وقد تم تطوير جهاز ميكروفلويديك الآلي لتعميم الأنوية تخصيب الخلية من الدم المحيطي عبر تحلل كرات الدم الحمراء التي تضمن عزل عينة ذات جودة عالية من دون خسارة الخلية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحلل الدم ميكروفلويديك الآلي بروتوكول لتخصيب اعارة خلايا الأنوية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في هذا التقرير هو مفصل في البروتوكول الآلي للحصول على جهاز ميكروفلويديك الدم تحلل. تعميم خلايا الأنوية (CNCs) ، بما في الكريات البيضاء وخلايا بطانة الأوعية الدموية ، وتوفير منصة مثالية للحصول على وضع محدثة عن حالة المناعي للفرد. بروتوكول ميكروفلويديك يسمح لتخصيب CNCs دون فقدان الخلية عينة انتقائية وتقلب بسبب إعداد المستخدم بوساطة الخطوات. لفترة وجيزة ، ويتضمن البروتوكول تصنيع الجهاز ، وجمع العينات ، إعداد الجهاز ، وتشغيل الدم من خلال غرفة ميكروفلويديك. داخل الجهاز هو مختلط الدم بسرعة كاملة مع الماء منزوع الأيونات لنحو 10 ثانية في 50 ميكرون × 150 قناة ميكروفلويديك ميكرون. في هذا الوقت هي lysed الكريات الحمراء تمتد بسبب ظروف ناقص التوتر. هياكل متعرجة على الجزء السفلي من القناة ضمان خلط دقيق والتعرض للخلايا في بيئة ثابتة. يتم إرجاع الخلايا المتبقية لظروف متساوي التوتر في الخروج من الجهاز ، باستخدام بارافورمالدهيد ثابتة 2 ٪ ، وطرد لفصل كرات الدم الحمراء من الحطام CNCs ، وعلقت في تدفق العازلة للتلوين وتحليلها من جانب التدفق الخلوي. تظهر النتائج نظيفة المؤامرات مبعثر تدفق الخلوي مع السكان CNC المحفوظة. أهمية هذا الجهاز والبروتوكول يأتي في دراسة وفهم الأمراض المرضية عن طريق التحليل للسكان باستخدام الحاسب الآلي. وبالتالي ، فإن تظاهر الأتمتة والفعالية والبساطة للبروتوكول ميكروفلويديك.
البروتوكول
الجزء 1. ميكروفلويديك جهاز تلفيق
تم إنشاء قالب السيليكون الرئيسي للجهاز تحلل باستخدام تقنيات الطباعة بصفائح معدة ضوئيا ميكروفلويديك القياسية مع المعدات في جامعة لويزفيل غرف الأبحاث [1]. وقد استخدم أوتوكاد (أوتوديسك ، وشركة ، وسان رافائيل ، كاليفورنيا) لإنشاء قناع الشفافية (Fineline التصوير ، كولورادو سبرينغز ، أول أكسيد الكربون) لإنشاء النسخ المتماثلة السلبية للقنوات. كانت ملفقة الجهاز ميكروفلويديك تحلل من القالب الرئيسي السيليكون باستخدام تقنيات الطباعة الحجرية الناعمة مع بولي الاستومر (dimethylsiloxane) (PDMS ؛ داو كورنينغ ، ميدلاند ، ميتشيغن). تم الإفراج عن ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد افاد الآلي تحلل الدم ميكروفلويديك البروتوكول. ضمن البروتوكول هي الخطوات الحاسمة الجدير بالذكر. في القسم P.2.1 ، فمن المهم أن تجاهل فيال الدم الاولى التي جمعت وكانت العينة تحتوي على خلايا بطانية ناضجة فكها بوصفها ايجابيات كاذبة. أيضا التأكد من تشغيل عينة من الدم في غضون ساعة من جمعها. فتيلة جهاز ميكروفلويديك في القسم P.2.2 ، من المهم في البداية للتخلص من الفقاعات. بالإضافة إلى ذلك ، ينبغي للمرء تجنب تقديم فقاعات عند إرفاق المحاقن جديدة للإبر في جميع أنحاء البروتوكول. عند ملء ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وقد تم دعم البحوث التي أجراها والاس جائزة مؤسسة حاء كولتر الوظيفي المبكر في البحوث بالحركة. بفضل تيم اندروز ، طب أمراض الدم / الأورام ، للمساعدة في جمع عينات من الدم. كما شكر للدكتور سام ولهوسان ، وتدفق الخلوي الأساسية ، وجيمس غراهام براون مركز السرطان ، للمساعدة في تشغيل عينات التدفق الخلوي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المراجع
- White, W. Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD. Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).
- Sethu, P. Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythroc....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
