كبيرة الحجم (20L +) الترشيح لعينة من ماء البحر الساحلية

ملخص

هذا الكتاب وثائق الفيديو الكبيرة (L ≥ 20) ترشيح الكتلة الحيوية الميكروبية ، وتتراوح ما بين 0.22μm 2.7μm في القطر ، من عمود الماء.

الملخص

يبدأ سير العمل في جمع المياه البحرية الساحلية للمجتمع الميكروبية المصب ، ويحلل الغاز المغذيات والتتبع. لهذا الأسلوب ، وقد تم جمع عينات من سطح التشغيل سفينتى جون ستريكلاند في مدخل Saanich. هذا الكتاب وثائق الفيديو الكبيرة (L ≥ 20) ترشيح الكتلة الحيوية الميكروبية ، وتتراوح ما بين 0.22μm 2.7μm في القطر ، من عمود الماء. يمكن تصفيتها عينتين 20L في وقت واحد باستخدام مضخة وحدة واحدة مزودة أربعة رؤساء بالتناوب. ويتم الترشيح في الميدان في رحلات طويلة ، أو فور مقابل رحلات يومية. فمن المهم لتسجيل كمية المياه التي تمر عبر كل وحدة تصفية sterivex. لمنع تشكيل بيوفيلم رحلات بين أخذ العينات ، يجب شطف جميع المعدات الترشيح مع حمض الهيدروكلوريك المخفف والمياه وتعقيمها منزوع الأيونات بعد الاستعمال مباشرة. وسوف يستغرق هذا الإجراء ما يقرب من 5 ساعات بالإضافة إلى ساعة إضافية للتنظيف.

البروتوكول

1. مجموعة تتكون من أجهزة الترشيح
   1. لإعداد جهاز الترشيح ، واستخدام ملاقط لوضع الصف GF / D تصفية وحدة سكنية في prefilter. تشديد فضفاضة السكن باليد. وكقاعدة عامة ، لا الإفراط في تشديد أو الوحدة مرة واحدة في تسرب سوف يبدأ الضخ.
   2. استبدال الغطاء الدامجانة زجاجة كبيرة مع غطاء تعقيمها والأنابيب التي توليها إدراج بعناية الأنبوب الداخلي في الدامجانة زجاجة كبيرة دون لمسها. إذا كان ذلك ضروريا ، واستخدام ملاقط لتوجيه الأنبوب في الدامجانة زجاجة كبيرة.
   3. تمرير الأنابيب الخارجية من خلال مضخة تمعجية.
   4. إرفاق وحدة سكنية prefilter إلى نهاية كل من أنابيب خارجية (أي 2 وحدة في الدامجانة زجاجة كبيرة). إحكام اتصال مع كماشة.
2. ترشيح مياه البحر
   1. لتبدأ تصفية مياه البحر ، وتشغيل المضخة وضبط سرعة تدفق إلى 1. رايتس ووتش إلى ضمان أن المياه التي يتم ضخها في الاتجاه الصحيح.
   2. سماح 500 مل من المياه لتتدفق بحرية من خلال وحدة وprefilter في دورق L 1.
   3. إيقاف المضخة ، وإرفاق تصفية Sterivex لتركيب luer الذكور في نهاية خالية من الإعداد prefilter. تشديد بشكل مريح السكن prefilter باليد.
   4. مراقبة في السكن prefilter وعلى العلاقة بين السكن وprefilter الأنبوب الذي يؤدي إلى الدامجانة زجاجة كبيرة. إذا تسرب يحدث ، تشغيل المضخة قبالة وتخفيف وإعادة إحكام السكن prefilter تبعا لذلك. تشغيل المضخة مرة أخرى.
   5. جمع الراشح في قوارير ل 4. بمجرد أن يتم بالكامل ، والقوارير الفارغة في الدامجانة زجاجة كبيرة نظيفة. لا شك أن نلاحظ حجم مرت كل مرشح. ويمكن جمع مزيد من معالجة الرشاحة ، مثل الترشيح للبحث عن الفيروسات.
   6. يستمر الترشيح حتى لا تبقى المياه في carboys. كالعادة مجموعة مرات الترشيح بين 4-5 ح / 20 L الدامجانة زجاجة كبيرة ، ولكن هذا يعتمد بشكل كبير على كمية الكتلة الحيوية داخل الماء.
   7. الترشيح مرة واحدة كاملة ، تبديل المضخة وقطع المرشحات Sterivex.
3. تخزين الفلاتر
   1. لتخزين المرشحات ، وطرد الأولى أي المياه المتبقية مع حقنة مل 30-60.
   2. باستخدام ماصة ، إضافة 1.8ml العازلة تحلل إلى تصفية ، وحفظ ~ 200 UL الفضاء في تصفية بالإضافة إلى وقت لاحق من الكواشف.
   3. ختم الجزء السفلي والعلوي من تصفية Sterivex مع قطعة صغيرة من Parafilm ، وتسمية المرشحات مع التاريخ وتحديد العينة.
   4. تخزين المرشحات في مرحلة ما قبل المسمى 50 مل في أنبوب الصقر -80 درجة مئوية
   5. إزالة عوامل التصفية من وحدة سكنية ووضعها المسمى أنابيب فالكون 50 مل تحتوي على 2 مل من تحلل العازلة. تخزين هذه في -80 درجة مئوية.
4. تنظيف
   1. لتنظيف النهائي ، وضع الأنابيب التي كان داخل الدامجانة زجاجة كبيرة في قارورة تحتوي على حمض الهيدروكلوريك 0.1 M
   2. توجيه أنابيب التي تؤدي إلى القارورة 4L في الدامجانة زجاجة كبيرة الأصلي.
   3. التبديل على المضخة وتشغيلها في 3 ، وجمع من خلال تدفق تشغيل في الدامجانة زجاجة كبيرة الأصلي.
   4. أخيرا ، شطف الأنابيب بالماء تعقيمها.

