في هذه المقالة عن طريق الفيديو نقدم طريقة لعزل وتنقية ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية الطرفية باستخدام حبة المغناطيسي فرز سريع بمساعدة الخلية الاستراتيجية. ويمكن الحصول عليها من الحمض النووي الريبي خلايا منعزلة استخدامها بسهولة لتطبيقات المصب بما في ذلك تحليلات ميكروأري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل وتنقية ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية الطرفية بواسطة حبة فرز المغناطيسي
في هذه المقالة
ملخص
البروتوكول
تعليقات عامة على الفرز المغناطيسي حبة من الخلايا العصبية المحيطية ذبابة الفاكهة (توقيت الاجمالي لاستكمال البروتوكول : 2،5-3 ساعات)
إجراءات يجب مراعاتها المختبر القياسية للحفاظ على بيئة نظيفة ريبونوكلياز ، مجانا في جميع الأوقات لمنع تدهور الحمض النووي الريبي.
عندما يتم تشريح إهاب يرقات ذبابة الفاكهة ووضع في زنزانة تفارق العازلة ، والخلايا العصبية المحيطية هي واحدة من خلايا الماضي لفصل من إهاب. لقد استغل هذه الخاصية ونحن صمم هذا البروتوكول إلى إزالة معظم الخلايا غير محدد من إه....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هو الأمثل للبروتوكول المعروضة هنا لعزل وتنقية الخلايا العصبية المحيطية التي تتقيد باحكام على السطح الداخلي للبشرة third ذبابة الفاكهة اليرقات طور مرحلي باستخدام الفرز المغناطيسي خلية حبة الاستراتيجية. في حين أننا قد استخدمت هذا البروتوكول على وجه التحديد لعزل الخلايا العصبية دا ذبابة الفاكهة ، وتطبيقات هذا البروتوكول إلى عزل أنواع الخلايا الأخرى التي تلتزم في إهاب اليرقات أو مراحل العذراء للتنمية يمكن (على سبيل المثال ظهائر والعضلات والأعصاب الطرفية الأخرى) التي يمكن تكييفها تفاوت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نشكر الدكاترة. Yuh - ننغ جان وGrueber ويس لتوفير مخزونات الطيران المستخدمة في هذه الدراسة. الكتاب يعترف F. توماس ميلر وكيت Jeffress التذكارية الاستئماني لدعم هذه البحوث (DNC) ومكتب جامعة جورج ماسون في بروفوست (EPRI).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
معدات
- ويمكن استخدام (10) كتلة مغناطيس نيوديميوم (K & J مغناطيسي ، وشركة ، القط. B444B #) ، بدلا من DynaMag ™ -2 (Invitrogen ، القط. # 123 - 21D).
- Kontes مطحنة الأنسجة الزجاج ، 2 مل القدرة على العمل ، مع إزالة مدقة كبيرة (الفئة # 885300-0002)
- مرشحات الخلية ، على سبيل المثال فصل تمهيدي MACS تصفية (Miltenyi بيوتيك ، القط. # 130-041-407)
- 35 ملم أطباق بتري ، المغلفة مع Sylgard (داو كورنينج كوربوريشن ، القط. 3097358-1004 #)
- تشريح الأدوات : زوجين من ملقط دومون رقم 5 (أدوات العلوم الجميلة ، القط # 11251-20.)
- Vannas الربيع الدقيقة تشريح المقص (العلوم أدوات الجميلة ، القط. # 15000-08)
- ماصات (P - 1000 ، P - 100 ، P - 10) مع نصائح القابل للتصرف
- عدادة الكريات القياسية لعدد الخلايا والنقاء تقدير
- باستور ماصات مع نصائح النار المصقول قطرها القياسية ، تقلص إلى 50 ٪ ~ من قطر القياسية وتقلص إلى 25 ٪ ~ من القطر القياسي لسحن
- طاولة صغيرة الطرد المركزي (1-16،000 (خ) ز)
- دوامة
- فلوري ستيريو المجهر (تم استخدام MZ16FA ايكا في هذا البروتوكول)
المراجع
- Corty, M. M., Matthews, B. J., Grueber, W. B. Molecules and mechanisms of dendrite development in Drosophila. Development. 136, 1049-1061 (2009).
- Parrish, J. Z., Emoto, K., Kim,, Jan, Y. N. Mechanisms that regulate establishment, maintenance, and remodeling o....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
