانقسام المختلفة في خلايا الشريحة غير المعالجة ، ولكن الانقسام هو عملية مستمرة في الكائنات الحية السليمة.