ممثل النتائج : النتيجة النهائية يتكون من المرشحات التي تحتوي كل منهما Sterivix الكتلة الحيوية الميكروبية من مياه البحر حوالي 10 لتر في نطاق وحجم 0.22μm 2.7μm. يتم تخزين هذه العازلة في تحلل وعلى استعداد لاستخراج الحمض النووي. بالإضافة إلى ذلك ، هذا الإجراء تجمع وتركز الكتلة أكبر من 2.7 ميكرون ، على prefilters GF / د. كما يتم تخزين هذه العازلة في تحلل وعلى استعداد لاستخراج الحمض النووي. إذا اتخذت خطوات معالجة إضافية ، ويمكن أن تتركز على 0.22 ميكرومتر التدفق من خلال وصولا الى جمع الكسر الفيروسية كذلك.

المناقشة

ومن الضروري أن يمسح أسفل المقاعد ومضخات بمنشفة مبللة بعد الاستخدام لإزالة أي آثار متبقية من المياه المالحة التي من شأنها أن خلاف ذلك تآكل المعدات. على الرغم من أن هذا الإجراء هو بسيط ، يمكن أن تكون واسعة شرط الوقت اعتمادا على تركيز الكتلة الحيوية أو الحطام في العينة التي تمت تصفيتها.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مضخة 연動ية (Peristaltic pump)		Masterflex (Cole Palmer)	77913-20, 77200-62, 77200-04
أنابيب Tygon LFL		Masterflex (Cole Palmer)	06429-24	لجهاز الترشيح
مشابك الخرطوم		Cole-Parmer	0683204	لجهاز الترشيح
محولات أنابيب 1/4” x 3/16”		Cole-Parmer	31702-20	لجهاز الترشيح
غلاف مرشح أولي من البولي بروبيلين		ADVANTEC	501200	لجهاز الترشيح
وصلة لوير معدنية (طرف خرطوم إلى قفل لوير ذكر)		Cole-Parmer	31507-27	لجهاز الترشيح
مغانط 2“			لجهاز الترشيح
أغطية قارورة كاربوي ذات 3 منافذ				لجهاز الترشيح
مرشحات GV 0.22 μm STERIVIX		EMD Millipore	SVGV01R5
مرشحات GF/D بقطر 47 mm وحجم مسامي 2.7 μm		Whatman, GE Healthcare	1823047
محلول منظم للتحلل (Lysis buffer)	كاشف			0.75 M sucrose, 40 mM EDTA, 50 mM Tris (pH 8.3)
0.1 % HCl	كاشف			لشطف ما بعد الترشيح
ماء معقم بجهاز الأوتوكلاف	كاشف			لشطف ما بعد الترشيح