نحن تصف طريقة سريعة وفعالة لتنقية الميتوكوندريا من الخميرة السكيراء الجعوية. هذه الطريقة تمكن من عزل عالية الغلة من الميتوكوندريا نقية خالية من التلوث أساسا العضيات الأخرى والمحافظة على سلامتها الهيكلية والوظيفية الخاصة بهم بعد تنقيتها.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الميتوكوندريا هي الموقع الرئيسي لإنتاج ATP أثناء عملية التمثيل الغذائي في الخلايا الهوائية غير حقيقية النواة الضوئي
البروتوكول
المواد والأساليب
سلالات الخميرة وظروف النمو
كانت تزرع سلالة من النوع البري BY4742 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) في المتوسط YEPD الغنية (1 ٪ خلاصة الخميرة ، ببتون 2 ٪ ، السكر بنسبة 2 ٪). والخلايا المستزرعة في 30 درجة مئوية مع الهز التناوب في 200 دورة في الدقيقة في قوارير مخروطي في نسبة "قارورة حجم / متوسطة الحجم" ل05:01.
كسر عزلة الميتوكوندريا الخام
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذه الطريقة تمكن من عزل عالية الغلة من الميتوكوندريا نقية من خلايا الخميرة. الميتوكوندريا يطهر هذا الأسلوب أساسا خالية من التلوث وغيرها من العضيات المحافظة على سلامتها الهيكلية والوظيفية الخاصة بهم بعد تنقيتها. عائدات الطريقة الموصوفة الميتوكوندريا التي هي مناسبة لإعادة تشكيل خلية خالية من العمليات الأساسية الميتوكوندريا. ويمكن أيضا هذه الميتوكوندريا نقية للغاية أن تستخدم لتحليل بنية الميتوكوندريا ووظائفها ، والميتوكوندريا بروتيوم lipidome ، والحمض النووي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من CIHR NSERC وكندا. فيتامين هو محقق جديد CIHR وكرسي أبحاث جامعة كونكورديا في علم الجينوم ، بيولوجيا الخلية والشيخوخة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المراجع
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, NJ. (2004).
- Suen, D. -F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &, Hardwick, J. M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
